Jasminum Sambac frumuþykkni sem andoxunarefnisörvun gegn öldrun húðar Part 1

Ágrip: Oxunarálag gegnir stóru hlutverki í öldrunarferli húðarinnar með því að framleiða hvarfgjörn súrefnistegundir og myndun háþróaðrar glýkunarendaafurða (AGEs). Andoxunarefni er því þörf á húðvörumarkaði og notkun sameinda sem koma úr plöntufrumuræktun gefur einstakt tækifæri. Í þessari grein voru eiginleikar vatnsetanóls útdráttar sem fæst með Jasminum sambac frumum (JasHEx) könnuð. Eiginleikar andoxunarefna og and-AGE voru rannsakaðir með þverfaglegri nálgun sem sameinar massarófsmælingar og lífupplýsingafræðilegar tilraunir in vitro og ex vivo. JasHEx inniheldur fenólsýruafleiður, lignans og triterpenes og það reyndist draga úr frumuhvarfandi súrefnisframleiðslu í keratínfrumum sem verða fyrir utanaðkomandi streitu. Það sýndi einnig getu til að draga úr AGE myndun og auka kollagen tegund I framleiðslu í utanfrumu fylkinu. Gögn sýndu að JasHEx andoxunareiginleikar tengdust hreinsun sindurefna og málmklómyndunarvirkni og virkjun Nrf2/ARE leiðarinnar. Þetta getur vel útskýrt JasHEx bólgueyðandi virkni sem tengist lækkun á NO gildum í LPS-örvuðum átfrumum. Þannig má líta á JasHEx sem öflugan andoxunarhvata gegn oxunarálagi af völdum öldrunar húðar.

Glýkósíð af cistanche getur einnig aukið virkni SOD í hjarta- og lifrarvef og dregið verulega úr innihaldi lipofuscins og MDA í hverjum vef, hreinsar í raun ýmsar hvarfgjarnar súrefnisradicals (OH-, H₂O₂, osfrv.) og verndar gegn DNA skemmdum af völdum af OH-róttækum. Cistanche phenylethanoid glýkósíð hafa öfluga hreinsunargetu sindurefna, meiri afoxunargetu en C-vítamín, bæta virkni SOD í sæðisviflausn, draga úr innihaldi MDA og hafa ákveðin verndandi áhrif á virkni sæðishimnu. Cistanche fjölsykrur geta aukið virkni SOD og GSH-Px í rauðkornum og lungnavef í tilraunamúsum af völdum D-galaktósa, auk þess að draga úr innihaldi MDA og kollagens í lungum og plasma og auka innihald elastíns, hafa góð hreinsunaráhrif á DPPH, lengja tíma súrefnisskorts í öldruðum músum, bæta virkni SOD í sermi og seinka lífeðlisfræðilegri hrörnun lungna í öldruðum tilraunamúsum. Með frumuformfræðilegri hrörnun hafa tilraunir sýnt að Cistanche hefur góða andoxunargetu og hefur tilhneigingu til að vera lyf til að koma í veg fyrir og meðhöndla öldrunarsjúkdóma í húð. Á sama tíma hefur echinacoside í Cistanche umtalsverða getu til að hreinsa DPPH sindurefna og getur hreinsað hvarfgjarnar súrefnistegundir, komið í veg fyrir niðurbrot á kollageni af völdum sindurefna og hefur einnig góð viðgerðaráhrif á anjónaskemmdir af sindurefnum af týmíni.

Smelltu á Hvar get ég keypt Cistanche

【Frekari upplýsingar:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Leitarorð: öldrun húðar; hvarfgjarnar súrefnistegundir (ROS); háþróaðar glycation end products (AGEs); Jasminum sambac hýdrætanólseyði (JasHEx); massagreiningu; efnaskiptafræði; Global Natural Product Social Molecular Networking (GNPS); kjarnaþættir rauðkorna 2-tengdur þáttur 2 (Nrf2)

1. Inngangur

Erfðafræðilegir innri þættir og ytri efni eins og útfjólublá geislun, innrauð geislun, útlendingalyf og umhverfismengun valda myndun hvarfgjarnra súrefnistegunda (ROS). Þau verða til við virkjun öndunarfærakeðju hvatbera, cýtókróm p450 og NADPH oxidasa [1]. ROS innihalda sindurefna (superoxíð anjón, hýdróperoxýl rót, alkoxý rótarefni og hýdroxýl rótarefni) og sameindir sem ekki eru róttækar (vetnisperoxíð og staksúrefni) [2]. Þegar andoxunarkerfi eru ofviða safnast ROS fyrir innan frumna og mynda svokallaða oxunarálag sem er helsti þáttur í öldrun húðarinnar [3].

