Echinacoside stuðlar að útbreiðslu nýrnapípla þekjufrumna úr mönnum með því að hindra HBX/TREM2-miðlaða NF-κB boðleið

Tengiliður: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Netfang:audrey.hu@wecistanche.com

YuFan ZHanG, QinFanG Wu, liMin ZHonG, donGWei GonG

Ágrip.

Lifrarbólgu B veiru X (HBX) prótein er nauðsynlegt fyrir afritun HBV og gegnir hlutverki í framgangi lifrarbólgu hjá mönnum. Hins vegar er undirliggjandi virkni HBX við langvinna glomerulonephritis (HBV-Gn) af völdum HBV óþekkt. (echinacoside frá cistanche)(ecH) er fenýletanóíð glýkósíð af Cistanche ættkvíslinni, sem býr yfir sterkri andapoptosis og taugaverndandi virkni. í þessari rannsókn var virkni HBX og tengsl HBX og ecH í nýrnapípluþekjufrumum úr mönnum (rTecs; HK-2 frumulína) kannað. öfugt magn Pcr og western blot greiningar voru notaðar til að mæla mRNA og prótein tjáningarmagn HBX í HK-2 frumum, í sömu röð. Frumutalningarsettið-8 prófið var gert til að greina frumufjölgun. Flæðifrumugreining var notuð til að ákvarða hraða frumudauða. HBX sýndi and-fjölgunar- og proapoptótísk áhrif í HK-2 frumum og var jákvætt tengt kveikiviðtaka sem tjáður er á tjáningu mergfrumu 2 (TreM2). Ennfremur truflaði ECH virkni HBX í HK-2 frumum, sem virkaði sem HBX bæli. Þar að auki var sérstakur NF‑κB hemill, PdTc, notaður til að kanna frekar sambandið milli HBX og nF-κB. Niðurstöðurnar bentu til þess að nF-KB væri þátttakandi í HBX/TreM2 merkjaleiðinni og stjórnaði neikvætt TreM2 tjáningu í RTECS. Þessi rannsókn gaf nýja innsýn í virkni HBX og gaf einnig til kynna hugsanlegt gildi ECH sem meðferðarmiðils fyrir HBV-Gn.

Kynning

Lifrarbólga B veira (HBV) er Hepadnaviridae veira, sem leiðir til bráðrar og langvinnrar lifrarbólgu hjá mönnum (1). HBV veldur ekki aðeins viðvarandi eða tímabundinni sýkingu í lifur heldur sýkir einnig vefi utan lifrar, þar á meðal bris, gallganga, eitlakerfi og nýru (2). Þar að auki er HBV sýking nátengd langvinnri glomerulonephritis (HBV-Gn); samt sem áður er sameindaverkun HBV meðan á HBV-Gn stendur ekki fullkomlega skilin (3,4).

HBV reglubundið lifrarbólgu B veiru X (HBX) prótein er nauðsynlegt fyrir HBV eftirmyndun (5,6). Fjöldi rannsókna hefur greint frá því að HBX stuðli að frumufjölgun meðan á lifrarkrabbameini sem tengist HBV sýkingu (7-9) stendur. Nýrnapípluþekjufrumur úr mönnum (rTecs) eru stór hluti nýrnapípla millivefs og gegna virku hlutverki í nýrnabólgu (10). rTec apoptosis er nátengd truflun á pípulaga millivef, sem leiðir síðan til framvindu HBV-Gn (10). HBX er fyrst og fremst tjáð í rTec frumum og veldur rTec frumudauða og nýrnapípuskemmdum hjá sjúklingum með HBV-Gn (11,12). Ennfremur hefur verið greint frá því að HBX bælir útbreiðslu rTecs úr rottum (13), og oftjáning HBX flýtir fyrir framvindu frumuhringsins frá G1 í S fasa í aðal rTecs, sem leiðir til stöðvunar frumuhrings í S fasa (14). Þess vegna getur auðkenning á HBX hemli veitt ný lækningalyf fyrir HBV-Gn. Hins vegar er nákvæmt sameindanet HBX í rTecs manna ekki alveg skilið.(echinacoside frá cistanche)(ecH) er náttúrulegt efnasamband unnið úrCistancheplöntur, sem sýna apoptotic og bólgueyðandi áhrif (15,16). Fyrri rannsókn greindi frá því að ecH framkalli fjölgun og kemur í veg fyrir frumufrumur þekjufrumna í þörmum (17). Ennfremur hefur verið greint frá því að ecH flýtir fyrir endurnýjun beina með því að auka fjölgun beinfrumna (18). ecH getur einnig dregið úr afritun HBV, tjáningu mótefnavaka og bólgu í þekjufrumum í þörmum rotta (16,19). Hins vegar hafa líffræðileg áhrif ecH á rTecs ekki verið skýrð að fullu.

