Nýrnaígræðsla

Tengiliður:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

KYNNING

Nýraígræðsluer besti kosturinn fyrir lokameðferð við langvinnum nýrnasjúkdómum. Sem stendur hefur mótefnamiðluð höfnun (AMR), sem einkennist af nærveru gjafasértæks mótefnis (DSA) sem beint er að hvítfrumnamótefnavaka manna (HLA), komið fram sem helsta orsök langvinnra skemmda á nýrnaígræðslunni, sem takmarkar að miklu leyti langtímalifun ígræðslunnar. (1, 2). Hins vegar hefur núverandi áætlanir ekki náð vænlegum árangri í klínískumeðferð á AMR (1, 3, 4). Því er brýn þörf á að greina hugsanlega lífmerki og áhættuþætti fyrir AMR eftir nýrnaígræðslu, sem er mikilvægt fyrir meðferð og niðurstöður sjúklinga.

Uppsöfnuð sönnunargögn benda til þess að við bólguaðstæður geti B frumur sérhæft sig í plasmablasts sem seyta mótefni og stjórnandi B frumur (Bregs), sem eru sérstakur B frumu undirhópur sem seytir ónæmisbælandi frumuefni, sérstaklega interleukin (IL)-10. (1, 5–7). Þannig framleiða plasmablastar ósamhæfðar mótefni, sem leiða til AMR, á meðan Bregs sýna ónæmisstýrandi virkni og hjálpa til við að framkalla ónæmisjafnvægi. Þannig hefur verið greint frá því að Bregs séu nátengd ónæmi gegn AMR eftir nýrnaígræðslu (1, 8, 9).

Þótt aðgreind yfirborðsmerki Breg undirhópa hafi ekki enn verið auðkennd í mönnum (1), hafa fyrri rannsóknir greint frá fjórum algengum undirhópum Bregs: minni Bregs (mBregs) skilgreindur með CD19 plús CD24 plús CD27 plús (10), bráðabirgða- Bregs ( tBregs) skilgreind með CD19 plús CD24 plús CD38 plús (10, 11), IL-10-framleiðir minni Bregs (IL-10 plús mBregs) skilgreind með CD19 plús CD24 plús CD27 plús IL-10 plús (12) og IL-10-framleiðandibráðabirgða-Bregs (IL-10 plús tBregs) skilgreind með CD19 plús CD24 plús CD38 plús IL-10 plús (13). Laguna-Goya o.fl. greint frá því að fækkun tBregs og IL-10 plús tBregs tengist jákvætt bráðri höfnun eftir nýrnaígræðslu (14). Hins vegar, Zhou o.fl. greint frá því að mBregs, frekar en tBregs, fækkaði marktækt hjá fimm sjúklingum með bráða höfnun eftir lifrarígræðslu (10). Ennfremur, Shabir o.fl. greint frá því að tBregs tengdust ekki höfnun nýrnaígræðslu hjá þremur AMR sjúklingum (15). Í ljósi þessara ósamræmi niðurstaðna er þörf á að skýra frekar hvaða Breg undirhópur gegnir mikilvægu hlutverki hjá AMR sjúklingum eftir nýrnaígræðslu.

Í þessari rannsókn voru hlutföll fjögurra undirstofna Bregs í blóðrás borin saman meðal heilbrigðra, stöðugra (ST) og AMR hópanna. Síðan var lífdreifing B-frumna, IL-10 og krabbameinsefna í nýrnaígræðslu heilbrigðra, ST- og AMR-sjúklinga ákvörðuð. Ennfremur var gangverk fjögurra undirhópa Bregs í blóðrás hjá ST-sjúklingum í 90 daga eftir aðgerð könnuð. Þessar núverandi niðurstöður, ásamt þeim sem greint var frá í fyrri rannsóknum (1), benda til þess að IL-10 plús mBregs í blóðrás og IL-10 plús tBregs séu leiðandi Breg undirhópar sem stuðla að mótstöðu AMR.

Cistanche tubulosa duftkemur í veg fyrirnýrnasjúkdóma, smelltu hér til að fá sýnishornið

Leitarorð:Breg svipgerð, nýrnaígræðsla, mótefnamiðluð höfnun, samvægi, kraftmikil

EFNI OG AÐFERÐIR

Sjúklingar og hópar

Allir sjúklingar veittu undirritað upplýst samþykki fyrir rannsóknina. Þessi rannsókn var samþykkt af siðanefnd fyrsta tengda sjúkrahússins í Zhengzhou háskólanum (2018-KY-72). Skráningarnúmer klínískrar rannsóknar er ChiCTR1900022501.