Reyndar veldur oxunarálagi bæði DNA skemmdum og lípíð- og próteinoxun ásamt því að kveikja á mítógenvirkjaðri próteinkínasa (MAPK) ferli (AKT, JNK, ERK og p38) [4]. Þetta aftur á móti stuðlar að tjáningu bólgueyðandi cýtókína, vaxtarþátta og límsameinda með örvun á umritunarþáttunum AP-1 og NF-KB. Þar að auki veldur virkjun MAPK ferla breytingum á húðfylki með því að draga úr kollagenmagni. Það flýtir fyrir niðurbroti kollagens með því að stilla tjáningu matrix metalloproteinasa (MMP) og vefjahemla þeirra TIMPs og það dregur úr nýmyndun nýs kollagens, með því að hindra TGF-gerð II viðtaka/Smad boð. Að auki breytir oxunarálagi húðsjúkdóma og truflar kalsíumhalla húðþekju, sem er nauðsynlegt fyrir heilleika og virkni hornhúðsins, örvar virkni fitukirtla og veldur hrörnun sortufrumna [5].

Samhliða því stuðlar myndun breyttra lífsameinda sem kallast háþróuð glýkunarendaafurðir (AGEs) oxunarálagi í frumum og vefjum [6]. Þróun þessara öldrunar lífmerkja er framkölluð af ýmsum umhverfisþáttum eins og sígarettureyk, miklu magni af hreinsuðu og einföldu kolvetnamataræði, háhitaelduðum matvælum og kyrrsetu lífsstíl; AGE eru stöðugar og óafturkræfar afurðir sem eru fengnar af óensímhvarfi á milli afoxandi sykurs og próteina, kjarnsýra eða lípíða, fylgt eftir með frekari endurröðun [7]. Reyndar er upphafspunktur AGE myndunarinnar Maillard hvarfið þar sem karbónýlhópar afoxandi sykra hvarfast afturkræf við frjálsa amínóhópa próteina, kjarnsýrur eða amínófosfólípíðs til að mynda Schiff basa. Þessar iminar raðast sjálfkrafa í stöðugra ketamín, sem kallast Amadori vörur. Þeir framleiða hvarfgjörn díkarbónýl (sem glýoxal eða metýlglýoxal) sem hvarfast við lýsín og arginín virka hópa próteina, sem gefur af sér mikið úrval af AGEs [8,9]. Þau eru flokkuð í mismunandi hópa eftir getu þeirra til að gefa frá sér flúrljómun og mynda krosstengingar.

AGE verkun er miðlað af viðtökum fyrir AGEs (RAGEs) sem eru yfirhimnuprótein sem tilheyra immúnóglóbúlín yfirfjölskyldu frumuyfirborðssameinda af tegund I, tjáð í mismunandi frumugerðum, þar með talið glærufrumum, trefjafrumum og átfrumum. Binding AGEs/RAGEs eykur ROS framleiðslu aðallega með virkjun NADPH oxidasa (NOX) og hvatbera öndunarfærakeðjunnar, sem leiðir til oxunarálags og allra ofangreindra afleiðinga áhrifa [6,8].

Þar að auki eru utanfrumu fylkisprótein (ECM), sérstaklega kollagen, mjög viðkvæm fyrir glýkingu. Reyndar er magn pentósídíns úr AGE uppbyggingunni, sem er unnið úr kollageni, marktækt hærra hjá gömlum en ungum einstaklingum [10]. Kollagen glýkur breytir ekki aðeins vélrænum eiginleikum kollagensins sjálfs, sem verður stífara og stökkara [11] heldur einnig eiginleikum utanfrumu fylkisins, sem hefur áhrif á hegðun búsettra frumna (vöxtur, aðgreining, hreyfigeta, genatjáning og viðbrögð við cýtókín) og matrix-frumu milliverkanir [12].

