Ágrip

Bakgrunnur: Greint hefur verið frá því að konungshlaup myndi draga úr myndun melaníns og hamla tjáningu próteina og gena sem tengjast sortumyndun. Í þessari rannsókn metum við virkni 10-hýdroxý-2-decanoic sýru (10-HDA) gegn sortuvaldandi og litarhreinsandi virkni úr konungshlaupi Apis mellifera.

Sumar rannsóknir hafa bent til þesscistanchegetur hjálpað til við að koma í veg fyrir öldrun húðar með þvídraga úr oxunarálagiogbólga, sem hvort tveggja getur stuðlað aðhrukkum, dökkir blettirog önnur merki um öldrun. Hins vegar er óljóst hvortcistanchedóslétta húðinaeðadraga úr litarefni. Í stuttu máli, þó að cistanche geti haft góð áhrif á húðina, er ekki ljóst hvort hægt sé að nota það sem áreiðanlegthúð-hvíttunumboðsmaður. Það er alltaf best að hafa samband við húðsjúkdómalækni til að fá ráðleggingar um öruggar og árangursríkar leiðir til að hugsa um húðina.

Smelltu á Cistanche Tubulosa til hvítunar

Fyrir frekari upplýsingar:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Aðferðir:Í þessari rannsókn metum við {{0}}HDA-hvítunarvirknina í samanburði við breytingar á innanfrumu týrósínasavirkni, melaníninnihaldi og melanínframleiðslutengdum próteinum í B16F1 sortuæxlafrumum eftir meðferð með {{4 }}HDA. Ennfremur voru húðhvítunaráhrifin metin með því að bera krem ​​sem inniheldur 0,5 prósent, 1 prósent og 2 prósent af 10-HDA á húð músa (C57BL/6 J) í 3 vikur til að fylgjast með áhrifum DL *-gildi.

Niðurstöður:Niðurstöðurnar sýndu að 10-HDA hindraði MITF prótein tjáningu (IC50 0.86 mM) í B16F1 sortuæxlisfrumum. Western blot greining leiddi í ljós að 10-HDA hamlaði virkni tyrosinasa og tjáningu tyrosinasa-tengts próteins 1 (TRP-1), TRP-2 og microphthalmia-associated transcription factor (MITF) í B16F1 sortuæxlisfrumum. Að auki sýnir 10-HDA sem notað er á húð músa marktækt aukinn meðalhvítunarstuðul (L gildi).

Ályktanir:Staðfestingargögnin gáfu til kynna möguleika 10-HDA til notkunar við að bæla húðlitun. 10-HDA er lagt til sem frambjóðandi til að hamla sortumyndun, þannig að það gæti verið þróað sem snyrtivörur fyrir húðvörur.

Leitarorð:Konungshlaup, 10-hýdroxý-2-dekansýra, sortumyndun, húðhvítandi, sortumyndunarhemill

Bakgrunnur

Konungshlaup (RJ) er seyti ungra verkabýflugna (Apis mellifera) sem framleitt er af undirkoki og kviðkirtlum. Býflugnadrottningin sem er að þróast var eingöngu fóðruð á ævi sinni [1]. RJ veitir hátt næringargildi vegna mikils magns próteina, ókeypis amínósýra, lípíða, vítamína og sykurs [2, 3]. Lífvirku prótein RJ eru helstu konungshlaupprótein (MRJPs), apisimin og royalizing, sem hafa sýnt ónæmisstýrandi og bakteríudrepandi áhrif í nokkrum rannsóknum [4-6]. 10-hýdroxý-2- dekansýra (10-HDA) var helsta fitusýran í RJ sem hefur nokkur heilsubætandi áhrif fyrir menn, sem hefur sýnt æxlishemjandi, bakteríudrepandi og ónæmisbælandi virkni [7 –9]. 10-HDA finnst aðeins í RJ svo það hefur verið notað sem gæðamerki fyrir kóngahlaupvörur [10, 11]. Nokkrar lyfjafræðilegar virkni RJ hafa þegar verið staðfestar með dýratilraunum og lyfjafræðileg virkni þar á meðal andoxun [12, 13], bólgueyðandi [14], æxlishemjandi [15, 16], gegn öldrun [17], bakteríudrepandi [18-20], æðavíkkandi [21, 22], háþrýstings [21, 22], kólesteróllækkandi [23], nýrnaverndandi [24] og húðhvítandi áhrif [25]. Byggt á næringargildi þess og ávinningi fyrir heilsu manna eru sífellt fleiri RJ vörur til sölu á mörkuðum.

Húðlitur dýra og manna tengist innihaldi melanín litarefnis í húðinni. Hlutverk melaníns er að vernda húðina gegn skemmdum frá útfjólubláu ljósi, en of mikil uppsöfnun melaníns veldur alvarlegum húðsjúkdómum eins og litabreytingum og litarefnum og hraðari öldrun húðar [26]. Melanín var myndað í sortufrumum sem staðsett eru í innsta lagi húðþekjunnar með sortumyndunaraðferðum [27]. Melanogenesis er flókin lífmyndunarferill sem stjórnað er af tyrosinasa, tyrosinasa-tengdum próteinum 1 og 2 (TRP-1 og TRP-2), og microphthalmia-associated transscription factor (MITF) [28, 29]. Týrósínasi er hraðatakmarkandi ensím til að stjórna myndun melaníns. Fyrsta skref melanínframleiðslu er hýdroxýlering L-tyrosíns í L-3,4-díhýdroxýfenýlalanín (L-DOPA) og umbreyting L-DOPA í dópakínón [30]. TRP-2 hvatar framleiðslu 5,6- díhýdroxýindólkarboxýlsýru sem er breytt úr dópakrómi, og afurð TRP-2, 5,6- díhýdroxýindólkarboxýlsýru sem hvarfefni fyrir TRP-1 breytt í indól-5,6-kínónkarboxýlsýru, sem leiðir að lokum til melanínmyndunar [31, 32]. Að hindra nýmyndun melaníns með truflun á sortumyndun væri helsta leiðin til að koma í veg fyrir eða bæta oflitaða sjúkdóma, svo sem melasma og aldursbletti. Þess vegna væri athyglisvert í lækninga- og snyrtivöruiðnaðinum að leita að hugsanlegu, öruggu og áhrifaríku efnasambandi til að draga úr þessum þáttum í sortumyndun.

