Hefur cistanche heildarglýkósíð áhrif á lyktarskyn?

Tengiliður:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Áhrif cistanche heildarglýkósíða á lyktarlyktarfrumur í rottum og seytingu þeirra á taugakerfisþáttum

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

Mænuskaðar (SCI) er alvarleg meiðsli á miðlægumtaugakerfi, sem er {{0}},2 prósent —0,5 prósent af heildaráfalli. Í mænubrotum eru 16 prósent -40 prósent flókin vegna mænuskaða, sem oft veldur alvarlegri fötlun, sem leiðir til erfiðleika í daglegu lífi sem hefur áhrif á lífsgæði sjúklinga og veldur mikilli álagi fyrir fjölskylduna og samfélagið.LyktarskynEnsheathing cells (OECs) eru sérstök tegund taugalíms. Plasmafrumur geta flutt inn í heilann meðlyktarskyntaugaöxum og geta seytt mörgum vaxtarþáttum eins og NGF, GDNF, BDNF, NT-3, taugapeptíð-Y og S-100. Vegna þessara eiginleikalyktarskynensheathing frumur, OECs eru taldar vera ein af efnilegu fræfrumum fyrir frumuígræðslu til að gera við SCI. Eins og er, byggist meðferð á siðbólga á sviði endurhæfingarlækninga aðallega á alhliða endurhæfingu. Til þess að finna árangursríkari aðferð hafa eftirfarandi rannsóknir verið gerðar á áhrifumcistancheallsglýkósíðum OEC:

Cistanche heildarglýkósíð fyrir lyktarhjúpandi frumur

1 Efniviður og aðferðir

1.1 Tilraunaefni

Wistar rotta (veitt af Animal Center of Inner Mongolia University);cistancheallsglýkósíð, DMEM/F12 miðill, fósturkálfasermi (FCS), pólý-D-lýsín, arabínósíð (Ara-C), trypsín, D -Hanks lausn, kanína and-p75NGFR (Santa Cruz), ELISA sett (Promega), frumuútungavél (Thermo-HEPA Class 100), öfug fasa-andstæða smásjá (Olympus CKX41, Japan), ofurhreinn vinnubekkur (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) Fyrirtækið, SW-CJ-2FD), ensím merkigreiningartæki (Wellscan MKH), frumuflæðismælir o.fl.

1.2 Rannsóknaraðferðir

1.2.1 OECs ræktun, hreinsun og auðkenning: Wistar rottum var fórnað með afhausun og liggja í bleyti í víni í 5 mínútur. Fremri höfuðkúpan var opnuð til að afhjúpalyktarskynperu. Þau tvölyktarskynperur voru fjarlægðar alveg undir krufningarsmásjá. Þvoið í D-Hanks lausn; skera ályktarskynperu með örskurðarskæri, bætið við 2ml af 0.25 prósent brisi og ræktið við 37 gráður í 20 mínútur; Bætið D MEM/F12 ræktunarmiðli sem inniheldur 10 prósent kálfasermi í 2ml skilvindurör. Meltingu var hætt í miðjunni; strætapípettan dró upp ófullkomlega meltan vefinn við 800 snúninga á mínútu og skilið í skilvindu í 5 mínútur, fleygði flotinu; notaði að lokum skilyrta miðilinn (20 prósent FCS plús 20|i, mól/LForskólín plús 20|ig/mlBPE plús DMEM /F12) Gerðu það í lx 107ml einfrumu sviflausn, sáðu það í pólýlýsínhúðaða frumuræktarflösku, settu það í 37 gráður, 5 prósent CO2 útungunarvél, og þá bæta við Arac Hreinsun var framkvæmd á 36h. Notaðu kanínu-anti-p75E og FITC-merkt geita-and-kanínu IgG auka mótefni fyrir ónæmisvefjaefnafræðilega frumugreiningu og flúrljómunarsmásjá.

1.2.2 Notaðu MTT og frumuflæðismælingu til að ákvarða áhrif afcistanche heildarglýkósíðályktarskynhlífðarfrumur: sáð ræktuðu og hreinsaðarlyktarskynhylja frumur í 96-brunnplötu við 1X106 og bæta viðcistanche heildarglýkósíð(virknistyrkur er Ijig/ml, 10mg/ml, 100mg/ml), mældu OD-gildið og mældu frumuflæðisgreininguna eftir 24 klst. Settu upp stýrihóp ogCistanche heildarglýkósíðmismunandi styrkleikahópar: Hópur A (eftirlitshópur): ræktunarmiðill sem inniheldur sermi er notaður sem neikvæður samanburður; Hópur B (cistanche heildarglýkósíðlágstyrkur hópur: llig/ml); Hópur C (cistanche heildarglýkósíð miðlungs styrkur Hópur: L10jxg/MK); D hópur (cistanche heildarglýkósíðHáþéttnihópur: 100|xg/ml): 15 rottur í hverjum hópi.