Í þessari atburðarás er mikil eftirspurn eftir andoxunarefnum á snyrtivörusviðinu til að draga úr AGE myndun og tengdum oxunarfalli þeirra: útdrættir úr tegundinni Jasminum sambac, sem tilheyra Oleaceae fjölskyldunni, eru áhugaverðir fyrir andoxunareiginleika þeirra og sameiginlega notkun þeirra í fólk lyf til að meðhöndla húðsjúkdóma [13]. Hins vegar sýna plöntuþykkni nokkra ókosti eins og lélega sjálfbærni, hugsanlega mengun með skordýraeiturum, áburði eða sýkla og breytileika í eigindlegri og magnbundinni samsetningu þeirra, sem hefur áhrif á árstíðir og umhverfisaðstæður. Gildur valkostur við plöntur, sem uppspretta lífvirkra snyrtivara innihaldsefna, er táknaður með plöntufrumuræktun sem býður upp á nokkra kosti: (i) mikla sjálfbærni framleiðsluferlisins, þar sem ekki er þörf á ræktuðu landi; ii) stöðugt framboð á náttúruvörum án landfræðilegrar, árstíðar og æxlunarferils háðar plantna; (iii) engin hætta á mengun af völdum sýkla, umhverfismengunarefna og landbúnaðarefnaleifa; (iv) stöðluð ræktunarskilyrði sem gera kleift að fá hærri og endurtakanlegri hraða lífmassa og uppskeru umbrotsefna; (v) mikil fjölhæfni, þar sem hægt er að hámarka styrk efnasambanda með því að breyta ræktunarskilyrðum og (vi) auðveldari og minna tímafrekar útdráttaraðferðir, sem dregur úr þörfinni á árásargjarnum leysiefnum [14,15].

Hér var hýdróetanólútdráttur unnin úr Jasminum sambac frumuræktun (JasHEx) rannsakaður. Markmið rannsóknarinnar okkar er víðtæk efnafræðileg og líffræðileg lýsing á JasHEx, sérstaklega að kanna eiginleika þess gegn blóðsykri og öldrun. Í fyrsta lagi voru háþróaðar aðferðir byggðar á massarófsmælingum notaðar til að fá nákvæma byggingalýsingu á útdrættinum. Síðan voru gerðar in vitro og ex vivo tilraunir til að sanna líffræðilega virkni JasHEx sem andoxunarefni.

2. Efni og aðferðir

2.1. Plöntuvefjaræktun og útdráttarundirbúningur

Vottað arabísk jasmín (Jasminum sambac) var fengin frá staðbundinni leikskóla ("Ladre di Piante", Pistoia, Toscana-héraði, Ítalíu). Jasminum sambac lauf voru lögð í bleyti í 70 prósent etanóli (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, Bandaríkjunum) í 1 mín. og yfirborðssótthreinsuð með 1 prósent (v/v) af bleikiefni í sölu ásamt Tween 2{{ 9}} (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, Bandaríkjunum) í 8 mínútur, fylgt eftir með þremur skolun í dauðhreinsuðu eimuðu vatni. Síðan voru blöðin skorin út í 0.5–1.0 cm stykki og ræktuð á fullstyrk MS miðli [16] sem innihélt 3 prósent (w/v) súkrósa, 0 0,2 mg/L 2,4D og 8 g/L plöntuagar. Útgræðslurnar voru ræktaðar mánaðarlega á ferskan miðil í þrjá mánuði. Þegar gulgrænn, brothættur og ört vaxandi kallus var fengin voru plöntufrumurnar fluttar yfir í fljótandi MS miðilinn, bætt við 3 prósent (w/v) súkrósa og 0,2 mg/L 2,4D. Sviflausnin var hrærð í hristara við 110 pm og 27 ◦C í dimmu loftslagsherbergi. Dökkvaxnu frumurnar voru stækkaðar í hverri viku úr litlum flöskum í stórar flöskur þar til fljótandi sviflausnræktum var náð um 177 g/L. Undirbúningur Jasminum sambac frumuræktunar vatns-etanóls útdráttar (JasHEx) var framkvæmd með því að bæta 2000 ml af lausn af etanóli/vatni (90/10, rúmmálshlutfall) í 500 g af frumum. Blandan var gerð einsleit í 3 mínútur við 1500 snúninga á mínútu og 6 mínútur við 3800 snúninga á mínútu með því að nota Grindomix GM300 hnífakvörn (Retsch GmbH, Haan, Þýskalandi). Sviflausnin sem fékkst var hrærð við 400 snúninga á mínútu í 2 klst við 25 ◦C, og forðast útsetningu fyrir ljósi. Sviflausnin var síðan skilin í skilvindu við 6300 rpm í 10 mínútur við 4 ◦C. Fljótandi vökvinn var fjarlægður, síaður og síðan þéttur undir lofttæmi í snúningsuppgufunartæki (IKA RV8, IKA-Werke GmbH & Co., Staufen, Þýskalandi) stillt á 25 ◦C. Að lokum var pH fært í 7,0 með 10 N NaOH og síðan frostþurrkað þar til fínt duft fékkst.

