Hermt örþyngdarafl hefur áhrif á ónæmistengda lífmerki í lungnakrabbameini

Ágrip: Örþyngdarafl er ný aðferð sem gæti þjónað sem viðbót við þróun krabbameinsmeðferða í framtíðinni. Í lungnakrabbameini er vel fjallað um áhrif örþyngdaraflsins á frumuferli og flutningsgetu frumna. Hins vegar eru áhrif þess á aðferðirnar sem knýja fram lungnakrabbamein áfram á frumstigi. Í þessari rannsókn var sýnt fram á að 13 gen sem tjáðust á mismunandi hátt tengdust horfum á lungnakrabbameini undir hermdu örþyngdarkrafti (SMG). Með því að nota auðgunargreiningu á genasettum eru þessi gen auðguð á húmorale ónæmisferlum. Í staðinn voru alveolar basal-epithelial (A549) frumur útsettar fyrir SMG í gegnum 2D clinostat kerfi in vitro. Auk formgerðarbreytinga og lækkunar á útbreiðsluhraða, sneri SMG við þekju-til-mesenchymal umbreytingu (EMT) svipgerð A549, lykilaðferð í framvindu krabbameins. Þetta kom fram með aukinni tjáningu E-cadheríns í þekju og minni tjáningu á mesenchymal N-cadherin, sem sýndi því minna meinvörp. Athyglisvert var að við sáum aukna tjáningu á FCGBP, BPIFB, F5, CST1 og CFB og fylgni þeirra við EMT undir SMG, sem gerir þau að hugsanlegum æxlisbælandi lífmerkjum. Saman sýna þessar niðurstöður ný tækifæri til að koma á nýjum lækningaaðferðum fyrir lungnakrabbameinsmeðferð.

Lykilorð: hermt örþyngdarafl; EMT; lungna krabbamein; meinvörp; æxlisbæli; lífmerki