1.2.3 Ákvörðun á innihaldi taugakerfisþátta í flotinu með ELISA: sáð ræktað og hreinsaðlyktarskynhylja frumur í 6-brunnplötu við 1x106, bætið viðcistanche heildarglýkósíð(sami styrkur og hér að ofan) eftir 24 klukkustundir og virkaðu í 24 klukkustundir og safnaðu ofanvatninu sérstaklega, vistað á -80 langan tíma. Innihald taugavaxtarþátta í vökvanum var ákvarðað með ELISA aðferð.

1.3 Tölfræðigreining

Gögnin í þessari rannsókn eru meðhöndluð sem mæligögn og gögnin sem fengust eru gefin upp sem meðaltal ± staðalfrávik og SPSS 11.0 tölfræðihugbúnaður er notaður til tölfræðilegrar greiningar. Gögnin sem fást eru greind með fráviksgreiningu og P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 Úrslit

2.1 Áhrif afcistancheheildar glýkósíð ályktarskynhjúpandi frumur

2.1.1 Ákvörðunarniðurstöður metýloxasólýltetrasólaðferðar (MT): Hópur A: 0.617±0.149; Hópur B: 0.589±0.147; Hópur C: 0.761±0.138; Hópur D: 0.732±0.234. Samanburður á milliCistanche heildarglýkósíð group (B) and Control group (A), P>0.05, munurinn var ekki marktækur;Cistanche heildarglýkósíð10mg/ml, 100mg/ml styrkleikahópur (C, D) samanborið við viðmiðunarhóp (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 Niðurstaða ákvörðunar á flæðifrumumælingu er sýnd á mynd 1. Í samanburði við samanburðarhópinn,cistanche heildarglýkósíðhópurinn var hærri en viðmiðunarhópurinn og hlutfall apoptótískra frumna var lægra en viðmiðunarhópurinn.

2.2 Niðurstöður ensímtengd ónæmissogandi prófun (ELISA).

Niðurstöður prófunar sýndu að innihald glial-cell-line-derived neurotrophic factor (GDNF): fyrir skömmtun: 302,1±16,6 pg/ml, hópur A: 340,5±13,2pg/ml; hópur B: 333,2±23,6pg/ml; Hópur C: 355,2±17,6pg/ml; D-hópur; 379,2±15,3pg/ml. Í samanburði við forgjöfina var GDNF innihaldið verulega aukið; samanborið við viðmiðunarhóp (A), GDNF innihaldCistanche heildarglýkósíð100mg/ml styrkleikahópur (D) var marktækur aukinn.

3 Umræður

Erfiðleikar við endurnýjun axóna er ein helsta ástæða þess að erfitt er að jafna sig eftir mænuskaða. OECs gegna hlutverki í endurnýjun á axonum miðtaugafruma sem erfitt er að skipta um aðrar tegundir frumna. Undanfarin ár hafa rannsóknir ályktarskynhlífðarfrumur eru orðnar heitur reitur.LyktarskynEnsheathing frumur eru sérstök tegund glial frumur sem hafa einkenni Schwann frumur og stjarnfrumur. Þau eru upprunnin frályktarskyngrunnhimnu og eru víða dreifðar á yfirborðilyktarskynslímhúð,lyktarskyntaug, oglyktarskynperu. Það hefur getu til að skipta sér og endurnýjast fyrir lífið og getur fylgtlyktarskyntaugaaxons til að flytja inn í heilann. Öxurnar ílyktarskyntaug getur farið í gegnum tengi milli úttaugakerfis og miðtaugakerfis á 30-60 daga fresti, vaxið aftur ílyktarskynslíðri og koma á taugamótatengingum4.Lyktarskynhlífðarfrumur geta seytt mörgum vaxtarþáttum eins og NGF, BDNF, GDNF, NT-3, taugapeptíð-Y og S-100. Rannsóknir hafa sýnt að taugavaxtarþáttur (NGF) getur komið í veg fyrir rýrnun á rauðum taugafrumum í mænukjarna og styrkt spíra bark og mænu og stuðlað að endurnýjun á taugabraut rauða kjarna mænu; bæði heila-afleiddur taugakerfisþáttur (BDNF) og taugatrópín-3 (NT-3) geta komið í veg fyrir frumudauða rauða kjarna mænufrumu í fullorðnum rottum með áverka sem hafa verið teknir af völdum og bjargað deyjandi taugafrumum og stuðlað að endurnýjun á axona P. Auk þess,lyktarskynEnsheathing frumur tjá einnig aðra þætti á frumuhimnum sínum, svo sem taugafrumuviðloðun (N-CAM), sem taka þátt í frumuviðloðun og axonvexti. Vegna þessara eiginleikalyktarskynensheathing frumur, OECs eru taldar vera ein af efnilegu fræfrumum fyrir frumuígræðslu til að gera við SCI.

