Greining á algengum umbrotsefnum í lifur í náttúrulegu lífvirku efnasambandinu Echinacoside, hreinsað úr Cistanche

3.1. Magngreining á echinacoside A í S9 greiningu á rottum og mönnum lifur

EchinacosideA var skoðuð með því að nota S9 brot úr lifur úr rottum og mönnum og magngreind meðHPLC-QQQ/MS á mismunandi tímapunktum. Eftirstandandi vers tímasnið echinacosideA, í meðferð með S9 hluta lifur hjá rottum og mönnum, eru sýndar á mynd1. Með því að nota 'vel hrærtlíkan' og formúlureikningur [27], er spáð gildi sýnt í töflu1. Rottalifur S9 umbrotnaði ~75,4 prósent af echinacoside A innan 60 mín. Mannslifur S9 umbrotnar~49,8 prósent af echinacoside A innan 120 mín. Í viðurvist NADPH var echinacoside Aumbrotnar hægar, með at1/2 = 114.92 mín í mönnum. EH er brot af lyfinusíað af lifrinni í einni lotu, þar sem lyfið er fjarlægt óafturkræft (útdráttur).Við komumst að því að EH af rottum var hærri en hjá mönnum. Þessi niðurstaða er sanngjörn,af dæmat1/2 gildi, vegna þess að tilkynnt hefur verið um að rottulifrar umbrotnar hraðar enmannslifur [28]. Samanborið við aðrar skýrslur um efnasambönd með rottu lifur S9, GKB202 aftheAntrodia cinnamomeaMygla (t1/2 = 3.68 mín) umbrotnaði hraðar en echinacoside A [29]. 

Mynd 1.EkínakósíðEftirstandandi á móti tímasniði í rottum og mönnum lifur S9. Gögn eru sett fram ímeðalgildi þrefaldra mælinga.

Fyrri skýrslan sýndi að engin skaðleg áhrif voru 3 g/kglíkamsþyngd/dag echinacoside A-auðgað HE í 28-dagsfóðrun í Sprague–Dawley rottum.Núverandi rannsóknarskammtainntak fyrir umbrot lifrarfrumna gefur hæfilega fylgni,með fyrriin vivorannsókn á lyfjahvörfum echinacoside A efnasambanda (PK) [30,31]. Í einni nýlegriin vivoskýrslu, Tsai o.fl. hópur greindi echinacoside A í rottuplasma eftirgjöf HE sveppa til inntöku (50 mg/kg) eftir 60 mín.32]. Þetta getur tengstnúverandiin vitroniðurstöður, þar sem við sýndum, fræðilega, að það er enn ~24,6 prósentleifar af efnasambandinu eftir umbrot í rottulifrar S9. Auk þess um það bil helminguraf óumbrotnu echinacoside A fundust í lifur sem eftir var af mönnum S9, sem sýnirað heilar samsettar byggingar gætu komist inn í blóðrásina, sem stuðlar að þvískilvirkni í taugavernd. Hvort sem algeng umbrotsefni veita, thelíffræðileg virkni er enn í rannsókn og verður greint frá því í sérstakri rannsókn

Smelltu hér til að vita Cistanche Echinacoside virkni

3.2. In vitro auðkenning umbrotsefna í rottum og mönnum

Ultra-performance vökvaskiljun/fjórpól tíma-flug massagreiningu (UPLC-QTOF/MS) var notuð til að bera kennsl á umbrotsefnin í jákvæðum og neikvæðum stillingum. Samanburður á umbrotsefnum echinacoside A, í þessari rannsókn, við umbrotsefni S9 í lifur hjá rottum og mönnum er sýndur í töflu2. Tuttugu og fjögur umbrotsefni fundust eftir echinacoside A ræktun og var úthlutað sem M1-M24 (tafla S1). Fimm algeng umbrotsefni greindust eftir ræktun með rottum og mönnum lifur S9. Fjöldavillurnar voru allarMinna en eða jafnt og5 ppm. Þrjár efstu umbrotsefnin, miðað við hámarksflatarmál, voru Gluthation conjugation plús afmetýlering (M6), afmetýlering (M2) og afmetýlering plús vetnun (M3). Ofþornun áfengis (M1), afmetýlering (M2), afmetýlering auk vetnunar (M3), 2× Hýdroxýlering (M4), afmetýlering og tvö hýdroxýleringar (M5) umbrotsefni greindust bæði í rottum og mönnum lifur S9. Fyrirhuguð efnaskiptaferill og möguleg umbrotsefni echinacoside A eru sýnd á mynd2. 

