Hluti 1:Acteoside vinnur gegn interleukin-1 -framkölluðum niðurbrotsferlum með mótun mítógenvirkja próteinkínasa og NFκB frumuboðaleið

Tengiliður: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Netfang:audrey.hu@wecistanche.com

HyangI Lim ,1 Do Kyung Kim ,1 Tae-Hyeon Kim ,1 Kyeong-Rok Kang

Slitgigt (OA) er algengasti hrörnunarsjúkdómurinn í liðum með langvarandi liðverkjum sem orsakast af versnandi hrörnun liðbrjósks í liðum liðanna.Akteósíð, kaffeóýlfenýletanóíð glýkósíð, hefur ýmsa líffræðilega virkni eins og örverueyðandi, bólgueyðandi, krabbameinslyf, andoxunarefni, frumuverndandi og taugaverndandi áhrif. Ennfremur inntöku áakteósíðí stórum skömmtum veldur ekki eiturverkunum á erfðaefni. Þess vegna er markmið þessarar rannsóknar að sannreyna niðurbrotsáhrifin afakteósíðgegn slitgigt og boðefnaferli hennar gegn niðurbroti.Akteósíðminnkaði ekki lífhæfi músafibroblast L929 frumna sem notaðar voru sem eðlilegar frumur og frumfrumur rotta.Akteósíðvirkaði gegn IL-1 -framkallaðri próteóglýkantapi í chondrocytes og liðbrjóski með því að bæla tjáningu og virkjun brjóskrýrnandi ensíms eins og matrix metalloproteinase- (MMP-) 13, MMP-1 og MMP{ {6}}. Ennfremur bældi akteósíð tjáningu bólgumiðla eins og framkallanlegs köfnunarefnisoxíðsyntasa, sýklóoxýgenasa-2, nituroxíðs og prostaglandíns E2 í aðal rottufrumur sem fengu meðferð með IL-1. Í kjölfarið minnkaði tjáning bólgueyðandi cýtókína fyrir tilstilli akteósíðs í frumfrumum rottu sem voru meðhöndlaðir með IL-1. Þar að auki, akteósíð bældi ekki aðeins fosfórun á mítógenvirkjuðum próteinkínasa í frumfrumur rotta sem voru meðhöndlaðar með IL-1 heldur einnig flutning NFκB frá frumu til kjarna með bælingu á fosfórun þess. Inntaka 5 og 10 mg/kg akteósíðs dró úr stigvaxandi hrörnun liðbrjósks í slitgigtarmúsamódelinu sem myndast við óstöðugleika í miðlægum meniscus. Niðurstöður okkar benda til þessakteósíðer efnilegt hugsanlegt efnaskiptalyf eða viðbót til að draga úr eða koma í veg fyrir versnandi hrörnun liðbrjósks.

cistanche-akteósíð

1. Inngangur

Slitgigt (OA) er algengasti hrörnunarsjúkdómurinn í liðum með langvarandi liðverkjum sem orsakast af versnandi hrörnun liðbrjósks í liðum liðanna [1]. Vegna hækkunar á lífslíkum er áætlað að algengi OA með skertri hreyfigetu og langvinnum liðverkjum af völdum versnandi hrörnunar liðbrjósks í liðliðaliðum sé 18 prósent og 9,6 prósent hjá konum eftir tíðahvörf og hjá körlum, í sömu röð [2 ]. Þrátt fyrir að 2 oxunarlyf og frumulengd tíðni OA aukist árlega á heimsvísu er meinalífeðlisfræðileg orsök OA enn óþekkt. Það getur stafað af mjög flóknum og fjölþættum áhættuþáttum eins og öldrun, kyni, erfðafræðilegum erfðum, áverka á liðum og alvarlegu vélrænu álagi á liðum. Ennfremur eru taugasjúkdómafræðileg tengsl milli versnandi hrörnunar liðbrjósks og þróunar langvinnra liðverkja óþekkt [3]. Þess vegna er markmið klínískrar meðferðar hjá sjúklingum með OA að viðhalda hreyfigetu líkamans og vélrænni liðstarfsemi með því að lina langvarandi liðverki, með því að nota lyfjafræðilegar og ólyfjafræðilegar aðferðir og liðskiptaaðgerðir. Krafan um þróun skilvirkrar inngrips eða viðbóta, með langtíma líffræðilegu öryggi, til að koma í veg fyrir eða draga úr OA til að viðhalda lífsgæðum með viðhaldi á vélrænni liðvirkni hjá öldruðum eykst.

