Formeðferðarvirkjað AKT stjórnar taugaþoli fyrir blóðþurrð í gegnum MDM2–p53 leiðinaⅡ

3. Umræður

Niðurstöður okkar sýna að IPC-miðluð virkjun á PI3K/AKT merkjaleiðinni kveikir á upplýsingatækni taugafrumna með því að stjórna MDM2-p53 flókinu í frum taugafrumum í heilaberki. Við staðfestum fyrst skilvirkni forskilyrðingarinnar hvað varðar taugavernd [33,39-41] með því að nota fullgilt IPC tilraunalíkan.

Smelltu til að cistanche tubulosa aukaverkanir fyrir Neuron

Við komumst að því að tilrauna-IPC framkallað af stuttri (20 mín.) súrefnis- og glúkósaþurrð (OGD) fylgt eftir af 2 klst. endursýringu leiddi til taugaverndar, eins og sýnt er af því að koma í veg fyrir bæði taugafrumufrumu og caspasa-3 virkjun sem framkallast af langvarandi OGD (90 mín) fylgt eftir með 4 klst af endursýringu (OGD/R). Við sýnum að IPC dregur úr virkjun kaspasa-3 í taugafrumum í heilaberki, sem tengist minni frumudauða eftir síðari og alvarlegri blóðþurrðarmóður.

Jafnvægið milli for- og andapoptotic merkja er grundvallaratriði til að tryggja lifun taugafrumna eftir blóðþurrð [3,33,38,42-44]. Þrátt fyrir að sýnt hafi verið fram á mikilvægi slíkra atburða bæði í blóðþurrðar- og blóðþurrðarlíkönum in vivo heilablóðfalls [43, 45], er verkunarhátturinn sem stjórnar þessum boðleiðum ekki enn að fullu skilinn í samhengi við blóðþurrðarþol. Hlutverk andapoptotic AKT og tengdar leiðir þess hafa verið mikið rannsakaðar í krabbameinsfrumum [46,47] og heilavef [38,48]; Hins vegar, enn sem komið er, er hlutverk AKT/MDM2- p53 boðleiðar í IPC-miðluðu taugaþoli gegn blóðþurrðarskaða enn óviðjafnanlegt.

Hér komumst við að því að virkjun PI3K/AKT boðferilsins af völdum IPC stuðlar að fosfórun MDM2 við Ser166, sem kemur af stað kjarnaflutningi þess og próteinstöðugleika, sem kemur í veg fyrir p53-framkallaða frumudauða með caspasa-3 virkjun eftir blóðþurrð. Virkjun AKT með fosfórun stuðlar að lifun taugafrumna [24,49] og getur stuðlað að framkalli upplýsingatækni [25,50]. Niðurstöður okkar sýna að hlutfallslegt magn AKT próteins er óbreytt við blóðþurrðar- eða forskilyrði áreiti. Athyglisvert er að við komumst að því að snemma PI3K-miðluð fosfórun AKT við Ser473 kemur í veg fyrir stöðugleika p53 af völdum blóðþurrðar í forskilgreindum taugafrumum.

Áhrifin voru ekki vegna breytinga á p53 mRNA gildum [33,34,44] heldur minnkuðu p53 próteinmagni vegna IPC fyrir OGD/R. Þar sem MDM2 er aðal eftirlitsaðili p53 stöðugleika og er einnig beint skotmark AKT, benda niðurstöður okkar á hlutverk AKT/MDM2–p53 boðleiðar í taugafrumum umburðarlyndi fyrir blóðþurrð. MDM2 mRNA eykst hratt eftir OGD [34], en MDM2 virkni er aðallega stjórnað af breytingum eftir þýðingu, sérstaklega fosfórýleringu [51]. Í góðu samræmi við þetta komumst við að því að einu sinni virkjað með fosfórýleringu eftir IPC, fosfórar AKT aftur á móti MDM2 við leifar Ser166, sem er staðsett nálægt kjarnastaðsetningarmerkinu [52], og þessi áhrif haldast eftir OGD/R meiðsli.

Niðurstöður okkar sýna að fosfórun MDM2 við Ser166 nægir til að beita IPC-miðluðum taugaverndaráhrifum með p53 óstöðugleika. Þannig, hér, greindum við tímaháða virkjun á AKT/MDM2-p53 ferli eftir blóðþurrðarskaða og reyndar sýnum við fram á að IPC-virkjað AKT kveikti á kjarnaflutningi utanlegs MDM2, sem og innræna próteinstöðugleika.

Þar að auki er AKT áfram virkt í kjarnanum, þar sem PI3K gæti einnig flutt til að bregðast við oxunarálagi og þá gert grein fyrir AKT fosfórun [53]. Hömlun PI3K-miðlaðrar fosfórunar á AKT eða AKT knockdown stuðlar að varðveislu MDM2 próteins í umfrymi, og það kemur í veg fyrir Ser166 fosfórun á MDM2, sem og IPC-miðlaða taugavörn gegn blóðþurrð af völdum taugafrumufrumu. Þvert á móti sýndum við að virkt AKT binst kjarna MDM2 próteini.

Þar af leiðandi stuðlar virk AKT að bæði fosfórýleringum MDM2 og kjarnastöðugleika þess, sem stuðlar að IPC-miðlaðri taugavernd. Niðurstöður okkar sýna að IPC-stuðluð taugavörn var háð PI3K-miðlðri AKT virkjun, sem fosfóraði MDM2 við Ser166, sem stuðlaði að MDM2 kjarnasöfnun eftir blóðþurrðarmóður.