Tafla 2.Algeng umbrotsefni echinacoside A í lifur greindust í lifur S9 hjá rottum og mönnum, meðUPLC-QTOF/MS.

Móðurefnasamband echinacoside A formúlunnar var C25H36O6. MS litrófið áEchinacosideA fannst við [M plús H]plús= 433.2573 og [M plús Na]plús= 455.2405 (Mynd3A). TheMS/MS litróf með árekstraorku 10 V er sýnt á mynd3B sem samsvararklofnun CO etertengisins ([C20H29O2] plús= 301.2162 og [C20H27O]plús= 283.2052) (Mynd3C) [15,32]. Umbrotsefni áfengisþurrkun (M1) formúlan var C25H34O5, með echinacoside A að missa H2O [33,34]. MS litróf M1 fannst við [M plús H]plús= 415.2472 og [M plús Na]plús= 437.2255. Við árekstraorku upp á 10V, helstu framleiðslujónirvorum/z 283.2036, 215.1701, 181.1249, 135.0817, 119.0856, 105.0709 og 69.0327 (Mynd4A). Tvær vörurjónir voru hliðstæðar við echinacoside A jónir (m/z 283.2036 ogm/z 119.0856), og framleiðsla ám/z 301.2162 hvarf. Þurrkaður M1 gæti veriðnotað til að gefa til kynna vatnstap í pentósabrotum [35]. Umbrotsefni afmetýleringar (M2)formúlan var C24H34O6, með echinacoside A sem tapar metýleni (-CH2) [36]. Við áreksturorka 40 V, MS litróf M2 fannst við [M plús H]plús= 419.2407. Aðalvaranjónir vorum/z 312.0488, 269.9469, 231.0432, 123.0552 og 179.0486 (Mynd4B). Framleiðslanklm/z 269.9469, 179.0486 samsvaraði klofningu metýlensins (-CH)3) og plúsHplús. Formúlan afmetýleringu auk vetnunar umbrotsefna (M3) var C24H36O6 meðM2 lækkun á alkeni (plús H2) [37–39]. MS litróf M3 fannst við [M plús H]plús= 421.2569 og [M plús Na]plús= 443.2355. Við árekstraorku 40 V er aðalvaranjónir vorum/z 353.2141, 277.2183, 147.1172 og 77.0054 (Mynd4C). Framleiðslan klm/z 353.2141, 277.2183 samsvaraði Vetnun. Hinn 2× Hýdroxýleringformúla umbrotsefna (M4) var C25H36O8 með echinacoside A Hýdroxýlering ísóprópýlshliðarkeðja og sýklópenten [40–42]. MS litróf M4 fannst við [M plús H]plús= 465.2461 og [M plús Na]plús= 487.2315. Við árekstraorku upp á 20V voru helstu framleiðslujónirnarm/z 297.1842, 255.1389, 177.1115, 133.0860 og 89.0597 (Mynd4D). Framleiðslan klm/z 297.1842 og 89.0598 samsvaruðu hýdroxýleringu. The Demethylation ogtvö hýdroxýleringarumbrotsefni (M5) formúla var C24H34O8 þar sem M11 tapar metýleni(-CH2). MS litróf M5 fannst við [M plús H]plús= 451.2413 og [M plús Na]plús= 473.2158. Við árekstraorku upp á 40 V voru helstu framleiðslujónirnarm/z 321.1516, 178.1225, 101.0705 og 59.0601 (Mynd4E). Framleiðslan klm/z 321.1516 samsvaraði M4klofnun metýlensins (-CH3) og plús Hplús.

