Cistanche til að meðhöndla bólgu og nýrnasjúkdóm: Hver er orsök sjúkdómsvaldandi hlutverks bólgu í nýrnaþátttöku í blöðrubólgu?
Mar 13, 2022
Tengiliður:joanna.jia@wecistanche.com
Samspil galektíns-3 og cystínósíns leiðir í ljós sjúkdómsvaldandi hlutverk bólgu í nýrnaþátttöku cystínósu
Tatiana Lobry1,2 o.fl
Bólgatekur þátt í meingerð margra sjúkdóma. Hins vegar eru undirliggjandi aðferðirnar oft óþekktar. Hér prófum við hvortblöðrubólgu, próteinið sem tekur þátt íblöðrubólgu, er mikilvægur eftirlitsaðili galectíns-3, meðlimur b-galaktósíðasa bindandi próteinfjölskyldunnar, á meðanbólga. Blöðrubólgaer ljósósómal geymsluröskun og, þrátt fyrir alls staðar tjáningu cystinosis, ernýruer aðal líffærið sem sjúkdómurinn hefur áhrif á.Blöðrubólgakom í ljós að það eykur staðsetning og niðurbrot galectins-3. Í Ctns–/–mýs, músamódel afblöðrubólgu, galectin-3 er oftjáð ínýru. Skortur á galectíni-3 í blöðrumúsum bætir sjúklega nýrnastarfsemi og uppbyggingu og dregur úr íferð átfrumna/einfrumna í nýru Ctns–/–Gal3–/–mýs miðað við Ctns–/– mýs. Þessi gögn benda eindregið til þess að galektín-3 miðlibólgaflæktur ínýruversnun sjúkdóms í blöðrubólgu. Ennfremur reyndist galectin-3 hafa víxlverkun við bólgueyðandi frumudrepið MonocyteChemoattractant Protein-1, sem örvar nýliðun einfruma/átfrumna, og reyndist vera marktækt aukið í sermi Ctns–/– músa og einnig sjúklingar meðblöðrubólgu. Þannig varpa niðurstöður okkar fram nýtt hlutverk fyrir cystinosis og galectin-3 víxlverkun í bólgu og veita frekari vélrænni skýringu ánýrusjúkdómur af blöðrubólgu. Þetta getur leitt til auðkenningar nýrra lyfjamarkmiða til að seinkablöðrubólguframvindu.
LYKILORÐ:langvinnan nýrnasjúkdóm; blöðrubólgu; galectin-3;bólga; monocyte chemoattractant prótein–1
cistanche getur meðhöndlað langvinnan nýrnasjúkdóm og blöðrubólgu
Orsök bólgu er sú að nituroxíð getur leitt til framleiðslu á bólgufrumum.Cistancheer dýrmætt kínverskt jurtalyf. Virku innihaldsefni þess geta hamlað seytingu nituroxíðs og gegnt hlutverki við að koma í veg fyrir og meðhöndla bólgu og nýrnasjúkdóma.
Þýðingaryfirlýsing
Þrátt fyrir meðferð þróast sjúklingar enn í nýrnabilun á lokastigi. Í þessari rannsókn sýndum við fram á að skortur áblöðrubólguleiðir til skertrar niðurbrots galektíns-3 (Gal-3), sem leiðir tilbólgaog framgangilangvinnan nýrnasjúkdóminnblöðrubólgu. Þessar niðurstöður opna ný sjónarhorn á hugsanleg meðferðarmarkmið sem gætu takmarkað eða tafið nýrnahrörnun hjá sjúklingum meðblöðrubólgu. Sem slík geta bólgueyðandi lyf og hemlar Gal-3 eins og bólgueyðandi lyf sem ekki eru sterar eða indometacín bætt nýrnasjúkdóm við blöðrubólgu.
Bólgaer eðlileg bráð viðbrögð lífvera við meiðslum eða sýkingu,1en krónísktbólgatengist vefjaskemmdum. Þegar um er að ræða langvinna sjúkdóma, eins og sykursýki, virkja skemmdir vefir ónæmiskerfið, sem leiðir til stöðugrar bólgusvörunar og að lokum hrörnunar vefja.2 Cytókín eru lykilstýringar ábólgaog eru fær um að virkja eða leysa úrbólgaferli.3 Hjá sjúklingum meðlangvinnan nýrnasjúkdóm(CKD), hækkuð plasmaþéttni cýtókína (interleukin [IL]-6 og æxlisdrepsþáttur-a) ogbólgamerki (C-hvarfandi prótein, IL-6, hýalúrónan og neópterín) tengjast framgangi í nýrnasjúkdóm á lokastigi.4 Skilningur á sértæku miðlunum sem kalla fram bólgusvörun auðveldar uppgötvun viðeigandi lyfjamarkmiða til að koma í veg fyrir hrörnunarskemmdir. .
