Mesenchymal stofnfrumur úr mönnum draga úr AGVHD eftir Allo-HSCT með því að stjórna milliverkunum milli örveru í þörmum og ónæmi í þörmum

Ágrip

Bráður ígræðslu-versus-host sjúkdómur (aGVHD) eftir ósamgena blóðmyndandi stofnfrumuígræðslu er ein af erfiðustu áskorunum. Dysbiosis í þörmum getur haldið áfram með aGVHD og mesenchymal stofnfrumur (MSCs) hafa efnilegan lækningalega möguleika fyrir aGVHD. Hins vegar er ekki vitað hvort hAMSCs hafi áhrif á örveru í þörmum meðan á aGVHD mildun stendur. Í samræmi við það leituðumst við að skilgreina áhrif og undirliggjandi aðferða MSCs (hAMSCs) sem eru unnin úr legvatnshimnu manna sem stjórna örveru í þörmum og ónæmi í þörmum í aGVHD. Með því að koma á manngerðum aGVHD múslíkönum og hAMSCs meðferð, komumst við að því að hAMSCs bættu verulega aGVHD einkenni, sneru við ónæmisójafnvægi T frumu undirhópa og frumuefna og endurheimtu þarmahindrunina. Þar að auki var fjölbreytileiki og samsetning örveru í þörmum bætt við meðferð með hAMSCs. Fylgnigreining Spearmans sýndi að það var fylgni á milli örveru í þörmum og tight junction próteina, ónæmisfrumna líka og frumuefna. Rannsóknir okkar benda til þess að hAMSCs létti aGVHD með því að stuðla að eðlilegri örveru í þörmum og stjórna samspili milli örveru í þörmum og þörmum, ónæmi.

cistanche ávinningur fyrir karla styrkir ónæmiskerfið

Leitarorð

Bráður ígræðslu-versus-hýsilsjúkdómur · Mesenchymal stofnfrumur í legvatni · Þarma örvera · Þarmaþröskuldur · Þarmaónæmi

Kynning

Helsti kosturinn við ósamgena blóðmyndandi stofnfrumuígræðslu (allo-HSCT) er öflugt æxlissvörun vegna graft-versus-leukemia (GVL) áhrifa sem koma af stað með viðurkenningu á peptíðum sem stafa af mismun á erfðafræðilegum fjölbreytni milli sjúklinga og gjafa. Hins vegar snýst bráður ígræðslu-versus-host sjúkdómur (aGVHD) um þróun vefjaskemmda viðtakanda vegna árásar alló-viðbragða T-frumna gjafa og táknar lífshættulegan alvarlegan fylgikvilla í alloHSCT [1, 2]. Greint hefur verið frá því að örverusjúkdómurinn í þörmum valdi bólgusvörun og tengist bólgutengdum sjúkdómum [3, 4]. Fjölmargar rannsóknir hafa gefið til kynna að truflanir í örveru í þörmum séu mikilvægur þáttur sem kallar fram aGVHD eftir allo-HSCT og verða nýtt markmið fyrir meðferð [5, 6]. Sérstaklega einkennist örverusjúkdómur í þörmum í aGVHD venjulega af tapi á fjölbreytileika baktería í þörmum og útvexti tækifærissýkla [6]. Í GVHD í meltingarvegi, ræsir slímhúðarhindrun í hættu virkjun frumna sem sýna mótefnavaka í hýsil og T frumur gjafa sem nær hámarki í aðgreiningu T-frumna eftir sjúkdómsvaldandi gerða{-17 hugmyndafræði á kostnað þolmyndandi stjórnunar T- frumumynstur [7]. Fyrst og fremst á grundvelli 16S ríbósómal RNA (16S rRNA) raðgreiningar benti til þess að margar tegundir af örverum í þörmum hafi verið tengdar GVHD, og ​​til dæmis eru bútýrat-framleiðandi clostridia tengd við viðhald þekjuþekjuhindrana og deyfingu bráðrar GVHD [8 ]. Mesenchymal stofnfrumur (MSCs) hafa vakið mikla athygli á síðasta áratug vegna sjálfsendurnýjunar og fjölkynja aðgreiningarmöguleika, sem og ónæmisbætandi eiginleika [9]. Talið er að MSCs geti valdið skemmdum vefjum úr jafnvægi bólgu- og endurnýjunar örumhverfis við kröftuga bólgu og hefur verið mikið notað til að meðhöndla ónæmissjúkdóma, þar sem farsælasta klíníska notkunin er þátt í GVHD meðferð [10]. Mannleg legvatnsstofnfrumur (hAMSCs) eru burðarmálsstofnfrumur sem hafa fósturstofnfrumulíka aðgreiningargetu og fullorðna stofnfrumulíka ónæmisstýrandi eiginleika. Með því að deila svipgerðum sem líkjast dæmigerðum MSCs, hafa hAMSCs orðið efnileg uppspretta stofnfrumna vegna auðveldrar, óífarandi og öryggis við vefjaöflun, mikillar frumuuppskeru og mjög lítillar siðferðis- og siðferðisdeilur samanborið við stofnfrumur frá öðrum uppruna. AMSCs úr mönnum hafa þá kosti lágt ónæmisvaldandi áhrif og engin æxlismyndun, sem gerir þau að kjörnum frumuuppsprettu fyrir frumumeðferð [11, 12]. In vitro tilraunir hafa staðfest að hAMSCs sýndu meiri fjölgunargetu og meiri langtímavaxtargetu en MSCs af beinmerg [13, 14]. Fjölmargar rannsóknir hafa sýnt að hAMSCs hafa möguleika á að bæta úr mörgum bólgusjúkdómum, þar á meðal bólgusjúkdómum, slitgigt og sjálfsofnæmissjúkdómum [11]. Nýleg rannsókn okkar hefur sýnt að hAMSCs bættu aGVHD með því að stjórna jafnvægi T effector og Treg frumna [15]. Hins vegar eru áhrif og verkun hAMSCs á örverusjúkdóminn í þörmum í GVHD óþekkt. Hér stefnum við að því að kanna hugsanleg áhrif hAMSCs á aGVHD sem og örvistkerfi þarma. Það væri fyrsta rannsóknin sem leiddi í ljós örveru í þörmum og fylgni hennar við ónæmi í þörmum eftir hAMSCs meðferð á aGVHD.

Efni og aðferðir

Einangrun, menning og auðkenning hAMSCs

HAMSCs voru dregin út eins og áður hefur verið lýst [15]. Þriðja leið (P3) frumur voru safnað úr svipgerðagreiningu með litun með mótefnum gegn CD34 (581, BD Pharmingen, Bandaríkjunum), CD45 (HI30, BD Pharmingen, Bandaríkjunum), HLA-DR (G46-6, BD Pharmingen , Bandaríkjunum), CD11b (ICRF44, BD Pharmingen, Bandaríkjunum), CD90 (5E10, BD Pharmingen, Bandaríkjunum), CD73 (AD2, BD Pharmingen, Bandaríkjunum) og CD105 (SN6, lífvísindi, Bandaríkin), og síðan greind með frumuflæðismæli ( BD FACS Canto II). Frumurnar voru athugaðar með tilliti til fjölkynja aðgreiningar þeirra með því að nota tiltekið örvunarmiðil (BGscience, Kína), og litaðar með Oil Red-O og Alizarin Red fyrir fitumyndun og beinmyndandi aðgreining, í sömu röð. hAMSCs í köflum 3 til 6 voru notuð fyrir tilraunirnar.

cistanche tubulosa-bæta ónæmiskerfið

Mannleg PBMC safn

Plasmasýni voru tekin úr heilbrigðum sjálfboðaliðum með skriflegu upplýstu samþykki. Einkjarna frumur úr útlægum blóði manna (PBMC) voru einangraðar úr útlægu blóði með Ficoll-Hypaque (Tianjin Haoyang, Kína) þéttleikaskilvindu, þvegnar með PBS, sviflausnar í rauðum blóðlýsubuffi (Solarbio, Kína) við 4 gráður í 15 mínútur. Þvoið aftur og setjið síðan í PBS til inndælingar í rófuæð í NPG mýs.

