Ágrip:Meginmarkmið þessarar rannsóknar er að áætla, með mismunagreiningu, ýmsa líffræðilega virkni á heildarfenólinnihaldi í áfengisútdrætti úr þremur döðlupálmaafbrigðum sem eru næm eða ónæm fyrir Fusarium oxysporum. sp Albidinis. Hér komu fram stilben vörur með andoxunarefni og lífvirka getu í ónæmu yrkinu Taabdount (TAAR). Ennfremur inniheldur metanólhlutfallið af TAAR-ónæmum döðlupálmaafbrigðum umtalsverða vöru, ákvörðuð með LCMS/MS og 1H, 13C NMR, sem tilheyrir fjölskyldu hýdroxýstilbena, sem hefur andoxunargetu, hindrar sveppatýrósínasavirkni og virkjar og hefur verndandi áhrif á skemmdir af völdum hýpóklóríts í 20S próteasómi á húðfrumum sem aldrað eru í húðtrefjum. Alls benda núverandi niðurstöður til þess að rannsaka ætti hýdroxýtólúen sem er til staðar í ónæmum Phoenix dactylifera L. til að skilja hvernig stilbenið gæti beitt öldrun gegn öldrun.

Glýkósíð af cistanche getur einnig aukið virkni SOD í hjarta- og lifrarvef og dregið verulega úr innihaldi lipofuscins og MDA í hverjum vef, hreinsar í raun ýmsar hvarfgjarnar súrefnisradicals (OH-, H₂O₂, osfrv.) og verndar gegn DNA skemmdum af völdum af OH-róttækum. Cistanche phenylethanoid glýkósíð hafa sterka hreinsunargetu sindurefna, meiri afoxunargetu en C-vítamín, bæta virkni SOD í sæðisviflausn, draga úr innihaldi MDA og hafa ákveðin verndandi áhrif á virkni sæðishimnu. Cistanche fjölsykrur geta aukið virkni SOD og GSH-Px í rauðkornum og lungnavef í tilraunamúsum af völdum D-galaktósa, auk þess að draga úr innihaldi MDA og kollagens í lungum og plasma og auka innihald elastíns, hafa góð hreinsunaráhrif á DPPH, lengja tíma súrefnisskorts í öldruðum músum, bæta virkni SOD í sermi og seinka lífeðlisfræðilegri hrörnun lungna í öldruðum tilraunamúsum. Með frumuformfræðilegri hrörnun hafa tilraunir sýnt að Cistanche hefur góða andoxunargetu og hefur tilhneigingu til að vera lyf til að koma í veg fyrir og meðhöndla öldrunarsjúkdóma í húð. Á sama tíma hefur echinacoside í Cistanche umtalsverða getu til að hreinsa DPPH sindurefni og hefur getu til að hreinsa hvarfgjarnar súrefnistegundir og koma í veg fyrir niðurbrot kollagen af ​​völdum sindurefna og hefur einnig góð viðgerðaráhrif á anjónskemmdir af týmín sindurefnum.

Smelltu á rou cong rong kostir

【Frekari upplýsingar:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Leitarorð:Phoenix dactylifera L.; Fusarium oxysporum. sp Albidinis (FoA); andoxunarvirkni; and-tyrosinasa virkni; virkjun próteasóms; LC-MS/MS greining; stilben afleiður

1. Inngangur

Döðlupálma (Phoenix dactylifera L.) er ævarandi einblóma af ætt Arecaceae. Þetta tré er afar mikilvægt í lífi íbúa Sahara í Suður- og Suðaustur-Marokkó, bæði efnahagslega og félagslega. Bayoud sjúkdómur, sem kemur fram af jarðvegssveppnum Fusarium oxysporum f. sp Albidinis (FoA) [1], hefur dregið verulega úr uppskeru marokkóskra döðlupálma á undanförnum árum [2]. Talið er að FoA hafi horfið úr tveimur þriðju hlutum marokkóskrar fæníkólararfs en heldur áfram að eyðileggja á bilinu 4,5 prósent til 12 prósent af hágæða afbrigðum döðlupálma [2]. Margar tilraunir hafa verið gerðar til að berjast gegn þessum sjúkdómi og útskýra nokkur varnarkerfi fyrir döðlupálma [3]. Fyrstu rannsóknirnar á mögulegum varnarháttum döðlupálmans hafa bent á hlutverk fenólefnasambanda og andoxunargetu í þol gegn FoA [4,5]. Lífefnafræðileg greining á ónæmum og viðkvæmum rótum fenólefnasambanda var fyrsta lífefnafræðilega rannsóknin sem skýrði ávinninginn af varnaraðferðum döðlupálmans. Reyndar benda bókmenntir til þess að afbrigði með þola rót séu ríkari af 5-kaffóýl shikimic sýru og stöðuhverfum hennar en næm rótarafbrigði [5]. Þessi efnasambönd hafa í raun sýnt mögulega sveppaeyðandi virkni in vitro gegn FoA [6].