Eins og sýnt er á mynd 1 er akteósíð (CAS nr. 61276-17-3; C29H36O15) kaffeóýlfenýletanóíð glýkósíð einangrað úr nokkrum jurtaplöntum eins og Verbascum chlorides [4], Buddleja globosa [5] og Plantago australis [6]. Acteoside hefur ýmsa líffræðilega virkni eins og örverueyðandi [5], bólgueyðandi [7], krabbameinslyf [8], andoxunarlyf [9], frumuverndandi [9] og taugaverndandi áhrif [10]. Ennfremur veldur inntöku akteósíðs í stórum skömmtum ekki eiturverkunum á erfðaefni [11].

Þess vegna settum við fram þá tilgátu að akteósíð með bólgueyðandi líffræðilegt öryggi hafi stöðvunaráhrif sem tengjast vörn liðbrjósks gegn versnandi hrörnun liðbrjósks með bælingu á niðurbrotsþáttum eins og bólgueyðandi frumudrepum, bólgueyðandi ensímmiðlum og brjósklosandi brjóskliðamiðlum. . Þess vegna var markmið þessarar rannsóknar að kanna akteósíð-framkallaða andoxunaráhrif og frumuboðsferil þess bæði in vitro, með því að nota frumfrumur einangraðar úr liðbrjóski í hné hné rottu, og in vivo, með því að nota OA dýramódel framleitt með skurðaðgerð. óstöðugleiki á miðlægum meniscus í hnélið músa.

acteoside frácistanche

2. Aðferðir

2.1. Frumumenning. Aðal rottufrumur voru einangraðar úr liðbrjóski rottu (5-dagsgömlu; Sprague–Daw- ley) hnéliðum, í samræmi við siðareglur (CIA-CUC2019-A0027) samþykktar af stofnuninni Dýraumönnunar- og notkunarnefnd Chosun háskólans, Gwangju, Kóreu. Einangruðum aðal rottufrumur var viðhaldið í Dulbecco's Modified Eagle's Medium/Nutrient Mixture F-12 (DMEM/F12) (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA) ásamt 10% nautgripafóstursermi (FBS) (Life Technologies) , Grand Island, NY, Bandaríkjunum), sýklalyf (50U/mL penicillín og 50ug/mL streptomycin), og 50ug/mL askorbínsýra. Venjuleg músa fibroblast L-929 frumulína var keypt frá American Type Culture Collection (ATCC). Samkvæmt leiðbeiningunum frá ATCC voru L-929 frumur ræktaðar í lágmarks nauðsynlegum miðli Eagle, sem innihélt 10 prósent FBS, og voru ræktaðar í rakaðri hitakassa við 37 gráður með 5 prósent CO2.

2.2. Frumulífvænleikapróf. Dímetýl þíasólýl dífenýltetrasólíum salt (MTT) prófið var gert til að meta hæfileika músa fibroblast frumulínu L929 frumna sem notaðar eru sem venjuleg fruma og aðal rottufrumur meðhöndlaðar með akteósíði. Í stuttu máli voru L929 frumur og aðal rottufrumur ræktaðar við frumuþéttleika 8×105 frumur/ml í ræktunarplötum í 24 klst og síðan meðhöndluð með 2,5, 5, 10, 25, 50 og 100μM akteósíði í 24 klst. Eftir meðferð með MTT lausn voru bæði L929 frumur og chondrocytes ræktaðar frekar í 4 klst. Eftir ræktun voru mynduðu MTT kristallarnir suspendaðir algjörlega í dímetýlsúlfoxíði og mældir með tilliti til gleypni við 570nm með litrófsmæli (Epoch microplate spectrophotometer, BioTek®, Winooski, VT, USA) til að meta lífvænleika frumna.