Efnaþættir íCistancheinnihalda aðallega fenýletanóíð glýkósíð, iridoids, rokgjarna þætti, lignans, fjölsykrur og alkalóíða. Rannsóknin komst að þvíCistancheog efnafræðilegir þættir þess hafa taugaverndandi áhrif. Deng o.fl. rannsakað áhrif tubulosa B á frumudreifingu SH-SY5Y taugafrumna framkallað af æxlisdrepum (TNF). Niðurstöðurnar sýndu að eftir 100 ug/ SH-SY5Y taugafrumurnar eftir 36 klst. TNF meðferð með L sýndu dæmigerða frumudauðaeiginleika, á meðan meðferð á túbúlíni B í 2 klst. gæti dregið verulega úr frumudauða af völdum TNF. Að auki hafa rannsóknir einnig sýnt fram á að fenýletanóíð glýkósíð geta hamlað frumuddreifingu heilakornafrumna í rottum með því að hindra caspase-3 og caspase-8 og gegn C57 músarvörtunni af völdum metýlfenýltetrahýdrópýridíns (MPTP). Skemmdir gæða dópamínvirkra taugafrumna hafa verndandi áhrif. Ekki nóg með það, heldurCistanchegetur einnig dregið úr ýmsum skemmdum eins og blóðþurrð-endurflæði taugakerfisins. Tilraunin með blóðþurrð í heila í músum sýnir að 24 klst. og 48 klst. eftir blóðþurrð í blóðþurrð í heila eru 72,98 prósent og 60,45 prósent að meðaltali. Aftur á móti ercistancheheildarglýkósíð stórir, meðalstórir og lágir skammtar (250.0mg·kg/d; 125.0mg·kg/d; 62.5mg·kg/d) geta framleitt heila músa í sömu röð eftir blóðþurrð í heila-endurflæði 24 klst. Dráttarstærð minnkaði í 25,94 prósent, 25,81 prósent og 31,13 prósent, og stærð heiladreps minnkaði í 22,14 prósent, 20,06 prósent og 22,27 prósent eftir 48 klukkustundir. Það var marktækur munur á þessu tvennu, sem sýndi marktæk hamlandi áhrif á frumudauða taugafrumu.

Í þessari rannsókn er mismunandi styrkur afcistanche heildarglýkósíðvar beitt til OECs. MTT aðferðin og frumuflæðismæling staðfestu að 10mg/ml100mg/mlcistanche heildarglýkósíðgetur stuðlað að útbreiðslu ályktarskynhjúpandi frumur. Niðurstöður frumuflæðismælinga sýndu þaðcistanche heildarglýkósíðgetur stuðlað að útbreiðslu ályktarskynensheathing frumur Það stuðlar aðallega að útbreiðslu G1 hringrásarlyktarskynsæðisfrumur og dregur verulega úr apoptotic frumum. Þess vegna,Cistanche heildarglýkósíðgetur ekki aðeins stuðlað að útbreiðslu ályktarskynhlífar frumum en eykur einnig frumuvirkni og hindrar frumufrumur þeirra. Ensímtengd ónæmissogandi prófun sannar þaðCistanche heildarglýkósíðgetur verulega stuðlað að seytingu GDNF með því aðlyktarskynhjúpandi frumur. Ofangreindar niðurstöður gefa tilraunagrundvöll fyrir klíníska notkun áCistanche heildarglýkósíð.

Heimildir

[1] Qiu Weihong, Zhu Hongxiang, Zhang Baixiang, o.fl. Þættir sem hafa áhrif á lífsgæði sjúklinga með mænuskaða meðan á endurhæfingu stendur [J]. Chinese Journal of Rehabilitation Medicine, 2009, 4(24): 313.

[2] Richter MW, Fletcher PA, Liu J, o.fl. Lamina propria oglyktarskynhlífðarfrumur úr nautum sýna mismunaða samþættingu og flæði og stuðla að því að axon spírist í mænu sem er meidd [J]. J Neurosci, 2005.25(46):10700 -10711.

[3] Fairless R, Bamet SC. lyktarhjúpandi frumur: hlutverk þeirra í viðgerð miðtaugakerfis[J.Int J Biochem Cell Biol. 2005,37(4):693-699.

[4] Chen X, Fang H. Schwob JE. Fjölvirkni hreinsaðs. ígræddar glúkósa grunnfrumur ílyktarskynþekjuvef[J]. J Comp Neurol,2004, 46914):457—474.

[5] La P, Jones LL. Tuszynski MH. BDNF-tjáandi marostromal fruma; styðja við mikinn axonal vöxt á stöðum d mænuskaða[J]. Exp Neurol, 2005,191(2):344—360.

[6] Deng M, Zhao JY, Ju XD, o.fl. Verndaráhrif tubulosa B á TNF-framkallaða frumudauða í taugafrumum [J]. Acta Pharmacol Sin, 2004,25(102 1276

[7] TianXue-Fei, PuXiao-Ping.FenýletanóíðglýkósíðfráCistanchessalsa hamla frumudauða af völdum 1-metýl-4-fenýlpýridínjónar í taugafrumum[J]. J Ethnopharmacol, 2005,97 (1):59.

[8] Geng X, Song L.Pu X, o.fl. Taugaverndandi áhrif