2.2. UPLC–MS/MS greining fyrir JasHEx efnagreiningu

Tvífasa bútanól/vatnsútdráttur náðist. Bútanólhlutinn var þurrkaður og þiðnaður í metanóli (10 mg/ml) áður en UPLC–MS/MS greiningin var framkvæmd á Q-Exactive Classic massalitrófsmæli með UltiMate™ 3000 UPLC kerfi (Thermo Scientific, Waltham, MA, Bandaríkjunum ). Allar litskiljunarkeyrslur voru framkvæmdar eins og þegar lýst er af Ceccacci o.fl. [17].

2.3. Global Natural Products Social Molecular Networking Analyses

Til að auðkenna umbrotsefni var Global Natural Products Social Molecular Networking notuð [18]. Öll þessi MS og MSMS merki sem ekki var úthlutað af GNPS voru skynsamlega skoðuð og úthlutað í samræmi við heimildir. Raw skrám var breytt í mzXML snið með MS Converter General User Interface hugbúnaði, áður en GNPS litrófssafn leit. Það var framkvæmt með því að nota forvera jónamassaþol upp á 0.025 Da, brotajónamassaþol upp á 0,02 Da, lágmarkstoppar sem samsvara 2, og stigaþröskuldur 0,7. Niðurstöðurnar voru staðfestar handvirkt.

Forvinnsla gagna var framkvæmd af Mzmine (útgáfa 2.53, Softpedia, Búkarest, Rúmenía) [19] og verkefni sem byggir á sameindaneti (FBMN) [20] var framkvæmt eins og greint var frá af Ceccacci o.fl. [17]. Netskrárnar sem fengust voru fluttar inn í Cytoscape (útgáfa 3.9.1, US National Institute of General Medical Sciences (NIGMS), Bethesda, MD, Bandaríkjunum) [21].

2.4. Magngreining á Lignans og Triterpenes

Sömu UPLC stillingar sem tilgreindar voru fyrir eigindlegu tilraunirnar voru notaðar við megindlega greiningu á lignanum, en fyrir tríterpenana voru þær endurbættar til að aðskilja tvö pör af ísómerum, arjúnól/asíatísk sýru og oleanolic/ursolic sýru. Greiningin var framkvæmd á Q-Exactive Classic Mass Spectrometer eins og áður var skilgreint. Aðskilnaðurinn var framkvæmdur með Phenomenex Kinetex (Torrance, CA, Bandaríkjunum) EVO C18 300 Å (150 × 2,1 mm, kornastærð 5 µm). Hreyfanlegur fasi samanstóð af A (5 mM ammóníumasetat vatnslausn, pH 9.00 stillt með ammóníumhýdroxíði) og B (1{{40}}0 prósent asetónítríl) með halli skolun upp á 13–28 prósent B eftir 0–20 mínútur, 28–65 prósent B eftir 20–24 mínútur, 65–75 prósent B eftir 24–28 mínútur, 75–95 prósent eftir 28–28,5 mínútur, 95 prósent við 28,5. –32 mín, 95–13 prósent við 32–32,1 mín og 13 prósent við 32,1–44 mín. Rennslishraði var 0,450 ml/mín og inndælingarrúmmál var 5 µL. Fyrir bæði lignans og triterpenes voru gögn aflað með massaaðferðinni sem lýst er af Ceccacci o.fl. [17]. Við keyptum nortachelogenin (#LCA52174) frá Biosynth Carbosynth, matairesinol (#80497) og maslinic sýru (#83209) frá PhytoLab GmbH & Co.KG, secoisolariciresinol (#60372) og arjunolic acid (#Al9rich) (#SMB001) frá Sigtma-19 Louisd. , MI, Bandaríkjunum), asísk sýra (#0027), oleanolic sýra (#0041 S) og ursolic sýra (#0037 S) frá Extrasynthèse (Genay, Frakklandi). Kvörðunarferlarnir voru fengnir með því að sprauta stöðlum í styrkleikanum 0,05 til 25 µM fyrir lignans og 0,1 til 25/250 µM fyrir triterpenes. Greiningarmörk (LOD) og magngreiningarmörk (LOQ) fyrir staðla voru ákvörðuð á grundvelli merki-til-suðs (S/N) hlutfalls.