Áhrif Cistanche jurt-antitumor

1. Inngangur

Rýmið er þekkt fyrir að vanta þyngdaraflið, sem hefur áhrif á líkamann á líffæra-, vef- og frumustigi. Örþyngdarafl, ástand sem er augljóst þyngdarleysi, er verulegur streituvaldur í geimnum sem vitað er að hefur veruleg áhrif á heilsu manna, svo sem beinmissi, vöðvarýrnun og hjartabilun [1,2]. Áhrif örþyngdaraflsins á krabbameinsfrumur hafa einnig verið vaxandi þungamiðja í geimnum og krabbameinsrannsóknum. Sýnt hefur verið fram á að örþyngdarkraftur bælir virkni ónæmisfrumna og truflar fjöllíkamakerfi, sem getur aukið hættuna á að fá krabbamein [2-4]. Vegna þessara augljósu heilsufarsvandamála hefur örþyngdarumhverfið gert vísindamönnum kleift að rannsaka lífeðlisfræðilega aðferðina sem hafa áhrif á örþyngdarafl og hjálpað til við að uppgötva meðferðir við taugahrörnunarsjúkdómum, ónæmismeðferðum og hugsanlega betri og markvissari meðferð gegn krabbameini [4-6]. Fjölmargar rannsóknir hafa vel skjalfest og farið yfir þá miklu þýðingu sem örþyngdarkraftur hefur á frumuframvindu, útbreiðslu og frumudauða í ótal æxlisfrumulínum, þar á meðal lungnakrabbameini [7-12]. Hins vegar er sýnt fram á að margar aðrar rannsóknir sem taka þátt í örþyngdarafli framkalla breytingar á genatjáningu sem taka þátt í útbreiðslu krabbameinsfrumna, meinvörpum og lifun og færa frumurnar í átt að minna árásargjarnri svipgerð [13,14]. Þetta gæti varpað ljósi á nýjan skilning á líffræði æxlis og greiningu, þar af leiðandi varpa ljósi á örþyngdarafl sem nýstárlegt tæki til að uppgötva ný markmið í von um að þróa nýjar rannsóknaraðferðir og bæta meðferðaraðferðir. Lungnakrabbamein, með lungnakrabbamein sem ekki er af smáfrumugerð (NSCLC) sem mest áberandi tegund, er leiðandi dánarorsök, stendur fyrir 12% allra krabbameina og er það krabbamein sem oftast greinist [15]. Í rannsóknum sem fela í sér örþyngdarafl, sem gæti leiðbeint okkur til að skilja betur krabbameinsvaldandi ferlið, var sýnt fram á að lungnakrabbameinsfrumur missa stofninn eftir útsetningu fyrir örþyngdarafl og hafa þannig áhrif á vöxt og starfsemi krabbameinsfrumna [11]. Rannsókn Ahn o.fl. sýndi að útsetning lungnakrabbameinsfrumna (A549) fyrir örþyngdarkrafti olli hröðum flæði og fjölgun. Þetta var útskýrt af uppstýrðu magni málmpróteasa (MMP-2 og MMP-9) undir örþyngdarafl, sem gegnir því mikilvægu hlutverki í innrás krabbameins og fólksflutningum [10]. Í annarri rannsókn, Chung o.fl. komst að því að hermdur örþyngdarkraftur hafði ekki marktæk áhrif á fjölgun lungnakrabbameinsfrumna heldur jókst flæði miðað við samanburðarhópinn undir eðlilegu þyngdarafl [16]. Þvert á móti, Chang o.fl. sýndi minnkun á flæði í A549 lungnakrabbameinsfrumulínu eftir 24 klst. útsetningu fyrir örþyngdarskilyrðum [17]. Þrátt fyrir veruleg áhrif örþyngdaraflsins á frumuhegðun, sem felur í sér frumudauða, fólksflutninga og innrásargetu, á enn eftir að skýra áhrif þess á lungnakrabbamein að fullu. Það er vel staðfest að þekjufrumur gangast undir nokkrar lífefnafræðilegar breytingar til að koma á mesenchymal svipgerð sem eykur frumufrumuþol, innrásargetu og flutningsgetu. Slíkt líffræðilegt ferli er þekkt sem epithelial-to-mesenchymal transition (EMT), sem einkennir framvindu krabbameins [18]. Tengsl EMT við framvindu krabbameins hafa verið vel rædd. Vitað er að æxli virkja EMT með því að hækka umritunarþætti, tjá frumuyfirborðsprótein og framleiða ECM niðurbrjótandi ensím. Þegar EMT er virkjað missa æxlisfrumurnar viðloðun frumu og frumu og öðlast flæðis- og ífarandi eiginleika [19]. Aðeins tvær rannsóknir hafa sýnt að eftirlíking af örþyngdarkrafti veldur tímabundinni þekju-til-mesenchymal umskipti (EMT) í keratínfrumum [9]. Að auki voru slík fyrirbæri auðkennd í MCF-7 frumum og HUVEC [20]; þó hafa engar rannsóknir beinst að áhrifum örþyngdarkrafts á EMT í lungnakrabbameini. Þrátt fyrir margar mikilvægar uppgötvanir sem gerðar hafa verið á getu örþyngdaraflsins til að stýra æxlismyndandi og meinvörpuðum ferlum krabbameins, eru nákvæmar aðferðir knúin áfram af örþyngdarborginni tiltölulega óþekktar, sem veldur því opnum spurningum varðandi aðlögunarbreytingar sem eiga sér stað á sameindastigi. Í þessari rannsókn höfum við greint einkenni ónæmistengdra gena (FCGBP, BPIFB1, F5, CFB og CST1) sem sýndu marktækt aukna mRNA tjáningu í A549 frumum undir áhrifum herma örþyngdarkrafts (SMG). Að auki höfum við metið framlag SMG í A549 krabbameinsframvindu með EMT reglugerð. FCGBP, BPIFB1, F5, CFB og CST1 og fylgni þeirra við EMT lykilmerki sýndu hugsanlega minna meinvörpuð svipgerð lungnakrabbameins undir SMG. Niðurstöður þessarar rannsóknar leggja grunn að framtíðarrannsóknum sem þarf til að bera kennsl á undirliggjandi kerfi, sem mun þróa skilning okkar og aðstoða við þróun nýrra lækningaaðferða til að meðhöndla lungnakrabbamein.