Sýnt hefur verið fram á að konunglegt hlaup gæti dregið úr myndun melaníns [22], en helsta virka efnasambandið eða aðferðin sem liggur að baki þessari starfsemi RJ er enn óþekkt. Í fyrri rannsókn okkar komumst við að því að 10-HDA gæti hamlað tyrosinasavirkni (óbirt gögn). Í þessari rannsókn voru hamlandi áhrif 10-HDA á týrósínasa metin frekar. Melanín lífmyndun in vitro líkan með B16F10 sortuæxli frumurækt og dýralíkan af mús með húðásetningu voru bæði gerðar til að kanna sortumyndun-hamlandi áhrif 10-HDA.

Aðferðir

Undirbúningur á 10-HDA úr konungshlaupi

Konungshlaup var útbúið af Fu-Chang býflugnarækt í Hualien, Taívan. Lirfur á 3-dagaldri voru fluttar í drottningarfrumubikar á rammanum og hver rammi innihélt 30 drottningarbolla. Rammarnir voru fluttir í býflugnabú og RJ var safnað 72 klst. eftir að lirfurnar voru fluttar. Hvert bú inniheldur um það bil 25,000 hunangsflugur [35]. Söfnuðu RJ sýnin voru geymd við -20 gráður þar til frekari greiningar. Konungshlaup (40 g) var látið flæða með metanóli (400 ml × 4 × 30 mín) og flotið var safnað með skilvindu við 4500 xg í 30 mínútur. Fljótandi vökvinn var þéttur undir lækkuðum þrýstingi til að fá hráa útdráttinn (10,76 g) sem heitir RJM. RJM sviflausn í metanóli var hreinsuð með kísilgelsúluskiljun (SiO2 CC) og síðan skoluð út með klóróformi og metanóli (300:1 til 1:1) til að fá tíu hluta sem greindir voru með TLC. Brot 4 og 5 sýndu marktæka bletti og því voru þau gefin í frekari hreinsun og greiningu. Hlutir 4 og 5 voru endurteknir hreinsaðir með SiO2 CC (skoðaðir með klóróformi/metanóli, 300:1 til 1:1) og frekar kristallaðir með asetoni til að fá 10-hýdroxý-2-dekansýru ({{32} } HDA). Efnafræðileg uppbygging hreinsaðrar vöru var staðfest með NMR og GC-massa litrófsgreiningu. 10-HDA megindleg greiningin var ákvörðuð með hágæða vökvaskiljun (HPLC) með Waters 1525 dælukerfi með Water 2489 skynjara, RP-8 GP250 súlu (4,6 mm) og Waters 717plús sjálfvirkur sýnatakari. Hreyfanlegur fasi var metanóllausn (60:40 v/v með ofurhreinu og afjónuðu vatni) stillt með fosfórsýru í pH 2,5, síuð í gegnum himnu (0,45 μm) og afgasaður í 5 mín. Hraðinn á hreyfanlegum fasa var stilltur á 1,0 ml/mín og greiningin var framkvæmd við 225 nm. Innihald 10HDA í endanlegu hreinsuðu sýni er 90 prósent, sem er notað til frekari greiningar.

Frumuræktun og 10-HDA meðferðir

B16F10 sortuæxlisfrumur (BCRC tala: 60.031) voru ræktaðar í Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) ásamt 10 prósentum (v/v) fóstursermi við 37 gráður í rakaðri, CO2-stýrðri (5 prósent) útungunarvél . Frumunum var sáð með viðeigandi frumuþéttleika í 24-brunn eða 6-brunnsplötu. Eftir 1 sólarhring af ræktun voru frumurnar meðhöndlaðar með ýmsum styrkjum af 10-HDA. Miðillinn var notaður í samanburðarhópnum í stað 10-HDA. Eftir það voru frumurnar teknar upp og notaðar í ýmsar prófanir.

Mæling á lífvænleika frumna

Frumulífvænleiki var mældur með {{0}}(4,5-dímetýlþíasól-2-ýl)-2,5 -dífenýltetrasólíumbrómíði (MTT) prófi samkvæmt aðferð sem Carmichael o.fl. [36]. B16F10 sortuæxlisfrumur voru ræktaðar í DMEM sem innihélt 10 prósent FBS og 1 prósent L-glútamín (4 mM) í 5 prósent CO2 útungunarvél við 37 gráður. Ræktuðum frumum (1 × 104 frumur/brunn) var sáð í 96-brunnsplötu, 10-HDA (leyst upp í dímetýlsúlfoxíði (DMSO)) þynnt með miðlinum í styrkleikanum 1, 0,5, 0,1 mM og kojic sýru 1 mM var bætt í brunnana. Miðillinn var notaður sem eyðublaðið. Eftir 24- klst. ræktun við 37 gráður undir 5 prósent CO2 var miðillinn fjarlægður úr hverri brunn, síðan voru holurnar þvegnar með PBS (1 M fosfat-buffer saltvatni) tvisvar sinnum. 200 ul af MTT lausn (2 mg/ml) var bætt í hvern brunn. Hvarfinu var hætt með því að bæta við 100 μL af DMSO eftir 4- klst. ræktun. Frásog hvers brunns var mæld við 540 nm með því að nota ónæmismælingarlesara (BIO-TEK, Winooski, VT) [20-23]. Lífvænleiki frumna var ákvörðuð með eftirfarandi jöfnu: Lífvænleiki frumna (prósent)=[(AB)/C] × 100 prósent, A: sýnisgleypnimagn, B: blindmagn gleypnimagns, C: gleypniviðmiðunarrúmmál.