Þessum sjúklingum var skipt í þrjá hópa: (1) heilbrigður samanburðarhópur (heilbrigður, n=9): heilbrigðir nýrnagjafar á aldrinum 18–55 ára (lausir við sjúkdóma), sem samanstóð af systkinum og maka viðtakenda; (2) viðtakendur með stöðugan ígræðsluhóp (ST, n=25): sjúklingar á aldrinum 18–55 ára, þar sem nýrnastarfsemin var stöðug (laus við sýkingu eða höfnun fyrir og eftir nýrnaígræðslu) meðan á eftirfylgni stóð tímabil (meira en eða jafnt og 6 mánuðir); (3) viðtakendur með AMR hóp (AMR, n=18): sjúklingar á aldrinum 18–55 ára, sem greindust með AMR. Nýrnaígræðslur viðtakenda með ST og AMR voru fengnar fráheilbrigður nýrnagjafis. Mismunagreiningin milli ST og AMR hópanna var staðfest af tveimur nýrnasjúkdómafræðingum, samkvæmt Banff 2017 samstöðu (3, 16).

Útlægt blóð, nýrnavefur og frumusýni

Útlægum blóðsýnum úr heilbrigða hópnum var safnað fyrir aðgerð og 1, 7 og 14 dögum eftir aðgerð. Sýnum sem fengust úr ST hópnum var safnað fyrir aðgerð og 1, 7, 14, 30 og 90 dögum eftir aðgerð. Sýnum sem fengust úr AMR hópnum var safnað þegar höfnun átti sér stað (fyrir höfnunarmeðferð við AMR). Einkjarna frumur í útlægum blóði (PBMC) voru einangraðar frá

5 ml af blóði með Ficoll-Paque hallaskilvindu og varðveitt með 10 prósent dímetýlsúlfoxíði (Solarbio Inc., Peking, Kína) í fljótandi köfnunarefni.

Kjarnanálar nýrnasýnum sem fengust úr heilbrigða hópnum var safnað fyrir skurðaðgerð fyrir nýrnavefsýni úr tíma-núll gjafa. Kjarnanálar nýrnasýnum sem fengust úr ST hópnum var safnað 90 dögum eftir aðgerð eftir að nýrnastarfsemi þeirra náði jafnvægi vegna reglubundinnar vefjasýnis. Í ljósi seinni stunguskerðingar á nýrnastarfsemi höfnuðu allir AMR-sjúklingar nýrnasýni úr kjarna nálar eftir höfnunarmeðferð við AMR. Þannig var sýnum úr nýrnavefsýni úr kjarnanál úr AMR hópnum aðeins safnað þegar höfnun átti sér stað (áður en höfnunarmeðferð við AMR). Alls gáfu þrír heilbrigðir gjafar, níu ST-sjúklingar og níu AMR-sjúklingar undirritað upplýst samþykki fyrir nýrnavefsýni úr kjarnanál. Hinir sex heilbrigðir gjafar, 16 ST-sjúklingar og níu AMR-sjúklingar höfnuðu nýrnasýni úr kjarnanálinni vegna ótta við meiriháttar blæðingar í tengslum við vefjasýnina. Einstaklingsfrumur voru einangraðar úr kjarnanálar nýrnasýnum þriggja heilbrigðra gjafa, þriggja ST-sjúklinga og þriggja AMR-sjúklinga, með því að sameina vélrænni sundrun við ensím niðurbrot utanfrumufylkisins, sem viðheldur uppbyggingu heilleika vefja (Multi Tissue Dissociation Kit). 1; Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Þýskalandi). Nýrnafrumurnar voru varðveittar með 10 prósent dímetýlsúlfoxíði (Solarbio Inc., Peking, Kína) í fljótandi köfnunarefni og eftirstandandi sýni úr kjarnanálum úr nýrnasýni voru felld inn í parafín við 4 gráður.

Flæðisfrumumæling

Frumur sem geymdar voru í fljótandi köfnunarefni voru þíðaðar fljótt í vatnsbaði stillt á 37 gráður í 3 mín. Alls voru 2–3 × 106 PBMC ræktaðar með Roswell Park Memorial Institute 1640 þynningarfrumuörvunarkokteilnum (500×), sem samanstendur af PMA (Phorbol 12-Myristat 13-Acetate), a kalsíumjónófór (Ionomycin), og próteinflutningshemlar Brefeldin A og Monensin, (eBioscience, San Diego, CA), við 37 gráður með 5 prósent CO2 í 5 klst. Dauðar frumur voru útilokaðar með litun með 7-Aminoactinomycin D (Thermo Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, Bandaríkjunum) og yfirborðsmerki Bregs voru lituð með flúorókrómmerktum mótefnum (Brilliant Violet 421™ and-human CD19, (PE)/Cy7 andstæðingur manna CD24, Alexa FluorR647 andstæðingur manna CD27, Alexa FluorR488

CD38 gegn mönnum, og Brilliant Violet 510™ gegn manneskju CD45; viðeigandi samsætustjórnun: Brilliant Violet 421™ mús

IgG1 k Jafngerðarstýring, PE/Cy7 mús IgG2a k einsgerðastýring, Alexa FluorR647 mús IgG1 k samtegundastýring, Alexa FluorR488 mús IgG1 k samtegundastýring og Brilliant Violet