Mýs

8–10 vikna gamlar og 25–30 g karl- og kvenkyns NPG mýs voru keyptar frá Beijing Vitalstar Biotechnology Co., Ltd. og aldar við SPF aðstæður á 12 klst ljós-myrkri lotu með stöðugum hita og raka. Allar dýraaðferðir voru samþykktar af Southern Medical University Institutional Animal Care and Use Committee (nr. L2019132) í samræmi við National Health and Medical Research Council of China Leiðbeiningar um dýratilraunir.

Bráð GVHD dýralíkan og meðferð

aGVHD músarlíkanið var komið á fót eins og áður hefur verið lýst [15]. Til meðferðar voru 5×105 hAMSCs á mús (hér í hAMSCs hópur) og PBS (hér aGVHD hópur) sprautað um halaæð í hverja mús á þriðja degi eftir ígræðslu. Í öllum músalíkönum voru mýs athugaðar á tveggja daga fresti með tilliti til veikinda og þyngdarbreytinga. Hver mús var metin fyrir meinafræðilega eiginleika þar á meðal þyngdartap, krókinn stellingu, úfið feld, húðskemmdir, skerta hreyfigetu og niðurgang og síðan flokkuð í samræmi við aGVHD klíníska stigakerfið aðlagað frá því sem Cooke lýsti upphaflega [16]. Í sumum tilfellum þjáðust mýs í aGVHD hópnum af alvarlegu aGVHD og músunum í hAMSCs hópnum á þriðja degi eftir meðferð var fórnað til að uppskera útlæga blóðið og marklíffærin þar á meðal lifur, milta, lungu og þörmum. Saur þessara músa var safnað fyrir fórn.

GFP-merkt hAMSC og in vivo rakning

GFP-merkt hAMSC voru stofnuð og auðkennd eins og áður hefur verið lýst [15]. Í stuttu máli, við umbreyttum græna flúrljómunarprótein (GFP) genið í hAMSCs með lentivirus sem ferju. 5× 105 GFP-merkt hAMSCs, dreift í 500 μL PBS, var sprautað í aGVHD mýs í gegnum halaæð. Eftir 24 klst og 72 klst voru mýsnar aflífaðar til að uppskera þörmum og mynduðu síðan frosna hluta. DAPI mótlitun var notuð til að greina móttakandafrumurnar.

Vefjameinafræðilegt mat

aGVHD marklíffærunum var safnað við krufningu og síðan unnin í paraffín-innfelldar blokkir til að mynda 5-μm þykka hluta fyrir hematoxylin og eosin litun (H&E). Vefjafræðileg stig voru metin út frá eyðingu vefjabyggingar og íferð eitilfrumna [17]. Fyrir ónæmisvefjaefnafræði voru hlutar afparafnaðir, endurvatnaðir og meðhöndlaðir með 3% H2O2 í metanóli í 20 mínútur til að óvirkja innræna peroxidasavirkni. Síðan voru hlutar látnir endurheimta mótefnavaka og meðhöndlaðir með sermi albúmíni í 1 klst. Í kjölfarið voru hlutar ræktaðir með CD45 mótefnum gegn mönnum (EP322Y, Abcam, Englandi) eða ZO-1 mótefnum ((EPR19945-296, Abcam, Englandi) í 1 klst. við 37 gráður. mótefni voru greind með HRP-tengdu aukamótefni (Genentech, USA) og sýnd með DAB. Jákvæða svæðið var greint með mynd J.

cistanche plöntuaukning ónæmiskerfi

16S rRNA raðgreining saurörveru

Saur erfðafræðilegt DNA var dregið úr 0,1 g frosnum saursýnum með því að nota EZNA® hægða DNA Kit (Omega BioTek, Norcross, GA, Bandaríkjunum) samkvæmt samskiptareglum framleiðanda. Með því að nota erfðafræðilegt DNA sem sniðmát voru sérstakir frumrar (338F: 5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′ og 806R: 5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′) með strikamerkjum og PremixTaq (TaKaRa, Kína) notaðir til að stækka V3-V4 ofbreytilegu svæðin í bakteríu 16S rRNA geninu. Eftir mögnun og hreinsun var allt erfðamengi sýnisins raðgreint á Illumina Hiseq eða Miseq háhraða raðgreiningarvettvangi af Magigene Technology Co., Ltd. (Guangzhou, Kína) til að fá hrá gögn á FASTQ sniði. Raðgagnagreiningar voru aðallega gerðar með því að nota Magichand vettvang.

Flæðisfrumugreining

aGVHD marklíffærin og útlægt blóð úr músum voru fengin og útbúin í einfrumu sviflausn. Frumur voru litaðar með einstofna mótefnum gegn CD3 (UCHT1, Biolegend, Bandaríkjunum), CD4 (RPA-T4, Invitrogen, Bandaríkjunum), CD8 (RPA-T8, Biolegend, Bandaríkjunum), CD25 (BC96, Biolegend, Bandaríkjunum) eða samsætusamsvörun stjórna IgG (eBioscience, USA) í 30 mínútur við stofuhita í myrkri. Síðan voru frumurnar unnar með Lysing Buffer (BD Pharm Lyse™) við 4 gráður í myrkri í 15 mín. Intracellular Foxp3 (236A/E7, Invitrogen, USA) litun var framkvæmd samkvæmt ráðleggingum framleiðanda (Fixation/Permeabilization Solution Kit; eBioscience). Síðan voru marglitar flæðifrumugreiningar gerðar á flæðifrumumæli.

Cytokines Magngreining

Magn cýtókína í sermi og vefjafljótandi vökva músa var ákvarðað með því að nota Cytometric Bead Array (CBA) Human Th1/Th2/Th17 cýtókínsett (BD Pharmingen, USA) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Í stuttu máli voru 50 μL af hverju sýni af floti ræktuð með 50 μL af blönduðu Th1/Th2/Th17 frumu-fangaperlum úr mönnum og 50 μL af Th1/Th2/Th17 PE greiningarhvarfefni úr mönnum við stofuhita í myrkri, síðan dreift. fyrir frumuflæðisgreiningu 3 klst síðar.

Magnbundin rauntíma PCR

Heildar-RNA var dregið úr ristilvef músa eftir einangrun með því að nota Trizol hvarfefni (TaKaRa, Kína). Heildar-RNA var notað sem sniðmát til að snúa við umritun cDNA. -aktín var notað sem innri viðmiðun. MRNA tjáningin var mæld með qPCR með því að nota eftirfarandi frumur: ZO-1-F, 5'-ACCACCAACCCGAGAAGAC-3' og ZO- 1-R, 5'-CAGGAGTCATGGACGCACA-3 '; Occludin-F, 5'-TTGAAAGTCCACCTCCTTACAGA-3' og OccludinR, 5'-CCGGATAAAAAAGAGTACGCTGG-3'; -aktín-F, 5'-GGCTGTATTCCCCCTCCATCG-3' og -aktín-R, 5'-CCAGTTGGTAACAATGCCATGT-3'. 2-ct aðferðin var notuð til að mæla RNA tjáningarstig.

