Rannsókn á aðskilnaði og ónæmishæfni vatnsútdráttar fjölsykru úr Cistanche Tubulosa

fyrir frekari upplýsingar:ali.ma@wecistanche.com

Ailadan·Maimaitiaili1,LI Yang1,YAO Jun1,YUAN Jie2

(1. Lyfjafræðideild, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Kína;2. Collage of Houbo, Xinjiang Medical University, Xinjiang Klamayi 834000, Kína）

ÁSTANDIÐ MARKMIÐ:Til að einangra vatnsþykkni affjölsykrur frá Cistanche tubulosaog til að kanna ónæmishæfni þeirra in vitro. AÐFERÐIR: AB{{{{30}}}} stórporous aðsogsresin var notað til að aflita C. tubulosa fjölsykru. Aflitunarferlið var fínstillt með hornréttu prófi með varðveisluhraða og aflitunarhraða fjölsykru sem yfirgripsmikið stig og notaði aðsogshraða, aflitunartíma, sýnisstyrk sem þætti. Staðfestingarprófin voru gerð. DEAE-650M jónaskiptasúla var notuð til að aðskilja vatnsútdrátt af aflituðu C. tubulosa fjölsykru. CCK-8 prófun var notuð til að greina áhrif mismunandi styrks fjölsykru（6.25-100 ug/mL) fyrir og eftir einangrun á útbreiðsluhraða átfrumna músa RAW264.7. Griess aðferð og ELISA próf voru notuð til að greina áhrif lágs, miðlungs og mikils styrks fjölsykru (12,5,25,50 ug/mL) á losun NO,IL-6 og TNF- í RAW264.7 frumum af völdum LPS. NIÐURSTÖÐUR: Í ákjósanlegu aflitunarferli AB-8 stórporu aðsogsplastefnis var aðsogsrennslið 1,2 BV/klst., aflitunartíminn var 9 klst. og sýnisstyrkurinn var 25 mg/ml. Alhliða einkunnir 3 sinnum af sannprófunarprófum voru 63,43％,63,29％ og 63,34％, í sömu röð, með að meðaltali 63,35％（RSD＝0.11％,n＝3）. Ein hlutlaus fjölsykra (CTZ) og 5 sýrur fjölsykrur (CT1, CT2, CT3, CT4, CT5) voru einangruð úr fjölsykru C. cistanche, innihaldið var 299,2,168.0},123.6,54.1. 11,2 mg/g. Samanborið við samanburðarhóp, 6.25-100 ug/mL CTZ (fyrir utan 6,25 μ g/ml), CT2, CT4, CT5 og 6,25 μ g/mL CTC (fjölsykran fyrir aðskilnað) gæti aukið útbreiðsluhraðann verulega af RAW264.7 frumum（P＜{{80}}.05）, en 6.25-100 ug/mL CT1,CT3 og 50 ug/mL CTC gætu lækkað útbreiðsluhraða RAW264. 7 frumur (P＜0,05）. Samanborið við LPS hópinn minnkaði losun NO marktækt í lágum, miðlungs og háum styrkleikahópum CTC, CT2, CT3 og CT5, CTZ lágstyrkshópum (P＜0,05) en var aukin marktækt í háum styrkleikahópum CT1 og CT4 （P＜0.05）. Losun IL-6 (nema fyrir CT1 háþéttnihópinn og CT5 lágþéttnihópinn) og TNF- (nema fyrir CT1 miðlungsþéttnihópinn) minnkaði marktækt í lágum, miðlungs og háum styrk hópum (P＜0,05) ）. Ályktanir: Bjartsýni aflitunartækni á stórporu aðsogsplastefni er stöðug og framkvæmanleg í rannsókninni. Einn hlutlausa fjölsykrur og 5 súr fjölsykrur er hægt að einangra úr vatnsþykkni úr C. tubulosa fjölsykrum, þar á meðal hefur CT2 fjölsykrur sterkari bólgueyðandi eiginleika.

LYKILORÐ:Cistanche tubulosa fjölsykra; Aflitun;Aðskilnaður;Ónæmishæfni

Cistanche tubulosaer þurr, holdugur stilkur með hreisturblöðum afCistanche tubulosa (Schenk) Wightaf Lidanaceae fjölskyldunni. Nútíma rannsóknir hafa sýnt að Cistanche Tubula inniheldur fenetýlalkóhól glýkósíð, iridoid glýkósíð, lignans, fjölsykrur, alkalóíða og önnur líffræðilega virk efni, sem hafa ástardrykkur, hægðalosandi, lifrarverndandi og öldrunareiginleika. , Aukið ónæmi gegn þreytu og nootropic áhrif [1-4], er hægt að nota til klínískrar meðferðar við skort á nýrna-yang, skorti á kjarna og blóði, getuleysi og ófrjósemi, máttleysi í mitti og hné, máttleysi í vöðvum og bein, þurrir þarmar og hægðatregða [5].

