Ágrip

Vatnskenndir etanólútdrættir úr stönglum Dendrobium loddigesii í duftformi gáfu þrjú ný fenól, þar á meðal þrjú -7-O-etýl-9-O-(4-hýdroxýfenýl)própíónýl-díacýlglýseról (1), (R){{ 7}},5,4ʹ-tríhýdroxý-3,3ʹ, -trímetoxýbíbensýl (2) og (S)-5,5',7-tríhýdroxý-3',4' -dímetoxýfavanóni (3), ásamt ellefu þekktum hliðstæðum. Uppbygging þeirra var ákvörðuð með víðtækri litrófsgreiningu. Til að bera kennsl á náttúruleg andoxunarefni, hvítunar- og öldrunarefni var hæfileiki þessara fenóla metinn til að hreinsa 1,2-dífenýl-2-píkrýlhýdrasýl (DPPH) stakeindina, getu þeirra til að hindra týrósínasaframleiðslu og hæfileika þeirra til að örva kollagenframleiðslu með húðtrefjafíbroblasta-fullorðnum (HDFa) prófi. Það kom í ljós að efnasambönd 1, 4–8, 13 og 14 sýndu marktæka DPPH róttæka hreinsivirkni, efnasamband 10 sýndi týrósínasa hamlandi virkni (IC50 37.904 ug/mL), og efnasamband 9 sýndi marktæka kollagenframleiðslu með EC50 gildið 3.182 ug/ml. Þessar niðurstöður benda til þess að fenólefni úr D. loddigesii geti verið andoxunarefni, húðhvítandi og/eða öldrunarefni.

Samkvæmt viðeigandi rannsóknum,cistancheer algengtjurtsem er þekkt sem "kraftaverkajurtin sem lengir lífið". Aðalþáttur þess erCistanósíð, sem hefur ýmis áhrif eins ogandoxunarefni, bólgueyðandi, ogefling ónæmisvirkni. Meginreglan milli cistanche oghúðhvíttunliggur í andoxunaráhrifumcistanche glýkósíð. Melanín í húð manna er framleitt með oxun átýrósínhvatað af týrósínasa og oxunarviðbrögðin krefjast þátttöku súrefnis, þannig að súrefnislausu stakeindir líkamans verða mikilvægur þáttur sem hefur áhrif á melanínframleiðslu. Cistanche inniheldur cistanoside, sem er andoxunarefni og getur dregið úr myndun sindurefna í líkamanum, þannig aðhamlar framleiðslu melaníns.

Smelltu á Cistanche Tubulosa viðbót

Fyrir frekari upplýsingar:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Grafískt ágrip

1. Inngangur

Ættkvíslin Dendrobium (Orchidaceae) inniheldur um það bil 1500 tegundir á heimsvísu, þar af um 80 tegundir vaxa í Kína [1]. Stönglar nokkurra plantna í þessari ættkvísl eru þekktir sem "Shi-Hu", sem hafa verið notaðir í þúsundir ára sem bæði hefðbundin kínversk læknisfræði og alþýðulækningar til að meðhöndla langvarandi rýrnunarmagabólgu, öldrun húðar, hita, hjarta- og æðasjúkdóma og tonic til að stuðla að framleiðslu líkamsvökva [2]. Fyrri rannsóknir á þessari ættkvísl leiddu til einangrunar á röð fjölsykra, fenólefnasambanda, alkalóíða og seskvíterpenóíða [1, 3-5], sem sum hver hafa ýmsa lífvirkni, þar á meðal bólgueyðandi [6], örverueyðandi [2], andoxunarefni. [7], æxlishemjandi [8], blóðflöguhemjandi [9], ónæmisbælandi [10] og gegn inflúensu A starfsemi [11].

Dendrobium loddigesii, ævarandi jurt, er víða dreift í suðvesturhluta Kína, eins og Guangxi, Guizhou og Yunnan héruðum [12]. Stilkur þess hefur verið notaður í alþýðulækningum til að meðhöndla magabólgu, hita og svima [13]. Í áframhaldandi leit að byggingarfræðilega fjölbreyttum og líffræðilega virkum náttúruafurðum frá þessari ættkvísl [1, 5, 14–17], var gerð ítarleg rannsókn á lyfjafræðilega virkum innihaldsefnum úr þessari plöntutegund hér. Fyrir vikið voru þrjú ný fenólsambönd (1–3) auk ellefu þekktra (mynd 1) einangruð úr 80 prósent etanólútdrætti úr stofni D. loddigesii. Einangrun, útskýring á uppbyggingu og líffræðilegt mat á þessum efnasamböndum er kynnt hér.