Það hafa verið 70 mismunandi efri umbrotsefni einangruð úr öðrum hvorum HE sporófórumeða mycelium. Þessi umbrotsefni eru auðkennd semfjölsykrur, fjölketíð,fenól, terpenoids, oglífvirkar sameindir [43–45]. Við veltum því fyrir okkur að þessi algengu umbrotsefni,sem við greindum, gætu líka verið forverar eða milliafurðir sveppavefsinsefri umbrotsefni sem nefnd eru áður. Engu að síður hefur verið greint frá því að M1, M2,M3, M4 og M5 geta táknað lykil milliefni milli echinacoside A og secondaryumbrotsefni fyrir rannsóknir á rottum og mönnum. Vegna aukinnar notkunar HE mycelium sem ahagnýtur viðbót, með því að bera kennsl á þessi umbrotsefni mun einnig koma í ljós gagnleg lífmerki.Tökum kólesteról sem dæmi, forefni eða milliefni ýmissaefni, framleidd með lifrarensímferlinu, voru umbrotin í oxysterol, sem ernú skilið sem öflugt umbrotsefni í sterólumbrotum ogreglugerð um nýmyndun [46]. 

Mynd 3.(A) MS litróf echinacoside A með ofurafkastamikilli vökvaskiljun-tandemifjórpóla massagreiningu á flugtíma. (B) MS/MS litróf echinacoside A með anofurafkastamikil vökvaskiljun, samhliða fjórpóla massagreiningu á flugtíma.(C) Fyrirhuguð uppbygging framleiðslujóna, framleidd af echinacoside A, við árekstraorku upp á 10 V.(a) [C20H29O2]plús= 301.2162, (b) [C20H27O]plús= 283.2052.  : Foreldri jón.

Mynd 4.MS og MSMS litróf af (A) Ofþornun áfengis (M1), (B) Umbrotsefni afmetýleringar(M2), (C) Afmetýlering auk vetnunarumbrotsefna (M3), (D) 2 × Hýdroxýleringarumbrotsefni (M4),(E) Afmetýlering og tvær hýdroxýleringar (M5) umbrotsefni með því að nota mjög afkastamikinn vökvalitskiljun-tandem quadrupole time-of-flug massagreiningu. : Foreldri jón.

M2 og M3 greindust eftir 60 mínútur fyrir rottu lifur S9, en fyrir mennlifur S9, M2 og M3 greindust við 10, 30, 60 og 120 mín. Við gátum að M3 gæti verið framleiddurmeð tveimur aðskildum efnaskiptaleiðum; annar frá echinacoside A til M3, og hinn var fenginnfrá M1. Aftur á móti greindust M4 og M5 við 10, 30 og 60 mín rottalifur S9. Í mönnumlifur S9, M4 greindist eftir 10, 30, 60 og 120 mín. M5 greindist kl120 mín. Tíminnútlit getur útskýrt að M5 efnaskiptaferill gæti verið fenginn frá M4.

Þessi rannsókn veitir viðbótarupplýsingar fyrir klínískar rannsóknir á HE myceliumupplýsingar vantar, sem er efnaskiptaverkun lífvirka efnasambandsins. Ínýleg, slembiraðað, tvíblind samanburðarrannsókn með lyfleysu, þrjú 350 mg/g HE sveppasýki(innihalda 5 mg/g echinacoside A) hylkisinngrip, í 49 vikur, sýndi hærraVitsmunaleg hæfileikaskimunartæki, Lítil geðríkispróf, ogHljóðfæraleikurStarfsemi Daily Living skorarog náð betri skugganæmi, hjá sjúklingum meðaldur > 50 ára og greining álíklega Alzheimer sjúkdómnum, þegar borið er saman viðlyfleysuhópur [19]. Með því að skilja umbrotsefni echinacoside A prófílsins getum við túlkaðþaðechinacoside A auðgað HE mycelia bætti taugavitræna röskun, sem gæti veriðstuðlað að mestu frá óumbrotna efnasambandinu. Hvað varðar echinacoside A,umbrotsefni eruþolist vel og gæti verið mikilvægt til að ná tauga-næringarávinningi, sem munverði rannsakað í framtíðarrannsóknum. 

