Hluti 1: Mannamjólk fásykra 2/-fúkósýllaktósi veldur taugavörn gegn heilablóðfalli í heila

Tengiliður: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Netfang:audrey.hu@wecistanche.com

Tsai-Wei Hung 1, Kuo-Jen Wu 1, Yu-Syuan Wang 1, Eun-Kyung Bae 1, YoungHa Song 2, JongWon Yoon 2 og Seong-Jin Yu1,*

1Center for Neuropsychiatric Research, National Health Research Institutes, Zhunan 35053, Taiwan;

pilypily@nhri.edu.tw (T.-WH); kjwu@nhri.edu.tw (K.-JW); yswang@nhri.edu.tw (Y.-SW);

baee@nhri.edu.tw (E.-KB)

2Advanced Protein Technologies Corporation, Suwon-si 16229, Kóreu; yhsong@aptech.biz (YS);

jongwon.yoon91@gmail.com (JY)

Bréfaskipti: b7508@nhri.edu.tw; Sími: plús 886-37206166 (símanúmer 36710)

Ágrip:

Heilablæðing (ICH) kemur fram þegar heilaæðar springa, sem veldur bólgu og frumudauða. 2-Fúkósýllaktósi (2FL), fásykra úr brjóstamjólk, hefur öflug andalyf og bólgueyðandi áhrif. Tilgangur þessarar rannsóknar var að skoða verndandi áhrif 2FL í frumu- og nagdýralíkönum af ICH. Hemíni var bætt í aðal rottuberkitaugafrumumog BV2 microglia samrækt til að líkja eftir ICH in vitro. IBA1 og MAP2 ónæmissvörun var notuð til að ákvarða bólgu ogtaugafrumumlifun. Hemin jók IBA1 umtalsvert á meðan það minnkaði MAP2 ónæmissvörun. 2FL andmælti báðum svörunum verulega. Verndaráhrif 2FL voru næst skoðuð í rottu ICH líkani. Gjöf innan heila á kollagenasa af tegund VII dró úr hreyfivirkni á opnu sviði. Snemma eftirmeðferð með 2FL bætti hreyfivirkni verulega. Heilavefjum var safnað fyrir ónæmisvefjaefnafræði og qRT-PCR greiningu. 2FL minnkaði IBA1 og CD4 ónæmissvörun í meiddum striatum. 2FL minnkaði tjáningu ER streitumerkja (PERK og CHOP), á meðan það stýrði M2 átfrumnamerkjum (CD206 og TGF ) í meiddum heila. Samanlagt styðja gögn okkar að 2FL hafi ataugaverndandiáhrif gegn ICH með hömlun átaugabólguog ER streitu. 2FL getur haft klínískar afleiðingar fyrir meðferð ICH.

Leitarorð: 2-fúkósyllaktósi; heilablæðing heilablóðfall; bólga; endoplasmic reticulum

áhrif cistanche þykkni: meðhöndla taugasjúkdóma

Vinsamlega smelltu hér til að hluta 2

1. Inngangur

Heilablæðing (ICH) er meiriháttartaugafræðilegartruflun sem tengist mikilli hættu á dauða hjá fullorðnum [1,2]. ICH er 10–15 prósent allra bráða heilablóðfallstilfella [3]. Nokkrar faraldsfræðilegar rannsóknir hafa stutt kynjamismunun hjá sjúklingum með ICH [4] eða heilaæðasjúkdóma [5]. Lítill hluti ICH-sjúklinga þróar með sér blæðandi lacunar heilkenni [6]. Núverandi meðferð við ICH leggur áherslu á að stjórna blæðingum, fjarlægja blóðtappa og létta innankúpuþrýsting af völdum blæðingar. Það er engin áhrifarík lyfjafræðileg meðferð við ICH.