Blöðrubólgaer sjálfhverf-víkkandi efnaskiptasjúkdómur sem tilheyrir leysigeymslusjúkdómafjölskyldunni og einkennist af uppsöfnun cystíns í öllum líffærum.5 Genið gallað íblöðrubólgu, CTNS, kóðar lýsósómal cystín/róteinda samflytjanda, cystinosis.6,7 Þrátt fyrir að CTNS sé alls staðar tjáð, þánýruer fyrsta líffærið sem hefur áhrif á einstaklinga meðblöðrubólgu. Sjúklingar eru venjulega á fyrsta æviári sínu með Fanconi heilkenni, sem einkennist af alvarlegum vökvatruflunum og blóðsöltum, lélegum vexti og beinkröm.8Í kjölfarið þróast langvinn nýrnasjúkdómur, sem þróast yfir í nýrnasjúkdóm á lokastigi og krefst þessnýruígræðslu. Uppsöfnun blöðru í öllum vefjum leiðir að lokum til truflunar á fjöllíffærastarfsemi; Sjúklingar upplifa ljósfælni og blindu, skjaldvakabrest, kynkirtilskorti, sykursýki, vöðvakvilla og versnun miðtaugakerfis.9 Í C57BL/6 bakgrunni, útsláttar músarlíkan (Ctns–/–) 10 endurtekur svipgerð nýrna hjá sjúklingum með blöðruhálskirtli,11 sem og útfellingu cystínkristalla í hornhimnu12og truflun á starfsemi skjaldkirtils.13
Í þessari rannsókn afhjúpum við nýtt hlutverk fyrirblöðrubólguinnbólgaí gegnum samskipti þess við Gal-3. Gal-3 er meðlimur lektín- og b-galaktósíð-bindandi próteinafjölskyldunnar 21 og tekur þátt í mörgum líffræðilegum aðgerðum, þar á meðalbólga.22Í samhengi viðnýrusjúkdóma, var sýnt fram á að Gal-3 hömlun dregur úr tjáningu bólgueyðandi merkja og nýrnatrefjun og kemur í veg fyrir hnignun gaukulsíunarhraða í aldósterónheilsu, háþrýstingi eða offitulíkönum.23–26Hér gefum við sönnunargögn um að íblöðrubólgu, fjarverublöðrubólguleiðir til Gal-3 oftjáningar ínýru, sem eykur íferð átfrumna og framvindu nýrnasjúkdóms. Að auki auðkennum við mónócýtu efnafræðilega prótein-1 (MCP-1) sem hugsanlegan miðlara, sem leiðir í ljós ný genamarkmið fyrir lyfjameðferð. NIÐURSTÖÐUR Gal-3 hefur samskipti við blöðrubólgu í gegnum kolvetnaþekkingarsvið þess Til að bera kennsl á tiltekna víxlverkun samstarfsaðilar sem nota megindlega massagreiningu, Madin-Darby hundnýru(MDCK) frumur voru umbreyttar með lentiveirubyggingu til að tjá stöðugt cystinosis-græna FL flúrljómandi prótein (GFP) samrunapróteinið. Til viðbótar við 9 undireiningarnar af vacuolar-gerð Hþ adenósín þrífosfatasa sem birtar voru áður,19Gal-3 var auðkennt sem eitt af próteinum sem hafa samskipti viðblöðrubólgu(Mynd 1a). Þessi víxlverkun var enn frekar staðfest með sam-ónæmisútfellingu og síðan Western blotting (mynd 1b og c). Að auki sýndum við fram á samspil Gal-3 ogblöðrubólguvar miðlað af Gal-3 kolvetnagreiningarsvæðinu (CRD) sem staðsett er í C-enda hala próteins. Milliverkunin var hindruð af þíódígalaktósíði, öflugum hemli á milliverkunum galektíns og kolvetna (mynd 1d). Eins og öll galectín hefur Gal-3 sækni í glýkósýleruð prótein,21 þannig að líklegt er að víxlverkunin við Gal-3 eigi sér stað í gegnum cystinosis glýkósýleraða hlutann sem staðsettur er í N-enda hala próteins í rofinu.27
Cystínósín eykur Gal-3 ljósósóma staðsetningu og niðurbrot
Til að sannreyna mögulega ljósósóma staðsetningu Gal-3 þegar samskipti viðblöðrubólgu, sýndum við fram á að Gal-3, eins og cathepsin D (introlysosomal próteasi), var varið fyrir meltingu með próteinasa K, en bæði próteinin voru melt þegar lýsósóm voru gegndræp með Triton X- 100 (Mynd 2a og viðbót Mynd S1). Svipuð gögn voru fengin í lýsósum sem voru einangruð úr músalifur, sem staðfesta leysisstaðsetningu Gal-3 in vivo (Mynd 2b og c). Vegna skorts á áreiðanlegu mótefni til að greinablöðrubólgu, ónæmislitun var framkvæmd áblöðrubólgu-GFP–tjáa MDCK frumulínur með and-Gal-3 mótefni. Það staðfesti tilvist Gal-3 í holrými lýsósómanna, en cystinosis-GFP og Lamp-2 (lysosomal transmembrane prótein) fundust aðeins á himnu blöðranna (Mynd 2d).
Til að kanna hvortcystínósíntók þátt í Gal-3 verslun, greindum við gangverki beggjablöðrubólguog Gal-3-jákvæðar blöðrur sem nota tvílita lifandi frumu heildar innri endurspeglun FL flúrljómunarsmásjár í músafósturtrefjum (MEF) frá villigerð (WT) og Ctns–/–mýs sem tjá bæði CTNS-DsRed og Gal-3–GFP. Greining okkar staðfesti þaðblöðrubólguog Gal-3 gangast undir sanna sambyggðu í Ctns–/– MEF eins og staðfest er af svipaðri tímabundinni dreifingu þessara sameinda í heildar innri endurspeglun FL flúrljómunarsmásjársvæðinu (Mynd 2e). Gögn í WT MEF voru svipuð (gögn ekki sýnd). Þar að auki, þegar MEFs sem aðeins voru transsmituð með Gal- 3–GFP voru greind, fannst Gal-3–GFP í umfryminu og engin sérstök blöðrubygging sást, andstætt samflutningi með CTNS-DsRed ( gögn ekki sýnd).
Þessi gögn voru staðfest í 293T frumum, þar sem sterkt GFP merki í umfryminu sást í frumum sem tjáðu aðeins Gal-3–GFP, en í frumum sem tjá bæði Gal-3–GFP ogcystínósín-DsRed, Gal-3–GFP var aðallega staðbundið innan cystinosis-DsRed-tjáandi leysisóma (Mynd 3a). Þar að auki, magngreining á Gal-3 próteintjáningu í frumum sem eru transsmitaðar með Gal-3–GFP eingöngu eða Gal- 3–GFP og CTNS-DsRed, og Gal-3–GFP og DsRed sem viðmiðunaraðferð, sýndu marktækt minna af Gal-3-GFP próteinum í frumum sem voru samsmitaðar með CTNS-DsRed samanborið við frumur sem voru umsmitaðar með Gal-3-GFP eitt sér eða samhliðar transsmitaðar með DsRed (mynd 3b). Alls benda þessar niðurstöður til þesscystínósíneykur staðsetningar og niðurbrot Gal-3. Sýnt var fram á að cystínósín tæki þátt í CMA.28 Heat shock 70 kDa prótein (Hsc70) tekur þátt í CMA með því að aðstoða við útbrot og flutning hvarfefnispróteina yfir himnuna inn í leysisholið á LAMP2A-háðan hátt.29,30 Vegna þess að Gal{ Lagt var til að {8}} yrði rýrt af CMA,31 við rannsökuðum staðsetning Gal-3 miðað við Hsc70 í blöðrueyðandi MEF. Confocal smásjárgreining staðfesti sambyggð Gal-3–GFP við Hsc70- jákvæða uppbyggingu bæði í WT (gögn ekki sýnd) og Ctns–/–frumur (Mynd 3c), sem styður samflutning Gal-3 með Hsc70 og bendir til þess að innbyrðis innbyrðis en ekki Gal-3-þekking af aðstoðarmanni sé gölluð íblöðrubólgu.
Gal-3 tekur þátt í nýrnabólgu í Ctns–/–mýs
Til að rannsaka hlutverk Gal-3 íblöðrubólguin vivo mynduðum við tvöfalt útsláttarmúsarlíkan sem var ábótavant í báðumcystínósínog Gal-3 (Ctns–/–Gal-3–/–mýs). WT, Ctns–/–, og Gal-3–/–mýs voru notaðar sem viðmiðunarefni. Í C57BL/6 Ctns–/–músum, nýrnaafbrigði koma fram um 10 mánaða aldur.11 Þess vegna voru rannsóknir gerðar eftir 8 til 9 mánaða, þegarnýrufrávik byrja að greina, og eftir 12 til 15 mánuði þegar nýrnafrávik hafa versnað. Vegna þess að cystíninnihald reyndist vera mismunandi í karlkyns og kvenkyns Ctns–/– nýru, voru þau greind sérstaklega. Ef cystíninnihald eykst með aldri í báðum arfgerðum sást ekki marktækur munur á karlkyns og kvenkyns nýrum á milli Ctns–/– Gal-3–/– músanna og Ctns–/– mýs á aldrinum 8 til 9 mánaða og 12 til 15 mánaða (mynd 4a).
Nýrnastarfsemi var metin í sermi og þvagi og enginn marktækur munur sást á milli WT og Ctns–/–mýs eftir 8 til 9 mánaða (gögn ekki sýnd), en eftir 12 til 15 mánaða, Ctns–/–mýs sýndu marktækt hærra kreatínín og þvagefni í sermi samanborið við WT mýs. Athyglisvert er að Ctns–/–Gal-3–/–mýs sýndu bætta nýrnastarfsemi samanborið við Ctns–/–mýs á aldrinum 12 til 15 mánaða, með lægra kreatínín í sermi (P < 0.05) og þvagefni (P < 0,05; Tafla 1).
Vefjafræðilegar rannsóknir á 8- til 9-mánaðargömlum og 12- til 15-mánaðargömlum músnýruköflum leiddi í ljós tilvist alvarlegra frávika í Ctns–/– nýruþar á meðal píplurýrnun, afturdregin gaukla og einkjarna íferð. Blind greining á nýrnasneiðum var á bilinu umfang barkarskaða frá 1 (varðveitt vefjabyggingu) til 6. Meðaleinkunn fyrir Ctns–/–mýs voru 2.64 - 0.36 við 9 mánaða aldur (n ¼ 7) og 4.12 0.37 við 12 til 15 mánaða aldur (n ¼ 16). Í nýrum Ctns–/–Gal-3–/–músum á sama aldri voru þessar frávik marktækt minna umfangsmiklar: 1.62 - 0.11 eftir 9 mánuði (n ¼ 21; P < 0.05,="" mann-whitney="" t-="" próf)="" og="" 3.04="" -="" 0.22="" eftir="" 12="" til="" 15="" mánuði="" (n="" ¼="" 33;="" p="">< 0,05,="" mann-whitney="" t-próf)="" (mynd="" 4b="" og="" viðbótarmynd="" s2).="" þar="" að="" auki="" var="" hlutfalli="" af="" píplurýrnun="" úthlutað="" hverjum="" vef="" og="" meðaltal="" fyrir="">–/–mýs og Ctns–/–Gal-3–/–mýs voru 66 prósent og 42 prósent, í sömu röð, eftir 12 til 15 mánaða (P ¼ 0.01). Ennfremur er sláandi munur á Ctns–/–og Ctns–/– Gal-3–/– nýrukafla var tilvist fárra einkjarna íferða í Ctns–/–Gal-3–/–köflum, en mikil íferð var stöðugt vart í Ctns–/– nýru(Mynd 4b).
Við einkenndum einkjarna íferð sem sást með vefjafræðilegri athugun í 8- til 9-mánaðargamla Ctns–/– nýrusem átfrumur/einfrumur með sam-ónæmislitun með CD68 og CD45 og með CD68 og aðal vefjasamhæfi flokki II (viðbótarmynd S3), en ekki með CD68 og CD163, sem bendir til þess að þessi átfrumur hafi M1--líkt bólgueyðandi prófíl.32 ,33 Magngreining á CD68- jákvæðum frumum leiddi í ljós marktækt færri átfrumur/monocytes í WT, Gal-3–/–, og Ctns–/–Gal-3–/– nýrusamanborið við Ctns–/– nýru(Mynd 4c), sem staðfestir vefjafræðilegu gögnin (Mynd 4b).
Alls benda þessar niðurstöður til þess að Gal-3 sé þátttakandi í nýliðun átfrumna/einfrumna í blöðrumnýruog að fjarvera þess bætir nýrnasjúkdóm íCtns–/–mýs. Þess vegna bendir það til þessbólgaer ábyrgur, að minnsta kosti að hluta, fyrir skerðingu nýrna í Ctns–/– mýs.
Ctns-skortur nýru sýna Gal-3 oftjáningu
Með því að nota Western blot greiningu komumst við að því að Gal-3 tjáning var verulega aukin ínýruaf 12-mánaðargamalt Ctns–/–mýs samanborið við WT mýs (Mynd 5a og b). Til að kanna hvort þessi aukna tjáning Gal-3 sé sértæk fyrir Ctns–/– nýru, töluðum við Gal-3 tjáningu við umrit og próteinstig ínýruúr músum með langvinnan nýrnasjúkdóm framkallaða með hefðbundinni 2-þrep nýranámsaðgerð og frá dýrum sem fóru í sýndaraðgerð. WT og Ctns–/–mýs voru notaðar sem viðmiðunarefni. Gal-3 afritum var marktækt aukið í Ctns–/– og sýndarnýrum en mjög fjölgað í langvinnri nýrnastarfseminýrusamanborið við WT mýs (Mynd 5c). Aftur á móti, á próteinstigi, greindist Gal-3 aðeins í Ctns–/–nýru, sem bendir eindregið til, að aðeins Ctns–/–nýru gátu ekki brotið niður Gal-3 prótein (mynd 5d). Ónæmisflúrljómandi litun á Gal-3 í músinninýrueftir 8 til 9 mánuði sýndi einnig oftjáningu Gal-3 í Ctns–/– nýrumiðað við WTnýru(Mynd 5e). Þar að auki var Gal-3 tjáð af CD68þ átfrumum, sem og nýrnafrumum í Ctns–/– nýrueftir 8 til 9 mánuði (viðbótarmynd S4). Á heildina litið eru þessi gögn í samræmi við minnkað Gal-3 niðurbrot í fjarverublöðrubólgueins og sýnt er fram á in vitro (mynd 3a og b), sem leiðir til uppsöfnunar Gal-3 próteins í Ctns–/– nýru.
Skortur á cystínósíni leiðir til aukinnar MCP í sermi-1 með Gal-3 uppstjórnun
Gal-3 stjórnarbólgagegnum mismunandi gangverk.34 Þannig að til að fá frekari innsýn í gangverkið íblöðrubólgu, könnuðum við tjáningu mismunandi bólgueyðandi eða bólgueyðandi frumuefna í sermi 12- til 15-mánaðargamals WT, Ctns–/–, Gal-3–/–, og Ctns–/–Gal- 3–/–mýs. Sex cýtókínmagn voru mæld með frumumælingarperlum músa, MCP-1, interferon-g, æxlisdrepstuðli og IL-10, IL-6 og IL-12p70. Aðeins MCP-1 tjáning jókst marktækt í sermi Ctns–/– músa samanborið við WT og Gal-3–/– mús og einnig í Ctns–/–Gal-3–/–mýs, þar sem MCP-1 sermismagn var sambærilegt við WT mýs (mynd 6a). MCP-1 er framleitt af mismunandi frumugerðum, þar sem aðal uppspretta MCP-1 eru átfrumur og einfrumur,35 og virkar sem efnadrepandi efni fyrir einfrumur og átfrumur sem stjórnar flutningi þeirra og íferð. Aftur á móti, á sama aldri, reyndist Gal-3 tjáning vera svipuð í sermi Ctns–/– músa (44,33 9,81 ng/ml; n ¼ 5) og WT músa (40.{{12} },41 ng/ml; n ¼ 7).
Tengsl Gal-3 og MCP-1 voru rannsökuð frekar með samónæmisútfellingu með því að nota Gal-3–GFP og MCP-1–DsRed– eða Gal-3– GFP og CTNS-DsRed- (sem jákvæð viðmiðun) sem tjáir 293T frumur. Víxlverkun milli Gal-3 og MCP-1 sást (Mynd 6b), sem bendir til beina framkalla MCP-1 af Gal-3. Ræktun með N-asetýl-D-laktósamíni (LacNAc), hemli Gal-3 CRD, sýndi að öfugt viðcystínósínsamspil, CRD tekur ekki þátt í samskiptum Gal-3 og MCP-1 (Mynd 6c).
Til að meta hvort þessi niðurstaða eigi við hjá mönnum mældum við Gal-3 og MCP-1 gildi hjá sjúklingum meðblöðrubólgusem voru ekki í ónæmisbælandi meðferð eða tóku bólgueyðandi lyf. Þótt Gal-3 magnið hafi verið örlítið aukið í sermi sjúklinga með blöðrubólgu samanborið við heilbrigða gjafa, var munurinn ekki marktækur (Mynd 6e), sem staðfestir niðurstöður okkar sem fengust í Ctns–/–mýs. Aðeins 2 sjúklingar voru með hátt Gal-3 gildi (25,34 og 39,54 ng/ml); þær voru taldar útúrdúrar og voru því ekki teknar með á mynd 6e. Aftur á móti, með því að nota ensímtengd ónæmissogandi próf sem beint er gegn MCP-1 úr mönnum (Mynd 6d), reyndust MCP{10}} í sermi vera marktækt aukið hjá sjúklingum meðblöðrubólgu(252.1 - 18,4 pg/ml; n ¼ 19; aldursbil 1–23 ára) þrátt fyrir cysteamínmeðferð samanborið við heilbrigða viðmiðunarþega (166.9 -13,5 pg/ml; n ¼ 1 0; aldursbil 8–63 ára) (P < 0,001).="" engin="" fylgni="" hefur="" fundist="" á="" milli="" aldurs="" og="" mcp-="" 1="" stigs="" hjá="" báðum="" sjúklingum="">blöðrubólguog heilbrigðir gjafar (gögn ekki sýnd).
Cistanchehefurbólgueyðandieignir
UMRÆÐA
Þrátt fyrir þá staðreynd að cystín safnast fyrir í öllum vefjum hjá sjúklingum sem hafa áhrif áblöðrubólgu, nýru eru þau líffæri sem eru viðkvæmust fyrir skemmdum. Þannig teljum við að cystínsöfnun sé ekki eingöngu ábyrg fyrir nýrnahrörnun. Hér lýsum við nýju hlutverki fyrircystínósíní reglugerð umbólgaþátt í framgangi langvinns nýrnasjúkdóms íblöðrubólgu. Þessi rannsókn gæti útskýrt hvers vegna sjúklingar þróast yfir í nýrnabilun á lokastigi þrátt fyrir að gangast undir cysteamínmeðferð.
Rannsóknin á sameindafélaga cystinosis leiddi í ljós bein víxlverkun við Gal-3, sem hemlar Gal-3 CRD geta hindrað. Nýlegar rannsóknir sýndu að Gal-3 gæti haft víxlverkun við glýkan sem staðsett er í holrýminu eftir ljósaskaða eins og kristallauppsöfnun.36 Í rannsókn okkar var samspil Gal-3 ogcystínósínvar rannsakað í heilbrigðum frumum sem tjáðucystínósínog safnar því ekki cysteini eða cystínkristöllum. Að auki breytti oftjáning bæði Gal-3 og cystínósíns í heilbrigðum frumum undirfrumustaðsetningu Gal-3, sem síðan var staðfærð á lýsósómin, samanborið við oftjáningu á Gal-3 eingöngu, sem var staðsett í umfrymi. Þessar niðurstöður benda eindregið til þess að víxlverkun milli Gal-3 og cystínósíns eigi sér stað óháð lýsósómskemmdum og að cystínósín sé virkt ábyrgt fyrir staðsetningu Gal-3 lýsósíns. Áður hefur verið sýnt fram á að Gal-3 er brotið niður með lysosomal-háðri próteingreiningu í fjarveru Abl og Arg, 2 týrósínkínasa.31
Auk þess sýndum við þaðblöðrubólguog Gal-3 staðsetja sig saman við kraftmikla blöðrubyggingu og eru saman virkjuð á tímabundinn hátt.Cystínósínhefur áður verið tengt verslunaraðferðum LAMP2A, eina þekkta CMA viðtakans, sem er ranglega staðsettur íblöðrubólgu.28Gal-3 niðurbrot hefur áður verið sýnt fram á að CMA miðlar.31Confocal smásjárgreining staðfesti sambyggð Gal-3 við Hsc70-jákvæða uppbyggingu í báðum Ctns–/– og WT frumur, sem styðja samflutning Gal-3 með Hsc70 til kynningar við lýsósómið og niðurbrot með CMA þar sem Hsc70 hjálpar til við flutning hvarfefnispróteina yfir himnuna inn í leysiholið.29,30Hugsanleg túlkun á niðurstöðum okkar er súcystínósínstjórnar verslun og afhendingu Gal-3 til CMA-virku leysikornanna til niðurbrots.
Þessi nýja leið umcystínósín-háð Gal-3 ljósósómal staðsetning og niðurbrot er studd in vivo þar sem Ctns-skortar mýs sýna oftjáningu Gal-3 innannýru. Þar að auki, en aukið Gal-3 mRNA var takmarkað í Ctns–/–nýru samanborið við annað líkan af langvinnri nýrnahettu, mikið magn af Gal-3 próteini greindist aðeins inCtns–/– nýru. Þessi gögn styðja eindregið þá ályktuncystínósíntekur þátt í niðurbroti Gal-3 próteins, sem getur stjórnað oftjáningu Gal-3 mRNA við streituástand eins og langvinnan nýrnasjúkdóm.
Gal-3 hefur nokkur líffræðileg hlutverk, þar á meðal hlutverk í bráðum og langvinnumbólgameð því að laða að sér einfrumur og átfrumur.37,38Í Ctns–/– músum, sáum við þung einkjarna íferð aðallega ínýrueins og áður hefur verið lýst,11,39sem einkenndust sem einfrumur/átfrumur. Aftur á móti, nýru frá tvöföldu knockout Ctns–/–Gal-3–/–mýs sýndu mjög fáar einfrumur/átfrumur íferð, sem bendir eindregið til þess að Gal-3 eigi þátt íbólgaí nýrum Ctns–/–mýs. Í samhengi við endurtekna vefjaskaða gæti Gal-3 kallað fram umskipti yfir í langvarandibólgaog bandvefssjúkdómur.34Í samræmi við þessar niðurstöður sýna gögn okkar þátttöku Gal-3 í framvindu langvinnrar nýrnasjúkdóms íblöðrubólgu. Reyndar, tvöfaldur útsláttur Ctns–/– Gal-3–/–mýs sýndu beturnýruvirkni og uppbygging miðað við Ctns–/–mýs. Að sama skapi sýna Gal-3-skort mýs minni bandvefsmyndun í nýrum ínýrusamanborið við WT mýs eftir einhliða þvagrásarstíflu,40 og Gal-3 knockout mýs sem urðu fyrir blóðþurrðar-endurflæðisskaða höfðu betri nýrnastarfsemi samanborið við WT mýs sem fengu blóðþurrðar-endurflæðisskaða.41
Þrátt fyrir að fylgni hafi fundist á milli magns Gal-3 í plasma og þróunar á nýrnasjúkdómi,42 sást enginn munur á Gal-3 tjáningu í sermi músa og manna sem verða fyrir áhrifum afblöðrubólguog heilbrigðum eftirlitsaðilum. Með því að mæla mismunandi cýtókínmagn í sermi fundum við verulega aukningu á MCP-1 í Ctns–/–mýs, en Ctns–/–Gal-3–/–mýs höfðu sambærileg gildi og WT músa. MCP-1 er frumuvaka sem hægt er að losa í sermi og myndar halla til að laða einfrumur og átfrumur að skaðastaðnum.35 Aukning MCP-1 í sermi Ctns–/–mýs miðað við Ctns–/–Gal-3–/–mýs voru óháðar cystínsöfnun vegna þessnýrucystíninnihald var svipað í báðum arfgerðunum. Ennfremur, þrátt fyrir cysteamínmeðferð sem gerði kleift að fara cystín út úr lýsósómunum, reyndist MCP-1 vera marktækt aukið í sermi sjúklinga meðblöðrubólgusamanborið við heilbrigða gjafa. Þessi gögn benda eindregið til þess að skortur ácystínósín, frekar en cystínsöfnun, er ábyrgur fyrir MCP-1 aukningu í sermi. Að auki sýndum við bein víxlverkun milli Gal-3 og MCP-1, sem Gordon-Alonso o.fl.43 lagði nýlega til en var ekki rannsakað frekar. Virkjun Gal-3-miðlaðrar MCP-1 virkjunar var ekki rannsakaður hér. Tilgáta er nærvera merkjapeptíðs í MCP -1 manna, sem hægt er að kljúfa til að auka seytingu þess.44 Þar að auki getur plasmín klofið C-enda MCP-1, sem eykur efnasamdráttarefni þess. styrkleika.45 Að auki, í samræmi við gögn okkar, kom hömlun á MCP-1 í múslíkani af nýrnakvilla af völdum sykursýki í veg fyrir nýrnaátfrumnaíferð og bætti nýrnastarfsemi.46,47 Íblöðrubólgu, gögn okkar benda eindregið til þess að skortur ácystínósínleiðir til aukningar á Gal-3, sem virkjar MCP-1 blóðmyndun, sem eykur nýrubólgaog framgangilangvinnan nýrnasjúkdóm.
Þessar niðurstöður opna ný sjónarhorn á hugsanleg meðferðarmarkmið sem gætu takmarkað eða tafið nýrnahrörnun hjá sjúklingum meðblöðrubólgu. Reyndar hefur reynst bólgueyðandi lyf eins og aspirín og indómetasín hamla Gal-3 tjáningu með því að hindra umritun þess.48 Indómetasín er í raun notað til að stjórna fjölþvagi og fjöldipsi íblöðrubólgu,49 og nýleg rannsókn á 307 evrópskum sjúklingum með blöðrubólgu sýndu fram á bætta nýrnaárangur hjá sjúklingum sem fengu meðferð með indometacíni.50 Í ljósi rannsóknar okkar, notkun indometacíns eða bólgueyðandi lyfja sem ekki eru sterarblöðrubólgusjúklingar gætu verið endurskoðaðir.
AÐFERÐIR
Dýratilraunir
C57BL/6 Ctns–/–mýs voru veitt af Dr. Antignac (Inserm U1163, París, Frakklandi). C57BL/6 galectin-3 núll (Gal-3–/–) mýs voru veittar af Dr. Fu-Tong Liu (University of California, Davis) og Dr. Jerrold M. Olefsky (University of California, San Diego). Ræktunarstefnan til að búa til WT, Ctns–/–, Gal-3–/–, Ctns–/– og Gal- 3–/–músum er lýst í viðbótaraðferðum.
Frumulínur
sóðaskapurinn varð til úr vefjasýni úr nýfæddum húð af WT og Ctns–/–mýs. MEF, 293T og MDCK tegund II frumulínur (ATCC, Manassas, VA) voru ræktaðar í Dulbecco's modified Eagle medium sem innihélt 10 prósent kálfsfóstursermi eða nautgripasermi, 100 einingar/ml penicillín, 0,1 mg/ml streptomycin og 2 mM L-glútamín.
Samónæmisútfelling og massagreiningargreining
Til að rannsaka prótein-prótein víxlverkanir voru MDCK frumur umbreyttar með því að nota lentiveiru pRRL.SIN.cPPT.PGK/WPRE vektor burðarásina til að tjá stöðugtcystínósín-GFP.51Samónæmisútfelling var framkvæmd eins og lýst er í viðbótaraðferðum. Samhliða ónæmisútfelld prótein voru leyst upp með natríumdódecýlsúlfat-pólýakrýlamíð gel rafdrætti (SDS-PAGE) og greind með massagreiningu, LTQ Orbitrap eins og áður hefur verið lýst.19
293T frumur sem tjá Gal-3–GFP og MCP-1–DsRed eða Gal-3– GFP og CTNS-DsRed voru notaðar fyrir sam-ónæmisútfellingu eins og lýst er í viðbótaraðferðum. Sam-ónæmisútfelld prótein voru leyst upp með SDS-PAGE og Gal-3-bindandi MCP-1 greindist með því að nota and-DsRed mótefni (Clontech Laboratories, Mountain View, CA).
Undirfrumubrot
Átta lifur voru fengnar úr C57BL/6 músum og undirbúnar eins og áður hefur verið lýst.52 Aðstæður hallans voru í meginatriðum þær sömu og lýst er í upphaflegu útgáfunni,52 nema að Nycodeenz var notað í stað metrizamíðs.
Gal-3–hemla og próteinasa K meðferðir
Lýsöt frácystínósín-GFP MDCK frumur og 293T sem tjá Gal-3–GFP og CTNS-DsRed eða Gal-3–GFP og MCP-1–DsRed voru ræktaðar með eða án 5 mM þíódígalaktósíðs eða 5 mM af N -Acetyl-D-Lactosamine, í sömu röð, 2 hemlar Gal-3 CRD. Eftir 30 mínútna ræktun við 4 - C með stöðugum hristingi, voru lysöt ræktuð með 50 ml and-GFP örperlum og ónæmisútfelling var framkvæmd eins og áður hefur komið fram. Útfelld prótein voru leyst upp með SDS-PAGE á 10 prósent hlaupi.
Lýsöt frácystínósín-GFP MDCK frumur og músa lifur lysosome auðgað brot voru ræktuð með eða án 2 prósent Triton X-100 í 10 mínútur við 4 - C og síðan ræktaðar 30 mínútur með eða án 2,5 mg/ml og 25 mg /ml próteinasa K, í sömu röð. Eftir ensímóvirkjun með 1 mM fenýlmetýlsúlfónýlflúoríði í 5 mínútur við 4 - C, voru prótein leyst upp með SDS-PAGE á 10 prósent hlaupi.
Ónæmisflúrljómunargreining
Föst MDCK frumur voru ræktaðar með and-Lamp-2 (OriGeneTechnologies, Rockville, MD) og and-Gal-3 mótefni (CedarlaneLaboratories, Burlington, Ontario, Kanada) í 2 klukkustundir við stofuhita, fylgt eftir með Alexa Fluor 555 aukamótefni (Invitrogen, Carlsbad, CA) í 1 klukkustund við stofuhita. Confocal myndir voru teknar með Zeiss LSM 700 smásjá (Carl Zeiss Microscopy, Jena, Þýskalandi).
293T frumur sem tjá tímabundið Gal-3–GFP eingöngu, Gal-3–GFP og DsRed eða Gal-3–GFP ogcystínósín-DsRed voru ræktuð á hylki áður en þau voru sett á rennibraut. Frumur voru myndaðar með Keyence BZ-X700 tæki (Keyence Corp., Osaka, Japan).
Lagaðnýruhlutar voru ræktaðir yfir nótt við 4 - C með and-CD68 (BioLegend, San Diego, CA) eða and-Gal-3 mótefni (BioLegend), fylgt eftir með Alexa Fluor 488 aukamótefni (Invitrogen), 1 klst. við stofuhita. Myndir voru teknar með Keyence BZ-X700 tæki. Magngreiningu á CD68 tjáningu er lýst í viðbótaraðferðum.
MEFs sem tjá Gal-3–GFP voru lituð með and-Hsc70 mótefni (Enzo Life Sciences, Farmingdale, NY) og mynduð eins og áður hefur verið lýst.53
Heildar innri endurspeglun FL flúrljómunarsmásjá
WT og Ctns–/–MEF sem tjáir Gal-3–GFP og CTNS-DsRed var sáð á 4-hólfa 35- mm bórsílíkatbotni (Cellvis, Mountain View, CA). Eftir 2 daga í ræktun voru MEFs greind með heildar innri endurspeglun FL flúrljómunar smásjá eins og áður hefur verið lýst54og í viðbótaraðferðum. Myndir voru greindar með ImageJ hugbúnaði.
Gal-3 tjáningargreining
293T frumur sem tjá Gal-3–GFP, Gal-3–GFP og DsRed, eða Gal-3–GFP og CTNS-DsRed og útgræddarnýruvoru greind í geislaónæmisútfellingarprófunarbuffi sem innihélt próteinasahemla kokteil. Prótein voru aðskilin á 4 prósent til 15 prósenta hlaupi og komu í ljós með því að nota and-Gal-3 (Abcam, Cambridge, Bretland) eða and-glyceraldehýð-3-fosfat dehýdrógenasa (Cell Signaling Technology, Danvers, MA) mótefni .
Nýruvoru gerð einsleit í RLT jafnalausn sem inniheldur b-merkaptóetanól með því að nota Precellys 24 (Bertin Instruments, Montigny-le-Bretonneux, Frakklandi). RNA var einangrað og Gal-3 – sértæk dropastafræn pólýmerasa keðjuverkun var framkvæmd eins og lýst er í viðbótaraðferðum. Gal-3 afritatjáning var gefin upp sem hlutfall samanborið við innræna samanburðarhópinn 18S. Ensímtengd ónæmissogandi prófun (Abcam) var notuð til að greina Gal-3 magn í músum og mannasermi, samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda.
Nýrnastarfsemi
Magn fosfats í sermi og þvagi, kreatíníni í sermi og þvagefni var metið með því að nota QuantiChrom fosfatgreiningarsettið, QuantiChrom kreatínínsettið og QuantiChrom þvagefnisgreiningarsettið (BioassaySystems, Hayward, CA). Próteinmagn í þvagi var mælt með því að nota Pierce BCA próteingreiningarsett (Rockford, IL).
Vefjafræði
Á þeim tíma sem mýsnar voru drepnar,nýruvar safnað, fest í formalín og sett í paraffín. Hlutar litaðir með hematoxýlíni og eósíni voru skoðaðir á blindan hátt af Dr. Marie Claire Gubler eins og lýst er í viðbótaraðferðum.
Mæling á cystínuinnihaldi
Mæling á cystíni í vefjum var gerð með massagreiningu (LC-ESI-MS/MS) eins og áður hefur verið lýst.39
Hefðbundin nýrnabrottnám og sýndaraðgerð
Mýs með langvinnri nýrnahettu var framkölluð með stöðluðu 2-stigi nýranámsaðgerðar eins og áður hefur verið lýst.55,56Sýndarhópurinn af músum fór í sömu aðgerð en án þess að skera neittnýruvefjum.
Cýtókínmagn í sermi
Til að mæla cýtókínmagn í músasermi, músbólgasett frumumælingaperlufylki (BD Biosciences, San Jose, CA) var framkvæmt samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. MCP-1 styrkur í sermi manna var ákvarðaður með því að nota ensímtengd ónæmissogspróf sem beint er gegn MCP-1 (Abcam, Cambridge, Bretlandi) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda.
tölfræðigreining
Gildi eru gefin upp sem meðaltal - SEM. Mikilvægi niðurstöðunnar var metið með óparuðu 2-hala t-prófi eða óparuðu 2-hala t-prófi með leiðréttingu Welch. Hópsamanburður á 3 skilyrðum eða fleiri var gerður með breytileikagreiningum, fylgt eftir með Tukey margfeldissamanburðarprófi fyrir parssamanburð. Vefjafræðileg stig voru borin saman með Mann-Whitney prófinu. Greiningar voru gerðar með Prism 6 hugbúnaði (GraphPad, San Diego, CA). P-gildi minna en 0.05 var talið marktækt.
Námssamþykki
Tilraunir á músum voru gerðar í samræmi við samskiptareglur stofnanadýranotkunarnefndar. Notkun mannsvefs í þessari rannsókn var samþykkt af háskólanum í Kaliforníu, San Diego, HumanResearch Protections Program.
UPPLÝSINGAR
SC er vísindaráðsmaður og meðlimur í trúnaðarráðiblöðrubólguRannsóknasjóður. SC er meðstofnandi, hluthafi og meðlimur í bæði vísindastjórn og stjórn GenStem TherapeuticsInc. Skilmálar þessa fyrirkomulags hafa verið skoðaðir og samþykktir af háskólanum í Kaliforníu-San Diego í samræmi við stefnu hans um hagsmunaárekstra. Allir aðrir höfundar lýstu ekki yfir hagsmunum í samkeppni.
útvega Gal-3–/–mýs. Við þökkum Lou Devanneaux og NicholeFlerchinger fyrir tæknilega aðstoð og Elizabeth Souter fyrir að fara yfir handritið. Við þökkum Christopher Alfonso frá BDBioscience fyrir að útvega músinabólgafrumumælingaperlufylki og fyrir aðstoð hans við túlkun á niðurstöðum. Þessi vinna var studd af National Institute of Health styrkjum RO1-DK090058og R01-DK110162,BlöðrubólgaResearch Foundation og California Institute of Regenerative Medicine (CIRM, CLIN-09230). TL er stutt af útskriftarfélagi frá Vaincre Les MaladiesLysosomales. AB og JZ eru studd af félagsskap fráblöðrubólguRannsóknasjóður. UCSD Neuroscience MicroscopyShared Facility var styrkt af National Institute of neurological disorders and Stroke (NINDS) styrk P30-NS047101.
HEIMILDIR
1. Medzhitov R. Uppruni og lífeðlisfræðileg hlutverkbólga. Náttúran. 2008;454:428–435.
2. Donath MY. Miðunbólgavið meðferð á sykursýki af tegund 2. Sykursýki Offita Metab. 2013;15 (fylgi 3):193–196.
3. Jaffer U, Wade RG, Gourlay T. Cytokines in the systemic inflammatory response syndrome: a review. HSR Proc Intensive Care Cardiovasc Anesth. 2010;2:161–175.
4. Pecoits-Filho R, Heimburger O, Barany P, o.fl. Tengsl milli bólgumerkja í blóðrás og eftirstandandi nýrnastarfsemi hjá CRF sjúklingum. Er JNýraDis. 2003;41:1212–1218.
5. Gahl WA, Thoene JG, Schneider JA.Blöðrubólga. N Engl J Med. 2002;347: 111–121.
6.Cherqui S, Kalatzis V, Trugnan G, Antignac C. Markmiðið ácystínósíntil leysihimnunnar krefst týrósíns byggt merki og nýs flokkunar mótíf. J Biol Chem. 2001;276:13314–13321.
7. Kalatzis V, Cherqui S, Antignac C, Gasnier B.Cystínósín, próteinið sem er gallað íblöðrubólgu, er H( )-drifinn lysosomal cystine transporter. EMBO J. 2001;20:5940–5949.
8. Cherqui S, Courtoy PJ. Fanconi heilkenni nýrna íblöðrubólgu: sjúkdómsvaldandi innsýn og meðferðarsjónarmið. Nat Rev Nephrol. 2017;13:115–131.
9. Nesterova G, Gahl W. Nephropathicblöðrubólgu: síðkomnir fylgikvillar fjölkerfa sjúkdóms. Barnalæknir Nephrol. 2008;23:863–878.
10. Cherqui S, Sevin C, Hamard G, o.fl. Innri cystínsöfnun í músum skortircystínósín, próteinið sem er gallað íblöðrubólgu. Mol Cell Biol. 2002;22:7622–7632.
11. Nevo N, Chol M, Bailleux A, o.fl. Nýrnasvipgerð afblöðrubólgumúsarlíkan er háð erfðafræðilegum bakgrunni. Nephrol Dial ígræðsla. 2010;25:1059–1066.
12. Kalatzis V, Serratrice N, Hippert C, et al. Augnafbrigðin í ablöðrubólgudýralíkan líkir eftir meingerð sjúkdóma. Pediatr Res. 2007;62:156–162.
13. Leiðsögumaður Chevronnay HP, Janssens V, Van Der Smissen P, o.fl. Músalíkan bendir til tveggja aðferða fyrir skjaldkirtilsbreytingar hjá ungbörnumblöðrubólgu: minnkuð nýmyndun thyroglobulin vegna streitu í endoplasmic reticulum/óbrotinni próteinviðbrögðum og skertri lýsosomalvinnslu. Innkirtlafræði. 2015;156:2349–2362.
14. Brodin-Sartorius A, Tete MJ, Niaudet P, et al. Cysteamínmeðferð seinkar framgangi nýrnasjúkdómablöðrubólguhjá unglingum og fullorðnum.NýraAlþj. 2012;81:179–189.
15. Cherqui S. Cysteamín meðferð: meðferð viðblöðrubólgu, ekki lækning.NýraAlþj. 2012;81:127–129.
16. Gahl WA, Balog JZ, Kleta R. Nephropathicblöðrubólguhjá fullorðnum: náttúrusaga og áhrif cysteamínmeðferðar til inntöku. Ann Intern Med. 2007;147:242–250.
17. Cherqui S, Courtoy PJ. Fanconi heilkenni nýrna íblöðrubólgu: sjúkdómsvaldandi innsýn og meðferðarsjónarmið. Nat Rev Nephrol. 2017;13:115–131.
18. Napolitano G, Johnson JL, He J, o.fl. Skerðing á sjálfsáhrifum sem miðlað er af leiðtoga leiðir til sértækra niðurbrotsgalla í leysigeymslusjúkdómnum.blöðrubólgu. EMBO Mol Med. 2015;7:158–174.
19. Andrzejewska Z, Nevo N, Thomas L, o.fl.Cystínósíner hluti af vacuolar H -ATPasa-regulator-rag flókinu sem stjórnar spendýramarkmiði rapamýsínfléttu 1 merkja. J Am Soc Nephrol. 2016;27: 1678–1688.
20. Rega LR, Polishchuk E, Montefusco S, o.fl. Virkjun á umritunarþættinum EB bjargar frávikum í blöðruhálskirtlinýrufrumur.NýraAlþj. 2016;89:862–873.
21. Dumic J, Dabelic S, Flogel M. Galectin-3: saga með opnum endum. Biochim Biophys Acta. 2006;1760:616–635.
22. Sciacchitano S, Lavra L, Morgante A, o.fl. Galectin-3: ein sameind fyrir stafróf sjúkdóma, frá A til Ö. Int J Mol Sci. 2018;19(2).
23. Calvier L, Martinez-Martinez E, Miana M, o.fl. Áhrif galectin-3 hömlunar á hjarta- og nýrnaskaða af völdum aldósteróns. JACC hjartabilun. 2015;3:59–67.
24. Frenay AR, Yu L, van der Velde AR, o.fl. Lyfjafræðileg hömlun á galectíni-3 verndar gegn háþrýstingsnýrnakvilla. Am J Physiol Renal Physiol. 2015;308:F500–F509.
25. Kolatsi-Joannou M, Price KL, Winyard PJ, Long DA. Breytt sítruspektín dregur úr galectin-3 tjáningu og alvarleika sjúkdómsins í bráðatilraunumnýrumeiðsli. PloS One. 2011;6:e18683.
26. Martinez-Martinez E, Ibarrola J, Clavier L, o.fl. Galectin-3 blokkun dregur úr vefjamyndun í nýrum í tveimur venjulegum tilraunalíkönum af nýrnaskemmdum. PloS One. 2016;11:e0166272.
27. Nevo N, Thomas L, Chhuon C, o.fl. Áhrif afblöðrubólguglýkósýleringu á próteinstöðugleika með mismunandi kraftmikilli stöðugri samsætumerkingu með amínósýrum í frumurækt (SILAC). Mol Cell Proteomics. 2017;16:457–468.
28. Napolitano G, Johnson JL, He J, o.fl. Skerðing á sjálfsáhrifum sem miðlað er af leiðtoga leiðir til sértækra niðurbrotsgalla í leysigeymslusjúkdómnum.blöðrubólgu. EMBO Mol Med. 2015;7:158–174.
29. Majeski AE, Dice JF. Aðferðir við sjálfsáfall sem miðlað er að leiðtoga. Int J Biochem Cell Biol. 2004;36:2435–2444.
30. Xie W, Zhang L, Jiao H, o.fl. sjálfsát sem miðlað er af leiðara kemur í veg fyrir frumudauða með því að niðurlægja BBC3/PUMA. Autophagy. 2015;11:1623–1635.
31. Li X, Ma Q, Wang J, o.fl. c-Abl og Arg týrósín kínasar stjórna niðurbroti ókópróteinsins Galectin -3. Frumudauði er mismunandi. 2010;17:1277–1287.
32. Takeuchi H, Tanaka M, Tanaka A, o.fl. Yfirgnæfandi magn M2-skautaðra átfrumna í þvagblöðrukrabbameini hefur áhrif á æðamyndun, æxlisstig og ífarandi. Oncol Lett. 2016;11:3403–3408.
33.Chavez-Galan L, Olleros ML, Vesin D, Garcia I. Miklu fleiri en M1 og M2 átfrumur, það eru líka CD169( ) og TCR( ) átfrumur. Framan Immunol. 2015;6:263.
34. Henderson NC, Sethi T. Reglugerð umbólgaeftir galectin-3. Immunologic Rev. 2009;230:160–171.
35. Deshmane SL, Kremlev S, Amini S, Sawaya BE. Monocyte chemoattractant prótein-1 (MCP-1): yfirlit. J Interferon Cytokine Res. 2009;29:313–326.
36.Skowyra ML, Schlesinger PH, Naismith TV, Hanson PI. Kveikt nýliðun ESCRT véla stuðlar að endolysosomal viðgerð. Vísindi. 2018;360(6384).
37.MacKinnon AC, Farnworth SL, Hodkinson PS, o.fl. Stjórnun á annarri virkjun átfrumna með galektíni-3. J Immunol. 2008;180: 2650–2658.
38. Sano H, Hsu DK, Yu L, o.fl. Galektín úr mönnum-3 er nýtt efnadrepandi efni fyrir einfrumur og átfrumur. J Immunol. 2000;165:2156–2164.