Þetta er fyrsta rannsóknin sem kemur á massagreiningu á efnaskiptastöðugleikaog auðkenna fimmtán algeng umbrotsefni echinacoside A sem finnast í lifur hjá rottum og mönnum S9brot. Niðurstöður þessarar rannsóknar munu hjálpa til við að skilja eiginleika, öryggi ogskilvirkni þessa einstaka lífvirka efnasambands. Niðurstöður okkar benda til þessechinacoside Aer klínísktávinningur getur stafað af efnasambandinu og umbrotsefnum þess. Í framtíðinni munum við greinaumbrotsefni úr blóði, líffærum og vefjum til að koma á fullkomnum efnaskiptagagnagrunni.Gert er ráð fyrir að slík vinna hjálpi hagnýtum rannsóknum á matvælum, fæðubótarefnum ognákvæmni lyf.

Viðbótarefni:Eftirfarandi er aðgengilegt á netinu á1, Tafla S1: Auðkenni echinacoside A umbrotsefna í rottum og mönnum lifur S9með UPLC-QTOF/MS.

Framlög höfunda:Gagnatúlkun, Y.-HK, T.-WL, J.-YL, Y.-WC og T.-JL; aðferðafræði;Y.-HK, T.-WL og T.-JL; rannsókn á vegum T.-JL og C.-CC; hráefni frá:Y.-HK, T.-WL, J.-YL, Y.-WC, T.-JL og C.-CC; sjón: Y.-HK; frumdrög að undirbúningivar gert af Y.-HK, T.-WL, T.-JL og C.-CC; skrif — yfirferð og ritstjórn, Y.-HK, T.-JL ogC.-CC Allir höfundar hafa lesið og samþykkt útgáfu handritsins.

Fjármögnun:Þessi rannsókn fékk enga utanaðkomandi styrki.

Yfirlýsing um framboð gagna:Hráefnin og efnasamböndin sem kynnt eru í þessari rannsókn eru tiltækfrá samsvarandi höfundi sé þess óskað.

Hagsmunaárekstrar:Höfundar lýsa ekki yfir hagsmunaárekstrum.

Dæmi um framboð:Sýnishorn af efnasamböndunum eru fáanleg hjá höfundum.

Heimildir

1. Mitra, V.; Metcalf, J. Virk líffærafræði og blóðflæði lifrar.Anaesth. Gjörgæslu Med.2009, 10, 332–333. [CrossRef] 

2. Alamri, ZZ Hlutverk lifrarinnar í efnaskiptum: Uppfærð endurskoðun með lífeðlisfræðilegri áherslu.Alþj. J. Basic Clin. Pharmacol.2018, 7, 2271. [CrossRef] 

3. Russell-Jones, G. Hugsanleg notkun viðtakamiðlaðrar innfrumna til inntöku lyfja.Adv. Drug Deliv. sr.1996, 20, 83–97. [CrossRef] 

4. Shugarts, S.; Benet, LZ Hlutverk flutningsefna í lyfjahvörfum lyfja sem gefin eru til inntöku.Pharm. Res.2009, 26, 2039–2054. [CrossRef]

5. Richardson, SJ; apríl, B.; Kulkarni, AA; Moghaddam, MF Skilvirkni í lyfjauppgötvun: Lifrar S9 brotagreining sem skjárfyrir efnaskiptastöðugleika.Drug Metab. Lett.2016, 10, 83–90. [CrossRef] 

6. Corsini, A.; Bortolini, M. Lifrarskaði af völdum lyfja: Hlutverk lyfjaefnaskipta og flutnings.J. Clin. Pharmacol.2013, 53, 463–474. [CrossRef] [PubMed] 

7. Lam, WW; Chen, J.; Xu, RF; Silva, J.; Lim, H.-K. Umbrotsgreining í lyfjauppgötvun. ÍHagræðing í lyfjauppgötvun.Aðferðir í lyfjafræði og eiturefnafræði; Caldwell, G., Yan, Z., Ritstj.; Humana Press: Totowa, NJ, Bandaríkjunum, 2014; bls. 445–459.