Ensímbundið ónæmissogspróf (ELISA)

Magn D-LA og DAO í plasma var mæld með ELISA settum (Jingmei, Kína) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Í stuttu máli voru söfnuð blóðvökvi sett í 96-vel sértækar mótefnahúðaðar plötur, í sömu röð. Frásog var skráð við 450 nm með því að nota örplötulesara (Multiskan MK3, Thermo Fisher Scientific).

Tölfræðigreining

Gögn voru sett fram sem meðaltal ± SD. Óháð sýnishorn t-próf ​​var framkvæmt og sýnd með því að nota GraphPad Prism8.0. 16S rRNA raðgreiningargagnagreiningar voru gerðar með því að nota Magichand vettvang (http://cloud.magigenecom/). Fylgnigreining milli örveru í þörmum og ónæmis var gerð með R pakkningum (v3.6.3) til að sýna fylgnifylki. P gildi<0.05 were considered statistically significant. * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001, **** p<0.0001, n.s. not signifcant.

Niðurstöður

Auðkenning hAMSCs

hAMSCs sýndu marghyrninga eða vefjagigtarlíka formgerð í ræktun (Mynd 1A) og voru mjög jákvæð fyrir yfirborðstjáningu MSC sértækra merkja CD90, CD105 og CD73, en neikvæð fyrir CD34, CD45, HLA-DR og CD11b (Mynd 1C). Eins og fyrir aðgreining á fjölættum, sýndu niðurstöður okkar að hAMSCs sýndu aðgreining á fitufrumum og beinfrumum (mynd 1B).

hAMSCs létta verulega aGVHD einkenni í músum

Við metum fyrst meðferðaráhrif hAMSCs á aGVHD. Í samanburði við aGVHD hópinn, bættu hAMSCs verulega á aGVHD, eins og sést af verulega minni þyngdartapi (mynd 2B) og lækkun á aGVHD klínískri einkunn (mynd 2C). Ennfremur hafði hAMSCs hópurinn marktækt hærri lifunartíðni samanborið við aGVHD mýs (mynd 2D). Meinafræðilega vefjagreiningin sýndi að aGVHD olli alvarlegum vefjaskemmdum og íferð hvítfrumna. hAMSCs, eins og sýnt er fram á með H&E, dró úr vefjaröskun og íferð utanaðkomandi T-frumna í aGVHD marklíffæri (mynd 2E). Í samræmi við það staðfestu niðurstöður IHC einnig að hAMSCs bættu óeðlilegar meinafræðilegar birtingarmyndir (mynd 2F). Þessar niðurstöður bentu til þess að hAMSCs hefðu tilhneigingu til að bæta aGVHD einkenni í aGVHD músum.

hAMSCs höfðu áhrif á hýsilónæmi í aGVHD músum

Til að skilja undirliggjandi ónæmisbælandi aðferðir sem hAMSCs draga úr aGVHD, mældum við virkjun og stækkun T-frumna í útlægum blóði og marklíffærum. Flæðifrumumæling leiddi í ljós að hAMSCs hamluðu ótrúlega fjölda CD3+CD4+T og CD3+CD8+T frumna í blóði og marklíffærum (Mynd 3A, B). Þar að auki var hlutfall CD4+CD25+Foxp3+Tregs í blóði og marklíffærum músa í hAMSCs hópnum marktækt hærra en í aGVHD hópnum (mynd 3C) . Við rannsökuðum næst áhrif hAMSCs á frumufrumusniðið (mynd 4). gjöf hAMSCs leiddi til augljósrar lækkunar á IL-17A, IFN- , TNF, IL-6 og IL-2 gildum í marklíffærum og blóði samanborið við þau í aGVHD hópnum, fyrir utan TNF-stigið í milta. Í millitíðinni, auk IL-10 gildi í lifur, sýndu hAMSCs meðferðarmýs verulega aukið magn IL-10 og IL-4 í marklíffærum og blóði. Samanlagt gegndu hAMSCs verndandi hlutverki í aGVHD með því að snúa við ónæmisójafnvægi T frumu undirhópa og frumustorms.

Kostir cistanche tubulosa-styrkja ónæmiskerfið

Smelltu hér til að skoða Cistanche Enhance Immunity vörur

【Biðja um meira】 Netfang:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

hAMSCs bættar þarmahindranir í aGVHD músum

Til að kanna hvort hAMSCs gætu lagað þarmahindrunina í aGVHD, horfðum við fyrst á hvort hAMSCs gætu flutt í þörmum. Eins og sýnt er á mynd. 5A, greindust GFP-merkt hAMSCs í þörmum eftir inndælingu í hAMSCs og gætu ígrædd og síast inn í þörmum. Síðan hönnuðum við vefjameinafræðilegt mat á smáþörmum. Í aGVHD hópnum voru þörmarnir veðraðir og drepnir, þarmavilli voru augljóslega eytt, villi brotnuðu og stórfelldar hvítfrumur fóru inn í þarmaslímhúð, undirslímhúð og lamina propria. Þarmavilli voru reglulega raðað, og það var engin þarmavillus brot eða losun villous þekju eftir hAMSCs meðferð (mynd 5B). Íferð manna eitilfrumna kom einnig fram með ónæmisvefjaefnafræði í þörmum í aGVHD hópnum, en hAMSCs meðferð gæti dregið úr íferð þeirra (mynd 5C). Til að meta verndandi áhrif hAMSCs á heilleika slímhúð í þörmum, gerðum við ónæmisvefjafræði til að greina áhrifin á ZO-1. Í hAMSCs meðferðarhópnum var tjáningarstig þéttmótapróteins ZO-1 marktækt aukið samanborið við aGVHD hópinn (mynd 5D). Við skoðuðum einnig mRNA-tjáningarmagn þéttmótapróteina í þörmum (TJs) og plasmaþéttni D-mjólkursýru (D-LA) og díamínoxíðasa (DAO) til að ákvarða virkni þarmahindrana og gegndræpi í þörmum. Þegar hMASC er gefið í bláæð gæti það aukið mRNA tjáningarmagn ZO-1 og occludin, lykilprótein TJs (mynd 5E, F), um leið og dregið úr magni D-LA og DAO (mynd 5G, H). Þess vegna, þegar aGVHD átti sér stað, skemmdist þarmaþröskuldurinn með lækkun próteina í þörmum og gegndræpi í þörmum jókst. Á sama tíma gætu hAMCSs verulega snúið við truflun á þörmum.