2 Niðurstöður og umræður

Efnasamband 1, sem fékkst sem hvítt fast efni, gaf sameindaformúlu C21H26O7 sem ákvarðað var með (−)-HRESIMS jóninni við m/z 389.1602 [M−H]− (reiknað fyrir C21H25O7, 389.16{{ 28}}6) með níu gráðu ómettunar. 1H NMR litróf 1 inniheldur sjö arómatískar róteindir við δH 6,85 (1H, d, J=1,7 Hz), 6,75 (1H, d, J=8,0 Hz), 6,68 (1H) , dd, J = 8,0, 1,7 Hz), 7,01 (2H, d, J = 8,5 Hz) og 6,68 (2H, d, J = 8,5 Hz), sem bendir til þess að 1,3,4-trísetinn bensenhringur og 1,4-trísetinn bensenhringur sé til staðar. 13C NMR litróf þess sýndi 21 kolefnisómun, þar á meðal tvö metýl (eitt metoxý), fjögur alifatísk metýlen, níu metín (tveir sp3, sjö sp2), og sex fjórðungskolefni (eitt karbónýl, fimm óefnislegt þar á meðal þrjú súrefnisbundin). HMBC fylgnin (Mynd 2) H-7/C-1 (δC 131.6), C-2 (δC 111.7), C-6 (δC 121.4), C -8 (δC 74.2), og C-10 (δC 65.3); H-9/C-7 (δC 83,8) og C-8 (δC 74,2); H-10/C-11 (δC 15,6); 3-OMe (δH 3,81)/C-3 (δC 149,1), ásamt fylgni H-7/H-8/H2-9 og H{{ 87}}/H3-11 frá 1 H–1 H COSY litróf (Mynd 2) gaf til kynna nærveru 7-O-ethylguaiacylglycerol [18]. Greint hefur verið frá því að J7,8 hafi verið um 5 Hz fyrir rauðkornahverfan og 7 Hz fyrir hverfurnar þrjár í tilfellum sprautu-glýseróla og díacýlglýserólafleiða. Þannig var efnasamband 1 talið vera hverfurnar þrjár með J7,8 (6,5 Hz) [18]. HMBC fylgni H-7ʹ (δH 2,79, t, J = 7,5 Hz)/C-8ʹ (δC 37,1), C-1ʹ (δC 132,7), C-2ʹ, 6ʹ (δC 130,2) og C-9ʹ (δCʹ 174,6), H-8ʹ (δH 2,59, t, J = 7,5 Hz)/C-7ʹ (δC 31,0), C-1ʹ og C-9ʹ, ásamt COSY krosstoppum H-8ʹ/H-7ʹ gefið til kynna tilvist p-hýdroxýkúmarsýru [19]. Á grundvelli sönnunargagnanna sem lýst er hér að ofan var lagt til að 1 væri með 7-O-etýlguajasýlglýserólhluta og p-hýdroxý-kúmarsýru í gegnum estertengingu. HMBC fylgnin frá H-9 til C-9ʹ gaf til kynna að estertengingin væri á milli C-9 og C-9ʹ. Þannig var uppbygging 1 ákvörðuð eins og sýnt er.