Mæling á innihaldi melaníns í frumum

Innanfrumu melaníninnihald B16F10 sortuæxlisfrumna var mælt með breyttri aðferð sem lýst er af Bilodeau et al., [37]. Í lok ræktunar B16F10 sortuæxlisfrumu voru frumurnar teknar upp og þvegnar með PBS. Uppskeru frumurnar voru leystar í köldu lýsisjafnalausn (20 mM natríumfosfat (pH 6,8), 1 prósent Triton X-100, 1 mM fenýlmetýlsúlfónýlflúoríð (PMSF), 1 mM etýlendíamíntetraediksýra (EDTA)). Eftir skilvindu við 15,000×g í 30 mínútur, voru kögglurnar leystar upp í 1 N NaOH sem innihélt 20 prósent DMSO í 1 klst við 60 gráður. Próteininnihald í flotinu var ákvarðað með því að nota Bradford prófið. Gleypið við 405 nm var mæld og melaníninnihaldið var reiknað út á móti þekktum staðli fyrir tilbúið melanín. Melanínmagn ( prósent )=[(AB)/ C] × 100 prósent ; A: sýnisgleypnimagn; B: tómt gleypnirúmmál; C: stjórna gleypnimagni.

Mæling á frumu tyrosinasa virkni

Týrósínasavirknipróf var framkvæmd samkvæmt aðferðinni sem áður var lýst af Martinez-Esparza et al., [38], með smávægilegum breytingum. B16F10 sortuæxlisfrumur voru leystar í 20 mM natríumfosfati (pH 6,8), 1 prósent Triton X-100 og 1 mM fenýlmetansúlfónýlflúoríð eða PMSF, og skilið í skilvindu við 14,000 snúninga á mínútu í 15 mínútur. Próteininnihald hvers flotans var ákvarðað með því að nota Bradford prófið með nautgripasermi albúmíni (BSA) sem próteinstaðall. Týrósínasavirkni var ákvörðuð í hvarfblöndu (1 mL) sem innihélt 50 mM fosfatjafnalausn (pH 6,8), 2 mM L DOPA og 300 ug flotprótein. Eftir ræktun við 37 gráður í 15 mínútur var gleypni við 475 nm mæld með því að nota örplötulesara. Týrósínasavirkni ( prósent )=[(AB)/ C] × 100 prósent ; A: sýnisgleypnimagn; B: tómt gleypnirúmmál; C: stjórna gleypnimagni.

Western blot greining

Frumurnar voru þvegnar þrisvar sinnum í ísköldu PBS og ljósaðar í RIPA jafnalausn (pH 7,4, 50 mM tris, 0,1 prósent SDS, 50 mM NaCl, 1 prósent NP-40, 1 mM PMSF, 10 ug/mL aprotinin og 10 ug/mL leupeptin). Deilur af lýsinu var notaður til að ákvarða próteininnihaldið með aðferð Bradford prófunar með því að nota sermi albúmín úr nautgripum sem staðal. Próteinin (40 ug) voru aðskilin með 10% SDS pólýakrýlamíð gel rafdrætti og þeytt á Hybond-C Extra nítrósellulósa himnu (Amersham Bioscience, Bretlandi). Himnurnar voru stíflaðar með 5 prósent fitulausri mjólk í Tris-buffer saltvatni (TBS) sem innihélt 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 og 150 mM NaCl í 30 mín. MITF, tyrosinasi, dópakróm tautomerase 2 (TRP-2), TRP-1 og -aktín (sem innra eftirlit) greindust með því að nota kanínufjölstofna mótefni, í sömu röð. Himnurnar voru ræktaðar frekar með geita fjölstofna efri mótefni gegn kanínu IgG-H&L (HRP). Öll bundin mótefni voru síðan greind með því að nota Super Signal® West Pico Chemiluminescent Substrate (ECL) (Thermo Scientific). Merkjastyrkur hvers bands var magnmældur með þéttleikamælikerfi Gel Doc TM / Chemi Doc TM Universal hood II (Bio-Rad) búin samþættingu og staðlað með innri stýringu.

Ákvörðun á aflitunarvirkni í músum

Aflitunarvirknin var mæld í gegnum músamódelkerfið með breyttri siðareglum Tai et al. [39]. Rannsóknin var samþykkt af siðanefnd National Formosa háskólans (samþykkisnúmer: 10,401). Fimm vikna gamlar kvenkyns svartar mýs (C57BL/6 J), sem vógu 20 til 25 g, voru keyptar frá National Animal Laboratory Center, Taipei. Í gegnum allar tilraunir voru dýrin geymd í loftkældu herbergi með stöðugu hitastigi (25 gráður ± 2 gráður) og haldið á 12 klst ljós: dimm hringrás. Dýrin voru aðlöguð í 7 daga fyrir tilraunina. Eftir að hafa rakað hárið fengu dýrin 1-dagshvíld. Gelsýni sem innihéldu 10-HDA voru útbúin með því að dreifa lyfjunum í vaselíni. Alls var fjörutíu músum skipt jafnt í fimm hópa og hver hópur var smurður tvisvar á dag með 0,1 g af vaselíni (viðmiðun), 1 prósent kojínsýru í vaselíni, 0,5 prósent, 1 prósent eða 2 prósent 10-HDA í vaselíni . Notkunin hélt áfram í 3 vikur og húðhvítunarstuðullinn (L gildi) var mældur á sama húðsvæði á hverjum degi með DermaLab® Combo (Cotex Technology, Danmörku), sem er litamælingartæki sem notar hástyrkt hvítt. LED sem ljósgjafi. Litmælingartækið er tengt við tölvu [40]. Við skoðuðum aðeins L færibreytuna og L-gildið var hlutfallslegt birtustig, allt frá alls svörtu (L=0) til alls hvíts (L=100). Upphafshvítunarstuðull L-gildi var mældur úr húð hverrar músar áður en það var borið á prófuðu efnin.

tölfræðigreining

Allar niðurstöður í þessari rannsókn voru greindar með því að nota almenna línulega líkanaðferðina sem er fáanleg í hugbúnaðarpakkanum Statistical Analysis System útgáfu 9.1 (Statistical Analysis System Institute, 2002). Duncan's multiple range test [41] var notað til að greina mun á milli meðaltala meðferðanna. Hver tilraun var gerð í þrígangi.