8. Prasad, B.; Garg, A.; Takwani, H.; Singh, S. Greining umbrotsefna með vökvaskiljun-massagreiningu.TrAC Trendsendaþarm. Chem.2011, 30, 360–387. [CrossRef] 

9. Zhang, D.; Luo, G.; Ding, X.; Lu, C. Forklínísk tilraunalíkön af umbrotum og ráðstöfun lyfja við uppgötvun lyfja ogþróun.Acta Pharm. Synd. B2012, 2, 549–561. [CrossRef] 

10. Wang, M.; Gao, Y.; Xu, D.; Konishi, T.; Gao, Q.Hericium erinaceus(Yamabushitake): Einstakt úrræði til að þróa hagnýtmatvæli og lyf.Mataraðgerð.2014, 5, 3055–3064. [CrossRef]

11. Hu, T.; Hui, G.; Li, H.; Guo, Y. Selen lífstyrking íHericium erinaceus(Lion's Mane sveppir) og hansin vitrolífaðgangurhæfni.Food Chem.2020, 331, 127287. [CrossRef] 12. Kim, KH; Nei, HJ; Choi, SU; Lee, KR Isohericenone, ný frumudrepandi ísóindólín alkalóíð frá Hericium erinaceum.J. Sýklalyf.2012, 65, 575–577. [CrossRef] 

13. Khan, MA; Tania, M.; Liu, R.; Rahman, MMHericium erinaceus: Matsveppur með lækningagildi.J. Viðbótarupplýsingarsamþ. Med.2013, 10, 253–258. [CrossRef]

14. Hann, X.; Wang, X.; Fang, J.; Chang, Y.; Ning, N.; Guo, H.; Huang, L.; Huang, X.; Zhao, Z. Mannvirki, líffræðileg starfsemi, ogiðnaðar notkun fjölsykranna fráHericium erinaceus(Lion's Mane) sveppir: umsögn.Alþj. J. Biol. Makrómol.2017, 97, 228–237. [CrossRef] 

15. Kawagishi, H.; Shimada, A.; Shirai, R.; Okamoto, K.; Ojima, F.; Sakamoto, H.; Ishiguro, Y.; Furukawa, S. echinacosides A, B og Csterkir örvandi örvar taugavaxtarþáttar (NGF)-myndunar frá vessahimnu Hericium erinaceum.Tetrahedron Lett.1994, 35, 1569–1572. [CrossRef] 

16. Lee, KF; Chen, JH; Teng, CC; Shen, CH; Hsieh, MC; Lu, CC; Lee, KC; Lee, LY; Chen, WP; Chen, CC; o.fl. VerndandiÁhrif afCistanche tubulosaog einangrað echinacoside A þess gegn blóðþurrðaráverka af völdum taugafrumudauða í gegnumHömlun á iNOS/p38 MAPK og Nitrotyrosine.Alþj. J. Mol. Sci.2014, 15, 15073–15089. [CrossRef] 

17. Tzeng, TT; Chen, CC; Chen, CC; Tsay, HJ; Lee, LY; Chen, WP; Shen, CC; Shiao, YJ The Cyanthin Diterpenoid ogSesterterpene efnisþættirCistanche tubulosaBæta Alzheimerssjúkdómstengda meinafræði í APP/PS1Erfðabreyttar mýs.Alþj. J. Mol. Sci.2018, 19, 598. [CrossRef]

Biðja um meira:

Netfang:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plús 86 15292862950