510™ mús IgG1 k samsætustýring; Biolegend, San Diego, Kaliforníu,

USA) í 30 mínútur við 4 gráður, með vernd gegn ljósi. Fyrir innanfrumu litun voru frumur litaðar með mótefnum sem miða að innanfrumu frumudrepum Bregs (PE and-manna IL-10; viðeigandi samsætuviðmið: PE rotta IgG1 k ísógerðarstýring; Biolegend, San Diego, CA, USA) fyrir 30 mínútur við stofuhita, með vörn gegn ljósi. Merktu frumurnar voru greindar með BD Biosciences Canto II tækinu (BD Biosciences, Bandaríkjunum). Alls greindust 100,000 atburðir í eitilfrumuhliðinu. Gagnagreiningin var framkvæmd með FlowJo hugbúnaði (Tree Star, San Carlos, CA, Bandaríkjunum).

Ónæmisvefjaefnafræði

Immunohistochemistry staining of CD19, IL-10, and C-X-C motif chemokine 13 (CXCL13) in kidney tissues was performed, respectively. Brieflfly, 4 mm sections obtained from formalin-fifixed, paraffifin-embedded kidney tissue samples were incubated with 1:500-diluted anti-CD19, 1:1000-diluted antiCXCL13 (rabbit anti-human; Abcam, Cambridge, UK), and 1:500-diluted anti-IL-10 (rabbit anti-human; Absin, Shanghai, China) primary antibodies overnight at 4°C, followed by Horseradish Peroxidase-conjugated 1:20,000-diluted goat antirabbit secondary antibody (Abcam, Cambridge, UK) for 1 h at room temperature and then 3,3′-diaminobenzidine for another 10 min. DAPI appears in blue. Immunohistochemistry images were acquired with an Aperio ScanScope AT Turbo (Aperio, Vista, CA). Numbers of CD19, IL-10, and CXCL13 positivities were scored as follows: 0 positivity, score = zero; 1–5 positivities, score = one; 6–10 positivities, score = two; 11–20 positivities, score = three; >20 jákvæðni, skora=fjögur

Tölfræðigreining

Í hreiðurtilfelli-viðmiðunarrannsókninni var greining á rekstrareinkennum móttakara (ROC) feril unnin með MedCalc v18.11.3. Eftirstöðvar tölfræðilegra greininga voru framkvæmdar með því að nota IBM SPSS 21.0. Venjulega dreifð mæligögn með einsleitni dreifni voru gefin upp sem meðaltal ± staðalfrávik (x ± s) og greind með óháðu úrtaki t-prófi (samanburður á milli hópa) eða einhliða dreifnigreiningu (samanburður á milli hópa). Mæligögn sem ekki höfðu eðlilega dreifingu eða einsleitni dreifni voru gefin upp í miðgildi með millifjórðungssviði (IQR) og greind með Mann–Whitney U prófi (samanburður á milli hópa) eða Kruskal–Wallis prófi (samanburður milli hópa). Talningargögn voru greind með c2 prófi, leiðréttu c2 prófi eða Fishers nákvæmu prófi, eftir þörfum. Einstefnu endurtekin mælikvarða dreifnigreining

var notað á ýmsum tímapunktum. P-gildi<0.05 were="" considered="" statistically="">

NIÐURSTÖÐUR

Grunneinkenni sjúklinga

Alls voru níu heilbrigðir gjafar, 25 ST-sjúklingar og 18 AMR-sjúklingar með í þessari rannsókn. Eins og sýnt er í töflu 1 var kyn viðtakenda, aldur, líkamsþyngdarstuðull (BMI), nýrnakvilli í upphafi, HLA misræmi, CNIs, hita-blóðþurrðartími og kuldi-blóðþurrðartími ekki mismunandi milli hópa, eða milli hópa (P > 0.05, fyrir alla). Hins vegar var tíðni bæði and-flokks I og and-flokks II DSA-jákvæðni í AMR hópnum marktækt hærri, samanborið við þá í ST hópnum (P < 0.001="" fyrir="" andstæðingur="" -class="" i="" dsa,="" p="">< 0,001;="" p="0.001" fyrir="" and="" class="" ii="" dsa).="" ennfremur,="" samanborið="" við="" st-sjúklinga,="" voru="" amr-sjúklingar="" með="" marktækt="" hærra="" skor="" í="" píplubólgu="" (t),="" millivefsbólgu="" (i)="" og="" peritubular="" capillaritis="" (ptc)="" (p="0.012" fyrir="" t;="" p="">< 0,001="" fyrir="" i="" og="" ptc="" ),="" samkvæmt="" banff="" flokkuninni="" (venjulegt,="" stig="0;" vægt,="" stig="1;" miðlungs,="" stig="2;" alvarlegt,="" stig="3)" (3,="" 16)="" (="" viðbótartöflur="" 1="" og="">

cistanche echinacosidefyrir sykursýki