Niðurstöður

Áhrif 10-HDA á lífvænleika B16F1 sortuæxlisfrumna

Ákjósanlegur skammtur úr frumulífvænleikaprófi með MTT í B16F1 sortuæxlisfrumum er sýndur á mynd 1. Hann sýndi greinilega að 10-HDA var ekki frumudrepandi fyrir B16F1 sortuæxlafrumur við styrkleika 0.1, { {8}}.5 og 1 mM, og kojínsýra var ekki frumudrepandi fyrir sortuæxlafrumur í styrkleikanum 1 mM. Frumulífvænleiki minnkaði marktækt (20 prósent minnkun) í sortuæxlafrumum sem verða fyrir 1,5 mM 10-HDA (P < 0.05) (gögn ekki sýnd) og 5 mM kojínsýra. Þess vegna var styrkurinn 0,1, 0,5, 1 mM af 10-HDA og 1 mM af kojínsýru notaður í síðari tilraunum.

Hömlun á virkni tyrosinasa og nýmyndun melaníns í B16F10 sortuæxlisfrumum með 10-HDA

Kojic sýra er áhrifaríkt og vel þekkt efni gegn sortumyndun og var notað sem jákvæður samanburður í þessari rannsókn. 10-HDA dró marktækt (p < 0.05) niður myndun melaníns og týrósínasavirkni samanborið við stjórnun ómeðhöndlaðra B16F1 sortuæxlafrumna. Við skammtinn 1 mM olli 10- HDA 28 ± 2,4 prósenta lækkun á týrósínasavirkni í frumum (P < 0.01) og 40,4 ± 3 .0 prósenta lækkun á melanínmyndun frumna (P < 0,001), en kojínsýra (1 mM) dró einnig verulega úr týrósínasavirkni og melanínmyndun um 14,4 ± 3,7 prósent (P < 0,05) og 19,3 ± 1,5 prósent (P < 0,001), í sömu röð (myndir 2 og 3).

Bæling á tyrosinasa, TRP-1 og TRP-2 próteintjáningu í B16F10 sortuæxlisfrumum með 10-HDA

Til að kanna hvort 10-HDA geti haft áhrif á tjáningu sortuvaldandi próteina, var Western blotting greining framkvæmd með því að nota lýsis B16F10 sortuæxlisfrumna sem voru meðhöndlaðir með 10-HDA (mynd 4). 10-HDA hamlaði verulega týrósínasa, TRP-1 og TRP-2 tjáningu í B16F1 sortuæxlisfrumum samanborið við ómeðhöndlaðar frumur (mynd 4b–d). -aktínið, heimilisprótein sem var notað sem innra eftirlit, sýndi enga breytingu. 10-HDA hamlaði próteintjáningu magns sortuvaldandi ensíma svipað og kojínsýru.

Hamlandi áhrif 10-HDA á próteinmagn sem tengist sortuvaldandi þáttum í B16F10 frumum

Meðan á sortumyndun í spendýrafrumum stendur gegnir MITF aðal eftirlitshlutverkinu í myndun TRP ferilsins, þar á meðal TYR, TRP{{0}} og TRP-2 [25, 26]. Áhrif 10-HDA á MITF tjáningu voru metin með því að nota Western blotting. B16F1{{10}} sortuæxlisfrumur voru útsettar fyrir ýmsum styrkjum af 10- HDA (0,1, 0,5 og 1 mM), sem leiddi til þess að MITF tjáningu minnkaði með 10-HAD ( mynd 4e). IC50 gildið fyrir 10-HDA bælingu MITF tjáningar var áætlað 0,86 mM. Núverandi niðurstöður benda til þess að MITF próteinmagn minnki með 10-HDA. Vanlitunaráhrif 10-HDA geta verið afleiðing af niðurstýrðri MITF genatjáningu, sem myndi síðan bæla prótein og genatjáningu tyrosinasa, TRP-1 og TRP-2.

Mat á aflitunarvirkni 10-HDA in vivo með músum

Til að velta fyrir okkur skammtinum hjá mönnum notuðum við mýs sem dýralíkan til að kanna litarhreinsunarvirkni {{0}}HDA. Eftir rakstur voru mýs meðhöndluð með 1 prósent kojic sýru í vaselíni, 0,5 prósent, 1 prósent eða 2 prósent 10-HDA í vaselíni og húðlýsingarstuðullinn var mældur og skráður. Fyrir þessa in vivo rannsókn notuðum við kojic sýru sem jákvæðan samanburð. Kojic sýra er mikið notað sem húðaflitunarmeðferðarefni um allan heim. Eftir fyrstu viku meðferðar var húðhvítunarstigið marktækt aukið hjá músunum sem fengu 10- HDA, samanborið við samanburðarhópinn, og þessi aukning hélt áfram þar til tilrauninni lauk. Aflitunarvirkni 0.5, 1 og 2 prósent 10-HDA var sambærileg við 1 prósent kojic sýru. Niðurstöður okkar leiddu í ljós að 10-HDA var fær um að stuðla verulega að húðhvíttun á húð músa í allt að 0,5 prósenta styrk (mynd 5). Þess vegna virðist 10-HDA henta vel sem húðhvítunarefni til að meðhöndla oflitun húðar.