Bólga gegnir mikilvægu hlutverki í ICH-völdumtaugahrörnun. Eftir að ICH byrjar fara blóðfrumur inn í heilablóðfallið, virkja örverur og hefja myndun bólgueyðandi frumudrepna [7,8]. Hemin, aukaafurð blóðrauða, veldurtaugafrumumdauða og veldur frumudauða og bólgu [9,10]. Nokkrar rannsóknir hafa stutt virkni bólgueyðandi meðferðar í dýralíkönum af ICH [11,12]. Við sýndum nýlega fram á að snemma eftirmeðferð með CXCR4 mótlyfinu CX807 hamlaði bólgu og bætti hegðunarvirkni í tilrauna ICH rottum [13]. Þessar upplýsingar benda til þess að bólgueyðandi meðferð geti dregið úr heilaskaða

eftir ICH.

Brjóstamjólk inniheldur næringu og nokkur mikilvæg lífvirk efni [14], td fásykrur úr brjóstamjólk (HMOs) [15]. 2′-fúkósýllaktósi (2FL) er aðal fásykra í brjóstamjólk. Munnleg afhending 2FL bættminniog nám í rottum [16,17]. Að auki bældi 2FL lípópólýsykra af völdum CD14 tjáningu og bólgu í innyfrumum manna [18]. Við greindum nýlega frá því að 2FL mildaðitaugabólguí heila sem þjáist af heilablóðþurrð [19]. Þessar upplýsingar benda til þess að 2FL sé öflugt bólgueyðandi efni og gæti því verið gagnlegt við meðferð á ICH.

Tilgangur þessarar rannsóknar var að kanna taugaverndaraðgerðir 2FL í frumu- og dýralíkönum af ICH. Hemin var notað til að líkja eftir ICH í frumurækt [20]. Við sýndum fram á að 2FL hamlaði hemin-miðlaðri virkjun á microglia. Kollagenasi af tegund VII var notaður til að mynda brennandi ICH í fullorðnum rottum [13]. Við komumst að því að 2FL dró verulega úr ICH-völdum örveruvirkjun, CD4 plús eitilfrumum og ER streitu í meiddum heila og bætti hegðunarvirkni. Gögn okkar styðja að 2FL hafi ataugaverndandiáhrif gegn ICH.

áhrif cistanche þykkni

2. Úrslit

2.1. 2FL Minnkuð hemin-miðluð taugahrörnun í frumtaugum í heilaberki og BV2 Microglia samrækt

Verndaráhrif 2FL voru fyrst skoðuð í frumulíkani af heilablæðingu. Primary corticaltaugafrumumog BV2 microglia samræktir voru meðhöndlaðir með hemíni (10 uM) í 48 klst (sjá tímalínu á mynd 1E). Hemin veiktisttaugafrumummerkið MAP2 (Mynd 1A), en það jók örglíamerkið IBA1 (Mynd1B). Þessi svör voru bæði andstæð af 2FL (1 uM, mynd 1A,B). Ónæmissvörun MAP2 og IBA1 voru greind frekar með því að mæla pixlaþéttleika tiltekinna merkja. Eins og sést á mynd 1C,D, minnkaði hemin verulega MAP2 ónæmisvirkni (Map2-ir) og jók IBA1-ir (p < 0.00="" 1,="" einstefnu="" anova,="" n="6" í="" hverjum="" hópi).="" þessi="" svör="" voru="" verulega="" andstæð="" af="" 2fl="" (map2:="" p="">< 0,001,="" f2,14="115.863;" iba1:="" p="">< 0,001,="" f2,15="134.644," einstefnu="">

F

Mynd 1. Thetaugaverndandiáhrif 2FL í frumberkitaugafrumuog BV2 microglia samrækt. (A) Fulltrúar örmyndir sýna að hemín minnkaði MAP2 ónæmisvirkni (-ir). Samhliða gjöf með 2FL hamlaði hemínmiðluðu tapi á MAP-ir. (B) Hemin jók IBA1-ir. Samhliða stjórnun með 2FL minnkaði IBA1-ir. (C,D) Pixelþéttleiki MAP2-ir eða IBA{{10}}ir var greind með NIS Elements AR 5.11 hugbúnaði. (C) 2FL hamlaði marktækt hemin-miðlað tap á MAP2-ir. (D) 2FL dró verulega úr hemín-völdum IBA1 virkni. (E) Tímalína tilraunar. * p < 0,05.="" skalastrik="100">

cistanche þykkni ávinningur

2.2. Eftirmeðferð með 2FL bættri hreyfivirkni hjá ICH rottum

Verndaráhrif 2FL voru næst skoðuð í dýralíkani af ICH. Alls var 14 fullorðnum karlkyns rottum gefinn lítill skammtur (0,5 einingar/uL × 1 uL) af kollagenasa af tegund VII til að framkalla heilablæðingu í hægra striatum. 2FL (400 mg/kg/d, ip, n=7) eða burðarefni (saltvatn, ip, n=7) ​​var gefið daglega í 5 daga, byrjað 1 degi eftir heilablóðfall (vinsamlegast sjáðu tímalínuna í mynd 2G). Síðan, 2 klst. eftir síðustu 2FL eða ökutækissprautuna á degi 5, voru dýrin sett fyrir sig í innrauða virkniklefa í 30 mín. Atferlishegðun á opnu sviði var skoðuð í 30 mín. Við komumst að því að 2FL jók verulega lóðrétta virkni (VACTV, mynd 2A), heildarvegalengd sem ekin var (TOTDIST, mynd 2B), lóðréttan tíma (VTIME, mynd 2C), lárétta virkni (HACTV, mynd 2D), hreyfingartíma (MOVTME, mynd 2E) ), og hreyfingarnúmer (MOVNO, mynd 2F). Ítarlegar tölfræði (tvíhliða ANOVA auk post hoc Newman–Keuls (NK) próf) eru skráðar í töflu 1.

Mynd 2. Eftirmeðferð með 2FL bætir taugastarfsemi í ICH rottum. Fullorðnar rottur voru meðhöndlaðar með kollagenasa af tegund VII á D0 (G, tímalína). 2FL eða ökutæki var gefið kerfisbundið daglega í 5 daga. Hreyfihegðun var skoðuð á D5. 2FL verulega bætt (A) lóðrétt virkni, (B) heildar vegalengd, (C) lóðrétt tími, (D) lárétt virkni, (E) hreyfitími og (F) hreyfing

númer. n {{0}} í hverjum hópi. * p < 0.05,="" tvíhliða="" anova;="" #="" p="">< 0,05,="" post="" hoc="" nk="">

Tafla 1. Marktækur munur á hreyfihegðun milli ICH plús veh og ICH plús 2FL.

2.3. Snemma eftirmeðferð með 2FL minni örveruvirkjun á skaðvalda svæðinu

Átta ICH rottur (2FL, n=4; Veh, n=4) voru aflífaðar og látnar sleppa fyrir IBA1 ónæmisvefjaefnafræði eftir hegðunarprófið á degi 5. Dæmigert IBA1-ir er sýnt á mynd 3 IBA1-ir var aukið á peri-skemmda svæðinu í striatum (Mynd 3B), samanborið við samsvarandi staði í gagnhliða ósjónuðu striatum (Mynd 3A) í heilablóðfallsrottum sem fengu veh. Við mikla stækkun fundust aframífiraðar eða ameboid örverur á skemmda svæðinu (Mynd 3B, innskot), en hvíldar örglíur sem sýndu grenjaða formgerð fundust í óbrotnu striatum (Mynd 3A, innskot). 2FL meðferð dró úr IBA1-ir og endurheimti að hluta til formfræðilega útbreiðslu örverunnar (Mynd 3C, innskot). IBA1-ir var magnmælt og meðaltal yfir þrjá heilahluta í röð með sjónrænni fremri þrá í öllum dýrum. 2FL verulega skert IBA1-eða í ICH heilanum (mynd 3D, p < 0.001,="" f2,12="50.357," einstefnu="">

Mynd 3. Snemma eftirmeðferð 2FL dró úr örvun örvera í meiddum striatum. Dýr fengu burðarefni eða 2FL eftir kollagenasa inndælingu frá degi 1 til 5. Dýr voru fórnuð á 5. degi. Aukin IBA1 ónæmissvörun með af-ramified formgerð fannst í meiddum striatum (B vs. A). Meðferð með 2FL minnkaði IBA ónæmisvirkni (C vs. B). (D) 2FL minnkaði marktækt IBA1 ónæmisvirkni í meiddum heila. * p < 0.05,="" einstefnu="" anova="" plús="" nk="">