Mynd 1 Svipgerðar- og starfræn einkenni hAMSCs. (A) Fulltrúar smámyndir af hAMSC frá leið 0 til 3 (engin litun, 100×). (B) Multilineage aðgreiningargeta hAM SCs. Adipogenic aðgreining hAMSCs (vinstri) voru lituð með Oil Red-O og beinþynningaraðgreining hAMSCs (hægri) voru lituð með Alizarin Red (litun, 100×). (C) Flæðifrumugreining sem gefur til kynna hAMSCs jákvæð fyrir CD90, CD105 og CD73 en neikvæð fyrir CD34, CD45, CD11b og HLA-DR

Mynd 2 hAMSCs léttu aGVHD í NPG músum. (A) Skýringarmynd sem sýnir stjórnunaráætlun hAMSCs í aGVHD músalíkönum. (B) Breytingar á líkamsþyngd í mismunandi hópum (n=10). (C) aGVHD klínískt stig (byggt á þyngdartapi, króknum stellingum, roðnum skinni, húðskemmdum, skertri hreyfigetu og niðurgangi) í mismunandi hópum (n=10). (D) Lifun meðal mismunandi hópa (n=10). (E) Fulltrúar smásæjar myndir af H&E litun (400×) og vefjafræðiskor (byggt á eyðingu vefjabyggingar og eitilfrumnaþenslu) (n=4). (F) Fulltrúar smásjármyndir af ónæmisvefjafræði (400×) og hlutfall CD45 jákvætt svæði (n=4). Gildi voru sett fram sem meðaltal±SD

Mynd 3 hAMSC hindraði T-frumuþenslu gjafa en jók Tregs myndun eða stækkun in vivo. (A) Flæðifrumumæling greining á CD3+CD4+T frumum(n=6), (B) Flæðifrumumæling á CD3+CD8+ T frumur(n=6), (C) Flæðifrumumæling á CD4+CD25+Foxp3+Tregs (n=6). Gildi voru sett fram sem meðaltal±SD

Mynd 4 hAMSCs lækkuðu bólgueyðandi frumur IL-17A, IFN-, TNF, IL-6, IL-2 og uppstýrðu bólgueyðandi frumur IL-10 og IL -4 í lífi (n=5). Gildi voru sett fram sem meðaltal±SD

Breytingar á örverum í þörmum eftir hAMSCs meðferð í aGVHD músum

16S rRNA raðgreiningin var framkvæmd í saurgerla DNA sem var einangrað úr mismunandi hópum músa. Fjölbreytnivísitölurnar, þar á meðal OUT, Chao1 og Shannon vísitölurnar, sýndu svipaða tilhneigingu og hAMSCs meðferðarmýs innihéldu örveru með marktækt meiri fjölbreytni miðað við aGVHD hópinn (mynd 6A). Aðalhnitagreining (PCoA) byggð á Un vegin-unifrac fjarlægð, Manhattan fjarlægð og Bray-Curtis mæligildi, skilaði dreifðum gagnapunktum á lóðum hópanna tveggja, þrátt fyrir að munurinn væri ekki marktækur (mynd 6B). Í kjölfarið metum við landslag örveru í þörmum til að kanna frekar hugsanlegan samsetningu mun á hópunum tveimur. Alls voru reiknuð 773 OTUs og hAMSCs hópurinn hafði hærri OTUs samanborið við aGVHD hópinn (mynd 6C). Hvað varðar bakteríusamsetningu á fylgjustigi voru Firmicutes og Bacteroidetes tvær ríkjandi fylkingar (mynd 6D). Við skipulögðum einnig samanburðarhitakort fyrir greiningu á örveru í þörmum milli þessara tveggja hópa (mynd 6E). Ættkvíslin Odoribacter og Ruminococcus_1 sýndi tiltölulega mikið magn í hAMSCs hópnum, sem eru mikilvægar örverur til að viðhalda jafnvægi í þörmum (mynd 6F, G). Til að staðfesta hvaða bakteríu var breytt með hAMSCs meðferð og aftur á móti haft áhrif á framvindu sjúkdómsins gegn aGVHD, gerðum við hávíddarflokkasamanburð með því að nota línulega aðgreiningargreiningu (LDA) á áhrifastærð (LEfSe) sem greindi verulegan mun á yfirburði bakteríusamfélaga milli hóparnir tveir. Eins og sýnt er á (Mynd. 6H, I), voru Streptococccaceae (fjölskyldan og ættkvísl Streptococcus), Paludibacteraceae, F0058 og Delftia lykilgerðir baktería sem stuðla að röskun á örverum í þörmum í aGVHD hópnum. Engu að síður sýndu gagnlegu bakteríurnar Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter og Clostridia (flokkurinn og röðin Clostridiales) hlutfallslega auðgun í hAMSCs hópnum, sem gæti tengst hAMSCs-miðluðum léttingu á aGVHD. Samanlagt var fjölbreytileiki og samsetning örveru í þörmum bætt eftir gjöf hAMSCs og færðist í heildarþróun sem var gagnleg fyrir líkamann.

cistanche tubulosa-bæta ónæmiskerfið

hAMSCs stjórnuðu milliverkunum milli örveru í þörmum og ónæmi í þörmum

Til að skilja hugsanlegt samband milli örveru í þörmum og slímhúð í þörmum voru fylgni milli TJs og þarma örveru á ættkvíslarstigi greind með fylgnigreiningu Spearman. Eins og sést á mynd 7 var jákvætt samband milli ZO-1 og gagnlegra baktería, Ruminococcaceae_UCG.014, Muribaculum, Ruminococcus_1 og Ruminiclostridium_9. Hlutfallslegt magn af gagnlegu bakteríunum, Roseburia, Odoribacter, Ruminococcus_1 og Ruminococcaceae_UCG.014 sýndi verulega jákvæða fylgni við Occludin. Næst gerðum við fylgnigreiningu á milli örveru í þörmum og ónæmishindrun í þörmum með Spearman's rank fylgniaðferð (Mynd 7). Við sáum að aukning á Roseburia, Muribaculum og Ruminococcus _1 var neikvæð fylgni við hlutfall CD3 +CD4+T-frumna. Auk þess var aukning á gagnlegum bakteríum, Ruminococcus_1 og Ruminiclostridium _9, jákvæð fylgni við hlutfall Tregs en neikvæð fylgni við IL-17. Magn Lactobacillus og Candidatus_Artthromitus var í neikvæðri fylgni við IFN-. Neikvæð fylgni var á milli magns Muribaculum og IL-2. Aukning á Candidatus_magni Saccharimonas og lækkun á Escherichia. Gnægð Shigella var jákvæð fylgni við IL-10 stig (Mynd 7). Niðurstöður fylgnigreiningar gáfu til kynna að hAMSCs bættu bólguumhverfi hýsilsins og stjórnuðu jafnvægi í þörmum sem gæti tengst mótun örveru í þörmum og þar af leiðandi komið í veg fyrir aGVHD.

Mynd 5 hAMSCs bættu truflun á þörmum í þörmum í aGVHD músum. (A) GFP-merkt hAMSCs síast inn í þörmum. (B) Fulltrúar smásjármyndir af H&E litun í þörmum (400×) og vefjafræðiskor (byggt á eyðingu vefjabyggingar og íferð eitilfrumna) (n=4). (C) Fulltrúar smásjármyndir af ónæmisvefjafræði (400×) í þörmum og hlutfalli CD45 jákvæðs svæðis (n=4). (D) Fulltrúar smásjármyndir af ónæmisvefjafræði (400×) í þörmum og hlutfalli ZO-1 jákvæðs svæðis (n=4). (E) mRNA tjáningarstig ZO-1 og occludin (n=3). (F) Plasmamagn D-LA og DAO (n=4).Gildi voru sett fram sem meðaltal±SD