Samkvæmt því, hömlun á PI3K/AKT með wortmannin eða AKT eyðingu með siRNA afnam IPC-stuðla taugavernd, sem leiddi til p53 stöðugleika og síðari taugafrumna apoptosis eftir blóðþurrð. Þess vegna hjálpa niðurstöður okkar við að skýra mikilvægu hlutverki IPC-háðrar virkjunar AKT-MDM2 leiðarinnar í lifun taugafrumna gegn blóðþurrðarskaða.

P53 próteinið tekur þátt í stjórnun taugafrumudauða/lifunar sem ákvarðar horfur hjá heilablóðfallssjúklingum [34,42,54], sem og hjá TIA sjúklingum [3]. Stöðugleiki P53 dregur úr taugavörn sem miðlað er við forskilyrði vegna blóðþurrðar/endurflæðisskaða [33]. MDM2-p53 milliverkunin mun því skipta sköpum fyrir lifun taugafrumna í þessu samhengi [34] og fyrir IPC-miðlaða þol gegn blóðþurrðarskaða [33].

Thus, the control of such interaction will also have an impact on stroke outcomes. In this context, we recently found that a single-nucleotide polymorphism (SNP) 309T>G í MDM2 verkefnisstjóranum ákvarðar tjáningu MDM2 og stjórnar aftur bata sjúklinga sem þjást af heilablóðfalli [34].

Að auki sáum við að Tp53 gen SNP (rs1042522) mótar stöðugleika hvatbera p53 og taugaþol gegn blóðþurrð en spáir fyrir um hagnýtan bata sjúklinga sem þjást af TIA fyrir heilablóðfall [3]. Þess vegna mun eftirlit með p53 apoptotic ferlum vera nauðsynlegt til að tryggja taugaverndandi áhrif IPC.

Þessar niðurstöður veita þýðingaaðferð við rannsóknina sem hægt væri að innleiða í framtíðinni til hagsbóta fyrir sjúklinga, og þær setja PI3K/AKT–MDM2–p53 merkjaleið sem nauðsynlegt markmið fyrir upplýsingatækniaðferðir sem stuðlað er að forskilyrðum í heilablóðfalli. Í stuttu máli sýnum við fram á að IPC-bætt PI3K/AKT merkjaleiðin stuðlar að fosfórun MDM2 við Ser166, sem leiðir til MDM2 kjarnaflutnings og stöðugleika þess, sem kallar á upplýsingatækni taugafrumna með því að stuðla að p53 óstöðugleika og síðari óvirkjun á apoptotic dauða af völdum blóðþurrðar af völdum blóðþurrðar.

Niðurstöður okkar leggja áherslu á hugsanlegan ávinning af snemmtækri virkjun AKT í IPC-miðluðu taugaþoli, sem stjórnar MDM2-p53 apoptotic ferlinu við blóðþurrðarskaða. Þessar niðurstöður benda á tækifæri til að skilja aðferðir sem stjórna taugafrumum AKT-MDM2-p53 merkjaleiðinni til að þróa nýjar taugavarnaraðferðir fyrir upplýsingatæknitengda sjúkdóma.

4. Efni og aðferðir

4.1. Aðalmenning heilabarktauga

Taugaræktun var útbúin úr C57Bl/6J eða p53-null (Tp53−/−, B6.129S2, Jackson Laboratory) músafósturvísa (14.5E) heilaberki. Taugafrumum var sáð í 1,8 × 105 frumur/cm2 í taugabasal miðli sem bætt var við 2 prósent B27 og 2 mM glútamíni (Invitrogen, Madrid, Spáni) og ræktaðar við 37 ◦C í rakaðri 5 prósent CO2-lofthjúpi [ 55].

4.2. Súrefnisglúkósasviptingar og formeðferðarlíkön

Eftir 9–1{{10}} daga in vitro (DIV) voru taugafrumur útsettar fyrir súrefnis- og glúkósaskorti (OGD) með því að rækta frumur við 37 ◦C í 90 mínútur í hitakassa búin með loftlás og stöðugt gasaður með 95 prósent N2/5 prósent CO2. Ræktunarmiðillinn (bufferuð lausn Hanks án glúkósa: 5,26 mM KCl, 0,43 mM KH2PO4, 132,4 mM NaCl, 4,09 mM NaHCO3, 0,33 mM Na2HPO4, 2 mM CaCl2 og 20 mM Ns HEP4, og 20 mM Ns. /5 prósent CO2 í 30 mín. Við þessar aðstæður var súrefnisstyrkur í ræktunarmiðlinum 6,7 ± 0,5 µM, mældur með súrefnisrafskauti af Clark-gerð [56,57].

Þegar það var gefið til kynna voru taugafrumurnar útsettar fyrir blóðþurrðarformeðferð (IPC; stutt OGD í 20 mínútur fylgt eftir af 2 klst af endursúrefni) fyrir síðari langvarandi blóðþurrð (OGD, 90 mín) og 4 klst. ). Samhliða voru taugafrumur ræktaðar í normoxia (Nx) við 37 ◦C í rakaðri andrúmslofti 95 prósenta lofts/5 prósent CO2 eða blóðþurrðarformeðferðar (IPC). Þegar gefið var til kynna voru taugafrumur ræktaðar 30 mínútum fyrir IPC í jafnaðarlausn Hanks (pH 7,4), í fjarveru eða viðveru wortmannins (100 nmól/L), eins og áður hefur verið lýst [19].