2.3. Cell Live/Dead Assay. Lifun frumna var framkvæmd með því að nota Cell Live/Dead prófunarbúnað (Molecular Probes, Carlsbad, CA, USA), sem er samsett úr grænu kalsín-AM til að merkja lifandi frumur (með grænu flúrljómun) og etídíum homodimer -1 til að merkja dauðar frumur (með rauðu flúrljómun). Í stuttu máli voru bæði L929 frumur og frumur rottufrumur ræktaðar við frumuþéttleika 8×105 frumur/ml á hólfaglasum (Nunc® Lab-Tek® Chamber Slide™ system; Sigma-Aldrich; Merck KGaA) í 24 klst. og síðan meðhöndluð með 50 og 100μM akteósíð í 24 klst. Eftir ræktun var frumulifunarpróf gerð samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Eftir það voru litaðar frumur myndaðir með flúrljómunarsmásjá (Eclipse TE200; Nikon Instruments, Melville, NY).

2.4. Dímetýlmetýlenblátt (DMMB) próf. DMMB próf var gert til að meta breytingu á próteóglýkaninnihaldi í frumfrumur rotta sem voru meðhöndlaðar með akteósíði í 21 dag í nærveru eða fjarveru IL-1. Til að viðhalda eiginleikum frumkorna rotta í 21 dag voru frumfrumur rottu (2×106 frumur) sviflausnar í 1mL af 1,2 prósent algínati og síðan hjúpaðar með því að dreypa frumu/algínat sviflausninni í lausn af 105mM CaCl2. Aðal rottufrumur sem hjúpaðar voru í algínati voru ræktaðar í 24 klst. í DMEM/F12 (innihalda 10% FBS, 50U/mL penicillín, 50ug/mL streptomycin og 50ug/mL askorbínsýru) og síðan aðlagaðar í 24h/mL með DMEM mini-insúlín-transferrín-selen (mini-ITS) og 50ug/mL askorbínsýra. Í kjölfarið voru chondrocytes meðhöndlaðir með 50 eða 100μM acteoside í viðurvist eða fjarveru 1ng/mL IL-1 í 21 dag. Á degi 21 var aðal rottufrumur safnað fyrir mat á próteóglýkaninnihaldi með því að nota DMMB prófið, eins og áður hefur verið lýst [12]. Að auki, til að mæla innihald próteóglýkans í hverri frumu og meta fjölgun frumkorna rotta, var frumufjöldi mældur með DNA prófun með PicoGreen (Molecular Probes, Carlsbad, CA), samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda.

2.5. Ex Vivo líffæraræktun á liðbrjóskvefjum hjá rottum. Liðbrjóskvefur voru einangraðir úr hnéliðum 5-dagsgamla Sprague-Dawley rotta og síðan ræktaðir í DMEM/F12 bætt við 10 prósent FBS. Næst liðbrjóskið

sýni voru meðhöndluð með 100μM akteósíði ítilvist eða fjarvera 10ng/ml IL-1 í 7 daga. Í lok ræktunartímabilsins var sýnunum safnað og fest í 4 prósent paraformaldehýði í 72 klst. til vefjagreiningar.

2.6. Vefjafræðileg greining. Vefjafræðileg greining með safranín-O og hröðum grænum litun var framkvæmd til að sannreyna tap á próteóglýkani í liðbrjóski sem var meðhöndlað með 100μM akteósíði í nærveru eða fjarveru 10ng/ml IL-1 í 7 daga. Í stuttu máli voru föst liðbrjósksýni kalkuð í etýlendíamíntetraediksýru og síðan sett í parafin. Síðan voru tilbúnu paraffin blokkirnar sem innihéldu liðbrjósk skornar í röð í 5μm þykkt og settar á glærur. Safranin-O og hröð græn litun var síðan gerð til að meta próteóglýkan tap í liðbrjóskgrunninu. Að auki var hematoxýlín og eósín litun gerð til að fylgjast með almennri formgerð liðbrjósksins.