Umræða

Háþróuð örverugreining hefur veitt nýja innsýn í flókin samskipti hýsilsins og örveru í þörmum [18]. Örvera í þörmum gæti breyst eftir allo-HSCT og er nátengd aGVHD, sem bendir til þess að örvera í þörmum gæti verið nýtt markmið fyrir aGVHD meðferð [5]. Fjölmargar rannsóknir, þar á meðal nýleg rannsókn okkar, hafa kannað og staðfest meðferðaráhrif MSC á aGVHD [15, 19, 20]. Hins vegar eru áhrifin á örveru í þörmum á þessu tímabili enn óljós. Í þessari rannsókn könnuðum við áhrif hAMSCs á aGVHD og hugsanlega aðferðir þar í lífi. Í samræmi við fyrri rannsóknir [15, 21-23] gáfu niðurstöður okkar til kynna að hAMSCs hafi hagstæð verndandi áhrif á aGVHD í músum, eins og sést af veiklaðri aGVHD einkennum og langvarandi lifun. Við sýndum einnig fram á að hAMSCs sýndu ónæmisbælandi áhrif með því að draga úr stækkun T-frumna gjafa en auka Tregs-myndun í aGVHD. Á sama tíma gætu hAMSCs minnkað bólgueyðandi frumur og aukið bólgueyðandi frumur in vivo, til að hindra bólgusvörun. Þarmaþröskuldurinn, þétt uppbygging sem samanstendur af einlagi þekjufrumna í þörmum, viðheldur heilleika sínum og kemur í veg fyrir flutning á luminal örveru í heilbrigðu ástandi [24]. Meðan á allo-HSCT stendur, skaða ástandsmeðferðir þarmaþröskuldinn, sem er fyrsta skrefið í þróun aGVHD, þar sem það leyfir flutning baktería yfir hindrunina og leiðir til truflana á ónæmiskerfi þarma [24, 25]. Uppsöfnuð sönnunargögn sýna að MSCs hafa getu til að gera við vefja, sem sannað var að gera við þarmahindrun heilleika í ristilbólgumúsum [26]. Tight junction prótein, þar á meðal ZO-1 og Occludin, gegna mikilvægu hlutverki í virkni þarmahindrana og flutningur á örveru í þörmum yfir skerta þarmahindrun vekur bólgu [27]. D-LA er unnið úr þarmabakteríum og DAO einbeitir sér aðallega í þarmaslímhúð. Þannig gæti hár styrkur D-LA og DAO í plasma að hluta endurspeglað breytingar á gegndræpi í þörmum og starfsemi þarmahindrana [28]. Sem stendur komumst við að því að tjáningarmagn TJs jókst verulega eftir gjöf hAMSCs, en plasmaþéttni D-LA og DAO lækkaði verulega, sem bendir til þess að hAMSCs gætu bætt truflun á þörmum og endurheimt gegndræpi í þörmum. Þarmar eru eitt af þeim líffærum sem verða fyrir alvarlegustum áhrifum af aGVHD og rannsóknir hafa sýnt að baktería, sérstaklega þarmaörvera, gegnir lykilhlutverki í meingerð og þróun aGVHD [5, 6]. Eins og greint var frá í fyrri rannsóknum tengdist tap á fjölbreytileika baktería hjá allo HSCT sjúklingum aukinni dánartíðni af völdum aGVHD [29, 30]. Saur yfirráð af tækifærissýkingum Enterococcus og Proteobacteria hefur einnig verið tengt aukinni GVHD [6, 31]. Undanfarna áratugi hefur aukin athygli verið lögð á fylgni milli örveru í þörmum og MSC meðferðar við bólgusjúkdómum. Sýnt hefur verið fram á að MSCs bætir örverusjúkdóm í þörmum vegna iktsýki, blóðsýkingar og þarmabólgu [32-34]. Til að kanna frekar hvernig hAMSCs bæta aGVHD, könnuðum við áhrif hAMSCs á örveru í þörmum. Í núverandi rannsókn sýndi hAMSCs gjöf töluverð áhrif á -fjölbreytileika örverusamfélaganna samanborið við enga ígræðslu, sem bendir til þess að gnægð örveru í þörmum gæti breyst eftir hAMSCs meðferð. Hins vegar var enginn marktækur munur á -fjölbreytileikamælingum, hugsanlega vegna lítillar úrtaksstærðar beggja hópa eða ófullnægjandi meðferðarlota hAMSCs. Greiningin með samanburðarhitakorti í ættkvíslinni gaf til kynna að gjöf hAMSCs jók gnægð gagnlegra baktería, Odoribacter og Ruminococcus_1 í þarmaflórunni, sem voru stuttkeðju fitusýrur (SCFAs) framleiðendur með bólgueyðandi eiginleika [35 , 36]. Til að bera kennsl á undirliggjandi ríkjandi bakteríur sem miðlað er með hAMSCs ígræðslu, var LEfSe greining gerð á milli hópanna tveggja. Samanborið við aGVHD hópinn jók meðferð með hAMSC marktækt magn sumra gagnlegra örvera tengdum bólgueyðandi áhrifum, svo sem Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter, Clostridia, sem öllum var lýst sem gagnlegum fyrir framleiðslu örveruefna í þörmum [SCFA]. 37–42]. Þess vegna bentu athuganir okkar til þess að eftir gjöf hAMSC hafi örverusjúkdómur í þörmum batnað, sem kemur fram í auknum fjölbreytileika og auknu hlutfallslegu magni gagnlegra baktería.

Mynd 6 Breytingar á örverum í þörmum í aGVHD músum. (A) samanburður á -fjölbreytileika. (B) samanburður á -fjölbreytileika. (C) Venn skýringarmynd af OTUs. (D) Hlutfallslegt magn baktería á fylkisstigi. (E) Hitakort yfir tegundafjölda á ættkvíslastigi. (F) Hlutfallslegt magn af Odoribacter á ættkvíslarstigi. (G) Hlutfallslegt magn ruminococcus_1 á ættkvíslarstigi. (H) Kladogram byggt á LEfSe greiningu. (I) LDA stig reiknað út frá eiginleikum sem eru mismunandi mikið á milli aGVHD og hAMSCs hópa. (AI) n=3 mýs í hverjum hópi. Gildi voru sett fram sem meðaltal±SD