Umræða

Melanínmyndun er stjórnað af flóknu ensímfalli tyrosinasa, TRP1 og TRP2. Hlutfall sortumyndunartengdrar gena- og próteinhömlunar gegnir mikilvægu hlutverki í virkni litabreytingarefnis, sem venjulega er notað við meðhöndlun oflitunar eða snyrtivara [28]. Til að skýra hin raunverulegu hamlandi áhrif 10-HDA á sortumyndun, var melaníninnihald og innanfrumu tyrosinasavirkni B16F10 frumanna mæld á sama styrkleikabili. Niðurstöðurnar á myndum. 2 og 3 bentu til þess að 10-HDA sýndi meiri hindrunarvirkni á melanínmyndun í B16F10 frumum en kojínsýra. Gögnin leiddu í ljós að 10- HDA hindrar sortumyndun í B16F10 sortuæxlafrumum.

Melanogenese einkennist að minnsta kosti af þremur stjórnpróteinum, tyrosinasa, TRP1 og TRP2 í sortufrumum spendýra [29]. Tjáning TRP-1, TRP-2 og MITF var öll hindruð í B16F10 sortuæxlafrumum, sem voru meðhöndlaðir með 10-HDA. MITF er mikilvægur umritunarþáttur til að stjórna tjáningu sortuvaldandi ensíma, eins og týrósínasa, TRP-1 og TRP-2 [42, 43]. Samkvæmt Western blotting gögnum okkar (mynd 4) myndu spendýrsfrumur sem voru meðhöndlaðar með 10-HDA draga úr tjáningu allra hraðatakmarkandi ensíma, þar með talið tyrosinasa, TRP-1 og TRP-2 , og koma í veg fyrir óeðlilega uppsöfnun melaníns meðan á sortumyndun stendur. Þessi gögn bentu til þess að 10- HDA gæti hamlað ferlið sortumyndunar með því að hindra MITF tjáningu. Í þessari rannsókn höfum við sýnt fram á að 10-HDA hamlar sortumyndun með því að minnka framleiðslu MITF próteina, tyrosinasa og melaníns. Hindrunarferill 10-HDA á MITF tjáningu var frábrugðinn öðrum sortumyndunarhemlum, svo sem kojínsýru, arbútíni og askorbínsýru, sem hafði ekki áhrif á MITF tjáningu [44, 45]. Þetta bendir til þess að 10-HDA hafi framúrskarandi möguleika til að nota sem öruggt og náttúrulegt húðhvítandi efni fyrir hagnýtar snyrtivörur [46].

Sortuæxli, húðkrabbamein stafar af illkynja umbreytingu sem myndast af sortufrumum. Sortuæxli sem komu fram í langvarandi sólskemmdri húð, slímhúð yfirborði, og acral húð voru af völdum ofvirkjað BRAF og NRAS [47], tap á CDKN2A staðsetningum [48], oftjáðu MITF [49], ofvirkjað Kit [50] ], ofvirkjað mGluR1 [51, 52] … et al. Í þessari rannsókn 10-gæti HDA hindrað MITF tjáningu í B16F10 sortuæxlisfrumum. Þetta gaf til kynna að 10-HDA gæti verið innihaldsefni húðlyfja eða krabbameins gegn sortuæxlum.

RJ hefur verið notað fyrir margar húðsjúkdómablöndur, þar á meðal endurnærandi húð, endurnýjun húðar, endurnýjun, bruna til að gróa eða sáragræðsla [53, 54]. Ennfremur var greint frá því að sumar ómettaðar fitusýrur í RJ gætu hamlað myndun melaníns og týrósínasavirkni, sem leiddi til minnkaðrar sortumyndunar [55], og við sýndum fram á að aflitunaráhrif RJ gætu verið afleiðing af nærveru {{3 }}HDA. Vegna þess að húð músa er svipuð og hjá mönnum, notuðum við mýs sem in vivo dýralíkan til að kanna litarhreinsunarvirkni 10-HAD. Eins og sýnt er á mynd 5 var húðhvítunarstuðull húðlitar marktækt aukinn í músum sem fengu 10-HAD, samanborið við samanburðarhópinn. Að auki, Koya-Miyata o.fl. voru metin kollagenframleiðsluhvetjandi virkni 10-HDA í trefjafrumulínum sem framleiða umbreytandi vaxtarþátt- 1 (TGF- 1), sem er mikilvægur þáttur í kollagenframleiðslu [55] . Þess vegna virðist 10-HDA vera mjög efnilegt náttúrulegt efnasamband fyrir húðendurnýjun og oflitunarmeðferð.

Niðurstaða

10-HDA hindraði ekki aðeins týrósínasavirkni heldur einnig sortuvaldandi ensímtjáningu, þar á meðal tyrósínasa, TRP-1 og TRP-2, með því að bæla MITF í B16F10 sortuæxlafrumum. Þar af leiðandi minnkaði litarefni melaníns í B16F10 sortuæxlisfrumum. Ennfremur sýndi in vivo dýralíkanið aflitunarvirkni 10-HDA við staðbundna notkun. Þessar niðurstöður bentu til þess að 10-HDA væri með frambjóðanda sem gæti verið öruggur og náttúrulegur sortumyndunarhemill fyrir snyrtivöruiðnaðinn, þar sem leit að náttúrulegu og áhrifaríku efnasambandi er eitt af mjög mikilvægu markmiðunum til að þróa betri húðvörur .