(R){{0}},5,4ʹ-Tríhýdroxý-3,3ʹ,-trímetoxýbíbensýl (2) fékkst sem hvítt fast efni. HRESIMS litrófið 2 sýndi hálfsameindajónatopp við m/z 319.1180 [M−H]− (reiknað fyrir C17H19O6, 319.1187) með 8 gráðu ómettunar. 1H NMR litróf 2 sýndi þrjá metoxýlhópa við δH 3,75 (3H, s), 3,70 (3H, s) og 3,17 (3H, s); ein súrefnisrík metínróteind við δH 4,13 (1H, t, J=6.8 Hz, H-); tvö metýlenmerki við δH 2,73 (1H, dd, J=13.5, 6.9 Hz) og 2.96 (1H, dd, J=13.5, 6.9 Hz); og fimm arómatískar róteindir, sem birtast sem 1,3,4,5-fjórskiptur arómatískur hringur við δH 6,28 (1H, d, J=1,8 Hz) og 6,34 (1H, d, J{{ 60}},8 Hz), og 1,3,4-þríútskiptur arómatískur hringur við δH 6,49 (1H, d, J=2,0 Hz), 6,62 (1H, d, J=8.0 Hz) og 6.52 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz). 13CNMR og DEPT litróf 2 sýndu þrjú oxýmetýlen, eitt metýlen, eitt súrefnisríkt metín og 12 arómatísk kolefni (fimm súrefnisrík). Samanburður á NMR gögnum þess (tafla 1) og dendrocandin C [20] sýndi mikla líkindi nema fyrir tilvist einn metoxýl hóps til viðbótar, sem var staðsettur við C-3ʹ með HMBC fylgni frá 3ʹ-OMe og H-5ʹ til C-3' (δC 148,4). Að auki, margar HMBC milliverkanir (mynd 2) 3-OMe og H-2/C-3 (δC 149,5); -OMe/C- (δC 86,9) benti til hinna metoxýlhópanna við C-3 og C-, í sömu röð. Alger stilling við C- var ákvörðuð sem R á grundvelli neikvæða sjónsnúningsins ([훼] 26 D –12.46), svipað og aphyllous D [훼] 20 D –20.3, MeOH) [15]. Í samræmi við það var uppbygging 2 ákvörðuð eins og sýnt er.

(S){{0}},7,5'-Tríhýdroxý-3',4'-dímetoxýfavanón (3) var fengið sem gult formlaust duft og hafði sameindina C17H16O7 (1{{69} } vísitölur vetnisskorts) samkvæmt (−)-HRESIMS jóninni við m/z 331,0819 [M – H]- (reiknað 331,0823). Hámark UV frásogs við 206 og 294 nm benti til þess að flavanón væri til staðar [21]. 1H NMR litrófið (tafla 1) sýndi þrjú merki á arómatíska svæðinu sem var komið fyrir við δH 5,29 (1H, dd, J=12.7, 3.1, H-2), 3.04 (1H, dd, J=17.1, 12.7, H-3ax) og 2.71 (1H, dd, J=17.1, 3.1, H-3 jöfnuður), fjórir arómatískar róteindir δH 5,87 (1H, d, J=2.2, H-6), 5.91 (1H, d, J=2.2, H-8), 6.62 (1H, d, J=2.0, H-2ʹ) og 6.61 (1H, d, J=2.0, H-6ʹ), tveir metoxýlhópar δH 3.83 (3H, s) og 3,77 (3H, s). 13C NMR og DEPT litróf (tafla 1) innihalda ómun fyrir 17 kolefni, þar á meðal tvö metoxý, eitt metýlen, eitt metín, eitt karbónýl kolefni og 12 arómatísk kolefni. Alhliða greining á NMR gögnum þess benti til þess að flatarbygging þess er náskyld uppbyggingu díhýdrótrísíns [22], nema OH-4ʹ og OCH3-5ʹ ómun í díhýdrótrísíni voru yfirfærð í 3. Þetta var staðfest með HMBC kross- toppar (mynd 2) frá H-2ʹ, H-6ʹ og OCH3-4ʹ til C-4ʹ (δC 137,7), frá H-6ʹ til C-5ʹ (δC 151,8). Gert var ráð fyrir að algera stillingin við C-2 væri á S-formi á grundvelli neikvætts sérstaks snúningsgildis (– 46,64, MeOH) í sjónsnúningi þess [23]. Þess vegna var uppbyggingu efnasambands 3 þannig úthlutað ótvírætt eins og sýnt er.

Ellefu þekkt efnasambönd voru auðkennd sem trepidation 4 [24], meskalín 5 [25], 4,5,4'-tríhýdroxý- 3,3'-dímetoxýbíbensýl 6 [26], 4', 5- díhýdroxý-3,3'-dímetoxýbíbensýl 7 [27], Tristin 8 [28], batatas í III 9 [27], 3,5,3'-hýdroxýbíbensýl 10 [29], aphyllous C 11 [15], tannform A 12 [30], díhýdrókoniferýl díhýdró-p-kúmarat 13 [31], p-hýdroxýfenýl trans-ferúlat 14 [32] með litrófsgreiningu og samanburði á litrófsgögnum þeirra við bókmenntir.