4.3. Frumubreytingar

Taugafrumur (8 DIV) eða HEK-293T frumur voru umbreyttar með plasmíðferju sem tjáir YFP-merkt Mdm2 frá MDM2 mönnum hvata. MDM2p/Mdm2-YFP var gjöf frá Uri Alon og Galit Lahav (Addgene plasmíð # 53962, Watertown, MA, Bandaríkjunum) [58]. Þegar þess var krafist var tómur vektor (pYFP) notaður sem viðmiðun við sömu aðstæður. Plasmíðflutningur var framkvæmdur með Lipofectamine® LTX (Invitrogen, Carlsbad, MA, Bandaríkjunum), samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Frumur voru umbreyttar með 1,5 µg/µL af plasmíðferjunni og notaðar eftir 24 klst.

AKT niðurfelling í 6 DIV taugafrumum var náð með transfection með litlum truflandi tvíþátta ríbónukleótíðum (siRNA). Markaðar raðir voru sem hér segir: 50–CUCAAGUACUCAUUCCAGAtt–30, andskynjun: 5 0–UCUGGAAUGAGUACUUGAGgg–30 (mús, s62216, samsvarar núkleótíðum 1006–1025, GenBank aðgangsnúmer NM{5{9}) Sem neikvæða stjórn notuðum við Silencer™ Select Negative Control nr. 1 siRNA (siControl). Öll siRNA voru keypt frá Ambion®, Invitrogen® og Thermo Fischer Scientific (Offenbach, Þýskalandi). Samkvæmt því hversu mikið prótein var fellt niður var skilvirkni flutnings siRNA metin vera 70–80 prósent 3 dögum eftir flutning. Fyrir þöggunartilraunir voru taugafrumur transsýktar með siRNA (10 nM) með því að nota Lipofectamine® RNAiMAX (Invitrogen), eftir leiðbeiningum framleiðanda. Taugafrumur voru ræktaðar frekar í Neurobasal miðli í 72 klst fyrir notkun þeirra.

4.4. Flow Cytometric Detection of Apoptotic Cell Death

Taugafrumur voru vandlega losaðar frá plötunum með því að nota 1 mM EDTA tetranatríumsalt í PBS (pH 7,4) og voru litaðar með annexíni V/APC og 7-AAD, framkvæmt nákvæmlega eins og áður hefur verið lýst [55].

4.5. Caspase-3 virknigreining

Kaspasa-3 virkni var metin í frumulýsum [33] og samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda með því að nota flúormetragreiningarsettið CASP3F frá SIGMA og lesið við losun á bylgjulengd 405 nm. Aðferðin byggist á losun flúrljómandi 7-amínó4-metýlkúmaríns (AMC) hlutans. AMC styrkur er reiknaður út með AMC staðli.

4.6. Immunoblots og sam-ónæmisútfellingarprófun

Taugafrumur voru leystar í jafna sem innihélt 1 prósent SDS, 2 mM EDTA, 150 mM NaCl, 12,5 mM Na2HPO4 og 1 prósent Triton X-100 (NP40: 1 prósent NP40, EDTA diK plús 5 mM, Tris pH{{13 }} mM, NaCl 135 mM og 10 prósent glýseról) ásamt fosfatasahemlum (1 mM Na3VO4 og 50 mM NaF) og próteasahemlum (100 mM fenýlmetýlsúlfónýlflúoríð, 50 µg/ml and-papain/50 µg/mL 50 mM pepainstat, µg/mL amastatín, 50 µg/mL leupeptin, 50 µg/mL bestatín og 50 µg/mL sojabaunatrypsín hemill), geymt á ís í 30 mínútur og soðið í 5 mínútur. Skammtar af upplýstum útdrætti voru settir í SDS pólýakrýlamíð hlaup (MiniProtean®, Bio-Rad) og þurrkaðir með mótefnum yfir nótt við 4 ◦C. Mótefni sem notuð voru voru and-AKT (9272), and-p(Ser473)AKT (9271), and-klofinn caspase-3 (Asp175, 9661) (Cell Signaling, Danvers, MA, USA), and-p53 ( 554157, BD Biosciences), andstæðingur-MDM2 (2A10, ab-16895), andstæðingur (Ser166)MDM2 (ab131355), andstæðingur-GFP (ab290; greinir einnig YFP) (Abcam, Cambridge, Bretlandi), andstæðingur-LAMIN B (sc-374015, Santa Cruz Biotechnology, Heidelberg, Þýskalandi), og antiGAPDH (Ambion, Cambridge, Bretlandi) yfir nótt við 4 ◦C. Eftir ræktun með piparrótarperoxidasa-tengdu geita-anti-kanínu-IgG (Pierce, Thermo Scientific) eða geita-anti-mús-IgG (Bio-Rad), voru himnur strax ræktaðar með aukinni efnaljómun SuperSignal West Dura (Pierce) í 5 mínútur áður en þær verða fyrir Kodak XAR-5 filma í 1 til 5 mínútur og sjálfsgeislamyndirnar voru skannaðar. Hljómsveitarstyrkur var magngreindur með ImageJ 1.48v hugbúnaði, eins og áður hefur verið lýst [60].