Kostir cistanche tubulosa-antitumor

2. Úrslit

2.1. Algengustu genin sem eru greind með mismunatjáningu í lungnakrabbameinsfrumum undir hermdu örþyngdarafl (SMG) samanborið við jarðþyngdarafl (GG)

Til að bera kennsl á gen sem taka þátt í lungnakrabbameini undir hermdu örþyngdarkrafti (SMG), rannsökuðum við upphaflega gen sem eru mismunandi tjáð undir SMG samanborið við þyngdarafl á jörðu niðri (GG) fyrir lungnakrabbamein í mönnum með því að nota opinberlega aðgengilegan Gene Expression Omnibus (GEO) gagnagrunn. Tvö gagnapakka voru valin, GSE78210 og GSE36931, sem innihalda genatjáningu fyrir tvær mismunandi lungnakrabbameinsfrumulínur úr mönnum, A549 og Colo699, ræktaðar í 2D og 3D frumuræktunarskilyrðum. Mismunur á erfðatjáningarsniðum milli SMG og GG sýna var sýndur í eldfjallalóðum (Mynd 1). Þekktum genum (DEG; mynd 2) fyrir hvert gagnasafn var skipt í þau sem eru uppstýrð í lungnakrabbameini (21 gen í A549 og 29 gen í Colo699 í GSE78210 gagnasafninu og 47 gen í A549 í GSE36931 gagnasafninu) og þau sem eru niðurstýrt I lungnakrabbamein (40 gen í A549 og 27 genum Colo699 úr GSE78210 gagnasafni og 87 gen í A549 í GSE36931 gagnasafni), eins og sýnt er í töflu 1. Þrettán DEG voru marktækt hátt tjáð í A549 frumum í GSE78210 og GSE73690 SMG borið saman við GG ástandið. Algengustu genin voru auðkennd með því að nota InteractiVienn veftólið (Mynd 2A). Umsóknargenin eru AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP og BPIFA1. Til að ganga úr skugga um hvort auðkenndar DEGs eigi þátt í sameiginlegum ferlum, voru umsækjenda genin hlaðið upp á Metascape (http://metascape.org; skoðað 11. nóvember 2021). Athyglisvert er að þessi gen eru auðguð á leiðum sem fela í sér húmoral ónæmissvörun og stjórnaða frumufrumu (Mynd 2B).

Mynd 1. Eldfjallauppdráttur sem sýnir mismunandi tjáð gen (DEGs) með GEO Omnibus. (A) Eldfjallalóð sem sýnir DEGs undir SMG og GG áhrifum í A549 frumum með því að nota (A) GSE78210 og (B) GSE36931 gagnapakka. (C) Eldfjallalóð sem sýnir DEGs undir SMG og GG áhrifum í Colo699 frumulínu með því að nota GSE78210 gagnasafn. Rauði liturinn gefur til kynna uppstýrð gen, en blái liturinn gefur til kynna niðurstýrð gen.

Tafla 1. Heildargen sem eru mismunandi tjáð við SMG samanborið við GG í lungnakrabbameinsfrumulínum A549 og Colo699. Hvert gagnasafn var með fellingarbreytingar aðlagaðar til að draga út efstu 5% af DEG. Fyrir GSE36931 var fold change (FC) stillt til að innihalda aðeins gen með FC sem er stærra en eða jafnt og 4 eða minna en eða jafnt og -4. Fyrir GSE78210 var FC stillt til að innihalda aðeins gen með FC sem er stærra en eða jafnt og 3 eða minna en eða jafnt og -3.

Mynd 2. Þrettán algengar DEGs á milli GSE78210 og GSE36931 gagnasafna í lungnakrabbameini. (A) Venn skýringarmynd sem sýnir 134 gráður í GSE36931 (A549 frumulínu), 61 gráður í GSE78210 (A549 frumulínu) og 56 gráður í GSE78210 (Colo699 frumulínu) við SMG aðstæður samanborið við GG. Af alls greindum 251 genum reyndust 13 DEG vera sameiginleg á milli gagnasafnanna tveggja, GSE78210 og GSE36931, í A549 frumulínu. Venn skýringarmynd var búin til með InteractiVinn.