Fenólsambönd eru ómissandi hluti af mataræði mannsins og eru þekkt sem öflug andoxunarefni vegna öflugrar keðjurofandi virkni þeirra og geta stuðlað beint að andoxunarvirkni [33]. DPPH radical scavenging prófið er ein algengasta og tiltölulega fljótlegasta aðferðin sem notuð er til að meta andoxunarvirkni. Efnasambönd sem geta gefið vetnisatóm til DPPH stakeindarinnar og síðan myndað minnkað form DPPH verða talin hugsanleg andoxunarefni. Öll efnasambönd voru metin með tilliti til DPPH radical scavenging virkni þeirra. Núverandi niðurstöður (tafla 2) sýndu að meirihluti fenólefnasambandanna (1, 4–8, 13 og 14) sýndu marktæka virkni með hreinsunargetu á bilinu 89.411 til 94.278 prósent við 100 ug/ml.

Á hinn bóginn er týrósínasi kopar-innihaldandi ensím og gegnir mikilvægu hlutverki við að stjórna melanínlífmyndunarferlinu í sortufrumum [34]. Þess vegna urðu týrósínasahemlar mikilvægir þættir í snyrtivörum eða lyfjum fyrir oflitarefni og þróun húðhvítunarefna. Í þessari rannsókn voru öll einangrun metin með tilliti til týrósínasahamlandi virkni þeirra (tafla 2). Kojic sýra, sem ætlað er að lýsa húðinni, var notað sem jákvæð viðmiðun. 3,5,3'-hýdroxýbíbensýl (10) sýndi marktæka hamlandi virkni með IC50 gildi 37,904 ug/ml. Aphyllals C (11) sýndi miðlungsmikla hömlun (IC50, 152,56 ug/mL). Öll efnasamböndin sem eftir voru voru óvirk í styrk upp að 200 ug/ml. Í þessari rannsókn má draga þá ályktun að efnasambönd 10 og 11 geti verið hugsanlegur frambjóðandi til meðferðar á húðsjúkdómum sem tengjast melanínlífmyndun.

Miðað við að þessi tegund er notuð til lækninga við öldrun húðar, þar sem kollagen er mikilvægt fyrir styrk og mýkt húðarinnar og niðurbrot þess leiðir til hrukka sem fylgja öldrun [35]. Þess vegna voru öll efnasamböndin einnig metin markvisst fyrir áhrif þeirra á kollagenframleiðslu í HDFa. Niðurstöðurnar (tafla 2) sýndu að efnasamband 9 örvaði marktækt HDFa kollagen framleiðsluvirkni (EC50 3.182 ug/mL). Efnasambönd 6 og 7 sýndu veikari virkni, með kollagenframleiðslu upp á 33,062 prósent og 29,157 prósent við 10 ug/mL, í sömu röð. Núverandi niðurstöður studdu ekki aðeins þjóðernislyfjafræðilega notkun D. loddigesii heldur veittu einnig áreiðanlegt uppbyggingarsniðmát til að þróa kollagenskortstengda sjúkdóma eins og bruna og sár.

3 Tilraunaverkefni

3.1 Almennar tilraunaaðferðir

3.2 Plöntuefni

Stönglum D. loddigesii var safnað í september 2014 frá Wenshan City, Yunnan héraði, Alþýðulýðveldinu Kína, og auðkennt af prófessor Hong Yu (Yunnan University, Kunming, Alþýðulýðveldið Kína). Skírteinissýnishornið (nr. 20.140.829) hefur verið afhent hjá State Key Laboratory of Phytochemistry and Plant Resource í Vestur-Kína, Kunming Institute of Botany, Chinese Academy of Sciences.