Oftjáning TreM2 stuðlaði að fjölgun glioma frumna (22). Aftur á móti dregur TreM2 knockdown úr flutningi nF-KB í kjarnann í hrörnunarkjarna pulposus frumum úr mönnum (23). Ennfremur hefur TreM2 verið skilgreint sem nýtt meðferðarmarkmið fyrir hrörnun milli hryggjarskífu manna (23). Hins vegar hefur ekki verið greint frá líffræðilegri virkni TreM2 í rTecs úr mönnum. í þessari rannsókn var HBX oftjáning (oeHBX) framkölluð í manna rTecs (HK-2 frumulínu) og í kjölfarið áhrif ecH(echinacoside frá cistanche) á transsýktum oeHBX frumum var rannsakað. Markmið þessarar rannsóknar var að kanna virkni HBX og hugsanlegt gildi ecH sem áhrifaríks lækningaefnis fyrir HBV-Gn.

Efni og aðferðir

Cell menningu.Mannlega rTec frumulínan HK-2 var keypt frá Shanghai Yaji Biotechnology co., Ltd. HK-2 frumur voru ræktaðar í DME/F12 miðli (cat. nr. SH30023.01B; Hyclone; cytiva) bætt við 10 prósenta fóstursermi nautgripa (cat. no. 16000-044; Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc. .), 2 mM l-glútamín og 1 prósent penicillín/streptomycin (cat. nr. P1400-100; Beijing Solarbio Science & Technology co., Ltd.) við 37˚C með 5 prósent CO2.

RNA einangrun og öfugt umritunarmagn PCR (RT-qPCR).Heildar rna var dregið úr HK-2 frumum með Trizol® (cat. nr. 1596 -026; Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, inc.), samkvæmt samskiptareglum framleiðanda. Heildar-RNA var öfugt umritað í cDNA með því að nota First-Strand cDNA Synthesis Kit í samræmi við samskiptareglur framleiðanda (cat. nr. K1622; Thermo Fisher Scientific, Inc.). qPCR var framkvæmt með því að nota SYBr-Green forblöndu í samræmi við samskiptareglur framleiðanda (cat. nr. K0223; Thermo Fisher Scientific, Inc.) á ABI-7300 rauntíma skynjara (Applied Biosystems; Thermo Fisher Scientific, Inc.). Skilyrði PCR voru: 95˚C í 10 mínútur og síðan 40 95˚C lotur í 15 sek., 60˚C í 45 sek. Þrjár endurtekningar voru nauðsynlegar fyrir hverja viðbrögð. Eftirfarandi grunnpör voru notuð fyrir qPCR: HBX áfram, 5'-GGcTGcTaGGTTGTacTG-3' og afturábak, 5'-caGaGGTGaaGcGaaGTG -3'; TreM2 áfram, 5'-TGGcacTcTcaccaTTacG-3' og afturábak, 5'-ccTccc atTcaTcTTccTTcac-3'; og GaPdH áfram, 5'-AAT cccaTcaccaTcTTc-3' og afturábak, 5'-aGGcTGTTG TcaTacTTc-3'. mRNA gildi voru magngreind með 2‑ΔΔCq aðferðinni og staðlað við innra viðmiðunargeniðGAPDH (24).

Oftjáning og högg niður.Til að framkalla oftjáningu HBX og TreM2 voru HBX eða TreM2 cDNA raðir í fullri lengd settar inn í plVX-puro vektorinn (cleantech rannsóknarstofur, inc.) með tvöföldu meltingu (Hindiii ogEcoRI). Í kjölfarið var endursamsetta plasmíðið (1,5 µg) flutt inn í HK-2 frumur (2x105). Sýndarplasmíðið (tómur vektor, 1 µg) var umbreytt tímabundið inn í HK-2 frumur (2x105) sem neikvæð viðmiðun (oenc) með því að nota lipofectamine® 2000 (cat. nr. 11668-027, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Inc.). ecH(echinacoside frá cistanche)(cat. nr. 82854-37-3; Biopurify Phytochemicals, ltd.) var leyst upp í DMSO (cat. no. d2650; Sigma-Aldrich; Merck KGaa) í styrkleikanum 1, 2,5, 5, 10, 20 og

50 mg/l í sömu röð; og bætt við ræktun á transsýktum oeHBX eða oeTreM2 frumum. Síðari tilraunin hófst 48 klst. síðar.

Til að slá niður TreM2 tjáningu voru framleidd þrjú lítil truflun (si)RNA (siTreM2-1, siTreM2-2 og siTreM2-3; 20 µM) sem miðuðu á TreM2 (Shanghai Majorbio Bio-Pharm Technology co . ltd.) og síðan umbreytt í HK-2 frumur (2x105) með því að nota lipofectamine® 2000 samkvæmt samskiptareglum framleiðanda (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.). Ósérhæfð spæna siRNA röð (5'uucuccGaacGuGucacGu3, 25 nM) si-neikvæð viðmiðun (nc) var notuð sem neikvæða samanburðurinn. Miðað staðsetning og raðir TreM2 sirnas er að finna í töflu Si. Síðari tilraunin var gerð 48 klst. síðar.

Vestur blotting.Heildarprótein var dregið úr HK-2 frumum

með því að nota RIPA lýsispúða (cat. nr. BYl40825; Jrdun Biotech Co., Ltd.). Heildarprótein var magnmælt með því að nota Bicinchoninic Acid prófunarbúnaðinn (cat. nr. PICPI23223; Thermo Fisher Scientific, inc.) í samræmi við siðareglur framleiðandans og 20 µg prótein/braut var aðskilin með SDS-PaGe á 15 prósent hlaupi. Eðlismæling sýna var ákvörðuð með því að nota örplötulesara (dnM-9602, Pulangxin). Í kjölfarið voru aðskilin prótein flutt yfir á PVDF himnu. Eftir blokkun með 5 prósent fitulausri þurrmjólk í 1 klst við stofuhita var himnan ræktuð með frummótefnum (tafla SII) við 4˚C yfir nótt og ræktuð aftur með efri mótefnamótefni mús igG (1:1, 000, vörunúmer a0216, Beyotime Institute of Biotechnology) í 1 klst. við 37˚C. Ónæmisvirku próteinböndin voru sýnd með því að nota ecl kerfi (cytiva). Blettingar voru gerðar í þríriti.GAPDHog H3 voru notuð sem hleðslustýringar fyrir umfrymi og kjarnaprótein, í sömu röð.

Niðurstöður

ECH (echinacoside frá cistanche)bælir niður fallið af HBX inn HK-2 frumur.Að meta

virkni HBX, oftjáning HBX var framkölluð í HK-2 frumum. Hlutfallslegt mrna og próteinmagn HBX var marktækt uppstýrt í oeHBX frumum samanborið við oenc frumur (mynd 1a og B). Í kjölfarið voru oeHBX frumur ræktaðar með mismunandi styrk af ecH (1, 2,5, 5, 10, 20 og 50 mg/l; e1, e2,5, e5, e10, e20 og e50, í sömu röð). Oftjáning HBX dró verulega úr fjölgun HK-2 frumna og þessari lækkun var snúið við með ecH á skammtaháðan hátt eftir 24 og 48 klst. (mynd 1c).

Ennfremur sýndi útbreiðsluhraði oeHBX frumna engan marktækan mun samanborið við E1-meðhöndlaðar frumur (mynd 1c). Aftur á móti jók e10 meðferð marktækt útbreiðsluhraða oeHBX frumna samanborið við E20 og E50 meðferð sem sýndi engan marktækan mun (mynd 1c). Því voru áhrif ecH á frumudauði skoðuð í e2.5, e5 og e10-meðhöndluðum frumum. Oftjáning HBX jók marktækt frumudauða HK-2 frumna og frumudrepunartíðni oeHBX frumna minnkaði með ecH meðferð á skammtaháðan hátt (mynd 1d). á heildina litið bentu niðurstöðurnar til þess að ecH hamlaði virkni HBX í HK-2 frumum á skammtaháðan hátt.

TREM2 tjáningu er hamlað af ECH(echinacoside frá cistanche) inn transfected oeHBX

frumur.rT-qPcr og western blotting voru notuð til að kanna hlutfallslegt mrna og prótein tjáningarstig TreM2 í oeHBX frumum, í sömu röð. TreM2 mrna og prótein tjáningarstig var marktækt uppstýrt í oeHBX frumum samanborið við oenc frumur (mynd 2a og B). Hins vegar minnkaði ecH tjáningarstig TreM2 í transsýktum oeHBX frumum á skammtaháðan hátt (mynd 2a og B). Þess vegna bentu niðurstöðurnar til þess að HBX tjáning væri jákvæð tengd TreM2 tjáningu og bentu enn frekar til bælandi áhrifa ecH á HBX í HK-2 frumum.

Niðurfelling og oftjáning af TREM2 inn HK-2 frumur.Til að meta frekar virkni TreM2, var TreM2 niðurfelling og oftjáning framkölluð í HK-2 frumum með því að nota rna truflun og lentiveiruferju, í sömu röð. Fyrir knock-down prófunina, þrjú siRNA sem miða á mannlegt genTREM2(siTreM2-1, siTreM2-2 og siTreM2-3) voru færð í HK-2 frumur og ósérhæft siRNA var notað sem neikvæð viðmiðun (sinc). allar þrjár TreM2-sirnurnar slógu niður innræna tjáningu TreM2 með góðum árangri í HK-2 frumum (mynd 3a og B). Hins vegar sáust lægsta hlutfallslegt TreM2 mrna og prótein tjáningarstig í siTreM2-1 og siTreM2-2-transsýktum frumum (mynd 3a og B), því siTreM2-1 og siTreM{{13 }}umbreyttar frumur voru valdar til síðari tilrauna. Fyrir oftjáningartilraunirnar var plasmíð sem innihélt TreM2cdna röð úr mönnum í fullri lengd smíðað og síðan umbreytt í HK-2 frumur (oeTreM2). a

sýndarplasmíð þjónaði sem neikvæð viðmiðun (oenc). Magn TREM2 tjáningar var marktækt aukið í oeTREM2 frumum samanborið við oenc frumur (mynd 3c og d). Þess vegna voru oeTreM2 frumur notaðar til síðari tilrauna.

TREM2 þöggun minnkar the apoptosis af oeHBX frumur.Mælt var með frumufrumusniði oeHBX-frumna sem transsýktar voru með siTREM2 eða sinc. Frumfrumuhraði oeHBX plus sinc frumna var marktækt hærra samanborið við opnar frumur. Hins vegar var apoptosis hlutfall marktækt lækkað í oeHBX plús siTreM2-1 eða siTreM2-2 frumum samanborið við oeHBX plús sinc frumum (mynd 4a). Niðurstöðurnar bentu til þess að TreM2-rýrnun hamlaði virkni HBX við HK-2 frumufrumu.

Survivin tilheyrir hemli apoptosis próteinafjölskyldu, sem hamlar apoptotic virkni og bælir frumudauða (25). Að miða á Survivin hefur verið skilgreind sem ný aðferð til að meðhöndla nýrnafrumukrabbamein (26). nF-KB er einnig apoptosis hemill sem gegnir hlutverki í æxlisferlum gegn apoptósu (27). Ennfremur er virkjun caspase3 nátengd apoptosis (28). í þessari rannsókn var próteininnihald TreM2, Survivin og klofnum caspasa3 í HK-2 frumum magnmælt. Magn TREM2 tjáningar minnkaði marktækt í oeHBX plús siTreM2-1/2 frumum samanborið við oeHBX plús sinc frumum (mynd 4B). Magn Survivin tjáningar jókst marktækt í oeHBX plús siTreM2-1/2 frumum samanborið við oeHBX frumur. að auki minnkaði magn klofins caspase3 tjáningar marktækt í oeHBX plús siTreM2-1/2 frumum samanborið við oeHBX plús sinc frumum (mynd 4B). Ennfremur dró oeHBX marktækt úr flutningi NF‑κB til kjarnans og siTREM2‑1/2 flutningur jók verulega nF-κB kjarnaflutning (mynd 4B). Samanlagt bentu niðurstöðurnar til þess að TreM2 væri downstream þáttur HBX í HK-2 frumum, því gæti HBX stuðlað að frumudauða með því að stjórna TreM2 tjáningu í rTecs úr mönnum.

TREM2 oftjáning bælir niður the flutningur afNF‑κB til the kjarna inn HK-2 frumur.Áhrif ecH(echinacoside frá cistanche)á oeTreM2-umbreyttum frumum voru greindar. Oftjáning TreM2 stuðlaði að frumufrumumyndun HK-2 frumna (mynd 5a). Mikið var dregið úr apoptosis oeTREM2 frumna með ECH meðferð (E10; mynd 5A). Ennfremur minnkaði ECH marktækt tjáningu TreM2 í oeTreM2 frumum. TREM2 oftjáning minnkaði marktækt tjáningarstig Survivin, hins vegar var þessari lækkun á tjáningu snúið við með ecH. að auki var próteintjáningastig klofnaðs caspasa3 marktækt aukið í oeTreM2 frumum samanborið við oenc frumur; áhrif sem minnkaði verulega með ECH meðferð. Ennfremur stuðlaði ecH að flutningi nF-KB í kjarna í oeTreM2 frumum (mynd 5B). Samanlagt bentu niðurstöðurnar til þess að ecH bæli einnig virkni TreM2 í rTec frumum úr mönnum.

HBX aðgerðir eru bæld niður af the NF‑κB hemill PDTCinn mannlegur RTECs.Að meta frekar sambandið á milli

HBX og nF-KB, HK‑2 frumur voru ræktaðar með sérstökum nF-KB hemli, PdTc (10 µmól/l; P10). Frumufrumuhraði oeHBX frumna var marktækt aukinn samanborið við oenc frumur (mynd 6a). Hins vegar sýndu oeHBX plús PdTc frumur marktækt aukið apoptosis hlutfall samanborið við oeHBX frumur. Ennfremur hefur hlutfallslegt mRNA og prótein tjáningarstig TreM2 lækkað í oeHBX plús PdTc frumum samanborið við oeHBX frumur (mynd 6B). Þess vegna eru niðurstöðurnar

benti til þess að nF-KB stýrði neikvætt TreM2 tjáningu í oeHBX-umbreyttum frumum.

NF‑κB hemill PDTC bælir niður TREM2 verkefnisstjóri starfsemi inn oeHBX frumur.luciferase reporter (pGl3-enhancer-luc2) sem innihélt villigerða stuðlaröðina af TreM2 (pGl3-enhancer-luc2-pTreM2) var smíðaður og í kjölfarið færður í oenc, oeHBX og oeHBX plús P10 ræktaðar frumur.

Lúsiferasavirkni greindarferjunnar sem innihélt villigerð TREM2 hvata jókst marktækt í oeHBX frumum samanborið við oenc frumur. Hins vegar bældi PdTc marktækt lúsiferasavirkni fréttamannsins í oeHBX frumum (Mynd 7). á heildina litið bentu niðurstöðurnar til þess að PdTc hamlaði umritun TreM2 með því að bæla örvunarvirkni TreM2 í oeHBX frumum.

Umræða

HBX er fyrst og fremst tjáð í rTecs sjúklinga með HBV-Gn og virkar sem ákvarðandi veirusjúkdómsmyndun (11,29). Þess vegna er aukin þekking á virkni HBX sameindanetsins mikilvægt skref í þróun nýrrar aðferðar til að meðhöndla HBV-Gn. Markmið þessarar rannsóknar var að kanna frekar virkni HBX og kanna hugsanlegt sameindanet þess í rTecs manna.

HBX hindrar útbreiðslu rTecs (11). í þessari rannsókn var greint frá útbreiðslu og frumudauðavirkni HBX í RTECs í mönnum, sem bendir til þess að HBX hafi bælt þróun rTecs úr mönnum. fyrri rannsókn gaf til kynna að ecH(echinacoside frá cistanche)hindrar afritun HBV og tjáningu mótefnavaka (19). í þessari rannsókn, ecH(echinacoside frá cistanche)meðferð truflaði starfsemi HBX í HK-2 frumum, því gæti HBX orðið fyrir áhrifum af ecH í HK-2 frumum.

Sameindalæknisfræðiskýrslur 22: 1137-1144, 2020 1143

Ennfremur bentu niðurstöður til þess að ecH(echinacoside frá cistanche)getur þjónað sem hugsanlegt lækningaefni fyrir HBV-Gn.

TreM2 er meðfæddur ónæmisviðtaki sem gegnir hlutverki í bólgusvörun (30). Í þessari rannsókn var HBX tjáning jákvæð tengd TreM2 tjáningu í RTECS manna. Ennfremur minnkaði TREM2-knúning verulega apoptosis hraða oeHBX frumna, og ecH(echinacoside frá cistanche)meðferð dró úr áhrifum oeTreM2 á frumudauða. Samanlagt bentu þessar niðurstöður til þess að TreM2 væri skotmark HBX í HK-2 frumum. Þess vegna, ecH(echinacoside frá cistanche)getur hamlað frumuddreifingu rTecs úr mönnum með því að hindra virkni HBX/TreM2 boðleiðarinnar.

Fyrri skýrsla sýndi fram á að nF-KB gegnir ekki aðeins hlutverki í frumudreifingu heldur tekur einnig þátt í stjórnun ónæmissvörunar og bólgu (31). Ennfremur er TreM2 miðlað af nF-κB-næma míkróRNA-34a við Alzheimerssjúkdóm og augnbotnahrörnun (32,33). í þessari rannsókn var apoptotic hlutfall oeHBX frumna marktækt aukið í viðurvist PdTc. Eftir því sem við best vitum gaf þessi rannsókn í fyrsta skipti til kynna að NF‑κB hemill PdTc bældi hvatavirkni TreM2. Ennfremur bentu niðurstöðurnar til þess að TreM2 stjórnaði flutningi nF-KB í kjarnann í HK-2 frumum á neikvæðan hátt, en væri jákvætt tengt klofnum caspase3 tjáningarstigum. TreM2 gegndi öfugu hlutverki í HK-2 frumum en hlutverki sínu í hrörnunarkjarna pulposus og glioma frumum (22,23). Þess vegna benti þessi rannsókn til þess að TreM2 gæti haft mismunandi aðgerðir í mismunandi gerðum mannafrumna.

Samanlagt gaf þessi rannsókn ekki aðeins til kynna að nF-KB væri nýr hluti af HBX/TreM2 merkjaleiðinni heldur benti hún einnig til þess að nF-KB stjórnar neikvætt TreM2 tjáningu í rTecs manna. Hins vegar voru helstu takmarkanir þessarar rannsóknar skortur áinn lifanditilraunir og klínísk gögn. Því frekarinn lifandiog klínískar rannsóknir eru nauðsynlegar til að staðfesta niðurstöður þessarar rannsóknar.