2.2. Mismunandi tjáð gen í tengslum við klínískar horfur sjúklinga með kirtilkrabbamein í lungum

Mismunandi tjáð gen í tengslum við klíníska horfur sjúklinga í lungnakirtilkrabbameini Til að meta klínískt forspárgildi umsækjenda gena hjá sjúklingum með kirtilkrabbamein í lungum, Kaplan–Meier plotter (http://www.kmplot.com/; skoðaður 11. nóvember 2{ {44}}21) var notað til að bera saman heildarlifun (OS) sjúklinga með kirtilkrabbamein í lungum (LUAD) með mikla/miðlungsáhrif á móti lágri tjáningu kandídata gena (Mynd 3). Hátt mRNA tjáningarstig NOX1 (áhættuhlutfall (HR), 1,45; 95% öryggisbil (CI), 1,11–1,9; p=0.0058), GDA (HR) , 1,74; 95% CI, 1,33–2,26; p=3.2e-05), TCN1 (HR, 1,62; 95% CI, 1,26–2,08; p=0.00014), og BPIFA1 (HR, 1,44; 95% CI, 1,12–1,84; p=0.0026) voru marktækt tengd slæmum horfum (mynd 3A–D). Á hinn bóginn tengdist hátt mRNA tjáningarmagn FCGBP (HR, 0,63; 95% CI, 0,46–0,85; p=0.0026) betri horfum og hærri heildarlifun hjá LUAD sjúklingum (Mynd 3E). Engin marktæk fylgni var á milli mRNA

Mynd 3. FCGBP, CST1, F5, CFB og BPIFB1 í tengslum við klínískar horfur sjúklinga með kirtilkrabbamein í lungum. Kaplan-Meier lifunarferlar af mRNA tjáningarstigum frambjóðandi gena: (A)NOX1; (B) GDA; (C) TCN1; (D) PLUNC; (E) FCGBP; (F) AZGP1; (G) H2Bf; (H) B7X; (I) AGR3; (J) CEACAM6; (K) F5; (L) BPIFB1; og (M) CST1 hjá sjúklingum með kirtilkrabbamein í lungum. HR: hættuhlutfall.

cistanche viðbót bætur - Antitumor

Smelltu hér til að skoða Cistanche vörur

【Biðja um meira】 Netfang:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.3. Tjáning á FCGBP, BPIFB1, F5, CFB og CST1 í A549 frumum eftir hermt örþyngdarafl

Til að sannreyna tjáningu á in silico auðkenndum genum (AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP og BPIFA1), var beitt in vitro með qRT-PCR. Athyglisvert er að með því að nota qRT-PCR sýndu gögn okkar marktæka uppstjórnun á FCGBP mRNA tjáningu, sérstaklega eftir 48 og 72 klst. í A549 frumum, eftir SMG samanborið við GG (Mynd 4A). Að auki var mRNA tjáning CFB, F5 og BPIFB1 marktækt uppstýrt 72 klst. eftir SMG, og samanborið við GG, í A549 frumum (Mynd 4B, C, E). Lítilsháttar aukning, þó ekki marktæk, á mRNA tjáningu greindist fyrir CTS1 við SMG aðstæður samanborið við GG (Mynd 4D). Tjáning AZGP1, AGR3, GDA, VTCN1, BPIFA1, NOX1, CEACAM5 og TCN1 voru óákveðin fyrir bæði SMG og GG (gögn ekki sýnd).

Mynd 4. Uppstjórnun FCGBP, CST1, F5, CFB og BPIFB1 við SMG aðstæður in vitro. mRNA tjáningarstig (A) FCGBP, (B) CFB, (C) F5, (D) CTS1, og (E) BPIFB1, magnmælt með qRT-PCR og staðlað til GAPDH í A549 frumum sem voru undir GG og SMG aðstæður í 24 , 48 og 72 klst. Súlurit sýna niðurstöður þriggja sjálfstæðra tilrauna (n=3). * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0,001, og **** p < 0,0001.

Á heildina litið gefa þessar upplýsingar til kynna að FCGBP, F5, CFB og BPIFB1 sem eru tjáð með mismunandi hætti í lungnakrabbameini gætu gegnt mikilvægu hlutverki í framvindu lungnakrabbameins.

2.4. Hermt örþyngdarafl dregur úr lífvænleika frumna og snýr við þekju-til-mesenchymal umskiptum í A549 lungnakrabbameinsfrumulínu

Til að kanna hvort SMG hafi áhrif á útbreiðslumöguleika A549 frumna var frumulífvænleikapróf gerð með því að nota trypan blue útilokunarpróf. Gögnin okkar leiddu í ljós að SMG olli marktækt tímaháðri lækkun á frumufjölgun (Mynd 5B). Minnkun á frumufjölgun var marktæk aðallega eftir 48 og 72 klst. eftir SMG samanborið við GG, sem sýndi aukningu á frumufjölgun A549 frumna. Samhliða því greindist breyting á frumuformgerð í A549 frumum undir SMG. Til að meta þessar breytingar voru frumur fjarlægðar úr SMG ástandinu, sáð á 24-brunnsplötur og skoðaðar í ljóssmásjá eftir 1 klst. af SMG notkun. Athyglisvert er að frumur sem urðu fyrir SMG sýndu kornótta, klumpaða formgerð eftir SMG. (Mynd 5A).