aGVHD er flókið bólguferli sem er hafið með eyðingu heilleika þarmahindrana sem fylgt er eftir með flutningi á örveru í þörmum og íhlutum þeirra. Viðurkenning á skaðatengdum sameindamynstri og sýklatengdum sameindamynstri af frumum sem sýna mótefnavaka framkallar bólgueyðandi svörun, þar með talið virkjun T-frumna og frumustorms til að auka skaða á þörmum og stuðla að þróun aGVHD [24, 43]. Á hinn bóginn gegna örvera í þörmum og örveruafleidd umbrotsefni eins og SCFA mikilvægu hlutverki við að viðhalda heilleika þarmahindrana og jafnvægi í þörmum ásamt því að móta slímhúð ónæmiskerfisins og koma jafnvægi á vörn hýsilsins með örveruþáttum og umbrotsefnum [24, 44] . Samskipti milli hýsilsins og örveru í þörmum við þarmahindrun stjórna slímhúð og almennum ónæmissvörun og, í meinafræðilegu ástandi, getur það leitt til GVHD [6, 45, 46]. Það benti til þess að örvera í þörmum sé nátengd tjáningu tight junction próteina [47]. Þessi rannsókn sýndi að mRNA tjáning TJs ZO-1 og occludin var neikvæð fylgni við hlutfallslegt magn skaðlegra baktería en hafði jákvæða fylgni við gagnlegar bakteríur, sem gefur til kynna að örvera í þörmum væri mikilvæg til að viðhalda heilleika þörmum hindrun. Að auki er örvera í þörmum einnig mjög mikilvæg til að viðhalda ónæmishindrunum í þörmum [47]. Við sáum að sumar af gagnlegu bakteríunum voru í neikvæðri fylgni við hlutfall CD3+CD4+T-frumna, en jákvæða fylgni við hlutfall Tregs. Hér komum við í ljós að gagnlegar bakteríur, aðallega framleiðendur SCFA, voru í neikvæðri fylgni við bólgueyðandi cýtókín en jákvæða fylgni við bólgueyðandi cýtókín, á meðan skaðlegar bakteríur eru öfugt. Í stuttu máli, marktækur munur á örveru í þörmum milli meðferða benti til fullrar myndar af víxlverkunum milli örveru í þörmum og þörmum, ónæmi. Það voru samt nokkrar takmarkanir þess virði að ræða í tilraunum okkar. Í fyrsta lagi, þó að rannsóknin okkar hafi kannað áhrif hAMSCs á ónæmi, þörmum og örveru í þörmum í aGVHD, þarf samt að sannreyna undirliggjandi kerfi í frekari rannsókn. Í öðru lagi er þörf á eyðingu örveru í þörmum og ígræðslu í saur örveru til að takast á við orsakasamhengi milli örveru í þörmum, þörmum og ónæmi. Í þriðja lagi er þörf á frekari rannsóknum sem rannsaka áhrif hAMSCs á SCFA sem eru afleidd af örverum og öðrum umbrotsefnum. Að lokum bentu rannsóknir okkar til þess að hAMSCs léttu aGVHD með því að stuðla að eðlilegri örveru í þörmum og stjórna víxlverkunum milli örveru í þörmum og þörmum, ónæmi. Rannsóknin okkar er sú fyrsta sem skilgreinir kerfisbundið áhrif og undirliggjandi aðferðir hAMSCs sem stjórna örveru í þörmum og ónæmi í þörmum í aGVHD.

Mynd 7 Fylgnigreining milli örveru í þörmum og ónæmi í þörmum. Fylgnigreining Spearmans var gerð á milli hlutfallslegs magns 15 mismunandi örvera í þörmum (á ættkvíslastigi) og mRNA tjáningarstigs TJs, hlutfalls ónæmisfrumna sem og styrks cýtókína í þörmum meðal hópanna tveggja. Spearman r gildin eru á bilinu -0.5 (blátt) til 0.5 (rautt)

Heimildir

1. Schmid, C. (2021). Skref nær GVL án GVHD. Blóð, 137(19), 2565–2566. https://doi.org/10.1182/blood.2020010132

2. Chang, Y., Zhao, X. og Huang, X. (2018). Aðferðir til að auka og varðveita áhrif gegn hvítblæði án þess að auka ágræðslu á móti hýsilsjúkdómi. Frontiers in Immunology, 9, 3041. https:// doi.org/10.3389/fmmu.2018.03041

3. Zhu, W., Winter, MG, Byndloss, MX, Spiga, L., Duerkop, BA, Hughes, ER, Büttner, L., de Lima Romão, E., Behrendt, CL, Lopez, CA, Sifuentes- Dominguez, L., Huf-Hardy, K., Wilson, RP, Gillis, CC, Tükel, Ç., Koh, AY, Burstein, E., Hooper, LV, Bäumler, AJ og Winter, SE (2018). Nákvæm breyting á örveru í þörmum bætir ristilbólgu. Náttúra, 553(7687), 208–211. https://doi.org/10.1038/nature25172

4. Zhao, L., Zhang, F., Ding, X., Wu, G., Lam, YY, Wang, X., Fu, H., Xue, X., Lu, C., Ma, J. , Yu, L., Xu, C., Ren, Z., Xu, Y., Xu, S., Shen, H., Zhu, X., Shi, Y., Shen, Q., … Zhang, C. (2018). Þarmabakteríur sem selt eru fram af matartrefjum draga úr sykursýki af tegund 2. Vísindi (New York, NY), 359(6380), 1151–1156. https:// doi.org/10.1126/science.aao5774

5. Shono, Y., & van den Brink, MRM (2018). Skaði á örveru í þörmum í ósamgena blóðmyndandi stofnfrumuígræðslu. Umsagnir um náttúruna. Krabbamein, 18(5), 283–295. https://doi.org/10.1038/ nrc.2018.10

6. Stafas, A., Burgos da Silva, M., & van den Brink, MRM (2017). Þarma örvera í ósamgena blóðmyndandi frumuígræðslu og graft-versus-host sjúkdómi. Blóð, 129(8), 927–933. https://doi.org/10.1182/blood-2016-09-691394

7. Wu, K., Yuan, Y., Yu, H., Dai, X., Wang, S., Sun, Z., Wang, F., Fei, H., Lin, Q., Jiang, H. ., & Chen, T. (2020). Örveruumbrotsefnið trímetýlamín N-oxíð í þörmum eykur GVHD með því að framkalla skautun M1 átfrumna í músum. Blóð, 136(4), 501–515. https://doi.org/10.1182/blood.2019003990

8. Mathewson, ND, Jenq, R., Mathew, AV, Koenigsknecht, M., Hanash, A., Toubai, T., Oravecz-Wilson, K., Wu, S., Sun, Y., Rossi, C. ., Fujiwara, H., Byun, J., Shono, Y., Lindemans, C., Calafore, M., Schmidt, TM, Honda, K., Young, VB, Pennathur, S., … Reddy, P. (2016). Umbrotsefni afleidd af örverum í þörmum móta skemmdir á þekjufrumum í þörmum og draga úr sjúkdómi ígræðslu á móti hýsil. Nature Immunology, 17(5), 505–513. https://doi.org/10.1038/ni.3400

9. Dave, JR, Chandekar, SS, Behera, S., Desai, KU, Salve, PM, Sapkal, NB, Mhaske, ST, Dewle, AM, Pokare, PS, Page, M., Jog, A., Chivte , PA, Srivastava, RK og Tomar, GB (2022). Mesenchymal stofnfrumur úr mönnum halda vexti sínum og ónæmisbælandi eiginleikum óháð aldri gjafa. Science Advances, 8(25), m6504. https://doi.org/10. 1126/sciadv.abm6504

10. Zhao, K. og Liu, Q. (2016). Klínísk notkun mesenchymal stromal frumna í blóðmyndandi stofnfrumuígræðslu. Journal of Hematology & Oncology, 9(1), 46. https://doi.org/ 10.1186/s13045-016-0276-z

11. Liu, Q., Huang, Q., Wu, H., Zuo, G., Gu, H., Deng, K., & Xin, H. (2021). Eiginleikar og meðferðarmöguleikar stofnfrumna úr amnion úr mönnum. International Journal of Molecular Sciences, 22(2), 970. https://doi.org/10.3390/ijms22020970

12. Li, J., Zhou, Z., Wen, J., Jiang, F. og Xia, Y. (2020). Stofnfrumur úr legvatni manna stuðla að endurnýjun innrænna beina. Frontiers in Endocrinology, 11, 543623. https:// doi.org/10.3389/fendo.2020.543623

13. Díaz-Prado, S., Muiños-López, E., Hermida-Gómez, T., Cicione, C., Rendal-Vázquez, ME, Fuentes-Boquete, I., de Toro, FJ, Blanco, FJ ( 2011). Fósturhimna manna sem önnur uppspretta stofnfrumna fyrir endurnýjunarlækningar. Aðgreining; Rannsóknir í líffræðilegri fjölbreytni, 81(3), 162–171. https:// doi.org/10.1016/j.dif.2011.01.005