Skammstafanir

10-HDA: 10-hýdroxý-2-dekansýra; BSA: Bovine Serum Albumin; DMEM: Dulbecco er breyttur Eagle's miðill; DMSO: Dímetýl súlfoxíð; EDTA: Etýlendiamíntetraediksýra; L-DOPA: L-3,4- díhýdroxýfenýlalanín; MITF: microphthalmia-tengdur umritunarþáttur; MRJP: helstu konungshlaupsprótein; MTT: 3-(4,5-dímetýlþíasól-2-ýl)-2,5-dífenýltetrasólíumbrómíð; PBS: fosfat-buffer saltvatn; PMSF: fenýlmetansúlfónýlflúoríð eða fenýlmetýlsúlfónýlflúoríð; TLC: þunnlagsskiljun; TRP-1: týrósínasa-tengt prótein 1; TRP- 2: týrósínasa-tengt prótein 2

Viðurkenningar

Við þökkum fröken Li-Yu Lee frá Fu-Chang býflugnaræktinni fyrir að útbúa konungshlaup

Fjármögnun

Þessi vinna var styrkt með styrk frá vísinda- og tækniráðuneytinu, Taívan, ROC (MOST102–2622-B-150-002-CC2 & MOST 103–2313-B-150 -001 -MY2 til CC Peng).

Aðgengi gagna og efnis

Öll gögn sem myndast eða greind í þessari rannsókn eru innifalin í þessari birtu grein og viðbótarupplýsingaskrám hennar.

Framlag höfunda

CCP hugsaði og hannaði tilraunirnar. HZS og IPL gerðu tilraunirnar. CCP og PCK greindu gögnin. CCP, PCK og JCL lögðu til hvarfefni/efni/greiningartæki. CCP og IPL skrifuðu og endurskoðuðu blaðið. Allir höfundar samþykktu lokaútgáfu handritsins.

Upplýsingar höfunda

CCP, doktor í líftækni, dósent við líftæknideild National Formosa háskólans. HZS, meistari í líftækni, útskrifaðist frá líftæknideild National Formosa háskólans. IPL, doktor í líftækni, framkvæmdastjóri rannsóknar- og þróunardeildar, Challenge Bioproducts Co., Ltd. PCK, doktor í efnafræði, dósent við líftæknideild National Formosa háskólans. JCL, framkvæmdastjóri hjá Honey Bee Town Co., Ltd.

Siðfræðisamþykki

Allar dýratilraunirnar voru samþykktar af siðanefnd National Formosa háskólans (samþykkisnúmer: 10.401) og voru í samræmi við leiðbeiningar um umönnun og notkun tilraunadýra.

Samþykki fyrir birtingu

Á ekki við í þessum hluta. Þessi grein er ekki klínísk rannsókn sem tekur þátt í mönnum og þetta handrit inniheldur engin einstök klínísk gögn.

Samkeppnishagsmunir

Höfundar lýsa því yfir að þeir hafi engra hagsmuna að gæta

Athugasemd útgefanda

Springer Nature heldur áfram að vera hlutlaus um lögsagnarkröfur í birtum kortum og stofnanatengslum.

Upplýsingar um höfund

1 Líftæknideild, National Formosa University, Huwei, Yunlin, Taívan. 2 Rannsókna- og þróunardeild, Challenge Bioproducts Co., Ltd., Douliou, Yunlin, Taívan. 3 Honey Bee Town Co., Ltd., nr.77-2 Huaxi, 970 Hualien City, Taívan.

Móttekið: 9. mars 2017 Samþykkt: 21. júlí 2017

Birt á netinu: 9. ágúst 2017

Heimildir

1. Chen C, Chen S. Breytingar á próteinhlutum og geymslustöðugleika Royal Jelly við ýmsar aðstæður. Food Chem. 1995;54:195–200.

2. Takenaka T. Efnasamsetning konungshlaups. Honeybee Sci. 1982;3:69–74.

3. Schmitzova J, Klaudiny J, Albert S, Schroder W, Schreckengost W, Hanes J, Judova J, Simuth J. Fjölskylda af helstu konunglegu hlauppróteinum af hunangsbíunni Apis Mellifera L. Cell Mol Life Sci. 1998;54:1020–30.

4. Okamoto I, Taniguchi Y, Kunikita T, Kohno K, Iwaki K, Ikeda M. Major royal jelly prótein 3 mótar ónæmissvörun in vitro og in vivo. Lífvísindi. 2003;1:2029–45.

5. Fujiwara S, Imai J, Fujiwara M, Yaeshima T, Kawashima T, Kobayashi K. Öflugt bakteríudrepandi prótein í konungshlaupi. J Biol Chem. 1990;265:11333–7.

6. Bilikova J, Hanes J, Nordhoff E, Saenger W, Klaudiny J, Simuth J. Apisimin, nýtt serín-valínríkt peptíð úr hunangsflugu (Apis Mellifera L.) konungshlaupi: hreinsun og sameindaeinkenni. FEBS Lett. 2002;528:125–9.

7. Townsend GF, Brown WH, Felauer EE, Hazlett B. Rannsóknir á in vitro æxlishemjandi virkni fitusýra. IV. Estrar sýra náskyldir 10- hýdroxý-2-dekansýrum úr konungshlaupi gegn ígræðanlegu hvítblæði úr músum. Can J Biochem Physiol. 1961;39:1765–70.

8. Blum MS, Novak AF, Taber S. 10-Hydroxy-2Δ-decanoic acid, sýklalyf sem finnast í konungshlaupi. Sci. 1959;130:452–3.

9. Vucevic D, Melliou E, Vasilijic S, Gasic S, Ivanovski P, Chinou I, Colic M. Fitusýrur einangraðar úr konungshlaupi móta dendritic frumumiðlaða ónæmissvörun in vitro. Int Immunopharmacol. 2007;7:1211–20.

10. Weaver N, Law JH. Misleitni fitusýra úr konungshlaupi. Náttúran. 1960;188:938–9.

11. Antinelli JF, Zeggane S, Davico R, Rognone C, Faucon JP, Lizzani L. Mat á (E)-10-hýdroxíð-enósýru sem ferskleikabreytu fyrir konungshlaup. Food Chem. 2003;80:85–9.

12. Takeshi N, Reiji I. Undirbúningur og virknieiginleikar vatnsþykkni og basísks þykkni af konungshlaupi. Food Chem. 2004;84:181–6.

13. Takeshi N, Mizuho S, Rriji I, Hachiro I, Nobutaka S. Andoxunarvirkni sums verslunarhunangs, konungshlaups og propolis. Food Chem. 2001;75: 237–40.

14. Martos MV, Navajas YR, López JF. Hagnýtir eiginleikar hunangs, propolis og konungshlaups. J Food Sci. 2008;73:117–24.

15. Hiroshi I, Masamitsu S, Kazuhiro T, Yoko A, Satoshi M, Hideaki H. Býflugnavörur koma í veg fyrir VEGF-framkallaða æðamyndun í æðaþelsfrumum úr naflablæðum manna. BMC viðbót Altern Med. 2009;9:1–10.

16. Tamura T, Fujii A, Kuboyama N. Antitumor áhrif konungshlaups (RJ). Nippon Yakurigaku Zasshi. 1987;89:73–80.

17. Park HM, Cho MH, Cho Y, Kim SY. Konungshlaup eykur kollagenframleiðslu í rottuhúð eftir eggjastokkatöku. J Med Food. 2012;15:568–75. doi:10.1089/jmf. 2011.1888.

18. Izuta H, Shimazawa M, Tsuruma K, Araki Y, Mishima S, Hara H. Býflugnavörur koma í veg fyrir VEGF-framkallaða æðamyndun í æðaþelsfrumum úr naflablæðum manna. BMC viðbót Altern Med. 2009;6:489–94.

19. Tseng JM, Huang JR, Huang HC, Tzen JTC, Chou WM, Peng CC. Auðveldandi framleiðsla á örverueyðandi peptíð-Royalisin og mótefni þess í gegnum gerviolíulíkamskerfi. Líftækni Prog. 2011;27:153–61.

20. Bílikova K, Huang SC, Lin IP, Šimuth J, Peng CC. Uppbygging og örverueyðandi virkni samband royalizing, örverueyðandi peptíð úr konungshlaupi Apis Mellifera. Peptíð. 2015;68:190–6.

21. Okuda H, Kameda K, Morimoto C, Matsuura Y, Chikaki M, Jiang M. Rannsóknir á insúlínlíkum efnum og hamlandi efnum í átt að angíótensín-umbreytandi ensími í konungshlaupi. Mitsubachi Kagaku. 1998;19:9–14.

22. Shinoda M, Nakajin S, Oikawa T, Sato K, Kamogawa A, Akiyama Y. Lífefnafræðilegar rannsóknir á æðavíkkandi þáttum í konungshlaupi. Yakugaku Zasshi. 1978;98:139–45. 23. Vittek J. Áhrif konungshlaups á lípíð í sermi í tilraunadýrum og mönnum með æðakölkun. Upplifun. 1995;51:927–35.

24. Ibrahim A, Eldaim MA, Abdel-Daim MM. Nýruverndandi áhrif býflugnahunangs og konungshlaups gegn ótímabundnum eiturverkunum á cisplatíni hjá rottum. Frumutækni. 2016;68:1039–48.

25. Han SM, Yeo JH, Cho YH, Pak SC. Royal Jelly dregur úr myndun melaníns með niðurstýringu á týrósínasa tjáningu. Am J Chin Med. 2011; 39:1253–60.

26. Gilchrest BA, Eller MS. DNA ljósskemmdir örvar sortumyndun og önnur ljósverndandi viðbrögð. J Investig Dermatol Symp Proc. 1999;4:35–40.

27. D'Mello SAN, Finlay GJ, Baguley BC, Askarian-Amiri ME. Merkjaleiðir í Melanogenesis. Int J Mol Sci. 2016;17:1144. doi:10.3390/ijms17071144.

28. Kobayashi T, Vieira WD, Potter B, Sakai C, Imokawa G, Heyrn VJ. Stöðun á melanogenic prótein tjáningu við skiptingu frá ESB yfir í pheomelanogenesis. J Cell Sci. 1995;108:2301–9.

29. Kim SS, Kim MJ, Choi YH, Kim BK, Kim KS, Park KJ, Park SM, Lee NH, Hyun G. Niðurstjórnun á tyrosinasa, TRP-1, TRP-2 og MITF tjáning með sítruspressukökum í músa B16 F10 sortuæxli. Asian Pac J Trop Biomed. 2013;3: 617–22.

30. Land EJ, Ito S, Wakamatsu K, Riley PA. Hraðfastar fyrir fyrstu tvö efnaþrep eumelanogenisa. Pigment Cell Res. 2003;16:487–93.

31. Yen FL, Wang MC, Liang CJ, Ko HH, Lee CW. Melanogenesis inhibitor(s) úr Phyla nodiflora extract. Evid Based Complement Alternat Med 2012; Auðkenni: 867494. doi 10.1155/2012/867494.

32. Tachibana M. MITF: straumur sem rennur fyrir litarfrumur. Pigment Cell Res. 2000;3:230–40.

33. Jung SO, Kim DH, Son JH, Nam KC, Ahn DU, Jo CR. Virkur eiginleiki eggjarauðu fosvítíns sem sortumyndunarhemlar. Food Chem. 2012;135: 993–8.

34. Yeon HK, Youn OJ, Cho CW, Son DW, Park SJ, Rho JH, Sang YC. Hindrandi áhrif kanelsýru á nýmyndun melaníns í húðinni. Biol Pharm Bull. 2008;31:946–8.

35. Liu JR, Yang YC, Shi LS, Peng CC. Andoxunareiginleikar konungshlaups sem tengjast aldri lirfunnar og uppskerutíma. J Agri Food Chem. 2007;56: 11447–52.

