Átfrumueyðing dregur úr meinafræði sjúkdóms í þætti H háð ónæmisflóknu miðluðu glomerulonephritis

ViðbótarþátturH (FH) er lykilstýribúnaður fyrir aðra aðferð við viðbót, hjá mönnum og músum. Fyrr leiddu rannsóknir okkar í ljós að fjarvera FH veldur því að C57BL6 músin verður næm fyrirlangvarandi sermisveiki(CSS) ásamt aukningu ánýru innfiflutningur átfrumnamiðað við eftirlit. Til að skilja hvort aukin nýliðun átfruma (Mϕs) að nýra var að keyra innflammation og útbreiðslu áverka, skoðuðum við eFfosfrv Mϕ eyðingu með klódrónati í FH knockout músum með CSS. Átta vikna gamlar FHKO mýs voru meðhöndlaðar með apóferritíni (4 mg/mús) í 5 vikur og með annað hvort burðarefni (PBS) eða klódrónati (50 mg/kg ip, 3 sinnum/viku síðustu 3 vikurnar). Stjórnun áclodronate minnkaði einfrumur og Mϕs í nýrumaf>80%. 

Nýrnastarfsemimetið með BUN og albúmín hélst nær eðlilegu við tæmingu á Mϕs. Clodronate meðferð kom í veg fyrir breytingu á cýtókínum, TNF og IL-6 og aukning á genatjáningu á vaxtarþáttum bandvefs (CTGF), TGF -1, fylkismálmpróteinasi-9 (MMP9),Fibronectin, laminin og kollagen í FHKO músum með CSS (P < 0:05). Clodronate meðferð leiddi til hlutfallslegrar verndar gegnónæmisfléttur- (IC-) miðluð meinafræði sjúkdóms meðan á CSS stendur eins og hún er metin afsigniFiverulega minnkuð gauklasjúkdómur(GN) og utanfrumu fylki. Niðurstöður okkar benda til þess að viðbót virkjun sé einn af þeim aðferðum sem stjórna átfrumulandslaginu og þar meðFibrosi. Það á eftir að ráða nákvæmlega hvernig vélbúnaðurinn er. Í stuttu máli sýna gögn okkar að Mϕs gegna mikilvægu hlutverki í FH-háðum ICGN og Mϕ rýrnundregur úr framgangi sjúkdómsins.

SMELLTU HÉR TIL AÐ FÁ NÁTTÚRULEGA LÍFFRÆNT CISTANCHE ÚTDRÆT MEÐ 25% ECHINACOSIDE OG 9% ACTEOSIDE FYRIR NÝRAVERKUN

1. Inngangur

Langvinn nýrnasjúkdómur(CKD) er alþjóðlegt heilsuvandamál; 10% af þeim eru ónæmisfléttur (IC-) miðlaðar og koma fram við sermissjúkdóma, sýkingar og sjálfsofnæmissjúkdóma. [1]. Það kemur fram í ársskýrslu USA Renal Data Systemeinstaklingar með langvinnan nýrnasjúkdóm„eru greinilega í mikilli hættu á að deyja“ með 10-föld aukinni tíðni á þremur áratugum þar sem sjúklingar misstu 70% af líftíma sínum. Samkvæmt NIDDK hafa um það bil 14% fullorðinna verið greindir með nýrnasjúkdóm, sem gerir það að 9. algengustu dánarorsök [2]. Nýrun eru mjög næm fyrir skaða af völdum komplements, sérstaklega í sjálfsofnæmis- og bólguaðstæðum [3, 4].