2.5. Húðfrumuræktun og útgræðsla

Ódauðlegar keratínfrumur úr mönnum (HaCaT), keyptar frá Addexbio Technologies (San Diego, Kaliforníu, Bandaríkjunum), voru varðveittar í Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM; Sigma Aldrich, St. Louis, MO, Bandaríkjunum) sem var bætt við 10% nautgripasermi frá fósturvísum. (FBS; Sigma Aldrich, St. Louis, MO, BANDARÍKIN) í 95 prósent lofti, 5 prósent CO2 og rakaðri andrúmslofti við 37 ◦C. Húðtrefjablöðrur úr mönnum (HDF) voru varðveittar í Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM; Sigma–Aldrich, St. Louis, MO, Bandaríkjunum) bætt við 10 prósent af sermi fósturs nautgripa (FBS; Sigma–Aldrich, St. Louis, MO, Bandaríkjunum) ) í 95 prósent lofti, 5 prósentum CO2 og rakaðri andrúmslofti við 37 ◦C. Húðútgræðslur, fengnar úr húð heilbrigðra kvengjafa (31 og 40 ára) á skurðstofu Villa Cinzia (Napólí, Ítalíu), voru ræktaðar í 24-transwell plötum í DMEM/FBS auk sýklalyfja við loft-vökva aðstæður við 37 ◦C í 5 prósent CO2 rakaðri lofti. Allir gjafar höfðu gefið skriflegt upplýst samþykki sitt fyrir notkun húðvefjanna, samkvæmt Helsinki-yfirlýsingunni.

2.6. Cytosolic ROS próf í H2O2-stressuðum HaCaT frumum

Fyrir þetta ferli var 1,8 × 104 HaCaT sáð í 96-brunnsplötur og ræktað í 20 klst. Frumurnar voru síðan meðhöndlaðar í 2 klst með mismunandi styrk JasHEx (0.0006 prósent, 0.002 prósent og 0.006 prósent p/v) eða með 500 µM askorbínsýru, notað sem jákvæða samanburðinn. Eftir það voru þau þvegin í PBS (fosfatbuffuð saltvatni) og ræktuð við 37 ◦C með 100 µL/brunn af lausn sem innihélt: 10 mM af Hepes, 1,3 mM CaCl2, 1 mM MgSO4, 5 mM af glúkósa og 5 mM. µM CM-H2DCFDA (5-(og-6)-klórmetýl-20,70 -díklórdíhýdróflúoresceín díasetat, Invitrogen). Eftir 45 mínútur var PBS þvottur framkvæmdur og grunnlínu flúrljómunarstyrkur frumna mældur við 535 nm (örvun 485 nm), með því að nota tækið EnVision (PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Síðan var oxunarálagið framkallað með því að bæta við 450 µM H2O2 og flúrljómun sýnanna var mæld eftir 30 mín.

2.7. Ensímtengd ónæmissogandi prófun (ELISA) fyrir AGE greiningu í glýoxal streitu manna húðtrefjafrumum (HDF) frumum

Fyrir þetta skref var 1,5 × 104 HDF sáð í 96-brunnsplötur og ræktað í 2 daga. Eftir þvott með PBS voru frumur festar í 1{{10}} mín. með 100 µL af 4 prósent formaldehýði í PBS. Í kjölfarið voru þeir meðhöndlaðir með JasHEx (0,0006 prósent og 0,002 prósent p/v) eða jákvæðri samanburði á 1 µM Aminoguanidine í viðurvist 0,5 prósent glýoxals við 50 ◦C í 1 viku. Eftir ræktun voru þau unnin fyrir ensímtengd ónæmissogandi prófun (ELISA) með því að nota sérstakt mótefni gegn AGE (Abcam ab23722).