2.7. Western Blotting. Western blotting var gerð til að kanna tjáningu niðurbrotsþátta þar á meðal MMP-13, MMP-1, MMP-3, framkallanleg nituroxíðsyntasa (iNOS) og sýklóoxýgenasa-2 (COX) -2) og breyting á frumuboðsameindum eins og mítógenvirkjaðri próteinkínasa og kjarnaþátt-kappa B (NFκB). Í stuttu máli voru frumfrumur rotta meðhöndlaðar með 50 eða 100μM akteósíði í nærveru eða fjarveru 10ng/mL IL-1 í 24 klst. Eftir það voru frumfrumur úr rottum safnað með skilvindu og voru leystar með því að nota leysistuðara (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Að auki, til að sannreyna kjarnaflutning NFκB, voru frumfrumur rotta meðhöndluð með 50 eða 100μM akteósíði í nærveru eða fjarveru 10ng/mL IL-1 í 24 klst. Eftir það voru frumu- og kjarnabrot dregin út með því að nota NE-PER™ kjarna- og frumuútdráttarhvarfefni (Thermo Sci- entific, Rockford, IL, USA) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Styrkur heildarpróteins sem dregin var út úr frumfrumu rottum var ákvarðaður með því að nota bicinchoninsýru próteinprófunarsett (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Að auki var skilyrta miðlinum safnað til að greina magn brjóskrýrnandi ensíma sem seytt er út úr chondrocytes. Jafnt magn af próteini og skilyrt miðli var rafskorið á natríumdódecýlsúlfat-pólýakrýlamíð gel rafdrætti (SDS-PAGE) og síðan flutt yfir á nítrósellulósahimnur. Síðan var Western blotting framkvæmd með því að nota miðuð aðal mótefni gegn MMP-13, MMP-1, MMP-3, iNOS, COX-2, phosphoERK1/2, total-ERK1 /2, phosphop38, total-p38, phosphor JNK, total JNK, phosphoNFκB, total NFκB, - actin og lamin B. Ónæmisvirkar hljómsveitir voru sýndar með því að nota aukið efnaljómunarkerfi (Thermo Sci- entific, Rockford, IL, USA) skv. leiðbeiningar framleiðanda og síðan myndað af Microchemi tæki (DNR Bioimaging Systems, Jerúsalem, Ísrael).

2.8. Quantitative Polymerase Chain Reaction (qPCR) og Quantitative Real-Time PCR (qRT-PCR). Aðal rottufrumur voru meðhöndlaðir með 50 eða 100μM akteósíði í nærveru eða fjarveru 10ng/mL IL-1 í 24 klst. Eftir það var heildar-RNA einangrað úr aðal rottufrumur með því að nota TRIzol hvarfefni (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Heildarstyrkur RNA var mældur með NanoDrop 2000 (Thermo Scientific, Rockford, IL, Bandaríkjunum). Til að búa til cDNA var 1 ug RNA öfugt umritað með því að nota ThermoScript öfugt umritun-PCR kerfi (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. qPCR af cDNA var framkvæmt með því að nota 2× TOPsimple™ DyeMIX-Taq (Enzynomics, Seoul, Lýðveldið Kóreu) og tiltekna primera á TaKaRa PCR Thermal Cycler tæki (TaKaRa Bio Inc., Shiga, Japan). Eftir það voru PCR afurðirnar rafskornar á agarósa hlaupi til að ákvarða tjáningarstig markgena. Glýseraldehýð 3-fosfat dehýdrógenasi (GAPDH) var notað sem innræn viðmiðun. Að auki, fyrir qRT-PCR, var cDNA magnað með því að nota Eco™ rauntíma PCR kerfi (illumine Inc., San Diego, CA, Bandaríkjunum). -Actin var notað sem innræn stjórn. Röð frumrana sem notuð eru í qPCR og qRT-PCR eru teknar saman í töflu 1 og 2, í sömu röð.

cistanche (acteoside) ávinningur: bæta ónæmi

3. Úrslit

3.1. Acteoside hefur ekki áhrif á L929 frumu- og frumfrumulífveru rotta. Mústrefjafrumulínan L929 sem notuð var sem eðlilegar frumur var meðhöndluð með 2,5, 5, 10, 25, 50 og 100μM akteósíði í 24 klst. Eftir það var MTT prófið framkvæmt til að meta frumueiturhrif akteósíðs á L929 frumum. Eins og sýnt er á mynd 2(a), var hlutfallslegur lífvænleiki L929 frumna ákvarðaður vera 94:8±8 prósent, 93:6±7 prósent, 100 ± 5 prósent, 103:9± 5 prósent, 126:1±8 prósent , og 122:7±4 prósent við 2,5, 5, 10, 25, 50 og 100μM akteósíð, í sömu röð, samanborið við samanburðarhóp (100:02 ± 3 prósent). Ennfremur, til að sannreyna frumueiturhrif akteósíðs á frumfrumur rotta, var MTT prófið framkvæmt eins og sýnt er á mynd 2(b). Lífhæfir frumfrumur rotta sem voru meðhöndlaðir með 2,5, 5, 10, 25, 50 og 100μM akteósíði voru ákvarðaðir sem 114 ± 4 prósent, 117:8±6 prósent, 123:9± 5 prósent, 132:6±4 prósent, 153:1± 7 prósent og 142:1±6 prósent, í sömu röð, samanborið við samanburðarhóp (100:4±5 prósent). Ennfremur, til að staðfesta áhrif akteósíðs á lífvænleika bæði L929 frumna og frumfruma rotta, var frumu lifandi/dauð próf gerð eins og sýnt er á mynd 2(c). Fjöldi dauðra frumna litaðra sem rauða flúrljómun jókst ekki fyrir bæði L929 frumur og frumfrumur rottu sem voru meðhöndlaðar með 50 og 100μM akteósíði í 24 klst. Þessar upplýsingar sýndu stöðugt að skilgreindur skammtur af akteósíði hafði ekki áhrif á lífvænleika L929 frumna og frumfruma rottufruma. Þannig voru 50 μM akteósíð og 100 μM akteósíð, sem eru óeitruð skammtar í bæði L929 frumum og aðal rottufrumur, notaðir til að sannreyna varnarvirkandi áhrif þess in vitro rannsóknir með því að nota aðal rottufrumur.

3.2. Acteoside vinnur gegn IL-1 -Valdu próteóglýkantapi í frumfrumur rotta. Aðal rottufrumur sem voru innbyggðar í algínatperlur voru meðhöndlaðar með 50 og 100μM akteósíði í nærveru eða fjarveru 1ng/mL IL- 1 í 21 dag. Eftir það var DMMB próf gerð til að meta breytinguna á próteóglýkaninnihaldi eins og sýnt er á mynd 3(a). Hlutfallslegt innihald próteóglýkans var ákvarðað sem 88:3±18:1 prósent og 86:8±16:3 prósent í aðal rottufrumur sem voru meðhöndlaðar með 50 og 100μM akteósíði, í sömu röð, samanborið við samanburðarhóp (103:8±) 32:3 prósent). Þrátt fyrir að hlutfallslegt próteóglýkaninnihald hafi minnkað vegna akteósíðs, voru þessar niðurstöður ekki marktækar. Hins vegar lækkaði hlutfallslegt próteóglýkaninnihald marktækt um 37:1± 14:7 prósent í frumfrumu rottum sem voru meðhöndlaðir með 1ng/mL IL-1, en 50 og 100μM akteósíð dró verulega úr próteóglýkaninnihaldinu um 125:7 prósent og 64 ± 14:5 prósent, í sömu röð, í viðurvist 1ng/mL IL-1. Í kjölfarið, til að sannreyna hvort akteósíð bæli niður IL-1 - framkallað próteóglýkan tap, var liðbrjósk sem skorið var úr hnéliðum rottu meðhöndlað með 100μM akteósíði í nærveru eða fjarveru 10ng/mL IL-1 í 7 daga. Eftir það var vefjafræðilegt mat með H&E litun og safranín-O og hröðum grænum litun gerð eins og sýnt er á mynd 3(b). Formfræðilega breytingin sást ekki með H&E litun; hins vegar, safranín-O og hröð græn litun leiddi í ljós að próteóglýkan litað sem rauði liturinn breyttist ekki í liðbrjóskunum sem voru meðhöndlaðir með 100μM akteósíði samanborið við það sem var í samanburði. Hins vegar var alvarlegt próteóglýkan tap framkallað af 10ng/mLIL-1 í liðbrjóskinu og 100μM akteósíð bældi marktækt próteóglýkan tapið í liðbrjóskinu sem var meðhöndlað með 10ng/ml IL- 1. Samanlagt sýna þessar upplýsingar stöðugt að akteósíð hefur afbrotsáhrif sem hægir á hrörnun liðbrjósks með því að vinna gegn IL-1 -framkölluðu próteóglýkantapi.