Komplementkerfið tekur þátt í meðfæddum og aðlagandi ónæmissvörun og veitir fyrstu varnarlínu gegn örverum [5, 6]. Það samanstendur af þremur virkjunarleiðum, sem hefjast á einstakan hátt, og samanstanda af meira en 30 plasma- og frumutengdum próteinum [7]. Önnur leiðin er stöðugt á varðbergi og er stjórnað af próteinum eins og complement factor H (FH). FH er prótein í blóðrás sem er að mestu tilbúið í lifur [8]. FH-skorts (fh-/-) mýs sem meðhöndlaðar eru með apóferritíni þróa með sér langvarandi sermisveiki (CSS) sem leiðir til dreifðrar útbreiðslu glomerulonephritis (GN) innan 5 vikna frá meðferð, en C57BL/6 mýs sem eru með storkuþátt H (FH) nægilega lítið. gauklabólga [9]. F4/80+ átfrumnaíferð á sér stað í nýru og sést í kringum IC útfellingar í fh-/- músunum. Viðbótarvirkjun myndar bráðaofnæmi, C3a og C5a, sem taka þátt í flutningi Mϕs á bólgustaðinn. Hömlun á C5a/C5aR1 merkjum dró úr Mϕs í nýrum [10]. Í þessari stillingu,nýrnaskaðatengist nýrnaíferð en þeim aðferðum sem geta átt þátt í að valdanýrnaskaðaenn óþekkt.

Mynd 1: FH breytir átfrumnamerkjagenum í nýrum músa með FH-háð ICGN. Rauntíma magn PCR fyrir CD204 og CD206 með því að nota mRNA einangrað úr nýrum eftir 5 vikna saltlausn eða apóferritín. Tjáningin er staðlað í GAPDH (n=6/hópur). ∗P < 0:01. Línurit sýna faltbreytingu gena í apóferritín-meðhöndluðum fh-/- músum (n=6) samanborið við fh-/- mýs sem meðhöndlaðar voru með saltvatni (n=6).

Einfrumur (Mo) sem myndast af blóðmyndandi frumum [11] flytjast í gegnum æðaþelið inn í vefina, þar sem þær aðgreina sig í Mϕs. Merki eins og F4/80, CD11b, CD68 og Fc viðtakar geta auðkennt Mϕs. Mϕs taka mikilvægan þátt í nýrnaskaða, viðgerð og bandvefsmyndun í mismunandi tilraunalíkönum um nýrnasjúkdóma [12, 13]. Nýlega sýndu rannsóknir okkar að nýrnaskaðar í FH-háðum ICGN tengist nýrnaíferð Mϕs. Þar að auki hafa fyrri rannsóknir sýnt fram á að hömlun á Mϕ íferð í nýru dregur úr slagæðaþrýstingi og kemur í veg fyrir gauklaskaða og bandvef í ýmsum dýralíkönum af nýrnakvilla [14, 15]. Hins vegar, að því er við vitum, hefur ekki verið fjallað um áhrif Mϕ eyðingar við nýrnaskaða í tengslum við FH-háð ICGN. Þess vegna skoðaði þessi rannsókn hlutverk Mϕs á nýrnaskaða sem tengist FH-háðum ICGN með því að nota lípósóm clodro nate. Klódrónat (klódrónsýra) er bisfosfónat sem umbrotnar í óvatnsrjúfan ATP hliðstæðu [16]. Tilraunir okkar sýna að Mϕs gegna lykilhlutverki í tapi á nýrnastarfsemi í umhverfi þar sem óstýrð komplement virkjun er. Þess vegna gæti minnkað Mϕs eða leiðbeinandi Mϕs að gera ráð fyrir viðgerðarsvipgerð dregið úr meinafræði sjúkdómsins og hægt er að nýta það með lækningalegum hætti.

2. Efni og aðferðir

2.1. Tilraunadýr.

fh−/− músastofninn var myndaður og vinsamlega veittur af Dr. Matthew Pickering og Marina Botto (Imperial College of London) og fóru stöðugt aftur yfir á C57BL/6 stofninn á rannsóknarstofu okkar í yfir 10 kynslóðir. Mýs sem nógu FH-nógu rusl þjónuðu sem viðmiðunarhópur (n=8/hópur) Arfgerð var framkvæmd með því að nota PCR-byggðar aðferðir. Músum var haldið við hitastigið 20-22 gráður C í 12 klst ljós-12 klst dökkri birtulotu, í dauðhreinsuðum, loftræstum búrum með mat og vatni að vild. Háskólinn í Chicago og háskólann í Buffalo dýraverndunar- og notkunarnefndir samþykktu allar rannsóknir.