2.8. ImmunoHisto flúrljómunarprófun á metýl-glýoxal streitu húðútgræðslu fyrir fíbrillín-1 greiningu

Húðútgræðslur voru fengnar frá tveimur sjúklingum, 31 og 40 ára. Úr hverri vefjasýni úr húð voru mynduð þrjú högg fyrir hverja meðferð sem átti sér stað við loft-vökvaskil. Á fyrsta degi voru höggin meðhöndluð með JasHEx (0.002 prósent og 0,006 prósent p/v) eða jákvæðu viðmiðuninni (1 mM Aminoguanidine) og eftir 24 klst., 500 µM metýl- glyoxal var bætt við. Meðferðirnar voru endurnærðar á tveggja daga fresti í alls sjö daga. Í lok tímabilsins voru kýlurnar unnar til vefjafræðilegrar greiningar, festar í 4 prósent PFA, ræktaðar í 15 prósent súkrósa, síðan í 30 prósent súkrósa og fryst geymdar í OCT efnasambandi (ákjósanlegur skurðarhiti) við -80 ◦C . Cryosection af 5 µm var fengin með cryostat CM1520 Leica (Leica Biosystems, Buffalo, IL, USA). Skyggnur með frostskurði voru vökvaðar í 30 mínútur í PBS og settar í „blokkandi“ lausn (6 prósent BSA, 5 prósent sermi, 20 mM MgCl2, 0,2 prósent Tween) í 1 klst. Í kjölfarið voru þau ræktuð með aðal and-fibrillin 1 mótefninu (MA5-12770, Thermo Scientific, Waltham, MA, Bandaríkjunum). í 16 klst við 4 ◦C. Glerurnar voru þvegnar með PBS í 30 mínútur og síðan ræktaðar með öðru and-kanínu Alexa-Fluor 546 mótefninu (A11035, Thermo Scientific, Waltham, MA, Bandaríkjunum) í 1 klst. Kjarnar voru litaðir með DAPI (40, 6-5 diamidino-2-fenýlindóli) 1 g/mL í PBS í 10 mín. Myndirnar voru teknar með flúrljómunarsmásjá og greindar með ImageJ hugbúnaðinum (útgáfa 1.53a, National Institute of Health, Bandaríkjunum).

2.9. AlphaLISA próf til að mæla innihald procollagen Type I C-peptíðs (PIP).

Í þessu skrefi var 8 × 103 HDF sáð í 96-brunnsplötu og meðhöndluð í 24 klst með JasHEx (0.0006 prósent , 0,002 prósent , og 0,006 prósent p/v) eða með TGF- (2,5 ng/ml). Eftir meðferð voru frumurnar unnar samkvæmt leiðbeiningum alfa LISA hPIP kollagen settsins (AL353HV, (PerkinElmer, Waltham, MA, USA)).

2.10. Nrf2 Lúsiferasa-undirstaða umritunarvirkjunarpróf

Hér voru 6 × 103 HaCaT frumur í 96-brunnsplötu sáð og ræktaðar í 16 klst. Eftir það voru þeir látnir gangast undir Nrf2 lúsiferasa-undirstaða umritunarvirkjunargreiningu með því að nota ARE fréttaritarasettið BPS Bioscience (San Diego, CA, Bandaríkin, #60514). ARE lúsiferasa boðberi sem er tilbúinn til sýkingar (sem inniheldur eldflugu lúsiferasa gen undir stjórn ARE móttækilegra þátta sem staðsettir eru fyrir framan lágmarks hvata) ásamt innri eftirliti (Renilla lúsiferasa ferju sem tjáir sig með myndrænum hætti) var tímabundið samsmitaður inn í HaCaT frumur með því að nota X-TREME gen HP DNA transfection hvarfefni (Roche, Basilea, Sviss, #6366244001). Eftir flutning í 24 klst. voru frumur meðhöndlaðar í 2 klst. með útdrættinum (0,0006 prósent, 0,002 prósent og 0,006 prósent p/v) eða jákvæða samanburðinum Resveratrol (50 µM). Eftir það voru þeir látnir fara í lúsiferasaprófun með Dual-Glo Luciferase prófunarkerfinu (Promega, Róm, Ítalía #E2920). Í stuttu máli voru frumur ræktaðar með eldflugulúsiferasa hvarfefni í 10 mínútur áður en ljómun var mæld í 96-brunnsplötulesara (Victor Nivo, Waltham, MA, Bandaríkjunum). Hlutfall ljóma frá eldflugu og Renilla var reiknað til að staðla og bera saman Nrf2 umritunarvirkni.

