RNA M6 A lesandinn YTHDF2 stjórnar NK frumu æxlishemjandi og veirueyðandi ónæmi Hluti 4

Það er vel þekkt að YTHDF2 virkar sem m6A lesandi, sem þekkir og bindur RNA sem innihalda m6A og stjórnar niðurbroti m6A umrita.
Við framkvæmdum síðan RNA ónæmisútfellingu (RIP) -seq með því að nota YTHDF2 mótefni til að kortleggja markafrit sem bundin eru af YTHDF2 í NK frumum. YTHDF2-bindingarstaðir voru auðgaðir á próteinkóða raðsvæðinu og 39UTR (mynd S5, E og F).

Tengsl lesenda og minnis eru mjög náin. Lestur er ein besta leiðin til að bæta minnisfærni okkar.

Þegar við lesum fer heilinn í gegnum flókið ferli. Þegar við skönnum orð og umbreytum þeim í merkingu, er heilinn okkar stöðugt að búa til nýjar taugafrumnatengingar. Þessar taugatengingar mynda minniskerfið okkar og hjálpa okkur að geyma upplýsingar í langtímaminni.

Að auki örvar lestur ímyndunarafl okkar og sköpunargáfu, sem einnig hjálpar til við að bæta minni okkar. Þegar við smíðum myndir og senur í huga okkar er heilinn virkur þátttakandi, þannig að fleiri taugafrumnatengingar myndast, sem styrkir minnishæfileika okkar.

Að lokum bætir lestur einnig einbeitinguna og einbeitinguna. Þegar við einbeitum okkur að lestri er heilinn stöðugt að æfa sig aftur og aftur, sem gerir minnið sterkara.

Á heildina litið getur lestur haft afar jákvæð áhrif á minni okkar. Með því að temja okkur þann vana að lesa og örva heilann með lestri getum við bætt minniskunnáttu okkar og notið ríkara og áhugaverðara lífs. Það má sjá að við þurfum að bæta minnið og Cistanche deserticola getur bætt minnið verulega því Cistanche deserticola er hefðbundið kínverskt lækningaefni sem hefur mörg einstök áhrif, ein þeirra er að bæta minni. Virkni Cistanche deserticola kemur frá mörgum virku innihaldsefnum sem það inniheldur, þar á meðal tannínsýra, fjölsykrur, flavonoid glýkósíð osfrv. Þessi innihaldsefni geta stuðlað að heilaheilbrigði með ýmsum leiðum.

Smelltu á vita 10 leiðir til að bæta minni

Við greindum 3.951 mögulega YTHDF2-bindingstoppa úr 1.290 afritum, þar af 426 (33%) sem greindust með marktækri m6A auðgun. GO auðgunargreining sýndi að 1.290 YTHDF2 markafritin voru auðguð í próteinþýðingu, RNA-bindingu og RNA-skerðingu (mynd S5 G).

Við greindum síðan möguleg markafrit frá skarast umrit í gegnum RNA-seq, m6A-seq og RIP-seq og komumst að því að mengi 29 umrita bundin af YTHDF2 og merkt með m6A (í bæði Ythdf2WT og Ythdf2ΔNK NK frumum) voru tjáð á mismunandi milli NK frumna frá Ythdf2WT og Ythdf2ΔNK músum (mynd 7 G). Meðal þeirra var 12 umritum stýrt upp og 17 umritum var stjórnað niður í NK frumum frá Ythdf2ΔNK músum samanborið við þær frá Ythdf2WT NKfrumum (mynd 7 G).

Byggt á hagnýtri lýsingu okkar á YTHDF2 og GO greiningunni úr RNA-seq gögnum, hefur Ythdf2 skortur áhrif á skiptingu og fjölgun NK frumna, mögulega með því að auðvelda mRNA niðurbrot á frumuhrings eftirlitsstöðvum eða neikvæðum eftirlitsstofnunum við frumuskiptingu.

Af 12 uppstýrðu umritunum hefur verið greint frá því að þrír stýra frumuskiptingu eða útbreiðslu á neikvæðan hátt, þar á meðal Mdm2 (músa tvöföld mínúta 2 [MDM2]; Frum o.fl., 2009; Giono og Manfredi, 2007; Giono o.fl., 2017), Tardbp ( TAR DNA-bindandi prótein 43 [TDP43]; Ayala o.fl., 2008; Sanna o.fl., 2020) og Crebzf (CREB/ATFBZIP umritunarþáttur; Hu o.fl., 2020; López-Mateo o.fl., 2012) , sem bendir til þess að þau séu hugsanleg skotmörk YTHDF2in NK frumna.

Athyglisvert er að m6A topparnir passa vel við YTHDF2-bindingarstaðina við 39UTR Mdm2 og Tardbp og við 59UTR Crebzf gena, eins og sýnt er af Integrative Genomics Viewer (Mynd 7 H).

RIP með því að nota annað hvort m6A eða YTHDF2 mótefni eftir qPCR staðfesti að Mdm2, Tardbp og Crebzf voru örugglega m6Ametýleruð og auðguð aðallega af YTHDF2 í NK frumum (Mynd 7, I og J), sem styður m6A-seq og RIP-seq gögn, sem benda til þess að þrjú gen eru hugsanleg skotmörk YTHDF2 inNK frumna.

Til að kanna hvort YTHDF2 stjórnar Mdm2, Tardbp og Crebzf tjáningu með því að móta mRNA stöðugleika, mældum við mRNA niðurbrot markanna þriggja með því að hindra umritun með actinomycin D í NKfrumum frá Ythdf2ΔNK og Ythdf2WT músum.