3.3. Acteoside hefur varnarvirkandi áhrif sem bælir MMP tjáningu og virkjun í frumfrumu rottum sem eru meðhöndlaðir með IL-1. Til að kanna hvort akteósíð-framkallað varnarleysisáhrif tengist bælingu á MMP tjáningu og virkjun, voru frumfrumur rotta meðhöndlaðar með 50 og 100μM akteósíði í nærveru eða fjarveru 10ng/mL IL-1 í 24 klst. Í kjölfarið voru breytingar á MMPs rannsakaðar. Eins og sýnt er á mynd 4(a), þó að tjáning brjóskrýrnandi ensíma eins og MMP-13, MMP-1 og MMP-3 hafi verið marktæk aukin í skilyrtum miðlum frumrottna chondrocytes meðhöndlaðir með 10ng/mL IL-1, það var minnkað með akteósíði á skammtaháðan hátt. Ennfremur leiddu niðurstöður bæði qPCR (Mynd 4(b)) og qRT-PCR (Mynd 4(c)) í ljós að IL-1 jók marktækt mRNA gildi MMP eins og MMP-13, MMP{ {22}} og MMP-3 í frumfrumu rottum. Hins vegar lækkuðu þau skammtaháð í frumfrumu rottummeðhöndluð með 50 og 100μM akteósíði. Þar að auki, 50 og 100μM akteósíð bældu á áhrifaríkan hátt virkjun MMPs í frumfrumur rotta sem voru meðhöndlaðar með 10ng/mL IL-1 (Mynd 4(d)). Samanlagt benda þessar upplýsingar stöðugt til þess að akteósíð hafi andoxunaráhrif sem bælir tjáningu og virkjun brjóskrýrnandi ensíma.

3.4. Acteoside bælar tjáningu og framleiðslu IL1 -framkallaðra niðurbrotsbólgumiðla og bólgueyðandi frumufrumuefna í frumfrumur rotta. Til að ákvarða hvort akteósíð hafi fyrirbyggjandi áhrif gegn OA, voru frumfrumur rotta meðhöndlaðar með 50 og 100μM akteósíði í nærveru eða fjarveru 10ng/mL IL-1 í 24 klst. Eftir það voru breytingar á bólgumiðlum, dæmigerðum niðurbrotsþáttum eins og iNOS, COX-2 og PGE2, rannsakaðar. MRNA-gildi iNOS, COX-2 og PTGS-2 jukust umtalsvert af IL-1 í frumfrumu rottum.

Hins vegar lækkuðu þau skammtaháð í frumfrumu rottum sem voru meðhöndlaðir með akteósíði (mynd 5(a)). Ennfremur bældi akteósíð ekki aðeins tjáningu iNOS og COX-2 í aðal rottufrumur sem voru meðhöndlaðar með IL-1 (Mynd 5(b)) heldur minnkaði einnig verulega hlutfallslega framleiðslu NO og PGE2 eins og sýnt er. á myndum 5(c) og 5(d), í sömu röð. Þessar upplýsingar benda til þess að akteósíð bæli tjáningu bólgumiðlunar-framkallaðrar bólgueyðandi cýtókína sem virka sem niðurbrotsþættir til að framkalla versnandi hrörnun liðbrjósks. Þess vegna, til að rannsaka tjáningarbreytingu bólgueyðandi cýtókína með 50μM akteósíði í aðal rottufrumur sem voru meðhöndlaðir með 10ng/mL IL- 1, var frumuflokkur framkvæmdur eins og sýnt er á mynd 6. Acteósíð bældi tjáningu frumtrópýla chemoattractant- (CINC-) 2, CINC-3, ciliary neurotrophic factor (CNTF), fractalkine (CX3CL1), IL-1, IL- 1, leptín, monocyte chemoattractant prótein{{22} } (MCP-1), átfrumubólguprótein- (MIP-) 3 og -taugvaxtarþáttur (NGF) í frumfrumum rottu sem fengu meðferð með IL-1 samanborið við IL-1 eingöngu. Samanlagt benda þessi gögn stöðugt til þess að akteósíð komi í veg fyrir versnandi hrörnun liðbrjósks með bælingu á bólgumiðlum og bólgueyðandi frumudrepum gegn IL-1 --framkölluðum niðurbrotsáhrifum í frumfrumur rotta.