Mikil getu náttúrulegra andoxunarefna til að hreinsa sindurefna er það sem knýr vaxandi vinsældir þeirra í matvæla- og læknisfræðirannsóknum [7-10].

Til dæmis eru hvarfgjarnar súrefnistegundir versnandi þættir í frumuskaða og öldrunarferlum [11] og tengjast því mörgum sjúkdómum. Þess vegna geta andoxunarsameindir hjálpað heilsu manna með því að koma í veg fyrir hrörnunarsjúkdóma og hægja á afleiðingum öldrunar [12]. Í þessari rannsókn höfum við áhuga á getu andoxunarefna til að stuðla að virkjun 20S-próteasómsins og vernda gegn oxunarskemmdum þess. Próteasómið stuðlar sannarlega að viðhaldi frumujafnvægis með því að gera frumunni kleift að hreinsa skemmd prótein og stjórna eyðingu skammlífra próteina [13]. Þess vegna gæti virkjun próteasómsins með andoxunarefnum reynst ný aðferð gegn öldrun [14]. Ennfremur ætlar þessi vinna að kanna möguleika á fenólinnihaldi ónæmra róta fyrir FoA sem virk líffræðileg efnasambönd.

2. Efni og aðferðir

2.1. Plöntusýni

Rannsóknin var gerð fyrir hvert sýni með efni úr 10 fullorðnum döðlupálmaafbrigðum (Phoenix dactylifera L.) sem ræktuð var úr ýmist menguðum eða ómenguðum böggum sem staðsettir eru í Palmaria Figuig, Suðaustur-Marokkó. Helstu ræturnar (þar á meðal loftöndunarrætur þeirra) liggja í þvermáli frá 0,5 til 2 cm af næmum afbrigðum, eins og charas Bouffegous infected (BI) eða ósýktum (BNI). Að auki var FoA-ónæmri yrkinu Taabdount (TAAR) safnað og laufum tveggja lækningaplantna notuð á staðnum sem sýklalyfjameðferð gegn FoA. Ennfremur var rósmaríni (R, Rosmarinus officinalis) og granatepli (G, Punica granatum L.) [15] einnig safnað í sama ómengaða pakkann þar sem þau voru greind og notuð sem viðmiðunarefni. Sýni voru tekin á tveimur tímabilum ársins, í september og lok janúar (milli 2013 og 2015), og geymd loftþétt við stofuhita. Þar sem sýnin voru fengin úr lófamanni eru þau tilhlýðilega vottuð (auðkenning og flokkun) af landbúnaðarráðherra Marokkó [16].

2.2. Undirbúningur útdráttanna

Eftir mikla þvott með vatni voru ræturnar eða laufblöðin þurrkuð í skugga, síðan maluð í blandara. Fyrir hvert sýni (BI, BNI, TAAR, R og G) var 10 ml af metanóli bætt við 1 g af þurru efni og síðan látið hrært í 4 klst við stofuhita. Síðan voru þau síuð og látin gufa upp við 37 ◦C með snúningsgufu. Þurrútdrátturinn var settur í metanóllausn með lokastyrk 10 mg/ml eða 50 mg/ml (síðar notað til að greina líffræðilega virkni in vitro). Þrjár óháðar útdrættir fyrir hvert sýni voru gerðar fyrir líffræðilegar virkniprófanir.