Fyrir sam-ónæmisútfellingarprófið voru taugafrumur leystar í ísköldu jafnalausn sem innihélt 50 mM Tris (pH 7,5), 150 mM NaCl, 2 mM EDTA, 1 prósent NP-40) ​​ásamt fosfatasahemlum sem lýst er hér að ofan. Eftir að rusl hefur verið hreinsað með skilvindu, voru taugalýsöt (100 mg) ræktuð með 1 mg af mótefninu í 24 klst við 4 ◦C og síðan bætt við 10 ml af próteini A-agarósa (GE Healthcare Life Sciences) í 2 klst. ◦C. Ónæmisútfellingar voru þvegnar ítarlega með lýsispúða og leyst upp með SDS-PAGE og ónæmisblettuð með tilgreindum mótefnum [61]. Hlutfallslegt magn próteina er sýnt á mynd S1. Fullir blettir og hlaupskannanir eru á mynd S3.

4.7. Ónæmisfrumuefnafræði og myndgreining

Taugafrumur voru ræktaðar á glerþekju og festar með 4 prósentum (w/v, í PBS) paraformaldehýði í 30 mínútur og ónæmislitaðar með kanínu-anti-phosphoAKT (Ser473; 9271; Cell Signaling, MA, USA), músa-anti-MDM2 (2A10, ab-16895), mús gegn MAP2 (1:500; M#1406, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) [55], mús gegn p53 (1:200; 554157, BD Pharmingen , San Diego, CA, Bandaríkjunum), og andstæðingur-GFP (1:1000; ab290; einnig staðfest til að greina YFP). Ónæmismerking var greind með því að nota afleidd mótefni gegn kanínu IgG–Cy3 eða anti-mús IgG–Cy2 (1:500; Jackson ImmunoResearch. Cambridge, Bretlandi).

Kjarnar voru litaðir með 40,6-diamidino-2 fenýlindóli (DAPI; D9542, Sigma-Aldrich). Hlífðarmiðar voru þvegnir, settir í SlowFade light antifade hvarfefni (Invitrogen) á glerskyggnum og skoðaðir með smásjá (Nikon Inverted smásjá Eclipse Ti-E, (NY, USA) búin 40× hlutefni, formiðjaðri trefjaljósi Nikon Intensilight C-HGFI, og svart-hvítu hleðslutengda tæki stafræna myndavél Hamamatsu ORCAER eða skanna leysir confocal smásjá ("Spinning Disk" Roper Scientific Olympus IX81, Tókýó, Japan) með þremur leysum 405, 491 og 561 nm, búin 40×, 63× og 100× PL Apo olíudælingarhlutfalli fyrir háupplausnarmyndatöku og stafræna myndavél Evolve Photometrics tækis.

Allar smásjástillingar voru stilltar til að safna flúrljómandi myndum undir mettun og var haldið stöðugum fyrir allar myndir sem teknar voru í tilrauninni. Myndir voru greindar með ImageJ 1.48v hugbúnaðinum (National Institute of Health). Hlutfall p(Ser473)AKT plús og p53 plús taugafrumna og magngreining hámarks próteinflúrljómunarstyrk p(Ser473)AKT og p53 eru sýnd á mynd S2A. Í MDM2-GFP-smituðum taugafrumum var kjarnafrymisdreifing MDM2-GFP reiknuð sem hlutfall kjarnameðalflúrljómunar og umfrymisflúrljómunar innræns MDM2, mæld í 24 taugafrumum (sex taugafrumum pr. ástand í fjórum mismunandi taugaræktun) (Mynd S2B) [62].

Til að mæla hámarks kjarnaflúrljómunarstyrk innrænnar MDM2 litunar og pSer473AKT voru 40 taugafrumur (10 taugafrumur í hverju ástandi í fjórum mismunandi ræktun) mældar (Mynd S2C), eins og áður hefur verið lýst [44]. Í dæmigerðum þversniðsstyrkleikasniðum sem sýndar eru á mynd 5B, var hlutfall p(Ser473)AKT og MDM2 sem gefið er upp fyrir neðan hvert skilyrði, magnbundið sem kjarnameðalflúrljómun. Í öllum tilfellum voru kjarnar auðkenndar með DAPI litun. Hámarks MDM2 flúrljómunarstyrkur kjarna í taugafrumum sem eru meðhöndlaðar með wortmannin eða siAkt er sýndur á mynd S2D.

4.8. Tölfræðigreining

Niðurstöður tilrauna voru metnar með einhliða breytileikagreiningu, fylgt eftir með Bonferroni post hoc prófinu, notað til að bera saman gildi milli margra hópa. Niðurstöðurnar eru gefnar upp sem meðaltal ± SEM. T-próf ​​nemenda var notað til að bera saman tvo gildishópa. Í öllum tilfellum var p < 0.05 talið marktækt (* p < 0,05 á móti Nx; # p<0.05 versus OGD). Statistical analyses were performed using SPSS Statistics 24.0 for Macintosh (IBM).

Hvernig verndar Cistanche taugafrumur?

Það eru nokkrar vísbendingar sem benda til þess að Cistanche gæti verndað taugafrumur með því að draga úr frumudauði (forritaður frumudauði) og stuðla að lifun taugafrumna. Apoptosis er náttúrulegt ferli sem á sér stað í líkamanum til að fjarlægja skemmdar eða óæskilegar frumur, en það getur verið skaðlegt þegar það gerist óhóflega eða óviðeigandi. Cistanche hefur reynst hamla frumudauða í rannsóknarstofurannsóknum og þessi áhrif geta hjálpað til við að vernda taugafrumur gegn skemmdum.

Að auki inniheldur Cistanche nokkur lífvirk efnasambönd sem sýnt hefur verið fram á að hafa taugaverndandi áhrif. Til dæmis inniheldur það echinacoside, sem hefur verið sýnt fram á að vernda taugafrumur gegn oxunarálagi og bólgu. Það inniheldur einnig akteósíð, sem hefur reynst hafa bólgueyðandi og andoxunareiginleika.

Heimildir

1. Emberson, J.; Lees, KR; Lyden, P.; Blackwell, L.; Albers, G.; Bluhmki, E.; Brott, T.; Cohen, G.; Davis, S.; Donnan, G.; o.fl. Áhrif seinkun á meðferð, aldri og alvarleika heilablóðfalls á áhrif segagreiningar í bláæð með alteplasa við bráðu blóðþurrðarslagi: Safngreining á upplýsingum um einstaka sjúklinga úr slembiröðuðum rannsóknum. Lancet 2014, 384, 1929–1935. [Krossvísun]

2. Wang, W.-W.; Chen, D.-Z.; Zhao, M.; Yang, X.-F.; Gong, D.-R. Fyrri tímabundin blóðþurrðarköst geta haft taugaverndandi áhrif hjá sjúklingum með heilablóðþurrð. Arch. Med. Sci. 2017, 5, 1057–1061. [CrossRef] [PubMed]

3. Ramos-Araque, ME; Rodriguez, C.; Vecino, R.; Garcia, EM; Alfonso, MDL; Barba, MS; Colàs-Campàs, L.; Purroy, F.; Arenillas, JF; Almeida, A.; o.fl. Blóðþurrðarþol í taugakerfi er háð Tp53 Arg72Pro fjölbreytni. Þýðing. Slag Res. 2019, 10, 204–215. [CrossRef] [PubMed]

4. Iadecola, C.; Anrather, J. Stroke rannsóknir á krossgötum: Spyrja heilann um leiðbeiningar. Nat. Neurosci. 2011, 14, 1363–1368. [CrossRef] [PubMed]

5. Zhao, C.; Jiang, M.; Zhang, L.; Hu, Y.; Hu, Z.; Zhang, M.; Qi, J.; Su, A.; Lou, N.; Xian, X.; o.fl. Peroxisome proliferator-virkjaður viðtaka gamma tekur þátt í öflun blóðþurrðarþols í heila af völdum blóðþurrðarformeðferðar í gegnum glial glutamate transporter 1 in vivo og in vitro. J. Neurochem. 2019, 151, 608–625. [Krossvísun]

6. Rodriguez, C.; Agulla, J.; Delgado-Esteban, M. Refocusing the Brain: New Approaches in Neuroprotection against Ischemic Injury. Neurochem. Res. 2021, 46, 51–63. [CrossRef] [PubMed] 7. Stenzel-Poore, þingmaður; Stevens, SL; Xiong, Z.; Lessov, NS; Harrington, AC; Mori, M.; Meller, R.; Rosenzweig, HL; Tobar, E.; Shaw, ET; o.fl. Áhrif blóðþurrðarforsendunar á erfðafræðilega svörun við blóðþurrð í heila: Líkur á taugavarnaraðferðum í dvala og súrefnisskorti. Lancet 2003, 362, 1028–1037. [Krossvísun]

8. Gidday, JM Formeðferð heila og blóðþurrðarþol. Nat. Séra Neurosci. 2006, 7, 437–448. [CrossRef] [PubMed]

9. Stetler, RA; Leki, R.; Gan, Y.; Li, P.; Zhang, F.; Hu, X.; Jing, Z.; Chen, J.; Zigmond, MJ; Gao, Y. Preconditioning veitir taugavernd í líkönum af miðtaugakerfissjúkdómum: Hugmyndir og klínísk þýðing. Prog. Neurobiol. 2014, 114, 58–83. [CrossRef] [PubMed]

10. Koch, S.; Della Morte, D.; Dave, KR; Sacco, RL; Perez-Pinzon, AM Biomarkers for Ischemic Preconditioning: Finding the Responders. Br. J. Pharmacol. 2014, 34, 933–941. [Krossvísun]

11. La Russa, D.; Frisina, M.; Secondo, A.; Bagetta, G.; Amantea, D. Modulation of Cerebral Store-operated Calcium Entry-Regulatory Factor (SARAF) og Peripheral Orai1 Eftir brennandi heilablóðþurrð og formeðferð í músum. Taugavísindi 2020, 441, 8–21. [Krossvísun]

12. Sisalli, MJ; Annunziato, L.; Scorziello, A. Novel Cellular Mechanisms for Neuroprotection in Ischemic Preconditioning: A View from Inside Organelles. Framan. Neurol. 2015, 6, 115. [Krossvísun]

13. Durukan, A.; Tatlisumak, T. Blóðþurrðarþol af völdum forskilyrða: Gluggi inn í innræna gír fyrir heilavernd. Exp. Þýðing. Heilablóðfall Med. 2010, 2, 2. [Krossvísun]

14. Broughton, BR; Reutens, D.; Sobey, CG; Sims, K.; Politei, J.; Banikazemi, M.; Lee, P. Apoptotic Mechanisms after Cerebral Ischemia. Heilablóðfall 2009, 40, 788–794. [Krossvísun]