3.3 Útdráttur og einangrun

Þurrkaðir og duftformaðir stilkarnir (10,2 kg) af D. loddigesii voru dregin út þrisvar sinnum með 80 prósent etanóli við stofuhita og þéttir við lækkaðan þrýsting. Síðan var leifinni dreift í H2O og skipt með EtOAc til að fá EtOAc hlutinn (220 g), sem var látinn fara í kísilgelsúluskiljun sem skoluð var út með jarðolíueter/asetoni (15:1 til {) {110}}:1) til að gefa 22 brot (Fr.1–22). Fr.11 (6 g) var sett í kísilgel CC skolað með CHCl3/MeOH (300:1), síðan fylgt eftir með MCI súlu (MeOH/H2O halli, 60:40–95:5) og kísilgel CC (CHCl3/ MeOH, 200:1) til að gefa 12 (4 mg). Fr.13 (850 mg) var aðskilið yfir súlu af MCI (MeOH/H2O, 60:40 til 95:5) til að gefa fimm hluta (Fr.13.1–Fr.13.5). Fr.13.4 (150 mg) gaf efnasambönd 4 (3 mg) og 5 (5 mg) með HPLC undirbúningi (MeOH/H2O, 60:40). Fr.16 (19 g) var litskiljað á kísilgelsúlu skolað með CHCl3/MeOH (100:1 til 20:1) til að gefa 6 undirhluti (Fr.16.1–Fr.16.6). Fr.16.4 (2,3 g) var sett á MCI súlu skolað með MeOH/H2O (50:50–100:0) og síðan skipt frekar yfir súlu af Sephadex LH-20 (MeOH/H2O, 90:10) til að afrakstur 7 (716 mg) og 13 (39 mg). Með því að nota sömu skilyrði og Fr.16.4, gaf Fr.16.6 (240 mg) efnasamband 9 (7 mg). Fr.18 (10 g) var aðskilið með kísilgeli CC (CHCl3/MeOH, 100:1–20:1), síðan farið í gegnum MCI (MeOH/H2O halli, 50:50–100:0) og Sephadex LH{{ 96}} (MeOH/H2O, 90:10) súlur til að gefa 3 (25 mg) og 11 (4 mg). Fr.19 (20 g) var sett í MCI súlu sem var skoluð með MeOH/H2O (30:70–100:0) til að fá sjö brot (Fr.19.1–Fr.19.7). Fr.19.5 (2.3 g) var aðskilið með endurtekinni kísilgelsúlu (CHCl3/MeOH, 30:1) til að gefa 8 (15 mg) og 10 (7 mg). Fr.19.6 (4.3 g) var skipt á súlu af kísilgeli (CHCl3/MeOH, 30:1) til að gefa 5 hluta (Fr.19.6.1– Fr.19.6.5). Fr.19.6.1 (1,2 g) var sett í kísilgelsúlu (CHCl3/MeOH, 30:1) og eftir hreinsun með HPLC (MeOH/H2O, 45:55), sem gaf 1 (15 mg). Fr.19.6.3 (540 mg) var sett á súlu af Sephadex LH-20 súlu sem var skoluð með MeOH/H2O (90:10), og síðan frekar hreinsuð með hálfundirbúandi HPLC (MeOH/H2O, 45:55) til að gefa 2 (6 mg) og 6 (5 mg). Fr.20 (12 g) var sett á MCI hlaup (MeOH/H2O, 30:70–100:0) litskiljunarskref og síðan sett í kísilgel CC (CHCl3/MeOH, 30:1) til að gefa 14 (21) mg).þrjú {{0}}O-Etýl-9-O-(4-hýdroxýfenýl) própíónýl-díacýlglýseról (1): hvítt fast efni; []D26 – 3,72 (c 0,51, MeOH); UV (MeOH) Xmax (log e) 203 (4,53), 225 (4,17), 280 (3,66) nm; IR (KBr) vmax 3426, 1727, 1516, 829 cm−1; 1H og 13C NMR (CD3OD), sjá töflu 1; ESIMS m/z 389 [M-H]-, HRESIMS m/z 389,1602 [M-H]- (reiknað fyrir C21H25O7, 389,1606).

(R)-4,5,4'-tríhýdroxý-3,3ʹ, -trímetoxýbíbensýl (2): hvítt myndlaust duft; []D26 –12,46 (c 1,07, MeOH); UV (MeOH) Xmax (log e) 204 (4,59), 286 (3,75) nm; IR (KBr) vmax 3418, 1607, 1517, 1455, 1434, 796 cm−1; 1H og 13C NMR (CD3OD), sjá töflu 1; ESIMS m/z 319 [M-H]-, HRESIMS m/z 319,1180 [M-H]- (reiknað fyrir C17H19O6, 319,1187).