14. Hong, J., Gao, Y., Song, J., Zhuo, W., Sun, H., & Ping, B. (2016). Samanburður á líffræðilegum eiginleikum og ónæmisbælandi virkni milli legsteinsstofnfrumna úr mönnum og beinmergsstofnfrumna úr mönnum. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi, 24(3), 858–864. https:// doi.org/10.7534/j.issn.1009-2137.2016.03.041

15. Gao, Y., Li, W., Bu, X., Xu, Y., Cai, S., Zhong, J., Du, M., Sun, H., Huang, L., He, Y. ., Hu, X., Liu, Q., Jin, H., Wang, Q. og Ping, B. (2021). Mesenchymal stofnfrumur úr mönnum hamla aGVHD með því að stjórna jafnvægi Treg og T efector frumna. Journal of Inflammation Research, 14, 3985–3999. https://doi.org/10.2147/ JIR.S323054

16. Cooke, KR, Kobzik, L., Martin, TR, Brewer, J., Delmonte, JJ, Crawford, JM, & Ferrara, JL (1996). Tilraunalíkan af sjálfvakinni lungnabólguheilkenni eftir beinmergsígræðslu: I. Hlutverk minniháttar H mótefnavaka og endotoxíns. Blóð, 88(8), 3230–3239.

17. Yañez, R., Lamana, ML, García-Castro, J., Colmenero, I., Ramírez, M., & Bueren, JA (2006). Mesenchymal stofnfrumur unnar úr fituvef hafa in vivo ónæmisbælandi eiginleika sem eiga við til að stjórna sjúkdómi ígræðslu á móti hýsil. Stofnfrumur (Dayton, Ohio), 24(11), 2582–2591.

18 Hooper, LV, Littman, DR og Macpherson, AJ (2012). Samskipti milli örveru og ónæmiskerfis. Vísindi (New York, NY), 336(6086), 1268–1273. https://doi.org/10.1126/ science.1223490

19. Kelly, K. og Rasko, JEJ (2021). Mesenchymal stromal frumur til að meðhöndla graft versus host sjúkdóm. Frontiers in Immunology, 12, 761616. https://doi.org/10.3389/fmmu.2021.761616

20. Macías-Sánchez, MDM, Morata-Tarifa, C., Cuende, N., Cardesa-Gil, A., Cuesta-Casas, M. Á., Pascual-Cascon, MJ, Pascual, A., Martin-Calvo , C., Jurado, M., Perez-Simón, JA, Espigado, I., Garzón López, S., Carmona Sánchez, G., Mata-Alcázar-Caballero, R., & Sánchez-Pernaute, R. (2022) ). Mesenchymal stromal frumur til að meðhöndla stera-ónæmar bráða og langvinna ígræðslu á móti hýsilsjúkdómi: Fjölsetra samúðarupplifun. Stem Cells Translational Medicine, 11(4), 343–355. https://doi.org/10.1093/ stcltm/szac003

21. Tago, Y., Kobayashi, C., Ogura, M., Wada, J., Yamaguchi, S., Yamaguchi, T., Hayashi, M., Nakaishi, T., Kubo, H., & Ueda, Y. (2021). Mesenchymal stofnfrumur úr mönnum drekka út xenogeneic graft-versus-host-sjúkdóm með því að koma í veg fyrir virkjun og fjölgun T-frumna. Scientifc Reports, 11(1), 2406. https://doi. org/10.1038/s41598-021-81916-y

22. Yamahara, K., Harada, K., Ohshima, M., Ishikane, S., Ohnishi, S., Tsuda, H., Otani, K., Taguchi, A., Soma, T., Ogawa, H. ., Katsuragi, S., Yoshimatsu, J., Harada-Shiba, M., Kangawa, K. og Ikeda, T. (2014). Samanburður á æðavaldandi, frumuverndandi og ónæmisbælandi eiginleikum mannlegra amnion- og chorion-afleiddra mesenchymal stofnfrumna. PLoS One, 9(2), e88319. https:// doi.org/10.1371/journal.pone.0088319

23. Yamahara, K., Hamada, A., Soma, T., Okamoto, R., Okada, M., Yoshihara, S., Yoshihara, K., Ikegame, K., Tamaki, H., Kaida, K. ., Inoue, T., Ohsugi, Y., Nishikawa, H., Hayashi, H., Ito, YM, Iijima, H., Ohnishi, S., Hashimoto, D., Isoe, T., … Fujimori, Y. (2019). Öryggi og verkun amnion-afleiddra mesenchymal stofnfrumna (AM01) hjá sjúklingum með steraþolinn bráðan ígræðslu-versus-host sjúkdóm eftir ósamgena blóðmyndandi stofnfrumuígræðslu: rannsóknaraðferð fyrir japanska fasa I/II rannsókn. BMJ Open, 9(7), e26403. https://doi.org/10.1136/bmjop is-2018-026403

24. Lin, D., Hu, B., Li, P., Zhao, Y., Xu, Y., & Wu, D. (2021). Hlutverk örveru í þörmum og umbrotsefni örvera í bráðri GVHD. Experimental Hematology & Oncology, 10(1), 49. https:// doi.org/10.1186/s40164-021-00240-3

25. Ghimire, S., Weber, D., Mavin, E., Wang, XN, Dickinson, AM og Holler, E. (2017). Meinalífeðlisfræði GvHD og annarra HSCT-tengdra meiriháttar fylgikvilla. Frontiers in Immunology, 8, 79. https://doi.org/10.3389/fmmu.2017.00079

26. Xu, J., Wang, X., Chen, J., Chen, S., Li, Z., Liu, H., Bai, Y., & Zhi, F. (2020). Mesenchymal stofnfrumur sem eru fengnar úr fósturvísum stofnfrumna stuðla að heilleika og endurnýjun ristilþekju með því að hækka IGF -1 í blóðrás í ristilbólgumúsum. Theranostics, 10(26), 12204– 12222. https://doi.org/10.7150/thno.47683

27. Zhao, Y., Huang, J., Li, T., Zhang, S., Wen, C. og Wang, L. (2022). Berberín bætir aGVHD með endurgerð örveru í þörmum, bælingu TLR4 merkja og viðgerð á ristilhindrun fyrir NLRP3 bólgueyðandi hömlun. Journal of Cellular and Molecular Medicine, 26(4), 1060–1070. https://doi.org/10. 1111/jcmm.17158

28. Yuan, M., Lin, L., Cao, H., Zheng, W., Wu, L., Zuo, H., Tian, ​​X., & Song, H. (2022). Örvera í þörmum tekur þátt í verndandi áhrifum HO-1/BMMSCs á lifrarígræðslu með fituhrörnun í lifur í rottum. Frontiers in Microbiology, 13, 905567. https://doi.org/10.3389/fmicb.2022.905567

29. Taur, Y., Jenq, RR, Perales, M., Littmann, ER, Morjaria, S., Ling, L., No, D., Gobourne, A., Viale, A., Dahi, PB, Ponce , DM, Barker, JN, Giralt, S., van den Brink, M., & Pamer, EG (2014). Áhrif fjölbreytileika baktería í þörmum á dánartíðni eftir ósamgena blóðmyndandi stofnfrumuígræðslu. Blóð, 124(7), 1174–1182. https://doi.org/10.1182/ blood-2014-02-554725