15. Zhao, H.; Sapolsky, RM; Steinberg, GK Phosphoinositide-3-Kinase/Akt Survival Signal Pathways hafa áhrif á taugalifun eftir heilablóðfall. Mol. Neurobiol. 2006, 34, 249–270. [Krossvísun]

16. Uzdensky, AB Apoptosis reglugerð í penumbra eftir blóðþurrðar heilablóðfall: Tjáning pro- og andapoptotic próteina. Apoptosis 2019, 24, 687–702. [CrossRef] [PubMed]

17. Fukunaga, K.; Kawano, T. Akt er sameindamarkmið fyrir merkjaflutningsmeðferð við blóðþurrðarmóðgun í heila. J. Pharmacol. Sci. 2003, 92, 317–327. [CrossRef] [PubMed]

18. Zhao, EY; Efendizade, A.; Cai, L.; Ding, Y. Hlutverk Akt (prótein kínasa B) og prótein kínasa C í blóðþurrð-endurflæðisskaða. Neurol. Res. 2016, 38, 301–308. [CrossRef] [PubMed]

19. Delgado-Esteban, M.; Martin-Zanca, D.; Andres-Martin, L.; Almeida, A.; Bolanos, JP Hömlun á PTEN með peroxýnítríti virkjar fosfóínósítíð-3-kínasa/Akt taugavarnarboðaleiðina. J. Neurochem. 2007, 102, 194–205. [Krossvísun]

20. Manning, BD; Toker, A. AKT/PKB Merkjagjöf: Siglingar um netið. Cell 2017, 169, 381-405. [CrossRef] [PubMed]

21. Diez, H.; Garrido, JJ; Wandosell, F. Sérstök hlutverk Akt iso Forms í Apoptosis og Axon Growth Regulation í taugum. PLoS ONE 2012, 7, e32715. [Krossvísun]

22. Santi, SA; Lee, H. Akt ísóformin eru til staðar á mismunandi undirfrumustöðum. Am. J. Physiol. Physiol. 2010, 298, C580–C591. [Krossvísun]

23. Yang, C.; Talukder, MH; Varadharaj, S.; Velayutham, M.; Zweier, JL Snemma blóðþurrðarformeðferð krefst Akt- og PKA-miðlaðrar virkjunar á eNOS með serín1176 fosfórun. Hjarta- og æðakerfi. Res. 2012, 97, 33–43. [CrossRef] [PubMed]

24. Ouyang, Y.-B.; Tan, Y.; Comb, M.; Liu, C.-L.; Martone, ME; Siesjö, BK; Hu, B.-R. Lifunar- og dauðahvetjandi atburðir eftir tímabundna blóðþurrð í heila: Fosfórun á Akt, losun cýtókróms C og virkjun kaspasa-líkra próteasa. Br. J. Pharmacol. 1999, 19, 1126–1135. [CrossRef] [PubMed]

25. Li, S.; Hafeez, A.; Noorulla, F.; Geng, X.; Shao, G.; Ren, C.; Lu, G.; Zhao, H.; Ding, Y.; Ji, X. Forskilyrði í taugavörn: Frá súrefnisskorti til blóðþurrðar. Prog. Neurobiol. 2017, 157, 79–91. [CrossRef] [PubMed]

26. Mayo, LD; Donner, DB A phosphatidylinositol 3-kínasa/Akt ferill stuðlar að flutningi Mdm2 frá umfrymi til kjarna. Frv. Natl. Acad. Sci. Bandaríkin 2001, 98, 11598–11603. [Krossvísun]

27. Ashcroft, M.; Ludwig, RL; Woods, DB; Copeland, TD; Weber, HO; Macrae, EJ; Vousden, KH Fosfórun HDM2 eftir Akt. Oncogene 2002, 21, 1955–1962. [Krossvísun]

28. Zhou, BP; Liao, J.; Xia, W. HER-2/neu framkallar p53 ubiquitination með Akt-miðlaðri MDM2 fosfórun. Nat. Cell Biol. 2001, 3, 973–982. [Krossvísun]

29. Grossman, SR; Perez, M.; Kung, AL; Jósef, M.; Mansur, C.; Xiao, Z.-X.; Kumar, S.; Howley, P.; Livingston, DM p300/MDM2 fléttur taka þátt í MDM2-miðluðu p53 niðurbroti. Mol. Cell 1998, 2, 405–415. [Krossvísun]

30. Toth, A.; Nickson, P.; Qin, LL; Erhardt, P. Mismunandi reglugerð um lifun hjartavöðvafrumna og ofstækkun með MDM2, E3 Ubiquitin Ligase. J. Biol. Chem. 2006, 281, 3679–3689. [Krossvísun]

31. Hausenloy, DJ; Tsang, A.; Mocanu, MM; Yellon, DM Blóðþurrðarformeðferð verndar með því að virkja prosurvival kínasa við endurflæði. Am. J. Physiol. Circ. Physiol. 2005, 288, H971–H976. [CrossRef] [PubMed]

32. Mocanu, MM; Yellon, DM p53 niður-stjórnun: Nýr sameindabúnaður sem tekur þátt í blóðþurrðarformeðferð. FEBS Lett. 2003, 555, 302–306. [Krossvísun]