Niðurstöðurnar sýndu að Mdm2 og Tardbp, en ekki Crebzf, höfðu lengri helmingunartíma í NK frumum frá Ythdf2ΔNK músum samanborið við þær frá Ythdf2WT músum (mynd 7, K-M), sem bendir til þess að Mdm2 og Tardbpare sé beint stjórnað af YTHDF2 í NK frumum.

Með því að nota ónæmisblotting, staðfestum við að próteinmagn MDM2 og TDP43 var uppstýrt í NK frumum úr Ythdf2ΔNK músum (Mynd S5 H). Til að staðfesta enn frekar að þessi tvö gen séu starfræn markmið YTHDF2, notuðum við Mdm2- eða Tardbp -sérstakt siRNA til að knýja niður tjáningu gena tveggja in vitro (mynd S5, I og J).

Við bárum síðan saman frumufjölgun og lifun Ythdf2ΔNKNK frumna samanborið við Mdm2 eða Tardbp án þess að falla niður í nærveru IL -15. Niðurstöðurnar sýndu að niðurfelling Tardbp gæti að minnsta kosti að hluta bjargað gallanum í frumufjölgun og frumulifun í NK frumum frá Ythdf2ΔNK músum (Mynd 7, N og O).

Hins vegar hafði niðurfelling Mdm2 engin björgunaráhrif (Mynd S5, K og L). Þessar niðurstöður benda til þess að YTHDF2 stjórnar NK frumufjölgun og skiptingu að minnsta kosti að hluta til með því að hindra mRNA stöðugleika Tardbp.

Umræða

Í þessari rannsókn greinum við frá margþættu hlutverki YTHDF2-miðlaðrar m6A metýleringar í NK frumuónæmi. Við komumst að því að YTHDF2, einn mikilvægasti lesandi m6A breytinga, er mikilvægur til að viðhalda jafnvægi NK frumna, þroska, IL-15 miðlaða lifun og æxlis- og veirueyðandi verkun.

Við greindum einnig nýja jákvæða endurgjöf á milli STAT5 og YTHDF2, aftan við IL-15, sem stuðlar að áhrifavirkni og lifun í NK-frumum músa. Rannsóknin okkar útskýrir líffræðilegt hlutverk YTHDF2 eða m6A metýleringar almennt í meðfæddu ónæmi NK frumna. Það fyllir upp í gjá þekkingar um hvernig YTHDF2 stjórnar meðfæddu ónæmissvörun við illkynja umbreytingu og veirusýkingu.

Niðurstöður okkar gefa nýja stefnu til að virkja æxlisofnæmi NK frumna og efla um leið skilning okkar á m6A breytingum í mótun meðfædds ónæmis. M6A lesendapróteinið YTHDF2 stjórnar stöðugleika mark-mRNA (Du o.fl., 2016; Wang o.fl., 2014). Fjölmargar rannsóknir hafa stutt víðtæk áhrif YTHDF2 í ýmsum líffræðilegum ferlum.

YTHDF2 bælir eðlilega stækkun blóðmyndandi stofnfrumna og sjálfsendurnýjun en er einnig nauðsynleg til að viðhalda blóðmyndandi stofnfrumum til langs tíma (Li o.fl., 2018; Mapperley o.fl., 2021 Paris o.fl., 2019; Wang o.fl., 2018a). Nýlega hefur þetta gen tekið þátt í að halda aftur af bólgu við bakteríusýkingu (Wu o.fl., 2020a). Hlutverk og verkunarháttur YTHDF2 í æxlisþróun hefur verið vel rannsakað.

YTHDF2 stuðlar að þróun hvítblæðisstofnfrumna og upphaf bráða mergfrumuhvítblæðis (Paris o.fl., 2019). Fyrir utan hvítblæði hefur verið sýnt fram á að YTHDF2 stuðlar að þróun fastra æxla, þar á meðal krabbameini í blöðruhálskirtli (Liet al., 2020), glioblastoma (Dixit et al., 2021) og lifrarfrumukrabbamein (Chen o.fl., 2018; Hou o.fl., 2019; Zhang o.fl., 2020), með því að miða á fjölbreytt m6A-breytt afrit, svo sem æxlisbælandi LHPP og NKX3-1 (Li o.fl., 2020), IGFBP3 (Dixit o.fl., 2021), OCT4 ( Zhang o.fl., 2020) og SOCS2 (Chenet al., 2018).

Þrátt fyrir að YTHDF2 gegni hvetjandi hlutverki í æxlisframvindu, sýnir rannsókn okkar gagnlegt hlutverk YTHDF2 í ónæmissvörun við æxlisfrumum, sérstaklega í NK frumum, sem er lykilþáttur í meðfæddu ónæmi gegn veirusýkingum og illkynja umbreytingu.

Þess vegna ætti að gæta varúðar við þróun YTHDF2 hemla til að miða á æxlisfrumur til krabbameinsmeðferðar þar sem hömlun á YTHDF2 getur skert æxlissvörun hýsilsins af NK frumum. Á hinn bóginn ætti að virkja æxlishemjandi virkni YTHDF2 í NK frumum eða öðrum ónæmisfrumum að íhuga hugsanleg áhrif þess sem verka æxlisfrumur beint. Mismunandi miðun YTHDF2 í æxlisfrumum og ónæmisfrumum ætti að hámarka æxlishemjandi virkni.

For more information:1950477648nn@gmail.com