2.11. Greining á tjáningu SOD-1(NM_000454.5) og OH-1(NM_002133.3) gena í HaCaT frumum

Fyrir þetta ferli voru 1,5 × 105 HaCaT frumur í hverri brunn ræktaðar í 6-brunnsplötum í 16 klst og ræktaðar í 6 klst með útdrættinum (0.002 prósent og 0.006 prósent p/v) eða 50 µM Resveratrol sem jákvæður samanburður. Í lok ræktunar var heildar-RNA dregið út með því að nota "GenElute™ Total RNA Purification" settið (frá Sigma-Aldrich (Saint Louis, MI, Bandaríkjunum) og meðhöndlað með DNase I (Thermo Scientific, Waltham, MA, Bandaríkjunum) við 37. ◦C í 30 mínútur, til að fjarlægja erfðafræðilega DNA-mengun.500 ng af heildar-RNA var umritað aftur með því að nota ensímið Reverse Transcriptase (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Hálfmagndar RT-PCR voru gerðar með því að nota parið af alhliða umritun. grunnur 18S grunnur/keppinautur (Invitrogen- Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) sem innri staðlar PCR vörurnar voru aðskildar á 1,5 prósent agarósa hlaupi og skoðaðar með iBright tækinu (Invitrogen Thermo Scientific, Waltham, MA, Bandaríkjunum). Röð frumra sem notuð voru til mögnunar voru eftirfarandi: HsSOD1Fw: GAAAGTAATGGACCAGTGAAGG; HsSOD1Rv: ATTGGGCGATCCCAATTACACC; OH-1Fw GAACTTTCAGAAGGGTCAGG; OH-1Rv GCTCAATGTTGAGCA

2.12. Nituroxíðgreining í LPS-örvuðum RAW 264.7

NO styrkur var ákvarðaður í RAW 264.7 átfrumum úr músum, sáð í styrknum 1,5 × 105 frumur/brunn í 96-brunnsplötum í 24 klst. og formeðhöndluð með útdrættinum ({{1 0}}.0006 prósent, 0.002 prósent og 0.006 prósent p/v) eða með 10 µM TPCK (jákvæð stjórn) í 2 klst., fyrir ræktun með 2 µg/mL LPS í 18 klst. Magn NO, umbreytt í nítrít, var reiknað út með því að bæta við Griess hvarfefni (lausn af N-(1-naftýl)etýlendiamíni og súlfanílsýru, Invitrogen-Thermo Scientific, Waltham, MA, Bandaríkjunum) og eftir 30 mín. gleypni var mæld við 540 nm af multibrunn plötulesaranum (EnVision, PerkinElmer, Waltham, MA, USA)

3. Úrslit

3.1. Eigindleg og megindleg greining á Jasminum sambac frumurækt vatns-etanólútdrætti (JasHEx)

UPLC–MS/MS greining á JasHEx var framkvæmd og litrófsgögn með háupplausn voru greind með Global Natural Products Social Molecular Networking (GNPS), vefbundnu massagreiningarkerfi sem hjálpar til við að skýra náttúruafurðir (NPs) [18] . Sérstaklega var GNPS litrófssafn framkvæmt til að ná fram afmyndun á netinu. Efnategundum sem ekki voru auðkenndar af GNPS var úthlutað í samræmi við heimildir. Eins og sýnt er á myndum 1 og 2 og töflu 1, fundust meira en 50 efnasambönd sem tilheyra nokkrum flokkum af afleiddum umbrotsefnum, aðallega pólýfenólum og terpenum. Reyndar inniheldur JasHEx þykkni fenólsýruafleiður, lignans (secoisolariciresinol, nortrachelogenin og matairesinol) og triterpenoids (arjúnólsýra, aspartínsýra, maslínsýra, oleanolic sýra og ursolic sýra).

【Frekari upplýsingar:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】