36. Carmichael J, DeGraff WG, Gazdar AF, Minna JD, Mitchell JB. Mat á hálfsjálfvirkri litamælingu sem byggir á tetrazolium: mat á efnanæmisprófum. Cancer Res. 1987;47:936–42.

37. Bilodeau ML, Greulich JD, Hullinger RL, Bertolotto C, Ballotti R, Andrisani O. MP-2 örvar týrósínasa genatjáningu og sortumyndun í aðgreindum sortufrumum. Pigment Cell Res. 2001;14:328–36.

38. Martinez-Esparza M, Jimenez-Cervantes D, Solano F, Lonzano JA, JC CB. Hömlun sortuæxlunar með æxlisdrepi þátt-alfa í B16/F10 sortuæxlisfrumum músa. Eur J Biochem. 1998;255:139–46.

39. Ding HY, Chang TS, Shen HC, Tai SK. Murine tyrosinasa hemlar frá Cynanchum Bungei og mat á in vitro og in vivo aflitunarvirkni. Exp Húðlækningar. 2011;20:720–4.

40. Takiwaki H, Serup J. Mæling á litabreytum psoriatic plaques með narrow-band reflectance spectrophotometry og tristimulus colorimetry. Skin Pharmacol. 1994;7:145–50.

41. Montgomery DC. Tilraunir með einn þátt: Dreifnigreining. Í hönnun og greiningu á tilraunum. Montgomery, DC, ritstj., John Wiley and Sons, New York, 1991; 75–77.

42. Park HY, Wu C, Yonemoto L, Murphy-Smith M, Wu H, Stachur CM. MITF miðlar cAMP-örvaða prótein kínasa Cb tjáningu í sortufrumum manna. Biochem J. 2006;395:571–8.

43. Goding CR. Mitf frá taugahálsi til sortuæxla: merkjaflutningur og umritun í sortufrumnaætt. Genes Dev. 2000;14:1712–28.

44. Kim DS, Park SH, Kwon SB, Li K, Youn SW, Park KC. (−)-Epigallocatechin-3- gallat og hinokitiol draga úr myndun melaníns með minni MITF framleiðslu. Arch Pharm Res. 2004;27:334–9.

45. Choi YK, RhoYK, Yoo KH, Lim YY, Li K, Kim BJ. Áhrif C-vítamíns vs fjölvítamíns á sortumyndun: Samanburðarrannsókn in vitro og in vivo. Nemandi J Dermatol. 2011;49:218–26.

46. ​​Dynek JN, Chan SM, Liu J, Zha J, Fairbrother WJ, Vucic D. Microphthalmia-tengdur umritunarþáttur er mikilvægur umritunarstjórnandi sortuæxla sem hindrar frumudauða í sortuæxlum. Cancer Res. 2008;68:3124–32.

47. Curtin JA, Fridlyand J, Kageshita T, Patel HN, Busam KJ, Kutzner H, Cho KH, Aiba S, Bröcker EB, LeBoit PE, Pinkel D, Bastian BC. Sérstaklega erfðafræðilegar breytingar á sortuæxlum. N Engl J Med. 2005;353(20):2135–47.

48. Chan SH, Lim WK, Scott T Michalski ST, Lim JQ, NDB, Met-Domestici M, Young CNC, Vikstrom K, Esplin ED, Fulbright J, Ang MK, Wee J, Sittampalam K, Farid M, Lincoln SE, Itahana K, Abdullah S, The BT, Ngeow J. Germline hemizygous eyðing CDKN2A-CDKN2B staðsetning hjá sjúklingi með Li-Fraumeni heilkenni. npj Genomic Medicine. 2016; doi:10.1038/ npjgenmed.2016.15

49. Hartman ML, Czyz M. MITF í sortuæxlum: aðferðir á bak við tjáningu þess og virkni. Cell Mol Life Sci. 2015;72:1249–60. doi:10.1007/s00018-014- 1791-0.

50. Antonescu CR, Busam KJ, Francone TD, Wong GC, Guo T, Agaram NP, Besmer P, Jungbluth A, Gimbel M, Chen CT, Veach D, Clarkson BD, Paty PB, Weiser MR. L576P KIT stökkbreyting í endaþarms sortuæxlum tengist KIT prótein tjáningu og er næm fyrir sértækri kínasa hömlun. Int J Krabbamein. 2007;121:257–64.

51. Abdel-Daim M, Funasaka Y, Komoto M, Nakagawa Y, Yanagita E, et al. Lyfjafræðileg fræði um metabotropic glútamat viðtaka undirtegund 1 og myndun illkynja sortuæxla in vivo. J Dermatol. 2010;37:635–46.

52. Ohtani Y, Harada T, Funasaka Y, Nakao K, Takahara C, o.fl. Metabotropic glútamat viðtaka undirtegund -1 er nauðsynleg fyrir in vivo vöxt sortuæxla. Oncogen. 2008;27:7162–70.

53. Kim J, Kim Y, Yun H, Park H, Kim SY, Lee KG, Han SM, Cho Y. Konungshlaup eykur flutning á húðtrefjum úr mönnum og breytir magni kólesteróls og sphinganíns í in vitro sáragræðslulíkani. Nutr Res Pract. 2010;4:362–8.

54. Fujii A, Kobayashi S, Kuboyama N, Furukawa Y, Kaneko Y, Ishihama S, Yamamoto H, Tamura T. Aukning á sárheilun með konungshlaupi (RJ) í streptózótósín-sykursýkisrottum. Jpn J Pharmacol. 1990;53:331–7.

55. Koya-Miyata S, Okamoto I, Ushio S, Iwaki K, Ikeda M, Kurimoto M. Auðkenning á kollagenframleiðsluhvetjandi þætti úr útdrætti af konungshlaupi og mögulegum aðferðum þess. Biosci Biotechnol Biochem. 2004;68:767–73.

Fyrir frekari upplýsingar: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501