Smelltu til að Cistanche herba vörur

Vatnsútdrátturinn afCistanche tubulosa fjölsykraer brúngult. Fyrri tilraun rannsóknarhópsins okkar kom í ljós að auk þessCistanche tubulosa fjölsykra, vatnsþykknið inniheldur einnig efni sem ekki eru markhópar eins og vatnsleysanleg litarefni og prótein. Þetta stuðlar að aðskilnaði og hreinsun fjölsykra. Rannsóknir á líffræðilegum virkni hafa valdið miklum erfiðleikum. Hin hefðbundna aflitunarmeðferð með lífrænum leysiefnum mun eyðileggja efnafræðilega uppbyggingu markþáttarins í hráefninu og draga úr lyfjafræðilegri virkni einstaklingsins og innleiðingu skaðlegra innihaldsefna í mannslíkamann [6]. Macroporous adsorption plastefni er algengt efni til að aflita fjölsykrur í útdrætti úr kínverskum læknisfræði. Það er hagkvæmt fjölliða aðsogsefni með stöðuga eðlis- og efnafræðilega eiginleika. Það er hægt að miða á það með sértæku aðsogs- og sigtunarárangri fyrir litarefnishluta. Til að fjarlægja litarefnin í útdrætti hefðbundinnar kínverskrar læknisfræði, auk þess er hægt að endurnýja það með súrsun og basaþvotti, svo það er mikið notað [7]. Þessi rannsókn hefur í hyggju að nota stórporous aðsogsplastefni til að aflita vatnsþykkni Cistanche Tubula fjölsykru, og nota hornrétta tilraun til að hámarka aflitunarskilyrði; eftir aflitun á útdrættinum, í samræmi við mismunandi eðli hópsins sem fjölsykrun ber með sér, er fyrirhugað að nota Aðferðin við jónaskipta súluskiljun aðskilur hlutlausa og súru fjölsykruna í fjölsykrunni enn frekar.Cistanche tubulosa.

Rannsóknir hafa sýnt þaðcistanche plantafjölsykrur hafa ónæmisbælandi áhrif og eru náttúruleg ónæmisbælandi efni sem geta virkjað komplementkerfið og ónæmisfrumur eins og T/B eitilfrumur, átfrumur, náttúrulegar drápsfrumur (NK) og geta einnig stuðlað að margs konar losun frumuefna og stuðlað að framleiðslu mótefna. o.s.frv. [8-11]. Lipopolysaccharide (LPS) getur virkjað bólgumerkjaferil átfrumna, framkallað nituroxíð (NO) og bólgueyðandi frumudrep eins og interleukin 6 (IL-6) og æxlisdrep-alfa (TNF-). Myndun og losun, sem veldur þar með röð bólguviðbragða í líkamanum [12]. Þessi rannsókn hefur í hyggju að koma á fót LPS-örvuðu RAW264.7 átfrumubólgalíkani músa, út frá áhrifum Cistanche Tubula fjölsykru á fjölsykrun átfrumna, seytingu bólguþátta og NO framleiðslu, og bráðabirgðamat á áhrifum þess á ónæmisvirkni líkamans. Það miðar að því að veita fræðilegan grunn fyrir ítarlega rannsókn á bólgueyðandi virka efnisgrunninumCistanche tubulosafjölsykrur og þróun fjölsykruauðlinda þess.

Fyrstu rannsóknir hafa leitt í ljós að þegar fjölsykrurnar í Cistanche cistanche eru unnar út með vatni munu fleiri vatnsleysanleg efni leysast upp saman, sem hefur áhrif á hreinleikacistanche cistanche fjölsykrur. Þess vegna getur frekari aðskilnaður og hreinsun þeirra lagt grunninn að rannsóknum á grunni fjölsykruefnis og líffræðilegri virkni. Stórporus aðsogsresin aðferðin er almennt notuð aflitunaraðferð [17-19]. Þar sem það er enn óljóst um litarefnasamsetningu íCistanche tubulosa, þannig að rannsóknarhópurinn notaði truflanir aðsogstilraunir til að skima heppilegasta stórporous aðsogsresínið AB-8 úr stórporous aðsogsplastefni með mismunandi skautum. Fjölsykra Cistanche deserticola hefur góða varðveislugetu. Til þess að ná betri aflitunaráhrifum eru þessar rannsóknir byggðar á fyrri rannsóknum og notaðar hornréttar tilraunir til að ákvarða aflitunarferlið (þvottur. Afsogsflæðishraði, aflitunartími og sýnismassastyrkur) hefur verið fínstillt. Fyrir vikið var ákjósanlegasta aflitunaraðferðin fyrir fjölsykruna Cistanche tubulosa 1,2 BV/klst. skolunarhraði, aflitunartími 9 klst. og sýnismassastyrkur 25 mg/ml. Niðurstöður sannprófunartilrauna sýna að aflitunaraðferðin er framkvæmanleg.