(2S)-5,7,3ʹ-Tríhýdroxý-6,4,5-trímetoxýfavon (3): gult myndlaust duft; []D 26 – 46,64 (c 0.46, MeOH); UV (MeOH) Xmax (log e) 206 (4,70), 294 (4,17) nm; IR (KBr) vmax 3335, 2940, 1641, 1514, 1462, 1345, 1434, 1182, 1091, 998, 833 cm−1; 1H og 13C NMR (CD3OD), sjá töflu 1; ESIMS m/z 331 [M-H]-, HRESIMS m/z 331,0819 [M-H]- (reiknað fyrir C17H15O7, 331,0823).

3.4 DPPH Radical Scavenging Activity Assay

Virkniprófun á sindurefnahreinsun var framkvæmd samkvæmt fyrri aðferð [36] með nokkrum breytingum. Í stuttu máli var 30 μL sýni (1000 ug/mL, leyst upp í etanóli) og Trolox (1 mM) bætt við 270 μL DPPH lausn (100 μM, leyst upp í metanól), í sömu röð. Hvarfið hélt áfram í 1 klst við 37 gráður á 96-brunn örplötu. Gleypið var síðan lesið við 515 nm og hlutfall heildarvirkni róttækrar hreinsunar var reiknað út með því að nota eftirfarandi formúlu: hömlunarprósenta =[(A0− A1)/A0]×100 prósent , þar sem A0 er gleypni DPPH án sýna (viðmiðunarviðbragð) og A1 er gleypni DPPH sem ræktað er með sýnunum. Öll prófin voru gerð í þríriti og Trolox var notað sem jákvætt viðmiðunarefni.

3.5 Sveppir týrósínasa hindrunarpróf

Týrósínasavirknihömlun var ákvörðuð með litrófsmælingu samkvæmt aðferðinni sem lýst var áður [36] með nokkrum breytingum. Í stuttu máli var mismunandi styrkur prófefnasambanda útbúinn í 10 prósent DMSO. Hverri sýnislausninni (20 μM) var blandað saman við L-Dopa (1,25 mM) og þynnt með 970 μL af 0.05 mM natríumfosfatbuffi (PBS, pH 6,8) í tilraunaglösunum. Hvarfið var hafið með því að bæta við sveppatýrósínasa (25 U/mL). Hvarfblandan var ræktuð í 5 mínútur við stofuhita. Magn dópakróms í blöndunni var ákvarðað með mælingu á gleypni hvers brunns við 490 nm. Kojínsýra var notuð sem jákvæð viðmiðun. Hömlunarprósenta týrósínasa var reiknuð út samkvæmt eftirfarandi jöfnu: Prósenta hömlun=[(A0− A1)/A0] × 100 prósent , þar sem A0 er gleypni dópakrómsins án prófefnasambanda (viðmiðunarhvarf) og A1 er gleypni dópakróms sem ræktað er með prófunarefnasamböndunum.

3.6 Kollagenframleiðsla með HDFa prófun

Þakkir Þetta verkefni var stutt fjárhagslega af vísinda- og tæknideild Yunnan héraðsins (nr. 2017ZF003-04, 2015HB093 og 2019HA001). Höfundarnir eru þakklátir starfsfólki greiningarhóps State Key Laboratory of Phytochemistry and Plant Resources í Vestur-Kína, Kunming Institute of Botany, Chinese Academy of Sciences, fyrir mælingar á öllum litrófum.

Fylgni við siðareglur

Opinn aðgangurÞessari grein er dreift samkvæmt skilmálum Creative Commons Attribution 4.0 International License, sem leyfir ótakmarkaða notkun, dreifingu og fjölföldun á hvaða miðli sem er, að því tilskildu að þú veitir upprunalega höfundinum/höfundunum og upprunanum viðeigandi heiður. , gefðu upp hlekk á Creative Commons leyfið og tilgreina hvort breytingar hafi verið gerðar.

Heimildir

Fyrir frekari upplýsingar: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501