33. Vecino, R.; Burguete, MC; Jover-Menual, T.; Agulla, J.; Bobo-Jiménez, V.; Salóm, JB; Almeida, A.; Delgado-Esteban, M. MDM2-p53 ferillinn tekur þátt í forskilyrðingu af völdum taugafrumuþols fyrir blóðþurrð. Sci. Rep. 2018, 8, 1610. [CrossRef] [PubMed]

34. Rodriguez, C.; Ramos-Araque, M.E.; Domínguez-Martínez, M.; Sobrino, T.; Sánchez-Morán, I.; Agulla, J.; Delgado-Esteban, M.; Gómez-Sánchez, J.C.; Bolaños, J.P.; Castillo, J.; et al. Single-Nucleotide Polymorphism 309T>G í MDM2 verkefnisstjóranum ákvarðar virkni eftir heilablóðfall. Heilablóðfall 2018, 49, 2437–2444. [Krossvísun]

35. Feng, J.; Park, J.; Cron, P.; Hess, D.; Hemmings, BA Auðkenning á PKB/Akt vatnsfælin mótíf Ser-473 kínasa sem DNA-háður próteinkínasa. J. Biol. Chem. 2004, 279, 41189–41196. [Krossvísun]

36. Lai, TW; Zhang, S.; Wang, YT Örvandi eiturverkanir og heilablóðfall: Að bera kennsl á ný markmið fyrir taugavernd. Prog. Neurobiol. 2014, 115, 157–188. [CrossRef] [PubMed]

37. Constantino, LC; bindiefni, LB; Vandresen-Filho, S.; Viola, GG; Ludka, FK; Lopes, MW; Leal, RB; Tasca, CI Hlutverk fosfatidýlínósítóls-3 kínasaleiðar í NMDA forskilyrðum: Mismunandi aðferðir við krampa og taugahrörnun í hippocampal taugafrumum af völdum kínólínsýru. Neurotox. Res. 2018, 34, 452–462. [Krossvísun]

38. Xie, R.; Cheng, M.; Li, M.; Xiong, X.; Daadi, M.; Sapolsky, RM; Zhao, H. Akt Isoforms vernda mismunandi gegn heilablóðfalli af völdum taugaskaða með því að stjórna mTOR starfsemi. Br. J. Pharmacol. 2013, 33, 1875–1885. [Krossvísun]

39. Soriano, FX; Papadia, S.; Hofmann, F.; Hardingham, NR; Bading, H.; Hardingham, GE Formeðferðarskammtar af NMDA stuðla að taugavernd með því að auka örvun taugafruma. J. Neurosci. 2006, 26, 4509–4518. [Krossvísun]

40. Grabb, MC; Choi, DW Blóðþurrð umburðarlyndi í músaberkisfrumuræktun: mikilvægt hlutverk fyrir NMDA viðtaka. J. Neurosci. 1999, 19, 1657–1662. [Krossvísun]

41. Chen, M.; Lu, T.-J.; Chen, X.-J.; Zhou, Y.; Chen, Q.; Feng, X.-Y.; Xu, L.; Duan, W.-H.; Xiong, Z.-Q. Mismunandi hlutverk NMDA viðtaka undirtegunda í blóðþurrðartaugafrumudauða og blóðþurrðarþoli. Heilablóðfall 2008, 39, 3042–3048. [Krossvísun]

42. Gomez-Sanchez, JC; Esteban, læknir; Rodriguez-Hernandez, I.; Sobrino, T.; De La Ossa, NP; Reverte, S.; Bolaños, JP; GonzalezSarmiento, R.; Castillo, J.; Almeida, A. Tp53 Arg72Pro fjölbreytileiki manna útskýrir mismunandi hagnýtar spár í heilablóðfalli. J. Exp. Med. 2011, 208, 429–437. [Krossvísun]

43. Xu, W.; Gao, L.; Logandi.; Zheng, J.; Shao, A.; Zhang, J. Mesencephalic Astrocyte-Derived Neurotrophic Factor (MANF) verndar gegn taugafæðingu með virkjun Akt/MDM2/p53 merkjaleiðar í rottulíkani af heilablæðingum. Framan. Mol. Neurosci. 2018, 11, 176. [CrossRef] [PubMed]

44. Sánchez-Morán, I.; Rodríguez, C.; Lapresa, R.; Agulla, J.; Sobrino, T.; Castillo, J.; Bolaños, JP; Almeida, A. Nuclear WRAP53 stuðlar að lifun taugafrumna og virkni bata eftir heilablóðfall. Sci. Adv. 2020, 6, eabc5702. [Krossvísun]

45. Burmistrova, O.; Olias-Arjona, A.; Lapresa, R.; Jimenez-Blasco, D.; Eremeeva, T.; Shishov, D.; Romanov, S.; Zakurdaeva, K.; Almeida, A.; Fedichev, PO; o.fl. Miðun PFKFB3 dregur úr blóðþurrð-endurflæðisskaða í heila í músum. Sci. þingmaður 2019, 9, 1–13. [Krossvísun]

46. ​​Tu, Y.; Kim, E.; Gao, Y.; Rankin, GO; Li, B.; Chen, YC Theaflavin-3, 30 -gallate framkallar frumudauða og G2 frumuhringsstopp í gegnum Akt/MDM2/p53 ferlið í cisplatínónæmum eggjastokkakrabbameini A2780/CP70 frumum. Alþj. J. Oncol. 2016, 48, 2657–2665. [CrossRef] [PubMed]