Mynd 5. Hermt örþyngdarkraftur dregur úr lífvænleika frumna og framkallar formfræðilegar breytingar í A549 frumum á tímaháðan hátt. (A) Fulltrúar smámyndir af foreldra A549 frumum (GG) og A549 frumum sem voru undirgefin SMG í 24, 48 og 72 klst áður en þær voru sáðar aftur í 1 klst undir GG. Myndir voru teknar með 10x stækkun. (B) Frumulífvænleiki A549 frumna var metinn með því að nota trypan blátt litarefni útilokunarpróf. Meðaltal frumulífvænleika 3 óháðra tilrauna er sýnd sem prósentustjórnun. **** p < 0.0001. Mynd 5. Hermt örþyngdarkraftur dregur úr lífvænleika frumna og framkallar formfræðilegar breytingar í A549 frumum á tímaháðan hátt. (A) Fulltrúar smámyndir af foreldra A549 frumum (GG) og A549 frumum sem voru undirgefin SMG í 24, 48 og 72 klst áður en þær voru sáðar aftur í 1 klst undir GG. Myndirnar voru teknar með 10X stækkun. (B) Frumulífvænleiki A549 frumna var metinn með því að nota trypan blátt litarefni útilokunarpróf. Meðaltal frumulífvænleika 3 óháðra tilrauna er sýnd sem prósentustjórnun. **** p < 0,0001.

Kínversk jurt cistanche planta - Antitumor

Til að skilja gögnin sem fengust um minnkaða frumufjölgun í A549, metum við framlag SMG til þekju-til-mesenchymal umskipti (EMT) kerfisins. EMT er aðalsmerki og mikilvægur búnaður sem knýr framgang krabbameins og meinvörp og eykur þannig hreyfanleika frumna og ífarandi eiginleika [19]. Lykil EMT merki (E-cadherin, N-cadherin, ZO-1 og snigill) og málmpróteinasa MMP-2 og MMP-9 mRNA tjáningarstig voru mæld með qRT-PCR í A549, undir bæði GG og SMG (mynd 6). Við notkun SMG sást marktæk aukning á E-cadherin mRNA tjáningu, samhliða marktækri minnkun á N-cadherin mRNA tjáningu, 48 og 72 klst. eftir SMG (Mynd 6A, B). Óveruleg aukning á ZO-1 og MMP-9 og lækkun á umritunarstuðli snigla greindust við SMG (Mynd 6C–E). MMP-2 minnkaði marktækt í A549 48 klst. eftir SMG (Mynd 6F), sem gefur til kynna minna ífarandi form. Samanlagt styðja þessi gögn mesenchymal-epithelial transition (MET) svipgerð framkölluð af SMG í A549.

Mynd 6

2.5. Þekju-til-Mesenchymal Transition Pathway tengist tjáningu FCGBP, BPIFB1, F5, CFB og CST1