3.5. Acteoside bælir MAPK og NFκB fosfórun í aðal rottufrumur sem meðhöndlaðir eru með IL-1. Til að kanna frumuboðaleiðir sem tengjast akteósíð-örvuðum varnarleysisáhrifum gegn bólgueyðandi cýtókíni IL-1 breytingu á MAPK og NFκB, voru frumfrumur rottufrumur meðhöndlaðir með 50 og 100μM acteósíði í nærveru IL{8} }} í 24 klst. Eftir það var heildarprótein dregið út og rafskorið á SDS-PAGE hlaupinu til að framkvæma Western blot. Eins og sést á mynd 7 voru MAPK eins og ERK1/2, p38 og JNK marktækt fosfórýleruð í aðal rottufrumur sem voru meðhöndlaðar með IL-1, en 50 og 100μM akteósíð framkallaði ekki marktækt fosfórun MAPK samanborið við fosfórunina. stjórn í frumfrumu rottum. Hins vegar bældu 50 og 100μM akteósíð skammtaháð IL-1 -framkallaða MAPK fosfórun í frumfrumur rotta. Ennfremur minnkaði fosfórun NFκB í frumfrumu rottum sem voru meðhöndlaðir með 10ng/mL IL-1 smám saman með akteósíði á skammtaháðan hátt. Þessar upplýsingar benda til þess að MAPK og NFκB frumuboðaleiðir séu nátengdar akteósíð-völdum varnarvirkandi áhrifum gegn IL -1 í frumfrumur rotta.

3.6. Acteoside bælir flutning NFκB frá frumufrumu til kjarna með bælingu á IL-1 -framkallaðri NFκB fosfórun í frumfrumur rotta. Til að kanna hvort akteósíð bæli flutning NFκB frá frumu til kjarna, voru frumfrumur rottu meðhöndlaðar með 50 og 100 ug/mL akteósíði í nærveru eða fjarveru 10 ng/mL IL-1. Eins og sýnt er á mynd 8(a), var NFκB umtalsvert flutt yfir í kjarnann frá frumu fruma rottufruma sem voru meðhöndlaðir með 10ng/mL IL-1. Hins vegar var það verulega hamlað af akteósíði á skammtaháðan hátt. Ennfremur, þrátt fyrir að NFκB magnið hafi verið aukið í kjarnahlutanum sem var dregin út úr aðal rottufrumur sem voru meðhöndlaðar með 10ng/mL IL-1, var það lækkað skammtaháð af akteósíði eins og sýnt er á mynd 8(b). Magn NFκB var lækkað í frumuhlutanum sem var dregin út úr frumfrumu rottum sem voru meðhöndlaðir með 10ng/mL IL-1, en það var skammtaháð aukið með akteósíði. Samanlagt benda þessi gögn stöðugt til þess að akteósíð-framkallað varnarafleiðandi áhrif gegn IL-1 eigi þátt í bælingu á flutningi frá frumu til kjarna á mótun NFκB boðferilsins í frumfrumum rotta.

3.7. Acteoside dregur úr stigvaxandi hrörnun liðbrjósks í skurðaðgerðar-DMM-framkallaðri hnéliðabólgusjúkdómsdýrum. Til að skýra akteósíð af völdum varnarleysisáhrifum in vivo, voru dýr af völdum OA sem mynduð voru með skurðaðgerð DMM sem gerð var á hnélið BALB/c músa gefin til inntöku 5 og 10mg/kg akteósíðs leyst upp í 5 prósent etanóli annan hvern dag í 8 vikur. Eftir það voru hnéliðir metnir vefjafræðilega með því að nota safranín-O og hraða græna litun eins og sýnt er á mynd 9. Próteóglýkan tap og skaði á liðbrjóski yfirborðinu jókst marktækt í hnéliðinu sem var krufið úr DMM-völdum OA dýrum. Hins vegar bældi inntaka akteósíðs próteóglýkantapi og minni áverka á liðbrjóski samanborið við burðarefni eingöngu. Ennfremur var einkunnagjöf Mankins aðeins hækkuð umtalsvert í OA dýrahópnum (n =5, 3± 0:7) sem fékk ökutæki eingöngu samanborið við Naive (n =5, 0 :67 ± 0:5). Hins vegar lækkaði gjöf 5 og 10mg/kg akteósíðs í OA dýrahópinn (n =5) Mankin einkunnagjöf um 2±0:7 og 1:67 ± 0:5 , í sömu röð, miðað við eingöngu ökutæki. Samanlagt benda þessar upplýsingar til þess að inntaka akteósíðs dregur úr versnandi hrörnun liðbrjósks í liðum liðum með niðurbrotssjúkdóma.

cistanche (Akteósíð)uppbót: gegn þreytu

Vinsamlega smelltu hér að hluta 2