2.4. 2FL milduð CD4 plús eitilfrumuíferð í skemmda heila

Gjöf kollagenasa eykur CD4 plús eitilfrumuígræðslu inn í meiddan striatum (Mynd 4B). Næstum engar CD4 frumur fundust í ósjónuðu striatum (mynd 4A). Ígræðsla CD4-frumna inn í skaddað rábein var milduð með 2FL meðferð (Mynd 4C á móti mynd 4B; p < 0.001,="" f2,6="173.485," einstefnu="" anova,="" mynd="">

Mynd 4. Eftirmeðferð með 2FL minnkaði CD4 plús eitilfrumuíferð inn í meidda heilann. Dæmigerð örmyndatökur sýna CD4 ónæmissvörun í (A) ósjónuðu striatum og (B) meiddum striatum frá rottu sem tekur á móti ökutæki við lága (kvörðun=50 um) og mikla stækkun (innsetning, kvörðun=10 um), sem og (C) skemmda striatum frá rottu sem fékk 2FL. (D) 2FL marktækt minnkað CD{{10}}ir í meiddum heila (* p < 0,001,="">

leið ANOVA).

2.5. 2FL breytti tjáningu M1 og M2 bólgumerkja á mismunandi hátt í ICH heila

Striatal vefjum var safnað úr átta rottum (veh, n {{0}}; 2FL, n=4) á degi 5. Tjáning M1/M2 bólgumerkja var skoðuð með qRT-PCR. ICH jók marktækt tjáningu M1 merkja CD86 (Mynd 5A, p=0.005) og M2 merkja CD206 og TGF (Mynd 5B, C, p=0.005). 2FL breytti ekki tjáningu CD86 (Mynd 5A, bls=0.356, tvíhliða ANOVA). Hins vegar hækkaði það verulega tjáningu CD206 (Mynd 5B) og TGF í meiddu hliðinni (p <0,05, nk="">

cistanche þykkni ávinningur

2.6. 2FL breytti tjáningu ER streitu og apoptotic merkja í ICH heila

Tjáning ER streitu og apoptotic merkja var skoðuð í átta rottum (veh, n=4; 2FL, n=4). 2FL dró verulega úr tjáningu PERK (Mynd 6A, p=0.016), IRE1 (Mynd 6B, p=0.018), CHOP (Mynd 6C, p=0.032) og SigmaR1 (Mynd 6D, bls=0.017) í meiddum striatum. 2FL breytti ekki tjáningu BIP (Mynd6E, p=0.841) og ATF6 (Mynd6F, p=0.403). Að auki minnkaði tjáning caspase3 marktækt með 2FL (Mynd 6G, p=0.029, t-próf).

Mynd 5. 2FL stýrði tjáningu M2 merkja í ICH heila. ICH jók verulega tjáningu (A) M1 merkja CD86 og M2 merkja (B) CD206 og (C) TGF (# p=0.005, tvíhliða ANOVA). (A) 2FL hækkaði marktækt tjáningu (B) CD206 og (C) TGF, en ekki (A) CD86, í meiddum striatum (* p < 0,05,="" nk="">

Mynd 6. 2FL bældi tjáningu ER streitu og apoptotic merkja. Tjáning á (A) PERK, (B) IRE1, (C) CHOP, (D) SigmaR1 og (G) caspase3 var verulega hamlað af 2FL í blæðandi heila. Tjáning (E) BIP og (F) ATF6 var ekki breytt með 2FL. * p < 0.05.="" er,="" endoplasmic="" reticulum;="" perk,="" prótein="" kínasa="" r-líkur="" er="" kínasi;="" ire1,="" ensím="" 1="" sem="" þarfnast="" inósítóls;="" chop,="" ccaat="" aukabindandi="" prótein="" samhæft="" prótein;="" sigmar1,="" sigma="" 1="" viðtaki;="" atf6,="" virkjar="" umritunarstuðul="">

cistanche viðbót