Til að öðlast frekari vélræna innsýn í hugsanlegt hlutverk auðkenndu gena í A549 og hugsanlega fylgni þeirra við EMT við SMG aðstæður, var gerð genasamskiptagreiningar með því að nota GeneMANIA gegn EMT genamerkjum. Mynd 7 sýnir víxlverkanir gena sem teiknaðar eru á milli EMT genanna E-cadherin (CDH1), N-cadherin (CDH2), TJP1, CTNNB1, SNAI1 (Snigl), ZO-1 og -catenin, í sömu röð. Með því að vita mikilvægu hlutverki þeirra í innrás krabbameins og fólksflutninga voru málmpróteinasarnir MMP-2 og MMP-9 einnig með í greiningunni. Hnútarnir bera kennsl á samtjáningarmynstur milli gena af mismunandi styrkleika miðað við þykkt hnútsins. Umsóknargenin sýna að vissu marki samtjáningu sín á milli; BPIFB1 er tjáð með CFB og CST1; FCGBP er tjáð með F5, CST1 og CFB; CST1 er tjáð með CFB og F5 er tjáð með CFB, CST1 og BPIFB1. Samtjáningarhnútar voru einnig auðkenndir á milli EMT gena og umsóknargenanna; CDH1 er samtjáð með FCGBP og F5; CDH2 er tjáð með F5, CST1, BPIFB1 og FCGBP; CTNNB1 er tjáð með CST1 og FCGBP; SNAI1 er tjáð með CST1, F5 og BPIFB1; TPJ1 er tjáð með CST1, FCGBP og F5; CTNNB1 er tjáð með CST1 og FCGBP; MMP2 er tjáð með BPIFB1 og CST1; og MMP9 er tjáð með F5, CST1, FCGBP og CFB. Þessar niðurstöður benda til marktækrar fylgni á milli nýgreindra gena og EMT merkja við SMG aðstæður, hugsanlega tengdar EMT ferlum.

Mynd 7. FCGBP, CST1, F5, CFB og BPIFB1 tengjast EMT ferlinum. Gen-gena samskiptanet valinna umsækjenda gena; FCGBP, CST1, F5, CFB og BPIFB1 með EMT genum; CDH1, CDH2, TJP1, CTNNB1 og SNAI1, auk frumuflutningstengdra gena MMP2 og MMP9 framleidd af GeneMANIA (http://genemania.org/; skoðað 11. nóvember 2021) til að bera kennsl á víxlverkanir milli umsækjenda gena með EMT og frumuflutningsmerki. Mismunandi litir netbrúnarinnar gefa til kynna lífupplýsingaaðferðirnar sem notaðar eru: spá fyrir vefsvæði (appelsínugult), líkamleg samskipti (rautt), samtjáning (fjólublá), sameiginleg próteinlén (brúnt), leið (ljósblá), sambyggð (dökk) blár), og erfðafræðileg samskipti (græn)