í þessari rannsókn, virkni ecH(echinacoside frá cistanche)var rannsakað og niðurstöðurnar bentu til hugsanlegra áhrifa ecH(echinacoside frá cistanche)um boðleiðir í mannlegum rTecs. Ennfremur jók þessi rannsókn núverandi þekkingu á líffræðilegri virkni ecH í rTec frumum úr mönnum og gaf einnig til kynna möguleika þess sem nýtt lækningaefni fyrir HBV-Gn.

Heimildir

1. Karayiannis P: Lifrarbólga B veira: veirufræði, sameindalíffræði, lífsferill og útbreiðsla í lifur. Hepatology international 11: 1-9, 2017.

2. Seeger c og Mason WS: Lifrarbólgu B veira líffræði. Microbiol Mol Biol rev 64: 51-68, 2000.

3. Usama e, Ana Maria S, W ray K og Fervenza Fc: Meðferð við lifrarbólgu B veiru-tengdum nýrnakvilla. nephron clin Practice 119: c41-c49, 2011.

4. Zhang Y, li J, Peng W, Yu G, Wang l, chen J og Zheng F: HBV-tengd bráðsmitandi bráða glomerulonephritis: skýrsla um 10 tilfelli. PloS one 11: e0160626, 2016.

5. Slagle Bl og Bouchard MJ: Lifrarbólga B veira X og stjórnun á tjáningu veirugena. kalt Spring Harb Perspect Med 6: a021402, 2016.

6. Guerrieri F, Belloni l , d'andrea d, Pediconi n, le Peral , Testoni B, Scisciani c, Floriot o, Zoulim F, Tramontano a,et al: Greining um erfðamengi á beinum HBx erfðafræðilegum markmiðum. BMc erfðafræði 18: 184, 2017.

7. Shi T, Hua Q, Ma Z og lv Q: niðurstýring á mir-200a-3p af völdum lifrarbólgu B veiru X (HBx) próteins stuðlar að frumufjölgun og innrás í HBV-sýkingartengda lifrarkrabbamein. Pathol res Pract 213: 1464-1469, 2017.

8. Tian Y, Xiao X, Gong X, Peng F, Xu Y, Jiang Y og Gong G: HBx stuðlar að frumufjölgun með því að trufla víxlspjall milli mir-181a og PTen. Sci rep 7: 40089, 2017.

9. Idris Me, Hachem H, Koering c , Merle P, Thénoz M, Montreux F og Wattel e: HBx kallar fram annað hvort frumuöldrun eða frumufjölgun eftir frumu svipgerð. J Veiruhepat 23: 130-138, 2016.

10. Wang X, Wang l, Zhu n, Zhou Y, Gu lJ og Yuan WJ: Lifrarbólgu B veira X prótein mótar nýrnapípulaga þekjufrumu-framkallaða T-frumu- og átfrumuviðbrögð. Immunol cell Biol 94: 266-273, 2016.

11. He P, Zhang d, li H, Yang X, li d, Zhai Y, Mal og Feng G: Lifrarbólgu B veira X prótein mótar frumudauða í nærliggjandi pípulaga þekjufrumum úr mönnum með því að virkja JaK2/STaT3 boðleiðina. int J Mol Med 31: 1017-1029, 2013.

12. Yang Y, Wang X, Zhang Y og Yuan W: Lifrarbólga B veira X prótein og bólgueyðandi frumufrumur sameinast til að auka slóð-framkallaða frumudauða nýrnapípla frumna með uppstýringu dr4. int J Biochem cell Biol 97: 62-72, 2018.

13. He P, Zhou G, Qu d, Zhang B, Wang Y og li d: HBx hamlar útbreiðslu og veldur frumuddreifingu með Fas/Fasl uppstýringu í nýrnapípluþekjufrumum rotta. J nephrol 26: 1033, 2013.

14. Han W, luo M, He M, Zhu Y, Zhong Y, ding H, Hu G, liu l , chen Q og lu Y: HBx genaflutningur hefur áhrif á hringrás frumna í nýrnapíplum þekjufrumum með því að stjórna tjáningu sýklíns. Mol Med rep 18: 1947-1954, 2018.