Hreinleiki og gerð náttúrulegra fjölsykra eru mikilvægir þættir sem hafa áhrif á virkni þess. Þess vegna eru viðeigandi rannsóknir á einangrunar- og hreinsunaraðferðum fjölsykra enn í brennidepli í rannsóknarvinnu náttúrulegra virkra fjölsykra. Algengar aðferðir til að aðskilja fjölsykrur eru meðal annars útfelling, hlaupskiljun, anjónaskiptaskiljun, stórporous resin súluskiljun og ofsíun [20]. Vegna mismunandi samsetningar einsykra hafa fjölsykrur mismunandi hleðslueiginleika. Þeim má skipta í hlutlausar fjölsykrur og súr fjölsykrur. Hlutlausar fjölsykrur eru fjölliður sem eru samsettar úr tveimur eða fleiri mismunandi sykurmiðuðum einliðum sem innihalda ekki lífrænar sýrur. Súrar fjölsykrur eru flóknari en hlutlausar fjölsykrur hvað varðar samsetningu og uppbyggingu, nema þær innihalda fleiri en tvær einliður sem byggja á sykri. , Inniheldur einnig uronic acid mono Body [21]. Anjónaskiptasúluskiljun notar mismuninn á hleðslu fjölsykrna til að aðgreina hlutlausar fjölsykrur frá súrum fjölsykrum [22]. Af þessum sökum notaði þessi rannsókn DEAE-650M jónaskiptasúluskiljunarsúlu til að aðskilja Cistanche Tubula fjölsykrur, og samtals 1 hlutlaus fjölsykra og 5 sýru fjölsykrur voru aðskildar. Átfrumur eru ónæmishæfar frumur sem geta stjórnað ónæmi með því að gleypa og drepa sjúkdómsvaldandi örverur. Rannsóknir hafa sýnt að þegar mannslíkaminn er örvaður af meinafræðilegum eða vélrænum skemmdum getur lyfjainngrip virkjað átfrumur til að auka átfrumugetu átfrumna af völdum LPS og hindra þannig framleiðslu á NO og röð bólgufrumna eins og IL{{ 9}} og seytingu TNF-þáttar, og vernda þar með hýsilinn gegn sýklum [23]. Í þessu skyni prófaði þessi rannsókn áhrif ýmissa Cistanche tubulosa fjölsykra á útbreiðsluhraða RAW264.7 frumna, sem og áhrifin á LPS-framkallaðar átfrumur til að losa NO, IL-6 og TNF-. Þar af leiðandi, innan massastyrksbilsins 12,5, 25 og 50 ug/mL, stuðlaði það ekki aðeins að útbreiðslu RAW264.7 frumna heldur hamlaði það einnig verulega fjölgun RAW264.7 frumna.

Thefjölsykra af Cistanche tubulosaí RAW264.7 frumum sem LPS örva til að losa NO, IL-6 og TNF- eru CT2. Viðeigandi rannsóknir hafa sýnt að einsykrur samsetning og mólþyngd fjölsykra mun hafa áhrif áónæmisbælandistarfsemi. Einsykrur eins og galaktósa, arabínósi, mannósa og glúkósa eru í jákvæðri fylgni við ónæmisvirkni fjölsykra [24]. Fjölsykrur með stærri mólþunga geta innihaldið hærri Margar mjög endurteknar hnúta uppbyggingu, geta krosstengd plasmahimnuyfirborðsviðtaka margátta, og sérstaklegaauka ónæmisbælandiáhrif [25]. Þess vegna gæti einsykrusamsetning súra fjölsykrunnar CT2 í þessari rannsókn innihaldið sérstakar einsykrur eða margar einsykrur sem eru jákvæðar tengdar ónæmisvirkni og mólþyngdin gæti verið meiri en hlutlausar fjölsykrur og aðrar súr fjölsykrur, en frekari rannsóknir eru nauðsynlegar til að staðfesta . Í stuttu máli er bjartsýni aflitunarferlið fyrir stórporous aðsogsplastefni í þessum rannsóknum stöðugt og framkvæmanlegt; Hægt er að aðskilja 1 hlutlausa fjölsykru og 5 sýru fjölsykrur frá vatnsþykkni Cistanche cistanche cistanche, þar á meðal ónæmisfræðilega virkni sýrufjölsykrunnar CT2 Stronger. Þessi rannsókn getur lagt tilraunagrundvöll fyrir þróun og nýtingu Cistanche Tubula fjölsykrna.