2.3. Líffræðileg starfsemi

2.3.1. Fenólinnihald og andoxunarvirkni

Aðferðin sem Nacoulma o.fl. var notað til að meta heildarfenól og heildarflavonoid innihald hvers útdráttar [17], með lokaaðlögun á rúmmáli við 200 µL til að nota á örplötulesara. Gleypið við 760 nm og 510 nm, í sömu röð, var ákvarðað á móti metanóleyðslu. Staðlaðar kvörðunarferlar gallsýru (0–300 mg/L) (y=0.0083x plús 0.9106, r2=0.978) og quercetin (0–100 mg/L) (y {{14 }}.0008x plús 0.0597, r2=0.994), í sömu röð, voru notuð.

Með því að nota 1,1-dífenýl-2-píkrýlhýdrasýl sindurefna, var andoxunareyðandi virkni rannsökuð (DPPH). Með því að nota endanlega aðlögun á rúmmáli við 300 µL og 275 µL, í sömu röð, til að nota örplötulesara, var getu útdráttanna til að minnka járn (III) metin, eins og lýst er af Nacoulma et al. [17]. Í samanburði við metanóleyðublað var gleypni mæld við 517 nm og 700 nm, í sömu röð. Síðan, með því að nota eftirfarandi jöfnu, var virkni hverrar lausnar til að hreinsa sindurefna áætluð sem hlutfall af hömlun:

Stöðluð kvörðunarferill var fengin með askorbínsýru ({{0}}–100 mg/L) sem andoxunarstaðall (y=0.0014x plús 0.0875, r2=0.998).

2.3.2. FoAMyc helíum Growth Inhibitory Assay

Með smá breytingu, aðferðin sem Neri o.fl. [18] var notað til að ákvarða að hve miklu leyti hrein efni hamluðu FoA sveppavöxt. Í 7-dagsgömul rækt af FoA voru fimm millimetrar af sveppaskífum settir á Petri diska með PDA miðli bætt við hreinu efnin sem talin eru upp hér að ofan við 50, 75 og 100 µg/ml. Plöturnar voru ræktaðar í 5 daga við 28 ◦C. Meðalþvermál nýlendunnar mælt í tveimur réttum hornum var notað til að meta vaxtarhömlun FoA sveppavefs. Hver meðferð samanstóð af þremur prófunum með þremur mismunandi FoA stofnum: FoA 41818, FoA 41814 (BCCM, Belgíu) og FoA Local (Palemeraie í Figuig, Marokkó), auk neikvæðrar samanburðar með því að nota miðil sem ekki hafði verið bætt við.

2.3.3. Frumulífvænleiki og 20S próteasómvirkni

Venjulegar húðtrefjur úr mönnum frá {{0}}árgömlum manni (NHDF) (Promocell, Heidelberg, Þýskalandi) voru notaðar þar sem frumur voru settar í þéttleikann 100,{{3 }} frumur/ml í RPMI 10 prósent bætt við 10 prósent (w/v) FBS, 1 prósent (w/v) L-glútamín, 100 einingar/ml penicillín og 100 µg/ml streptomycin. Þau voru geymd í hvítum eða gagnsæjum 96-örbrunnsplötum í 24 klst við 37 ◦C í hitakassa með rakaðri umhverfi með 5 prósent CO2. Fyrir prófun á próteasómvirkni, sem og til að meta verndandi áhrif á skemmdir af völdum hýpóklóríts, voru frumur síðan meðhöndlaðar með prófunarefnum (hreinu efnasambandi frá 5 til 50 µg/ml, jákvæð viðmiðun við 0,5 og/eða 1 µM, og metanól plöntuþykkni frá 15 til 50 µg/ml) í 24 klst. með að hámarki 0,3 prósent af DMSO í lokastyrk, samtímis, án breytinga, varðandi neikvæða samanburðinn. Að rannsaka verndandi áhrif TAAR útdráttar eða hreinna efnasambanda á próteasómvirkni þýddi að trefjafrumur voru síðar beittar 50 µM OCl- í 35 mínútur (valið sem ákjósanlegt, án eiturverkana á frumum, oxunarhemlar 20S próteasóms ástandsins) [19]. Eftirfarandi tilraunastigum var lokið með aðferðafræði birgisins (Proteasome-Glo Chymotrypsin-Like Cell-Based Assay, Promega Corporation, USA): Í fyrsta lagi samhliða frumulífvænleikatilraun þar sem notaðar voru kristalfjólublár litamælingar eða MTT mælingar sem voru framkvæmdar við nákvæmlega svipaðar aðstæður var notað til að staðla þessa frumu-lífljómunarprófun. Staðalfrávik og meðalflúrljómun í þreföldum sýnum úr tveimur aðskildum prófunum (n=6) eru sýndar. Allar mælingar og óháðar tilraunir (n=2) voru framkvæmdar tvisvar.

2.3.4. Hamlandi áhrif á frumulaus sveppa-týrósínasa

Til að kanna áhrif á ensímvirknina voru prófunarefnin (hrein andoxunarefni eða metanólísk plöntuþykkni) forræktuð með ensímum í fosfatjafna við stofuhita. Í hnotskurn var 300 ml af 5 mM L-DOPA lausn við 50 mM fosfatbuffer (pH 6,5) með eða án prófunarefna í ýmsum styrkjum bætt við 96-brunnur örplötu ásamt 100 ml af vatnslausn af sveppatýrósínasa (20 einingar). Í 40 mínútur var prófunarblandan ræktuð við 25 ◦C. Eftir ræktun var dópakróm framleiðslustig hvarfblöndunnar mæld með litrófsmælingu við 492 nm [20]. Stöðluð kvörðunarferill var teiknaður upp með því að nota gallsýru (0–1000 µg/mL) (y=-0,087 × plús 0,45; r2=0.97). Hver sjálfstæð mæling og tilraun (n=2) var framkvæmd tvisvar.

2.4. Aðferðir við greiningar, einangrun og uppbyggingarskýringar

Möltu rótin (20 g) var dregin út með 200 ml af metanóli, hrærð í 24 klst við umhverfishita, síuð, skilin í skilvindu við 10,000× g í 15 mínútur og síðan gufuð upp við 35 ◦C með snúningsvél. lofttæmi uppgufunartæki. Hráa seyðið var þynnt með 20 ml af eimuðu vatni, endurútdráttur með 2 × 20 ml af etýlasetati og síðan þéttur með því að nota snúnings lofttæmisuppgufunarkerfi við 35 ◦C. Aðalafurðin var hreinsuð með undirbúnings HPLC með því að nota Waters C18 súlu (SymmetryPrep 150 × 19 mm, 7 µm kornastærð) með sömu LC hallaskilyrðum sem notuð voru hér að ofan og flæðihraða 5 ml/mín. Hámarkið við RT var á milli 38,8 og 40,8 mín., safnað á milli 39,2 og 40,2 mín; heildarrúmmálssafnið var frostþurrkað til að gefa 27 mg af efnasambandinu. MS og NMR 1H og 13C auðkenndu það síðan.

Greiningar voru gerðar með hraðri upplausn LC 1200 röð kerfis með því að nota díóða fylkisskynjara (DAD) sem notaður var til að fylgjast með UV litrófum við 320 nm (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, Bandaríkjunum). Aðskilnaður efnasambanda var framkvæmdur á Beckman C18 súlu (ULTRASPHERE 250 mm × 4,6 mm, 5 µm kornastærð) með því að nota 47 mín halla af 10 mM ammóníum asetati/0,2 prósent maurasýru í vatni (v/v), pH 2,9 ({{ 13}}leysi A) og 30/70 asetónítríl/metanólblöndu (=leysi B). Rennslishraði var 0,8 ml/mín og leysir B var hækkaður úr 5 í 35 prósent á 45 mínútum og komið aftur í jafnvægi í 2 mínútur. Í röð með DAD var ESI-QTOF 6520 röð (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, Bandaríkjunum) notuð fyrir háupplausn MS og markvissa tannem MS (MS/MS) greiningar. Litróf voru aflað í neikvæðri og háupplausn (4 GHz) upptökuhami.

1H NMR og 13C NMR litróf voru skráð á Bruker Avance 300 litrófsmæli sem starfaði við 300 MHz. Ókeypis örvunarhvörf voru unnin með MestreNova 5.3.2 NMR svítunni frá MestreLab Research SL.

2.5. Tölfræðigreining

Allar óháðar tilraunir voru gerðar í þríriti. Öll gögn voru sett fram sem meðalgildi ± SD. Með því að nota útgáfu 6 af GraphPad Prism forritinu voru niðurstöðurnar greindar með því að nota Kruskal–Wallis prófið sem er ekki parametrískt ásamt margfeldis samanburðarprófi Dunns. p-gildi 0.05 og lægri eru talin marktæk.

3. Niðurstöður og umræður

3.1. Heildarfenól- og flavonóíðinnihald metanólútdráttar

Vegna afoxunareiginleika þeirra hefur plöntufenólsambönd reynst hafa margvísleg líffræðileg áhrif, þar á meðal andoxunarvirkni [21]. Tafla 1 sýnir heildarfenólinnihald metanólrótarútdrátta (500 µg/mL) af næmum afbrigðum af ghagras Bouffegous sýkt (BI) og ósýkt (BNI) af FoA eða ónæm sem Taabdount (TAAR). Styrkur þeirra var breytilegur frá 171 ± 14 til 253 ± 47 mg af gallínsýrujafngildi/g. Mesta magn þessara efnasambanda fannst í BNI yrkinu en minnsti styrkurinn kom frá metanólrótarþykkni BI. Fjöldi flavonoids í þessum sömu útdrætti (tafla 1)) var breytilegur frá 240 ± 25 til 406 ± 66 mg af quercetin jöfnuði/g, og enn og aftur var hæsta magnið rakið til BNI yrkisins. Það er tap sem nemur um það bil 1/3 af heildarfjölda fjölfenóla og flavonoids milli ósýktra (BNI) afbrigða og sýktra (BI) eða ónæmra (TAAR) afbrigða fyrir FoA. Þess vegna er athyglisvert að athuga hvernig tap efnasambanda, sem lýst er sem mikilvægt fyrir andoxunargetu plöntunnar, getur haft áhrif á líffræðilega starfsemi sem við höfum áhuga á.

3.2. Andoxunarmöguleiki metanólútdráttar

DPPH radical scavenging virkni er aðferð sem er mikið notuð til að skima andoxunarvirkni plöntuþykkna [22]. Þetta próf ákvarðar hvort andoxunarefni sem finnast í útdrættinum geti hreinsað stöðugu róttæku tegundirnar DPPH. Tilraunagögnin (Mynd 1) sýna að allir metanólútdrættir (við 100 eða 500 µg/mL) eru líklegir til að hafa þau áhrif að hreinsa sindurefna með hæstu DPPH hreinsivirkni sem sést hefur í TAAR rótum (87,0) prósent af DPPH hömlun). Andoxunarvirkni virðist ekki vera háð nærveru heildarmagns polyphenolic eða flavonoid efnasambanda. Hins vegar gæti betri virkni TAAR rót metanólútdrætti verið vegna fleiri vetnisgjafa íhluta sem eru í útdrættinum.

Afoxunarkrafturinn er metinn út frá getu metanólútdráttarins til að umbreyta Fe (III) í Fe (II). Þessa hæfni til að draga úr Fe (III) má rekja til fjölda og stöðu hýdroxýlhópa sem eru til staðar í fenólsamböndum og getu þeirra til að gefa vetni [23]. Tafla 2 sýndi minnkandi virkni metanólútdrátta úr plöntusýnunum okkar í samanburði við askorbínsýru sem staðal. Metanólútdrættir af TAAR rótum innihalda mikla skerðingu (95 ± 1 mg af askorbínsýrujafngildi/g), en lægsta innihaldið fékkst úr BNI rótarútdrætti (27 ± 2 mg af askorbínsýrujafnvægi/g).

Gerð var aðhvarfsgreining til að tengja þær niðurstöður sem fengust (fylgnistuðull (R)). Marktæk línuleg fylgni fundust á milli heildarfenóls og flavonoid innihalds (R {{0}}.849, p < 0.05) og milli DPPH og afoxunaraflsgreiningar (R=0). 816, p < 0,05), en ekkert var á milli fenól- eða flavonoidinnihalds metanólútdráttanna og andoxunarvirkni þeirra. Að lokum sýndu allir metanólútdrættir marktæka andoxunarvirkni gegn DPPH róttæka hreinsandi virkni og draga úr krafti, en þessi andoxunarvirkni virðist ótengd heildar fenól- eða flavonoid innihaldi. Þess vegna gefa þessar niðurstöður í skyn að tiltekin tegund efna, frekar en magn fenól- eða flavonoid efnasambanda sem finnast í fjölbreyttu útdrættinum okkar, er líklegast ábyrgur fyrir andoxunarvirkni plöntuþykknanna sem eru til skoðunar. Nokkrir fenólir þættir sem áður var lýst og eru mjög virkir einstaklingar geta einnig haft áhrif á andoxunarvirkni plöntuþykkna: Óháð styrk þeirra geta fenólsamböndin sem finnast í þroskuðu rauðvíni sýnt ýmsa andróteindaeiginleika sem tengjast uppbyggingu þeirra [ 24].

TAAR FoA-ónæma afbrigðið sýnir hæstu andoxunarvirkni meðal mismunandi afbrigða döðlupálma. Með vísan til fræðiritanna má rekja þróun ónæmis í þessum tilteknu döðlupálfum til aukningar á magni mismunandi stöðuhverfa af kaffóýl shikimic sýru [5].

3.3. Sveppir Tyrosinase Activity

Sveppir týrósínasa dífenólasavirkni hvatar oxun tveggja dópakínónafleiða sem leiðir til nýmyndunar melaníns. Niðurstöðurnar sem sýndar eru í töflu 3 sýna getu efnasambanda sem eru til staðar í metanólútdrætti af TAAR, BI og BNI til að trufla hýdroxýleringu l-DOPA með því að hindra sveppatýrósínasavirkni. Ennfremur sýna þessar niðurstöður að metanólútdráttur TAAR er tölfræðilega virkari en útdrætti af BI (p < 0.05) og BNI (p < 0,05) á sveppa-týrósínasavirkni. Þannig að geta pálmatöðrurótarútdráttar til að hindra virkni tyrosinasa virðist fylgja sömu þróun og andoxunarhæfileikar.

Tyrósínasar eru fyrst og fremst tengdir húð, augum og hárlitun. Reyndar eru týrósínasar sortumyndunarensím sem taka þátt í fyrstu skrefum lífmyndunar melaníns og melanín tengist vörn gegn útfjólubláum (UV), sólar- eða gammageislun, minni frumunæmi og frumuveggþol gegn vatnsrofsensímum [20]. Aftur á móti getur offramleiðsla á melaníni gegnt hlutverki í húðfrávikum eða alvarlegri sjúkdómum eins og krabbameini (td sortuæxli), og of mikið af dópakínóni getur leitt til taugahrörnunarsjúkdóms (td Parkinsonsveiki) [20,25]. Ennfremur hefur verið greint frá því að sortumyndun framleiðir vetnisperoxíð og önnur ROS, sem útsetur sortufrumur manna fyrir miklu oxunarálagi [26]. Nokkur náttúruleg andoxunarefnasambönd (fenól, flavonoids og önnur) sem fengin eru úr plöntum hindra virkni tyrosinasa fenólasa [27,28]. Hér virðist TAAR þykkni innihalda efnasambönd sem eru næm fyrir því að hindra öldrun húðar og sortumyndun.

3.4. Próteasómvirkni metanólískra döðlupálmaútdrátta

Greint hefur verið frá því að hækkað magn 20S próteasómsins leiði til aukinnar þols fyrir oxunarálagi [13]. Þess vegna var könnuð stjórnun próteasómavirkni með rótarútdrætti af BI, BNI og TAAR, ræktunarafbrigðum. Mæld 20S próteasómvirkni tengist kymotrypsin-líkri (CT-L) virkni í NHDF-öldruðum frumum (sjá Efni og aðferðir). Eins og sýnt er á mynd 2A sýndu frumur sem voru meðhöndlaðar með 50 µg/mL af metanólútdrætti í 24 klst marktæka virkjun á CT-L fyrir BI og TAAR útdrætti og hömlun á BNI án þess að mynda meira en 30 prósent af eiturverkunum á frumum. TAAR rót þykkni sýndi grípandi próteasómvirkjun samanborið við 1µM af lípósýru (Ct plús) (212 prósent og 248 prósent, í sömu röð). Próteasómið er sívalur próteinasakomplex sem inniheldur kjarna úr fjórum staflaðum hringjum sem bera ábyrgð á að fjarlægja óeðlilega niðurbrotið (26S) próteasóm og oxandi (20S próteinkjarnaflókið) skemmd prótein (Ciechanover, 1998). Eins og fram kemur í verkum Hwang [29], getur truflun á próteasómum verið þátttakandi í öldrun húðar manna. Reyndar hefur verið sýnt fram á að öldrun og æxlunarfrumur hafa minnkað próteasómvirkni sem og próteinmagn próteasóma undireininga. Sú staðreynd að bæði oxuð og/eða skemmd frumuprótein söfnuðust oftar saman í þessum frumum bendir til þess að ubiquitin-próteasóm niðurbrotsferill próteins sé tengdur innri öldrun. Myndir 2B og C sýna getu TAAR metanólútdráttar til að vernda NHDF-aldraða frumur gegn hömlun á 20S próteasómvirkni með OCl- oxunarefni. Reyndar hamlar OCl− oxunarefni um 50 prósent próteasómvirkni stjórnfrumna (Ct), á meðan hæsta 20S-próteasómvirkjarinn (lípósýra við 1 µM, Ct plús ) með meira en 50 prósent af hömlunarvirkni nær ekki að snúa hömluninni við. af 20S próteasómvirkninni með OCl−, en allur hinn styrkurinn sem prófaður var (15, 50 og 75 µg/mL) af TAAR metanólútdrætti virðist snúa við þessari hömlun (0 til 19 prósent af hömlun). Þessar niðurstöður benda til þess að TAAR rótarútdrættir gætu innihaldið sameindir sem gætu seinkað öldrun húðar, ekki aðeins með því að auka próteasómvirkni heldur einnig með því að vinna gegn hamlandi áhrifum oxunarefna. Meðal þessara sameinda er líklegast að caffeoyl shikimic sýra sé til staðar, sem og önnur efnasambönd. Ennfremur hafa LC-DAD-MS (MS) og NMR greiningar verið gerðar til að bera kennsl á helstu efnasambönd útdráttanna og er hér með fjallað um í næsta kafla.

3.5. Litrófsgreiningar

3.5.1. LC-DAD-MS greining á metanólútdrætti

Samanburðarrannsóknin á döðlupálmarótum leiddi ekki í ljós eigindlegan mun, en þess í stað kom fram að einhverju leyti hálf-magnlegur munur (í DAD og MS litskiljum) milli yrkja (Mynd 3A, D). Reyndar leyfa núverandi niðurstöður ekki tengsl á milli viðnáms döðlupálma við aukningu á magni mismunandi staðbundinna myndbrigða af caffeoyl shikimic sýru vegna þess að ónæm yrki (TAAR) sýnir lægsta hlutfallslega magn þessara efnasambanda (Mynd 3C). Allar þrjár stöðuhverfur af caffeoyl shikimic sýru (m/z=335.0768 með villu upp á 1,2 ppm) voru auðkenndar með MS/MS litrófinu (Mynd S6) með broti við m/z 179.0340, sem samsvarar koffínsýrubroti A (C9H7O4) og broti við m/z 135.0443, sem samsvarar afkarboxýleringu koffínsýru (C8H7O2). Engu að síður virðist annað efnasamband sem samsvarar ekki caffeoyl shikimic sýrum (Mynd 3C) og þar sem varðveislutími er 29 mín með m/z=259.0607 (eða 373.0543 fyrir TFA adduct), greinilega aðgreind á milli mismunandi yrkja (Mynd 3D). Munurinn á uppsöfnun þessa efnasambands í rótum viðkvæmra og ónæmra yrkja (0,135 prósent), með hlutfallið um 1:35 (frá m/z=259.06, MS gögn), gæti skýrt áberandi líffræðilega virkni sem sést fyrir metanólútdrætti þessarar rótar.

【Frekari upplýsingar:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】