3. Umræður

Cistanche te

Umræða Lungnakrabbamein, einn af mikilvægustu og ógnandi sjúkdómum um allan heim, hefur nýlega vakið mikla athygli í „geimrannsóknum“. Hins vegar, þrátt fyrir framfarir á þessu sviði, er framgangur lungnakrabbameins og viðbrögð þess við meðferð enn umdeild vegna skorts á endanlegum matsaðferðum sem hjálpa til við að koma í veg fyrir eða meðhöndla krabbamein [21]. Að því er við vitum er þetta fyrsta skýrslan til að bera kennsl á safn gena sem undirskrift fyrir framvindu lungnakrabbameins undir vélrænu umhverfi sem framkallað er af hermi örþyngdarafls (SMG). Við leggjum áherslu á aukna tjáningu á ónæmissvörunstengdum genum FCGBP, BPIFB, F5, CST1 og CFB og fylgni þeirra við þekju-til-mesenchymal umskipti (EMT) undir SMG, sem gerir þeim hugsanlega lífvísa um framvindu lungnakrabbameins. Hérna leggjum við einnig áherslu á áhrif framkallaðrar SMG á EMT-stjórnun, sem er einkennismerki krabbameinsframvindu [18,22], til að styðja við mesenchymal-to-epithelial transition (MET) svipgerð. Á heildina litið býður þessi rannsókn upp á grundvöll fyrir tengsl auðkenndu gena við EMT; Hins vegar er þörf á frekari rannsóknum til að afhjúpa nákvæmlega aðferðir sem hjálpa til við að þróa nýja markvissa meðferð við lungnakrabbameini. Í þessari rannsókn sýndum við þrettán gen (AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP og BPIFA1) sem eru marktækt tjáð í lungnakrabbameini undir herma örþyngdarafl (SMG) sem borið saman við þyngdarafl jarðarinnar í kísil. Gögnin okkar sýndu að þessi mismunandi tjáð gen eru auðguð á leiðum sem tengjast aðallega húmorsónæmi og stýrðri exocytosis. Áhugi samhliða niðurstöðum okkar, þó að meginhlutverk FCGBP sé enn óljóst [23]. Þetta kann að hluta til stafa af misvísandi hlutverkum sem það hefur í mismunandi æxlum [25]. Til dæmis er sýnt fram á að FCGBP er marktækt tengt betri heildarhorfum og sjúkdómssértækri lifun hjá sjúklingum með krabbamein í höfði og hálsi, ristilkrabbameini og beinsarkmein [25-27], en í krabbameini í eggjastokkum og blöðruhálskirtli er mikil tjáning á FCGBP tengdist lakari heildarlifun [28]. Athygli vekur að hlutverk FCGBP hlutverks hefur verið rakið til ónæmisvarnaraðferða, bólgueyðandi viðbragða, svo og frumuverndar [29,30], sem gerir það að mikilvægu forspármerki [31]. Með því að nota in vitro forrit, höfum við metið tjáningu auðkenndra gena í lungnakrabbameini og við SMG aðstæður með 2D clinostat. Það er mikið úrval af clinostat gerðum og öðrum örþyngdarpöllum sem hafa verið þróaðir. Þetta felur í sér 1/2/3 D clinostat kerfi, handahófskenndar staðsetningarvélar búnar renniflöskum (aðallega fyrir krabbameinsfrumur í skjaldkirtli) og NASA-þróuð snúningsveggæðar. Hver er hannaður til að þjóna ákveðnu rannsóknarmarkmiði, þar sem sumar eru hannaðar til að rækta viðloðandi frumur eða fjöðrunarfrumur og aðrar eru notaðar til að mæla hreyfihvarfasvörun á netinu. Athygli vekur að clinostat er einn einfaldasti og aðlögunarlegasti pallurinn sem notaður er af mismunandi tilraunaforritum. Í grundvallaratriðum einkennist 2D clinostatið af snúningsás sem snýst stöðugt á stilltum stöðugum hraða og í stefnu sem er hornrétt á stefnu þyngdarvigrar jarðar, sem skapar miðflóttakrafta sem líkja eftir raunverulegum örþyngdarafl [14,32,33 ]. Athyglisvert er að af þrettán genum jókst tjáning FCGBP, BPIFB, F5, CST1 og CFB marktækt sem svar við 2D clinostat-völdum SMG í A549 frumum. Tjáning FCGBP og BPIFB hafði mest áhrif og sýndi marktæka aukningu á öllum metnum tímapunktum: 24, 48 og 72 klst. eftir SMG. Líkt og FCGBP er vitað að BPIFB1 stuðlar að meðfæddum ónæmissvörun [34]. BPI-fellingin sem inniheldur fjölskyldu B meðlim 1 prótein (BPIFB1), sem er fyrst og fremst framleitt af þekjuvef í öndunarvegi, hefur reynst taka þátt í varnaraðferðum hýsils ásamt bakteríudrepandi og bólgueyðandi áhrifum [35]. Í öndunarfærasjúkdómum er sýnt fram á að BPIFB1 hefur æxlishemjandi og meinvörpandi áhrif; Hins vegar eru nákvæmar aðferðir óljósar, sem gefur tilefni til frekari rannsókna [34,36]. Ein rannsókn Wei o.fl. komist að því að BPIFB1 hamlar flæði og innrás í nefkokskrabbameini [37]. Í ljósi þess kom í ljós að stökkbreytingar sem eiga sér stað