2.2. Bókun um langvarandi sermissjúkdóm.

CSS var framkallað hjá 6-8 vikna fH−/− eða villigerð músum með daglegri gjöf í kviðarholi af 4 mg hrossamilta apóferritíni (Calzyme Laboratories) án hjálparefnis [10, 17, 18] í 5 vikur. Stýridýr fengu samtímis inndælingar í kviðarhol með saltlausn burðarefni

2.3. Mat á nýrnastarfsemi.

Styrkur þvagefnis köfnunarefnis í blóði (BUN) var ákvarðaður með Beckman Autoanalyzer (Beckman Coulter, Fullerton, CA). Styrkur albúmíns í þvagi var mældur með músalbúmíni ELISA setti (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX) og staðlað kreatínín í þvagi mæld með litamælingu (Stanbio Laboratory, Boerne, TX) eins og áður hefur verið lýst [19].

Mynd 2: Clodronate dregur í auknum mæli úr átfrumum nýrna í músum með FH-háð ICGN. Gefin eru flæðifrumumælingarsnið F4/80+ einfruma/Mϕs á degi 0, 2, 4 og 7, á dæmigerðan hátt. Tjáning F4/80+ frumna var ákvörðuð með frumuflæðismælingu. Gögnin voru greind með FlowJo V10 hugbúnaði. F4/80+ frumur minnka verulega á hverjum tímapunkti og ná minna en 10% á degi 7. Hver tímapunktur n=6.

2.4. Vefjafræði.

Nýru voru felld inn í paraffín og fyrir malin-fast og fjögurra míkrómetra hlutar voru búnir til. Skaflarnir voru litaðir með Periodic Acid-Schiff og skoðaðir af nýrnasjúkdómafræðingi (AC) á blindan hátt. Fyrir hverja glæru var fjölgandi gauklabólga og glomerulo-sclerosis flokkuð frá 0 til 4 eins og áður hefur verið lýst [20]. Fyrir ónæmisflúrljómunarsmásjárskoðun var nýrnavefurinn snöggfrystur í 2-metýlbútani forkælt í þurrís. Fjögurra míkróna cryostat hlutar voru unnar fyrir ónæmisflúrljómun (IF) litun. Hlutar voru festir í 4% paraformaldehýði og litaðir með Alexa488-samböndum gegn músum C3 (Cappel) og Alexa 555 gegn músum IgG. Hálfmagnt skor á styrkleika litunar og dreifingu frá 0 til 4 var veitt á blindan hátt eins og áður hefur verið lýst [19].

2.5. QRT-PCR.

Nýrun voru tekin og heildar-RNA var dregið úr vefjum með því að nota TRIzol hvarfefni samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda (Invitrogen, USA). cDNA var búið til með SuperScript III bakriti (Invitrogen). qRT-PCR var framkvæmt með því að nota Power SYBR Green PCR Master mix á ABI 7700 röð skynjara (Applied Biosystems). PCR mögnun var framkvæmd í heildarrúmmáli 25 ul sem innihélt 12,5 ul af 2x TaqMan Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems), 6,25 ul af nukleasafríu vatni, 5 ul af cDNA og 1,25 ul af viðeigandi primerum (IDT). Allir qPCR grunnar (tafla 1) voru hannaðir með því að nota Primer3 hugbúnaðinn (Whitehead Institute for Biomedical Research) til að tryggja sérhæfni og næmi. Til að mæla magn mRNA, stöðluðum við tjáningu markgenanna í glýseraldehýð-3- fosfat dehýdrógenasa. Hlutfallslegt mRNA tjáningarstig var reiknað með 2 - ΔΔCt aðferðinni og var staðlað til tjáningarstigs GAPDH.

2.6. Tölfræði.

Allar niðurstöður eru meðaltal ± SD frá að minnsta kosti {{0}} músum í hverjum hópi. Annaðhvort var óparað tvíhliða próf (gögn með normaldreifingu) eða Mann–Whitney U prófið (gögn án normaldreifingar) notað til að bera saman 2 hópa með GraphPad Prism 5.0. Tölfræðileg marktækni er sett fram sem hér segir: ∗P < 0:05; ∗∗P < 0:01; og ns: ekki marktækur.

Stuðningsþjónusta Wecistanche - Stærsti útflytjandi cistanche í Kína:

Netfang:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Sími:+86 15292862950

Verslaðu fyrir frekari upplýsingar:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop