Theaflavin-stýrð Imd Condensates Control Drosophila þarmajafnvægi og öldrun

Vinsamlegast hafðu sambandoscar.xiao@wecistanche.comfyrir meiri upplýsingar

SAMANTEKT

Svart te er mest neysla tedrykkurinn í heiminum og hefur stöðugt verið greint frá því að það hafi áhrif gegn öldrun. Hins vegar er að mestu óþekkt hvort teaflavín, ein tegund einkennandi plöntuefna í útdrætti úr svörtu tei, tekur þátt í að stjórna öldrun og líftíma hjá neytendum. Í þessari rannsókn sýnum við að theaflavín gegna jákvæðu hlutverki við að koma í veg fyrir aldursbyrjun þarmalaka og dysbiosis og seinka þannig öldrun í Drosophila. Á vélrænan hátt stjórna theaflavín þéttisamsetningu Imd til að stjórna neikvæðri ofvirkjun Imd merkja í þörmum ávaxtaflugna. Að auki koma teaflavín í veg fyrir ristilbólgu af völdum DSS í músum, sem bendir til þess að teaflavín gegni hlutverki við að móta heilleika þarma. Á heildina litið leiðir rannsókn okkar í ljós sameindakerfi þar sem teaflavín stjórna jafnvægi í þörmum líklega með því að stjórna samruna Imd.

Vinsamlegast smelltu hér til að vita meira

KYNNING

Öldrun, sem einkennist af minnkandi lífeðlisfræðilegri starfsemi einstakra líffærakerfa og vaxandi hættu á sjúkdómum og dauða, felur í sér uppsöfnun á skemmdum á sameindum, frumum og vefjum (Alavez o.fl., 2011; Bartke o.fl., 2019; Engeet al., 2017). Að bera kennsl á hagnýt efni eða efni sem koma í veg fyrir líffræðilega hrörnun til að seinka öldrun og lengja líftíma er án efa lykilatriði (Bar-ardo o.fl., 2017; Kapahi o.fl., 2017). Fyrri rannsóknir hafa greint frá því að svart te, sem er mest neytt te í heiminum, hafi verulega starfsemi sem seinkar öldrun (Cameron o.fl.,2008; Fei o.fl.,2017; Kumar og Rizvi, 2017; Naumovski o.fl.,2019 ; Peng o.fl., 2009; Xiao o.fl., 2020). Fæðubótarefni með útdrætti af svörtu tei lengir á skilvirkan hátt líftíma tilraunadýra eins og orma (Feet al., 2017), ávaxtaflugur (Peng o.fl., 2009; Site al., 2011), músum (Site al., 2011). ; Xiao o.fl., 2020), og rottur (Kumar og Rizvi, 2017).

Það er vel þekkt að útdrættir úr svörtu tei innihalda aðallega tvenns konar plöntuefna, nefnilega katekín og teaflavín (TFs) (Cameron o.fl.,2008; Kondo o.fl.,2019; Li o.fl.,2013), hið síðarnefnda. eru framleidd úr katekínum með innrænum pólýfenól oxidasa og peroxidasa á oxunarferlinu í svart te framleiðslu (Li o.fl.,2013). Röð rannsókna hefur bent á öldrunarhlutverk katekínanna með því að bæta oxunarálag og aldurstengda bólgu og draga úr vefjaskemmdum (Cameron o.fl., 2008; Niu o.fl., 2013; Peng o.fl., 2009; Si o.fl. .2011; Waaner o.fl.,2015). Hins vegar hafa hagnýtar rannsóknir á framlagi TFs til öldrunar verið mjög eftirbátar þeim á katekínum, vegna þess að erfitt er að vinna nægilegt magn af TFs úr svörtu telaufum fyrir læknisfræðilegar rannsóknir (Takemoto og Takemoto, 2018). Nýlega hafa nokkrar líffræðilegar aðferðir verið þróaðar til fjöldaframleiðslu á TFs (Takemoto og Takemoto, 2018), sem gerir það mögulegt að kanna nákvæmlega líffræðileg áhrif TFs og undirliggjandi eftirlitskerfi.

Nýlega hafa vaxandi gagnasöfn bent á lykilhlutverk þörmanna í öldrun og líftímamótun (Guo o.fl., 2014; Jji o.fl., 2019; Maynard og Weinkove, 2018; Rothenberg og Zhang, 2019; Salazar o.fl. ,2018). Þarmaþekjan, sem virkar sem sértæk hindrun, gerir frásog næringarefna, jóna og vatns og takmarkar snertingu hýsils við skaðlegar einingar, þar á meðal örverur, mótefnavaka í mataræði og umhverfiseiturefni (Capo o.fl., 2019; Nicholson o.fl. , 2012; Ryu o.fl., 2010). Þarmavefur sem veltur mikið hjá einstaklingum veitir besta lífsumhverfið fyrir samlífa örverur, þar á meðal náttúrulegar loftfirrtar aðstæður, mikið af næringarefnum og hæfilegt hitastig og pH

Mynd 1. Theaflavin lengja líf Drosophila og auka klifurhæfileikann

(A og B) Kvenkyns ávaxtaflugur voru ræktaðar með stöðluðum fæðutegundum sem bætt var við 1 mg/ml eða 2,5 mg/ml af theaflavins (TFs) eða án TFs sem grunnefni. Flugur voru fluttar yfir í fersk hettuglös sem innihéldu nýtt efni annan hvern dag og dauðar flugur hafa skorað allan fullorðinsaldurinn. Lifunarferlar (A) og meðallengd (B) kvenflugna voru greind og sýnd.

(Cand D) Kvenkyns w18 voru fóðraðir með venjulegu Drosophila matvæli (vísað til Basal) eða með matvælum sem bætt var við 1mg/ml eða 2,5mg/ETF, í sömu röð. Sex sjálfstæðir hópar flugna á tilgreindum aldri (10 dagar, 30 dagar, 40 dagar og 50 dagar, í sömu röð) voru látnir fara í kaffistofuna (C) og flúrskinsfóðrun (D) próf. gildi, myndar veggskot sem tilteknar bakteríutegundir taka upp í líkamanum (Bonfini o.fl.,2016; Buchon o.fl., 2013; Nicholson o.fl., 2012). Á sama tíma hafa þessar samlífu örverur og umbrotsefni þeirra einnig beint eða óbeint áhrif á vinnslu næringarefna; melting og frásog; orkujafnvægi; ónæmisstarfsemi; þroski og þroski í meltingarvegi; og margar aðrar mikilvægar lífeðlisfræðilegar aðgerðir (Bonfini o.fl., 2016; Broderick, 2016; Maynard og VVeinkove, 2018; Nicholson o.fl., 2012). Gagnkvæmt samband milli samlífanna tveggja getur viðhaldið stöðugleika og kraftmiklu jafnvægi í örvistkerfi þarma (Bonfini o.fl., 2016; Brodeerick, 2016; Broderick o.fl., 2014; Guo o.fl., 2014; May-nard og Weinkove, 2018; Nicholson o.fl., 2012).

cistanche getur gegn öldrun

Röð rannsókna hefur sýnt að meðfædda ónæmissvörun er mikilvæg til að viðhalda jafnvægi örveru í þörmum og er varðveitt frá hryggleysingjum til hryggdýra (Guillouet al., 2016; Guo o.fl., 2014; Ryu o.fl., 2006, 2010; Vijay- Kumar o.fl., 2010). Í Drosophila eru tvær helstu boðleiðir, þ.e. Toll og ónæmisbrest (Imd) leiðir, þátt í meðfæddu ónæmissvörun (Lu o.fl., 2020; Myllymakiet al., 2014; Valanne o.fl., 2011). Athyglisvert er að Drosophila Toll ferillinn deilir líkindum við spendýra interleukin-1 viðtaka (IL-1R) og MyD88-háð Toll-like receptor (TLR) feril, en Imd ferillinn er svipuð til æxlisdrepsþáttarviðtaka (TNFR) ferilsins og TRIF-háða TLR ferilsins í spendýrum (Imler, 2014; Myllymaki o.fl., 2014; Valanne o.fl., 2011). Þessar tvær leiðir stjórna tjáningu örverueyðandi peptíða (AMP) með virkjun NF-KB umritunarþátta (Imler, 2014; Myllymaki o.fl., 2014; Valanne o.fl., 2011).lífflavonoidsImd boðleiðin er venjulega virkjuð með Gram-neikvæðri bakteríusýkingu og leiðir til tjáningar á öðru setti AMP, eins og Attacin, Cecropin og Diptericin (Kleino og Silverman, 2014; Myllymaki o.fl., 2014). Tjáning þessara AMPs krefst peptidoglycan recognition prótein (PGRP)-LC viðtakans í Imd ferlinum og merkjaháðrar klofnunar og kjarnaflutnings Relish, NF-kB fjölskyldu umritunarþáttar (Kleino og Silverman, 2014; Myllymaki o.fl., 2014). Nýleg rannsókn sýndi að amyloid myndun er nauðsynleg til að virkja Drosophila Imd ferlið við viðurkenningu á bakteríupeptíðóglýkönum (Kleino o.fl., 2017). Hins vegar er að mestu óþekkt hvort þessi Imd-þéttiefni á þátt í öðrum líffræðilegum ferlum, svo sem viðhaldi á jafnvægi í þörmum og öldrun.

Í þessari rannsókn notuðum við ávaxtaflugur og mýs sem dýralíkön til að rannsaka hlutverk TFs við að stjórna heilindum og öldrun þarma. Við sýndum fram á að TFs seinka offjölgun stofnfrumna í þörmum sem byrjar á aldrinum, vernda gegn dysbiosis í örveru í þörmum og koma í veg fyrir virkjun Imd boðferilsins og lengja þannig líftíma Drosophila. Frekari vélrænar rannsóknir bentu til þess að TFs leggi neikvæðan þátt í Imd merkjasendingar geta verið með því að hindra þéttingu Imd frekar en alls staðar. Ennfremur komumst við að því að TFs eru mjög áhrifaríkar til að koma í veg fyrir DSS-framkallaða ristilbólgu í músum. Samanlagt sýna niðurstöður okkar hugsanlegt hlutverk TFs í að móta Imd hegðun, sem gæti verið lykilþátturinn í jákvæðu framlagi þeirra til jafnvægis í þörmum og lengingu líftíma.

NIÐURSTÖÐUR

Fæðubótarefni fyrir theaflavin lengir líftíma Drosophila

Til að kanna hvort theaflavins (TFs) hafi áhrif á öldrun og líftíma í Drosophila, ræktuðum við kvenkyns w'118 flugur með venjulegu eldisfóðri sem var bætt við 1mg/ml eða 2,5mg/ml TFs og gerðum líftímaprófanir eins og áður hefur verið lýst (Ji o.fl. .,2019). Flugur sem fengu fæði sem bætt var við jafnmiklu magni af TFs leysi (H2O) voru taldar viðmið. Eins og sést á mynd 1A, lengti fæðubótarefni tiltölulega lágs styrks TFs (1 mg/ml) líftíma ávaxtaflugunnar lítillega og hár styrkur TFs (2,5 mg/ml) hafði marktæk jákvæð áhrif á lengd líftíma. Athyglisvert er að langtímaupptaka á háum styrk TFs (2,5 mg/ml) leiddi til um það bil 8 daga hækkunar á meðallíftíma kvenflugna (Mynd 1B), sem bendir til jákvæðs hlutverks TFsin við að stjórna langlífi í Drosophila. Svipaðar niðurstöður fengust þegar við prófuðum hugsanleg áhrif viðbótar TFs á líftíma karlkyns w'*''''8 flugna (myndir S1A og S1B).

Mynd 2. Theaflavin koma í veg fyrir truflun á meltingarvegi og örverusjúkdómur í Drosophila

(A og B) Tap á heilindum í þörmum var metið af Strumpaprófinu á aldrinum 10 daga, 30 daga, 40 daga og 50 daga hjá kvenkyns w18 fullorðnum. Dæmi um ekki Strumpa og Strumpa voru sýnd í (A). Hlutfall Strumpa í mismunandi tilgreindum hópum var greind og sýnd í (B).

(C) Bakteríufjöldi vistuð með qPCR af 16S rRNA geninu í kvenkyns w18 skrám frá mismunandi tilgreindum hópum var greind og sýnd.

(DF) Raðgreining á 16S rRNA geninu af commensal bakteríu var gerð. Hlutföll bakteríutaxa (D), hitakort af helstu örverutegundum (F) og hlutfallslegt magn gammaproteobacteria (F) voru greind og kynnt.

Mynd 2. Framhald

(G og H) Þarmar voru krufnir úr tilgreindum kvenflugum sem voru fóðraðar með 2,5 mg/ml TFs eða án TFs sem viðmiðunar við 10 daga og 40 daga aldur. Myndir af miðþörmum voru teknar með flúrljómunarsmásjá fyrir GFP merki (G). Tölfræðileg greining sem sýnir hlutfall GFP-jákvæðra frumna er sýnd í (H).

(I) Innyfli úr tilgreindum kvenflugum var safnað saman og þær gerðar ónæmislitunarprófanir þar sem notuð voru mótefni gegn fosfórýleruðu Histon 3(pH3) Tölfræðilegar niðurstöður sem mæla pH 3-jákvæðar frumur í hverri þörmum voru greindar og sýndar. Í B, C, H og eru gögn greind með tvíhliða nemendaprófi og eru sýnd sem meðaltal ± SEM.NS, ekki marktækt,*p<><0.001. see="" also="" figure="">

ETFs hafa verið þekkt fyrir að hafa beiskt bragð og bitur matur er venjulega forðast af bæði neytendum, þar á meðal ávaxtaflugum og spendýrum (Yamazaki o.fl., 2014; Yang o.fl., 2018). Við leituðum síðan að skýra hvort TFs geti haft áhrif á Drosophila fæðuinntöku, vegna þess að fyrri rannsóknir hafa sannað að takmörkun á fæðu leiðir til lengri líftíma bæði hjá hryggdýrum og hryggleysingjum (Hudry o.fl., 2019; Kapahi o.fl., 2017; Moger-Reischer o.fl. ., 2020). Til að gera þetta gerðum við fyrst kaffihúsagreininguna, sem er mikið notuð aðferð til að mæla fóðrunarhraðann beint og nákvæmlega með því að nota háræðamatara sem inniheldur fljótandi miðil, eins og áður hefur verið lýst (Ja o.fl., 2007). Eins og sýnt er á myndum 1C og S1C, breytti fæðubótarefni TFs (1 mg/ml og 2,5 mg/ml, í sömu röð) varla fæðuneyslu prófaðra flugna. Til að staðfesta þetta enn frekar notuðum við flúrskinsefni sem fæðuspor (Rera o.fl., 2012; Wang o.fl., 2005) og gerðum náttúrulega fæðugreiningu (Danilov o.fl., 2015). Eins og sýnt er á myndum 1D og S1D tókst okkur ekki að fylgjast með neinum fylgni milli TFs viðbót og magn fæðuinntöku. Samanlagt bentu niðurstöður okkar til þess að gagnlegt hlutverk TFs við að lengja líftíma gæti ekki verið vegna takmarkana á mataræði í Drosophila.

Viðbótar TF eru ómissandi til að hafa áhrif á Drosophila orkujafnvægi

Því hefur verið haldið fram að pólýfenól úr svörtu tei hafi jákvæð áhrif á að koma í veg fyrir offitu með því að hindra meltingu, frásog og inntöku fitu og sykrna, og draga þannig úr kaloríuinntöku (Cameron o.fl., 2008). Við leituðum síðan að skýra hvort TFs-stýrð LDrosophila líftímalenging sé vegna breytinga á upptöku næringarefna og orkugeymslu. Til að gera þetta skoðuðum við fyrst magn tríacýlglýseríðs (TAG), eitt algengasta fituumbrotsefnið (Tennessen o.fl., 2014), í kvenflugum allt sitt líf eins og áður hefur verið lýst (Fan o.fl., 2017).kaupa cistancheEins og sýnt er á mynd 1E hafði meðferð á TFs varla áhrif á heildarmagn TAG á mismunandi aldursstigum. Þegar við fundum frekar glýkógeninnihald og magngreindum kolvetni í blóðrás (glúkósa og trehalósa) með Hexokinase settinu (Li o.fl., 2018; Ten-nessen o.fl., 2014), sýndu niðurstöðurnar að engar augljósar breytingar voru á milli sýna með eða án TFs meðferðar (myndir 1F-1H). Athygli vekur að samkvæmar niðurstöður fengust þegar við skoðuðum efnaskiptasvipgerðir með því að nota karlkyns w118 sem dýralíkön (myndir S1E-S1H). Samanlagt bentu þessar upplýsingar til þess að fæðubótarefni TFs sé ómissandi til að stjórna kolvetna- og orkujafnvægi allan líftíma Drosophila.

Við könnuðum frekar hreyfihvörf náttúrulegrar öldrunar Drosophila undir inngripi TFs í mataræði með því að framkvæma hröð endurtekin neikvæð geotaxi (RING) próf eins og áður hefur verið lýst (Dilliane o.fl., 2017; Staats o.fl., 2018). Eins og sýnt er á myndum 1l, 1J, S1l og S1J, voru klifurvísitölur aldraðra (40 daga) w1118 (bæði konur og karlar) í TFs bætiefnahópum verulega bættar (næstum 12 prósent aukning hjá konum og næstum 18 prósent hækkun hjá körlum ) samanborið við samanburðarhópa, sem bendir til þess að TFs geti hugsanlega bætt Drosophila klifur og hreyfivirkni.

Theaflavin koma í veg fyrir aldursleka í meltingarvegi og örverusjúkdómur

Fyrri rannsóknir hafa sýnt að hreyfivirkni ávaxtaflugna og líftími er mjög tengdur heilsufari gestgjafans, svo sem kyni, mataræði, aldri og arfgerð (Caruso o.fl., 2013; Heintz og Mair, 2014). Nýlega hafa nokkrar vísbendingar sannað að varðveisla Imd-merkjajafnvægis í þörmum bætir heilleika í þörmum með því að koma í veg fyrir offjölgun ISC og forverafrumna og með því að seinka aldursbrest í þekjuvef í þörmum, sem aftur stuðlar jákvætt að heilsu lífvera (Clark o.fl. , 2015; Guo o.fl., 2014). Hjá Drosophila er styttur líftími nátengdur truflun á þekjuþekjuþekju í þörmum og þróun heilleika þessarar hindrunar við öldrun hefur í för með sér lengingu líftíma (Clark o.fl., 2015; Guoet al., 2014; Jet al., 2019). Þannig reyndum við að ákvarða hvort TFs breyti heilleika þörmanna með því að framkvæma Strumpaprófið, aðferð sem hefur verið lýst áður (Clark o.fl., 2015; Rera o.fl., 2011). Eins og sýnt er á mynd 2A, voru prófaðar ávaxtaflugur þar sem blá litarefni voru takmörkuð við meltingarveginn nefndur ekki Strumpa (vinstra spjaldið á mynd 2A). Ef blá litarefni sáust

Mynd 3. Framhald

(EG) Þarmar voru einangraðir úr kvenkyns w1118 skrám sem fengu 2,5 mg/ml TFs eða án TFs sem grunn við 10 daga, 30 daga, 40 daga og 50 daga aldur, í sömu röð. Heildar-RNA var dregið út og gert aRT-PCR greiningu. MRNA tjáningarstig diptericin (F), attacín (F) og cecropin A1(G) voru greind og sýnd. Í EG eru gögn greind með tvíhliða t-prófi nemenda og sýnd sem meðaltal ± SEM.NS, ekki marktækt, *p<><><0.001. see="" also="" figure="">

leki út úr þörmunum inn í kviðinn, voru hýsarnir taldir sem Strumpa (hægri spjaldið á mynd 2A). Í samræmi við fyrri niðurstöður (Clark o.fl.,2015), jukust hlutföll Strumpa smám saman við öldrun (Mynd 2B). Athyglisvert er að hlutfall fullorðinna strumpa lækkuðu verulega í hópum sem fengu TFs samanborið við aldurssamhæfða viðmiðunarhópa hjá báðum konum (úr 8,2 prósentum í 3,7 prósent, úr 19,4 prósentum í 15,6 prósent og úr 35,4 prósentum í 27,1 prósent fyrir hópa. við 30 daga, 40 daga og 50 daga aldur, í sömu röð, mynd 2B) og fullorðnir karlmenn (frá 2,7 prósentum í 0,9 prósent, frá 6,9 prósentum í 0,9 prósent og frá 8,3 prósentum í 2,7 prósent við 30 ára aldur daga, 40 dagar og 50 dagar, í sömu röð, mynd S2A), sem gefur til kynna að TFs geti komið í veg fyrir truflun á þörmum í þörmum í öldruðum ávaxtaflugum. Athygli vekur að við sáum meiri lækkun á Strumpahlutfalli hjá körlum (minnkaði um tæp 65,8 prósent, 86,9 prósent og 67,4 prósent á aldrinum 30 daga, 40 daga og 50 daga, í sömu röð) en þeir sem eru á aldrinum -samsvörun kvendýra (minnkaði um næstum 54,1 prósent, 19,5 prósent og 23,3 prósent á aldrinum 30 daga, 40 daga og 50 daga, í sömu röð), sem gefur til kynna að TFs gætu gegnt betra hlutverki við að lækka leka í þörmum í karlflugum.

Fyrri rannsóknir hafa bent til þess að truflun á þörmum í þörmum sem myndast á aldrinum sé oft í tengslum við röskun á örveru í þörmum (Clark o.fl., 2015; Guo o.fl., 2014). Þannig skoðuðum við gerlasamsetningu þarma eftir TFs viðbót. Við notuðum fyrst alhliða primera og gerðum megindlegar PCR tilraunir til að mæla magn 16S rRNA gena baktería. Eins og sést á mynd 2C, í aldursskurði, sýndi heildarbakteríaþýði frá TFs íhlutunarhópum sláandi minnkun (tæplega 45 prósent -55 prósent) samanborið við viðmiðunarhópa, sem bendir til þess að TFs viðbót komi líklega í veg fyrir stækkun örveru við öldrun . Síðan gerðum við metagenomics til að skoða ítarlega breytingar á örverusamfélagi þarma af völdum fæðubótarefna með TFs. Eins og sýnt er á myndum 2D-2F, var hlutfall gammaproteobacteria, sem reyndist vera nátengd bilun í þörmum (Clark o. tæplega 7 prósenta lækkun), sem gefur til kynna að TFs stuðla jákvætt að jafnvægi í örveru í þörmum við öldrun í Drosophila.

Theaflavins bæta fjölgunarjafnvægi í þörmum í Drosophila

We further examined the intestinal integrity of flies that were treated with or without TFs. First, we employed the widely-used P{Esg-Gal4}/P{Uasp-GFP};{Tub-Gal80*s}strain(referred to as esgts>GFP), þar sem stofnfrumurnar í þörmunum (ISC) og forfrumurnar voru merktar með GFP. Eins og sýnt er á myndum 2G og 2H var fjöldi GFP-jákvæðra frumna í TFs íhlutunarhópum við 40 daga aldur (20 þarmar voru taldir) mun minni (tæplega 29,7 prósent) en í aldurssamsvöruðu viðmiðunum (tæplega 47,6 prósent og 19 þarmar voru taldir), sem bendir til þess að TFs gætu hamlað aldursbyrjun offjölgun ISCs. Ennfremur gerðum við ónæmislitunartilraunir með því að nota mótefni gegn Phospho-Histone 3(pH3), sértæku merki fyrir mítósufrumur í þarmavef. Við sáum færri pH-3-jákvæðar frumur í þörmum frá fullorðnum TFs-bættum fullorðnum (meðaltalan var 20,6) en í þeim frá viðmiðunarhópnum (meðaltalan var 39,5, mynd 2). Samanlagt benda niðurstöður okkar til þess að fæðubótarefni með TFs bæti fjölgunarjafnvægi í þörmum og komi í veg fyrir aldursdreifingu á örveru, og seinkar þannig öldrun í Drosophila.

Theaflavin mótar Imd boð í þörmum á neikvætt

Til að kanna undirliggjandi sameindaaðferðir sem TFs stuðla jákvætt að Drosophila þarmajafnvægi, gerðum við RNA-seq greiningu með því að nota aldurssamsvörun þarmasýni úr kvenkyns w1118 fullorðnum sem voru meðhöndlaðir með eða án TFs. Brota á hverja kílóbasa á milljón (FPKM) greiningar bentu til þess að heildargenatjáningarmynstrið væri svipað á milli tilraunahópanna tveggja (Mynd 3A). Frekari mismunatjáningargreining greindi hins vegar alls 229 gen sem tjáðust með mismunandi hætti, þar af 99 með uppstýringu og 126 með niðurstýringu (mynd 3B). Athyglisvert er að genagreining á þessum genum leiddi í ljós að ónæmissvörunarferillinn var mjög breyttur með fæðubótarefnum með TFs (Mynd 3C).

Í Drosophila hefur verið sýnt fram á að meðfæddir ónæmisboðaleiðir gegna ríkjandi hlutverki við að stjórna aldursbyrjun þarmajafnvægis og langlífi (Clark o.fl., 2015; Guo o.fl., 2014). Við einbeittum okkur síðan að því að skoða tjáningarmynstur örverueyðandi peptíða (AMPs) neðan við meðfædda ónæmismerkin. Eins og sýnt er

Mynd 4. Framhald

(D) Hreinsuð Imd prótein voru ræktuð með ýmsum styrkjum af TFs (50 uM, 100 uM, og 200 uM, í sömu röð) við stofuhita í 5 mínútur. Sýni voru síðan gefin í flúrljómunarrófsgreiningu með því að nota tilgreindar bylgjulengdir (örvun við 430 nm, losun frá 450 nm til 550 nm með 5 nm raufbreidd). Sýni án TFs var notað sem grunnlínuviðmið.

（E and F）Lysates of guts from NP11>Myc-Imd flugur voru útbúnar og ræktaðar með TFs (100μM) við stofuhita í 30 mín. SDD-AGE (efri spjaldið í E) og SDS-PAGE (neðri spjaldið í E) voru gerðar til að greina Imd próteinsamstæður. Túbúlín var notað sem hleðslustýring.cistanchÞéttmælagreining var gerð til að mæla Imd þéttiefni í mismunandi sýnum og niðurstöðurnar voru sýndar í (F). (G) Dæmigerð litskiljun af TFs sýni.

（H og I） Hreinsuð Flag-Imd prótein voru ræktuð með TFs, TF1, TF2a, TF2b eða TF3 (100 μM fyrir hvert sýni) eða með jöfnu rúmmáli af jafnalausn (eftirlit) við stofuhita í 30 mínútur eins og gefið er til kynna. Sýni voru síðan gefin í SDD-AGE (efri spjaldið í H) og SDS-PAGE (neðri spjaldið í H) prófunum til að ákvarða samsöfnunarmynstur Imd. Þéttmælagreining til að mæla Imd þéttiefni í mismunandi sýnum var framkvæmd og sýnd í (). Í C, F og I eru gögn greind með tvíhliða prófi nemenda og sýnd sem meðaltal ± SEM.***p< 0.001.="" see="" also="" figure="">

á mynd 3D, AMP gen sem stjórnast af ónæmisskortsferlinu (Imd), þar á meðal diptericin A (DptA), dip-tericin B(DptB), attacín A(AttA), cecropin A1 (CecA1), cecropin A2(CecA2) og cecropin C (Cece), lækkaði marktækt (um 39,4 prósent, 72,3 prósent, 10,5 prósent, 86,5 prósent, 99,8 prósent, og 36,1 prósent, í sömu röð) í hópum sem fengu meðferð með TFs samanborið við samanburðarhópana. Til að staðfesta enn frekar niðurstöðurnar sem fengust úr RNA-seq greiningu, framkvæmdum við megindlega umritun-pólýmerasa keðjuverkun (gRT-PCR) til að mæla hlutfallslegt tjáningarstig Imd-tengdra AMP gena í Drosophila þörmum sem fengust á fjórum mismunandi aldursstigum þar á meðal 10 dagar, 30 dagar, 40 dagar og 50 dagar. Eins og sést á myndum 3E-3G var mRNA tjáningarstig ákveðinna gena, þar á meðal diptericin, attacín og cecropin A1, verulega lækkað (um tæplega 35,9 prósent -66.6 prósent) hjá TFs sem fengu meðferð. aldraður þörmum. Sameiginlega leiddu gögn okkar í ljós að TFs stöðvuðu hugsanlega virkjun Imd boðleiðar í Drosophila þörmum við öldrun.

Theaflavín eru ómissandi til umritunarstjórnunar á Imd ferlinum eða alls staðar nálægð Imd

Við leituðumst við að skoða tengsl milli TFs og Imd og framkvæmdum yfirborðsplasmon resonance (SPR) prófið eins og áður hefur verið lýst (Lan o.fl., 2020). Eins og sýnt er á mynd 4A. TFs sýndu miðlungs bindisækni við hreinsað Imd prótein við áætlaðan Kp stöðuga 8,078 uM. Síðan höfum við tilhneigingu til að ákvarða hvernig TFs stjórna Imd-boðaleiðinni í þörmum. Byggt á niðurstöðum umritsgreiningar úr RNA-seq gögnum, komumst við að því að tjáningarstig helstu stjórnunarþátta í Imd merkjaleiðinni, eins og PGRP-LC, Imd og Relish, var varla breytt við TFs meðferð (Mynd S3A ). Við söfnuðum frekar þarmasýnum úr flugum sem fengu fæðubótarefni með eða án TFs á ýmsum aldri og gerðum qRT-PCR tilraunir til að greina sérstaklega tjáningarmynstur þessara gena. Eins og sýnt er á mynd S3B var mRNA-magn ákveðinna gena, þar á meðal effete, dofnað, tak1, pgrp-Ica, uev1a, beygjulaust, relish, imd, pgrp-sc2, tab2, ird5 Kenny og diap2, svipað á milli viðmiðunarhópanna og TFs íhlutunarhópa, sem bendir til þess að TFs taki ekki þátt í að stjórna Imd merkjum á umritunarstigi.

Næst skoðuðum við Imd ubiquitination sniðin vegna þess að fyrri rannsóknir hafa bent til þess að ubigui-tination á Imd sé nauðsynleg fyrir niðurstreymis merkjaflutning í Imd leiðinni (Myllymaki o.fl., 2014; Zhou o.fl., 2005). Við gerðum fyrst in vitro E1 breytingapróf og komumst að því að meðferð með TFs hefur engin sýnileg áhrif á ensímhvörf E1 og ubiquitin til að mynda samtengda E1 / Ub (Mynd S4A). Ennfremur transfjótum við Drosophila S2 frumur með plasmíðum sem tjá Flag-merkt Imd ásamt HA-merktu Ub og meðhöndluðum síðan frumurnar með eða án TFs. Frekari alls staðar mælingar bentu til þess að viðbót við TFs hefði varla áhrif á magn alls staðar nálægs Imd í ræktuðum frumum (myndir S4B og S4C). Til að ákvarða tengslin milli TFs og Imd ubiquitination in vivo, notuðum við erfðabreyttu fluguna P {NP1-Gal4}/P{Uasp-Myc-Imd};P{Tub-Gal80*} (vísað til sem NP1* s > Myc-Imd), þar sem Myc-merkt Imd prótein var mjög tjáð í þörmum (Mynd S4D). Allstaðartilraunir okkar sýndu að fæðubótarefni með TFs var ómissandi til að móta alls staðar nálægð Imd í þarmavef (myndir S4D og S4E). Samanlagt bentu niðurstöður okkar til þess að TFs stjórna Drosophila Imd merkjum á neikvæðan hátt með því að hafa ekki áhrif á hvarvetnamynstur Imd.

Theaflavins koma í veg fyrir Imd þéttisamsetningu

Nýleg rannsókn benti til þess að samsöfnun Imd sé nauðsynleg til að virkja gena niðurstreymis í Imd ferlinum (Kleino o.fl., 2017). Við leituðumst síðan við að kanna hvort TFs stjórni ferlinu við

Mynd 5. Framhald

(F og G) Kvenkyns w18 (vísað til sem imd plús / plús), imd' arfblendnar og arfhreinir stökkbrigði (vísað til sem imd plús /- og imd-/-, í sömu röð) voru alin staðlað Drosophila matvæli (vísað til sem basal) eða fæðubótarefni með 2,5 mg/ml (vísað til sem TFs) og voru síðan látin fara í lífstímapróf Lifun (F) og meðallengd (G) voru greind og sýnd.

Í og F var Log Rank prófið notað til tölfræðilegrar greiningar. Í BE, og, var tvíhliða t-próf ​​nemenda notað til tölfræðilegrar greiningar og gögn eru sh sem meðaltal ± SEM. NS, ekki marktækur, *bls<0.05, **p="" <="" 0.01,=""><0.001. see="" also="" figure="">

Imd samanlagður myndun. Fyrst hreinsuðum við Myc-merkt Imd prótein úr ræktuðum S2 frumum og ræktuðum próteinin með mismunandi styrk af TFs (Mynd 4B). Athyglisvert er að við komumst að því að TFs komu verulega í veg fyrir samsöfnun Imd (minnkaði um 81,7 prósent -89.7 prósent, myndir 4B og 4C), eins og gefið er til kynna með hálfnáttúrandi þvottaefni agarósa gel rafdrætti (SDD-AGE) prófunum okkar. Til að staðfesta þessa niðurstöðu, framkvæmdum við frekar thioflavin-T bindipróf og fengum samkvæmar niðurstöður (Mynd 4D). Síðast ræktuðum við NP1ts > Myc-Imd erfðabreyttar flugur sem fengu fæðubótarefni með eða án TFs og söfnuðum þarmasýnum frá fullorðnum fullorðnum. SDD-AGE tilraunirnar bentu til þess að samsöfnun Imd væri mjög lækkuð af TFs í þarmafrumum (minnkaði um 16,7 prósent -22 prósent, myndir 4E og 4F).

Til að ákvarða hvernig TFs stuðla að því að stjórna Imd þéttisamsetningu, lögðum við TFs í HPLCanal-ysis og komumst að því að þeir innihéldu aðallega fjórar tegundir einliða (Mynd 4G), þ.e. theaflavin (TF1), theaflavin 3-O-gallate ( TF2a), theaflavin 3'-O-gallate (TF2b) og theaflavin 3,3'-di-O-gallate (TF3), sem voru í samræmi við fyrri skýrslur (Li o.fl., 2013; Takemoto og Takemoto, 2018) . Síðan ræktuðum við hvert þessara efna með hreinsuðu Imdproteini og gerðum SDD-AGE tilraunir. Eins og sýnt er á myndum 4H og 4l leiddi meðferð allra þessara TF einliða til marktækrar lækkunar (um 59,5 prósent , 60,9 prósent , 58,4 prósent ,58,2 prósent . og 55,8 prósent fyrir TFs, TF1, TF2a, TF2b og TF3, í sömu röð) í Imd samanlagðar stigin. Samanlagt bentu niðurstöður okkar til þess að TFs stjórni Drosophila Imd merkjaleiðinni á neikvæðan hátt, líklega með því að stjórna hegðun Imd þéttiefna.

Theaflavin lengja líftíma Drosophila á Imd-háðan hátt

To examine whether TFs prolong Drosophila lifespan depending on their regulatory role in Imd, we specifically knocked down Imd in gut tissues using the transgenic flies P{NP1-gal4)PITub-gal80*}/P{Uasp-imd-IR(KK)} (referred to as Imd RNAi). As shown in Figures 5A and 5B, dietary supplementation of TFs extended the lifespan of controls (elevation of nearly 7.2 days in the mean lifespan), whereas prevention of Imd expression in guts apparently reversed the lifespan extension caused by TFs. Consistent results were obtained when we utilized male Imd RNAi and control flies to perform lifespan assays (Figures S5A and S5B). Further qRT-PCR assays showed that the mRNA expression levels of AMP genes at ages of 10 days, 30 days, 40 days, and 50 days, including diptericin, attacin, and cecropin A1.hardly changed in the gut tissues of Imd RNAi flies(Figures 5C-5E), whereas additional TFs caused reductions of 31%-72.3% in mRNA abundances of these genes in samples from control groups. To confirm these results from Imd RNAi flies, we first performed lifespan assays using w18(control, referred to as imd+/+), imd' heterozygous (referred to as imd+/-), and homozygous(referred as imd-/-)mutant flies. We found that TFs addition extended lifespan and increased mean life longevity of imd+/-flies (elevation of nearly 6.2 days, Figures 5F and 5G). However, this lifespan extension effect by TFs was almost abolished in imd-/-flies (Figures 5F and 5G). Next, we performed lifespan assays utilizing Relish RNAi(NP1's>Relish RNAi and control(NP1ts>plús )flugur. vegna þess að Relish er lykilumritunarþátturinn sem ber ábyrgð á tjáningu Imd-downstream AMP gena(Myllymaki o.fl.,2014). Eins og sýnt er í Fiqures S5C og S5D. Fæðubótarefni TFs lengja verulega langlífi eftirlitsflugna og var verulega komið í veg fyrir þessa lengingu á líftíma hjá Relish RNAi flugum. Samanlagt bentu gögn okkar til þess að fæðubótarefni með TFs stuðlar jákvætt að líftíma Drosophila, sem líklega fer eftir Imd-merkjum í þörmum.

Til þess að sjá hvort lenging líftíma með TFstill á sér stað í axenískum bakgrunni, gerðum við lífstímamælingar með því að nota w1118 kvendýr við axenískar aðstæður. Eins og sést á myndum S5E og S5F hafði það að bæta við mismunandi styrkleika TFs (1 mg/ml og 2,5 mg/ml) varla áhrif á hlutföll dánartíðni og meðallífslífs hjá fullorðnum w18. Vegna þess að axenísk uppeldisskilyrði geta að mestu komið í veg fyrir mikla örveru, og takmarkað þannig Imd merki í niðurskurði (Clarke al., 2015), gáfu gögn okkar til kynna að TFs lengja líftíma Drosophila gæti verið með mótun á meðfæddum ónæmismerkjum í þörmum.

Mynd 6. Theaflavín draga úr DSS af völdum ristilbólgu í CD-1 músum

(A) Meðferð með TFs hafði ekki áhrif á vatnsnotkun í ýmsum hópum CD-1 músa.

(BD) Notkun á ýmsum styrkjum TFs (1 mg/ml, 2,5 mg/ml, og 5 mg/ml, í sömu röð) bætti styttingu ristilsins og stækkun milta af völdum DSS í CD-1 músum. Sýndar voru dæmigerðar myndir (B) og tölfræðilegar greiningar á ristli (C) og milta (D). (E) Gjöf mismunandi styrkleika TFs (1 mg/ml, 2,5 mg/ml, og 5 mg/ml, í sömu röð) kom í veg fyrir leka í þörmum af völdum DSS í CD-1 músum. (F og G) Ristillum var safnað úr tilgreindum hópum músa. Heildar-RNA var dregið út og gert með qRT-PCR prófum til að greina mRNA tjáningarmagn TNFa(F) og IL-6 (G).

(HL) Ristill úr ýmsum hópum músa var safnað á lengdina og látnir fara í HE-litunarpróf. Sýni voru skoðuð með smásjá og dæmigerðar myndir af tilgreindum sýnum （HL） voru fengnar og sýndar. Kvarðastangir, 40 μm. (M-Q') SEM myndir sem sýna míkrótríkóma ristils úr mismunandi sýndum sýnum. Kvarðastikur, 50 um (MQ) og 4 um (M'-Q').

Í CG eru gögn greind með tvíhliða nemendaprófi og sýnd sem meðaltal ± SEM.NS, ekki marktækt, *p<><><0.001. see="" also="" figure="">

Theaflavín draga úr ristilbólgu af völdum DSS í CD-1 músum

Til að kanna frekar hugsanlegt hlutverk TFs við að viðhalda jafnvægi í þörmum í spendýrum voru CD-1 mýs notaðar til að framkalla ristilbólgu með dextran súlfatnatríum (DSS). Mýs voru gefin í maga mismunandi styrk af TFs (1 g/L, 2,5 g/L eða 5 a/L) eða vatni sem viðmiðunarefni í fjórar vikur, fylgt eftir með meðferð með 2 prósent DSS í drykkjarvatni í 7 daga. Til að sjá hvort TFs hafi áhrif á drykkjarmagn DSS yfir mismunandi hópa músa, fylgdumst við með drykkju músa á hverjum degi. Eins og sýnt er í Fiqure6A, er meðferð með TFs ómissandi til að hafa áhrif á drykkjarneyslu hjá DSS-völdum ristilbólgumúsum, DSS-meðhöndlaðar mýs sýndu ristilbólguheilkenni með niðurgangi og/eða hematochezia, sem var komið í veg fyrir með skammtaháðri TFs meðferð (myndir S6A-S6E).cistanche ÁstralíuÞar að auki bjargaði inngrip með TFs minnkun á lengd ristils af völdum DSS og bætti stækkun milta (myndir 6B-6D).

Við notuðum síðan dextran-4000-FITC (FITC-DX) til að kanna virkni þörmanna í þessum músum. Eins og sýnt er á mynd 6E, sýndu mýs úr DSS-meðhöndluðu hópunum háan styrk af FITC-DX í blóðsýnum, sem bendir til leka í þörmum í þessum dýrum. Hins vegar kom inngrip með TFs í veg fyrir flutning FITC-DX frá meltingarlíffærum inn í blóðrásarkerfi (minnkað um 56,1 prósent -77,5 prósent, mynd 6E). Sérstaklega breytti gjöf TFs ekki gegndræpi í þörmum músa við venjulegar aðstæður (Mynd S6F). Vegna þess að bólga gegnir lykilhlutverki í ristilbólguþróun músalíkans, gerðum við frekar qRT-PCR tilraunir, sem sýndu að TFs meðferð dró verulega niður IL-6 og TNF tjáningu í þörmum DSS-meðhöndlaðra músa (myndir 6F og 6G).

Til að greina frekar meinafræðilegar breytingar í ristli, gerðum við hematoxylin-eosin (HE) litunarpróf. Eins og sýnt er á myndum 6H-6L og S6G-S6J var alvarlegum þekjuskemmdum af völdum DSS batnað verulega með meðferð með TFs á skammtaháðan hátt. Skanna rafeindasmásjármyndataka af þessum þarmasýnum gaf enn frekar samræmdar niðurstöður (myndir 6M-6Q' og S6K-S6N'). Samanlagt bentu niðurstöður okkar til þess að TFs gegna jákvæðu hlutverki við að vernda þarmahindranir í bæði skordýrum og spendýrum.

UMRÆÐA

Í þessari rannsókn könnuðum við lífeðlisfræðilega virkni TFs við að stilla jafnvægi á þarma og langlífi og undirliggjandi sameindakerfi. Við sýndum fram á að fæðubótarefni með TFs stuðlar á jákvæðan hátt að því að koma í veg fyrir aldursdreifingu í örveru í þörmum og seinkun á truflun á þekjuþekju í þörmum og lengja þannig líftíma Drosophila. In vitro og in vivo vélrænni rannsóknir okkar leiddu í ljós að TFs gegna líklega neikvæðu hlutverki við að stjórna Imd merkjaleiðinni með því að hindra samruna Imd. Ennfremur komumst við að því að DSS-framkallað ristilbólga er á skilvirkan hátt hægt að lina með TFs viðbót í CD-1 músum. Niðurstöður okkar styðja þá hugmynd að TFs stuðli á hagstæðan hátt að jafnvægi í þörmum í bæði hryggleysingjum og hryggdýrum.

Fæðubótarefni með theaflavini lengir líftíma Drosophila

Teneysla er vinsæl um allan heim og er næst á eftir vatnsneyslu (Rothenberg og Zhang, 2019). Fjölmargar rannsóknir hafa beinst að lífeðlisfræðilegri virkni, oft með bæði tilrauna- og klínískum aðferðum (Cameron o.fl., 2008; Niu o.fl., 2013; Peng o.fl., 2009; Rothenberg og Zhang. 2019; Spindleret al., 2013; Takemoto. og Takemoto, 2018; Unno o.fl., 2020; Zhou o.fl., 2020. Það hefur verið sýnt fram á að te gagnast heilsunni með því að lækka blóðfitumagn og með offituáhrifum, og helstu virku efnasamböndin í tei eru katekín, sérstaklega epigallocatechin gallate (EGCG)(Abbas og Wink,2009; Modernelli o.fl.,2015; Niu o.fl.,2013; Wagner o.fl.,2015; Xiong o.fl.,2018). Fyrri rannsóknir hafa einnig bent til þess að grænt te og svart te getur aukið heilsutíma og líftíma ávaxtaflugna (Site al., 2011; Wagner o.fl., 2015), orma (Fei o.fl., 2017; Xiong o.fl., 2018) og rotta (Imran o.fl. .,2018; Niu etal.2013). og helsta stjórnunaraðferðin er árangursrík forvarnir gegn oxunarálagi með EGCG með mótun ROS-merkja.cistanche ávinningur,Hins vegar, hvort TFs, sem einkennandi "gyllta" efnasamböndin í svörtu tei, gegna hlutverki við að stjórna öldrun og líftíma er að mestu óþekkt. Þessi rannsókn gefur sannfærandi vísbendingar sem benda til þess að inngrip TFs sé ómissandi til að hafa áhrif á fæðuinntöku, og langtímaupptaka TFs í gegnum mataræði lengir verulega líftíma bæði karlkyns og kvenkyns ávaxtaflugna. Þessar niðurstöður veita leiðbeiningar um frekari rannsóknir á virkni TFs í langlífi spendýra.

Theaflavín bæta aldursbyrjun örverusjúkdóma og stuðla að jafnvægi í þörmum. Stigvaxandi ójafnvægi á fjölgunarjafnvægi og endurnýjunargetu er aðalsmerki öldrunar og sjúkdóma sem hefjast á aldrinum (Clark o.fl., 2015; Heintz og Mair, 2014; Maynard og Weinkove, Rera, 2018; o.fl. 2012). Langvinn bólga tengist tapi á jafnvægi og aukinni tíðni krabbameins í öldruðum lífverum (Bartke o.fl., 2019; Kapahi o.fl., 2017; Xiao o.fl., 2020). Þetta er sérstaklega mikilvægt í þekjuþekju á hindrunum eins og þarmaþekju (Guo o.fl., 2014; Maynard og Weinkove, 2018). Með líkani fyrir þróun aldurstengdrar dysplasia í öldrunarþörmum, sýndum við fram á að bætt víxlverkun hýsils og samskipta í öldrunarhindrunarþekju gæti stuðlað að heilsu og líftíma. Við notuðum fjölda óífarandi aðferða til að greina þarmastarfsemi og gangverki örvera við öldrun. Í fyrsta lagi gaf Strumpagreiningin til kynna jákvætt hlutverk TFs við að stjórna truflun á þekjuhindrunum við öldrun. Síðan leiddi ónæmislitunargreiningin með nokkrum erfðabreyttum flugum í ljós að TFs seinka offjölgun ISCs og veltu sérhæfðra frumna. Að lokum benti raðgreining á örverunni til þess að TFs lækka aldursbyrjun stækkunar commensal örflóru þarma. Þessar niðurstöður bentu eindregið til þess að TFs gegna lykilhlutverki við að seinka öldrunarferli hýsilsins með því að viðhalda jafnvægi í þörmum.

Theaflavin dregur úr óhóflegri ónæmissvörun í þörmum með því að hafa neikvæð stjórnun á Imd-boðum

Því hefur verið haldið fram að viðhalda þurfi viðkvæmu jafnvægi milli ónæmisvirkni í þörmum og örveru til að tryggja langtímajafnvægi hindrunarþekju (Guo o.fl., 2014; Maynard og Weinkove, 2018). Fyrri rannsóknir hafa einnig sýnt að langvarandi óhófleg bólga í þörmum tengist aldurstengdri vanstarfsemi í þekjuþekju og er einkenni öldrunar (Clark o.fl., 2015; Guo o.fl., 2014; Ji o.fl., 2019) . Þannig er vænleg nálgun til að efla heilbrigði og langlífi að viðhalda heilbrigðum miðlægum íbúa með því að varðveita meðfædda ónæmisjafnvægi í slíkum þekju (Bonfini o.fl., 2016; Broderick, 2016; Clark o.fl., 2015). Að kanna sameindakerfin með því að hvaða TFs seinka öldrun, gerðum við RNA-seq greiningu með því að nota krufða þörm með eða án TFs meðferð. Gögn okkar bentu til þess að hópur gena sem voru mjög tjáðir í þörmum samanburðarávaxtaflugna samanborið við dýr sem fengu TFs væri auðgaður með genum sem flokkast sem „ónæmissvörun“ genum. Frekari lífupplýsingagreining og get-PCR mælingar leiddu í ljós að tjáning á Imd-tengdum AMP genum var verulega hamlað með því að bæta við mataræði TFs. Niðurstöður CD-1 músatilrauna sem notuðu DSS til að framkalla óeðlileg ónæmissvörun í þörmum staðfestu enn frekar þá hugmynd að TFs virki sem verndarar gegn þarmabólgu.

Theaflavins bæla merki með því að ákvarða amyloid samsetningu Imd

Hvernig stjórna TFs á neikvæðan hátt Imd merkjaleiðinni? Byggt á niðurstöðum umritsgreiningar, komumst við að því að TFs eru ómissandi fyrir umritunarstjórnun á lykilþáttum í Imd boðleiðinni. Við horfðum á augljósa bindisækni TFs við hreinsað Imd prótein með SPR prófun, sem gaf til kynna líkur á að TFs gætu gegnt hlutverki við að stjórna Imd próteinhegðun eða breytingaferli þess eftir þýðingu. Fyrri rannsóknir hafa sýnt fram á lykilhlutverk alls staðar að í Imd merkjaflutningi (Kleino og Silverman, 2014; Myllymaki o.fl., 2014) og að koma í veg fyrir Imd hvarvetnasetningu leiðir til djúpstæðrar lokunar á Imd merkjasendingum (Myllymaki o.fl., 2014; Thevenon o.fl., 2009). Hins vegar sýndu in vitro og in vivoubiquitination prófanir okkar að TFs hafa varla áhrif á hvarvetnamynstur Imd. Nýleg rannsókn hefur sýnt að amyloid myndun er nauðsynleg til að virkja Drosophila Imd ferlið við viðurkenningu á bakteríupeptíðóglýkönum (Kleino o.fl., 2017). Athyglisvert er að SDD-AGE og ThTbinding mælingar okkar bentu til þess að samruna Imd sé komið í veg fyrir af TFs. Að koma í veg fyrir samsöfnun Imd með því að slá niður eða stökkbreytingu á Imd í þörmum frumum virðist hafa snúið við jákvæðum áhrifum TFs á framlengingu líftíma. Til að staðfesta niðurstöðu okkar enn frekar væri áhugavert að kanna hvort TFs séu ekki lengur virka til að lengja líftíma í ávaxtaflugvélum þegar varðveitt dulræna RHIM (cRHIM, amínósýrur frá 118. til 121. klst.) mótíf Imd er sérstaklega slegið út, eyðilagt, byggt á þeirri niðurstöðu að glæpurinn í Imd sé nauðsynlegur fyrir samsöfnun þess og amyloid myndun (Kleino o.fl.,2017). Engu að síður undirstrikar rannsókn okkar lykilhlutverk TFs við að stjórna jafnvægi í þörmum og öldrunarferlinu, kannski með því að stilla Imd samruna. Framtíðarrannsóknir ættu að einbeita sér að því að kanna hvaða leifar eða svæði Imd eru bundin af TFs og hvernig þessi binding leiðir til þess að koma í veg fyrir Imd þéttingu. Þar að auki bentu niðurstöður okkar í spendýrakerfinu til þess að TFs gætu á áhrifaríkan hátt verndað ristilinn gegn bólgu af völdum utanaðkomandi eiturefna DSS, sem bendir til varðveitts stjórnunarhlutverks TFs við að viðhalda jafnvægi í þörmum. Það er þess virði að kanna hvort TFs gegni hlutverki við að stjórna próteinsamsetningu í spendýravef.

Þessi grein er dregin út úr zhongwenxie@ahau.edu.cn