47. Wan, W.; Hou, Y.; Wang, K.; Cheng, Y.; Pu, X.; Já, X. LXR-623-framkallað langt ókóðandi RNA LINC01125 bælir útbreiðslu brjóstakrabbameinsfrumna með PTEN/AKT/p53 merkjaleið. Cell Death Dis. 2019, 10, 248. [CrossRef] [PubMed]

48. Tao, J.; Cui, Y.; Duan, Y.; Zhang, N.; Wang, C.; Zhang, F. Puerarin dregur úr hreyfi- og vitsmunabrestum sem og taugaskemmdum hippocampus í gegnum PI3K/Akt1/GSK-3 merkjaleiðina í in vivo líkani af heilablóðþurrð. Oncotarget 2017, 8, 106283–106295. [CrossRef] [PubMed]

49. Janelidze, S.; Hu, B.-R.; Siesjö, P.; Siesjö, BK Breytingar á Akt1 (PKB) og p70S6K í skammvinnri brenniþræði blóðþurrðar. Neurobiol. Dis. 2001, 8, 147–154. [CrossRef] [PubMed]

50. Pignataro, G.; Boscia, F.; Esposito, E.; Sirabella, R.; Cuomo, O.; Vinciguerra, A.; Di Renzo, G.; Annunziato, L. NCX1, og NCX3: Tveir nýir áhrifavaldar seinkaðrar formeðferðar í blóðþurrð í heila. Neurobiol. Dis. 2012, 45, 616–623. [Krossvísun]

51. Li, J.; Kurokawa, M. Reglugerð um MDM2 stöðugleika eftir DNA skemmdir. J. Cell. Physiol. 2015, 230, 2318–2327. [Krossvísun]

52. Olson, DC; Marechal, V.; Momand, J.; Chen, J.; Romocki, C.; Levine, AJ Auðkenning og einkenni margra mdm-2 próteina og mdm-2-p53 próteinfléttna. Oncogene 1993, 8, 2353-2360. [PubMed]

53. Uranga, RM; Katz, S.; Salvador, GA Aukið fosfatidýlínósítól 3-kínasa (PI3K)/Akt merki hefur pleiotropic markmið í Hippocampal taugum sem verða fyrir oxunarálagi af völdum járns. J. Biol. Chem. 2013, 288, 19773–19784. [CrossRef] [PubMed]

54. Almeida, A.; Sánchez-Morán, I.; Rodríguez, C. Hvatbera-kjarna p53 mansal stjórnar taugafrumum við heilablóðfalli. IUBMB Life 2021, 73, 582–591. [CrossRef] [PubMed]

55. Delgado-Esteban, M.; Garcia-Higuera, I.; Maestre, C.; Moreno, S.; Almeida, A. APC/C-Cdh1 samhæfir taugamyndun og stærð corticals meðan á þroska stendur. Nat. Commun. 2013, 4, 2879. [CrossRef] [PubMed]

56. Constantino, LC Hlutverk NMDA viðtaka í þróun heilaviðnáms með for- og eftirmeðferð. Öldrun Dis. 2014, 5, 430–441. [Krossvísun]

57. Almeida, A.; Esteban, læknir; Bolaños, JP; Medina, JM Súrefnis- og glúkósaskortur veldur vanstarfsemi hvatbera og oxunarálagi í taugafrumum en ekki í stjarnfrumur í frumrækt. J. Neurochem. 2002, 81, 207–217. [Krossvísun]

58. Lahav, G.; Rosenfeld, N.; Sigal, A.; Geva-Zatorsky, N.; Levine, AJ; Elowitz, MB; Alon, U. Dynamics of the p53-Mdm2 endurgjöf lykkja í einstökum frumum. Nat. Genet. 2004, 36, 147–150. [Krossvísun]

59. Li, J.; Karaplis, AC; Huang, DC; Siegel, forsætisráðherra; Camirand, A.; Yang, XF; Muller, WJ; Kremer, R. PTHrP knýr upphaf, framgang og meinvörp í brjóstaæxli í músum og er hugsanlegt meðferðarmarkmið. J. Clin. Rannsaka. 2011, 121, 4655–4669. [Krossvísun]

60. Maestre, C.; Esteban, læknir; Gomez-Sanchez, JC; Bolaños, JP; Almeida, A. Cdk5 fosfórar Cdh1 og mótar stöðugleika sýklíns B1 í örvandi eiturverkunum. EMBO J. 2008, 27, 2736–2745. [Krossvísun]

61. De Tudela, MV-P.; Esteban, læknir; Maestre, C.; Bobo-Jiménez, V.; Jiménez-Blasco, D.; Vecino, R.; Bolaños, JP; Almeida, A. Reglugerð um Bcl-xL-ATP synthasa víxlverkun með hvatbera Cyclin B1-Cyclin-Dependent Kinase-1 ákvarðar lifun tauga. J. Neurosci. 2015, 35, 9287–9301. [CrossRef] [PubMed]

62. Bobo-Jiménez, V.; Esteban, læknir; Angibaud, J.; Sánchez-Morán, I.; de la Fuente, A.; Yajeya, J.; Nägerl, UV; Castillo, J.; Bolaños, JP; Almeida, A. APC/CCdh1-Rock2 ferill stjórnar dendritic heilleika og minni. Frv. Natl. Acad. Sci. Bandaríkin 2017, 114, 4513–4518. [CrossRef] [PubMed]