30. Jenq, RR, Taur, Y., Devlin, SM, Ponce, DM, Goldberg, JD, Ahr, KF, Littmann, ER, Ling, L., Gobourne, AC, Miller, LC, Docampo, MD, Peled, JU, Arpaia, N., Cross, JR, Peets, TK, Lumish, MA, Shono, Y., Dudakov, JA, Poeck, H., … van den Brink, MRM (2015). Blautia í þörmum tengist minni dauða vegna graft-versus-host sjúkdóms. Biology of Blood and Marrow Transplantation: Journal of the American Society for Blood and Marrow Transplantation, 21(8), 1373–1383. https://doi.org/10.1016/j.bbmt.2015.04.016

31. Le Bastard, Q., Chevallier, P., & Montassier, E. (2021). Þarma örvera í ósamgena blóðmyndandi stofnfrumuígræðslu og sérstakar breytingar sem tengjast bráðum ígræðslu vs hýsilsjúkdómi. World Journal of Gastroenterology, 27(45), 7792–7800. https:// doi.org/10.3748/wjg.v27.i45.7792

32. Li, X., Lu, C., Fan, D., Lu, X., Xia, Y., Zhao, H., Xu, H., Zhu, Y., Li, J., Liu, H. ., og Xiao, C. (2020). Stofnfrumur úr naflastreng úr mönnum sýna meðferðarmöguleika við iktsýki með því að stjórna samskiptum milli ónæmis og örveru í þörmum með Aryl kolvetnisviðtakanum. Frontiers in cell and developmental biology, 8, 131. https://doi.org/10.3389/fcell.2020.00131

33. Sun, J., Ding, X., Liu, S., Duan, X., Liang, H. og Sun, T. (2020). Mesenchymal stofnfrumur af fitu draga úr bráðum lungnaskaða og bæta örveru í þörmum í rottóttum rottum. Stem Cell Research & Therapy, 11(1), 384. https://doi.org/10.1186/ s13287-020-01902-5

34. Soontararak, S., Chow, L., Johnson, V., Coy, J., Wheat, W., Regan, D., & Dow, S. (2018). Mesenchymal Stem Cells (MSC) fengnar úr Induced Pluripotent Stem Cells (iPSC) sem jafngilda fituafleiddum MSC til að stuðla að lækningu í þörmum og eðlilegri örveru í músabólgulíkani. Stem Cells Translational Medicine, 7(6), 456–467. https://doi.org/ 10.1002/sctm.17-0305

35. Li, J., Zou, C. og Liu, Y. (2022). Úrbætur á fæðuofnæmi af völdum eggjastokka í músum með markvissri gjöf sýanidíns-3-O-glúkósíðs í endaþarm og ristli. Foods (Basel, Sviss), 11(11), 1542. https://doi.org/10.3390/foods11111542

36. Maruyama, S., Matsuoka, T., Hosomi, K., Park, J., Nishimura, M., Murakami, H., Konishi, K., Miyachi, M., Kawashima, H., Mizuguchi, K. ., Kobayashi, T., Ooka, T., Yamagata, Z. og Kunisawa, J. (2022). Flokkun á tilviki blóðfitufalls út frá þarmabakteríum sem tengjast byggneyslu. Frontiers in Nutrition, 9, 812469. https://doi.org/10.3389/fnut.2022.812469

37. Lee, SH, Park, H., Kang, CD, Choi, DH, Park, SC, Park, JM, Nam, S., Chae, GB, Lee, KY, Cho, H., & Lee, SJ ( 2022). Háskammta D3 vítamínuppbót í vöðva hefur áhrif á örveru í þörmum sjúklinga með clostridioides diffile sýkingu. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology, 12, 904987. https://doi.org/10.3389/fcimb.2022.904987

38. Meyer, RK, Lane, AI, Weninger, SN, Martinez, TM, Kangath, A., Laubitz, D., & Duca, FA (2022). Oligofructose endurheimtir stuttar fitusýrur eftir máltíð meðan á fituríkri fóðrun stendur. Offita (Silver Spring, Md.), 30(7), 1442–1452. https://doi.org/ 10.1002/oby.23456

39. Sang, J, Zhuang, D, Zhang, T, Wu, Q, Yu, J, Zhang, Z (2022) Sameiginleg og ólík aldursmunstur á fjölbreytileika örveru í þörmum í mönnum og ómannlegum prímötum. M-kerfi: e151221. https:// doi.org/10.1128/msystems.01512-21

40. Ge, X., He, X., Liu, J., Zeng, F., Chen, L., Xu, W., Shao, R., Huang, Y., Farag, MA, Capanoglu, E. , El-Seedi, HR, Zhao, C. og Liu, B. (2022). Bæta sykursýki af tegund 2 með nýju 6, 8-guanidyl luteolin kínón-króm samhæfingu með lífefnafræðilegum aðferðum og samspili örvera í þörmum. Journal of Advanced Research, S2090–1232(22), 121–129. https://doi.org/ 10.1016/j.jare.2022.06.003

41. Ding, Q., Cao, F., Lai, S., Zhuge, H., Chang, K., Valencak, TG, Liu, J., Li, S., & Ren, D. (2022). Lactobacillus plantarum ZY08 dregur úr langvarandi lifrarhrörnun af völdum áfengis og lifrarskaða hjá músum með því að endurheimta fora homeostasis í þörmum. Food Research International (Ottawa, Ont.), 157, 111259. https://doi.org/10. 1016/j.foodres.2022.111259

42. Rees, NP, Shaheen, W., Quince, C., Tselepis, C., Horniblow, RD, Sharma, N., Beggs, AD, Iqbal, TH, & Quraishi, MN (2022). Kerfisbundin endurskoðun á spávísandi lífmerkjum gjafa og þegna um svörun við saurörveruígræðslu hjá sjúklingum með sáraristilbólgu. EBioMedicine, 81, 104088. https:// doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.104088

43. Li, A., Abraham, C., Wang, Y. og Zhang, Y. (2020). Ný innsýn í grunnlíffræði bráða ígræðslu-versus-host-sjúkdóms. Haematologica, 105(11), 2540–2549. https://doi.org/10.3324/haematol. 2019.240291 44. Kayama, H., Okumura, R. og Takeda, K. (2020). Samspil milli örveru, þekju og ónæmisfrumna í þörmum. Annual Review of Immunology, 38, 23–48. https://doi.org/ 10.1146/Annu rev-immunol-070119-115104

45. Schluter, J., Peled, JU, Taylor, BP, Markey, KA, Smith, M., Taur, Y., Niehus, R., Stafas, A., Dai, A., Fontana, E., Amoretti. , LA, Wright, RJ, Morjaria, S., Fenelus, M., Pessin, MS, Chao, NJ, Lew, M., Bohannon, L., Bush, A., … Xavier, JB (2020). Þarma örvera tengist gangverki ónæmisfrumna í mönnum. Náttúra, 588(7837), 303–307. https://doi.org/10.1038/ s41586-020-2971-8

46. ​​Yang, J, Yang, H, Li, Y (2022) Þreföld samskipti milli örveru í þörmum, mycobiota og ónæmi hýsils. Critical Review in Food Science and Nutrition: 1–21. https://doi.org/10.1080/10408 398.2022.2094888

47. An, J., Liu, Y., Wang, Y., Fan, R., Hu, X., Zhang, F., Yang, J. og Chen, J. (2022). Hlutverk slímhúð í þörmum í sjálfsofnæmissjúkdómi: Hugsanlegt skotmark. Frontiers in Immunology, 13, 871713. https://doi.org/10.3389/fmmu.2022.871713