í BPIFB1 stuðla að hættu á lungnakrabbameini og niðurstýring þess leiðir til slæmra horfa hjá lungnakrabbameinssjúklingum [38,39]. Auk hlutverks FCGBP og BPIFB er sýnt fram á að complement þáttur B (CFB) og chimeric æxlisbæli 1 (CST1) gegna verndandi hlutverkum í krabbameini. Til dæmis var greint frá því að mikil tjáning CFB tengdist aukinni heildarlifun sjúklinga og sjúkdómslausri lifun hjá lungnakrabbameinssjúklingum [40]. Ennfremur þjónar komplementkerfið sem fyrsta varnarlínan gegn sýklum, sem þjónar sem aðalþáttur bæði meðfædda og áunna ónæmiskerfisins [41]. Eins og fyrir CST1, mismunandi rannsóknir lögðu áherslu á áhugaverða eiginleika þess, svo sem getu þess til að bæla frumuvöxt, framkalla frumudauða og mótstöðu þess gegn óvirkjun af krabbameinsvaldandi formum p53, sem gerir það aðlaðandi, en samt valkostlegt meðferðarmarkmið villigerðar p{ {74}}ónæm æxli í mönnum [42]. Til viðbótar við aukna tjáningu FCGBP, BPIFB1, F5, CFB og CST1, sýndu gögn okkar á áhugaverðan hátt tvær frumutengdar svipgerðir af A549 frumum undir SMG - formgerðarbreytingu í samsöfnun og klumplaga frumur og veruleg lækkun á útbreiðslu hlutfall eftir SMG. Þetta er samhliða nokkrum öðrum rannsóknum, þar sem frumur sem voru útsettar fyrir SMG sýndu litla kekki eða marglaga frumusamstæðu [43,44]. Þessi formfræðilegi munur endurspeglast af samhliða stórkostlegum virknibreytingum á frumuferlum, hluti þeirra er EMT. EMT er aðalsmerki meinvörpunarferlisins, sem tengist flótta ónæmiseftirlits og innrásar í æðakerfið, sem gerir frumunum kleift að dreifa sér til efri líffæra [19,22]. Í grundvallaratriðum gangast illkynja þekjufrumur í gegnum EMT kerfi á fyrstu stigum æxlisþróunar, þar sem þessar frumur hafa tilhneigingu til að tjá mesenchymal eiginleika, sýna aukna hreyfigetu sem auðveldar flótta þeirra frá aðal sess, en meinvörpum sem myndast á aukahliðinni birtast minna aðgreindar eiginleikar samanborið við samsvarandi frumæxli þeirra. Hér er MET (mesenchymal-to epithelial) ferli hluti af slíkri framvindu æxlismyndunar með meinvörpum. Hins vegar vanrækir það ekki þátttöku EMT á mismunandi stigum krabbameinsframvindu vegna þess að krabbameinsfrumur á efri stöðum munu annað hvort halda áfram að vaxa og fjölga eða fara í dvala [45,46]. Slík margþætt genasamhæfing og útlit sérstakra farmerkja sem stjórna meinvörpum krabbameinsfrumna getur leitt til mismunandi útkomu við útsetningu fyrir SMG [47]. Til dæmis, við örþyngdaraðstæður, sýndu mismunandi brjóstakrabbameinsfrumur mismunandi formgerð, frumuviðloðun og flæðieiginleika við útsetningu fyrir örþyngdarafl [5]. Athygli vekur að aðaleinkenni EMT er tap á frumuviðloðunarsameindinni, E-cadherin, sem hefur þannig áhrif á kyrrstöðu heilleika frumanna. Á hinn bóginn leiðir aukning taugakadheríns, N-kadheríns, til breytinga á viðloðun frumna. Þetta er framkallað aðallega af umbreytandi vaxtarþætti (TGF-), sem virkjar pleiotropically tjáða umritunarþætti, svo sem snigla, Twist og Zeb prótein og aðrar merkjaleiðir sem eru útfærðar í meinvörpum [18,48,49]. Hér greinum við frá aukningu á þekjumerkinu E-cadherin (CDH1) og niðurstýringu á mesenchymal N-cadherin (CDH2) mRNA stigum, lykilmerkjum EMT [49]. Þetta gefur til kynna að ásamt gögnum okkar um minni útbreiðslutíðni A549, sýna frumurnar minna meinvörp. Athyglisvert er að breyttri tjáningu lykil-EMT merkja fylgdi einnig marktæk niðurstýring á matrix metalloproteinasa MMP-2, sem er meginþáttur grunnhimnunnar sem venjulega aðskilur þekjulagið frá nærliggjandi mesenchyme, sem leiðir þannig til tap á grunnhimnu [50]. Þetta er samhliða rannsókn Chang o.fl., þar sem þeir greindu frá niðurstöðum sínum um að draga úr meinvörpum kirtilkrabbameinsfrumna í lungum manna með breytingu á MMP2 tjáningu [17]. Almennt séð hefur hlutverk MMP verið vel bendlað við framgang illkynja sjúkdóma, þar með talið meinvörp, þar sem skert MMP (MMP-2 og MMP-9) tjáning og ensímvirkni er einkenni minna meinvarpaðrar svipgerðar [ 50–52]. Með mikilvægu hlutverki EMT í meinvörpum sýna gögn okkar marktæka fylgni FCGBP, BPIFB, F5, CST1 og CFB við EMT genamerki sem og frumuflutningstengda gena MMP2 og MMP9. Athyglisvert er að Xiong o.fl. hafa sýnt að FCGBP er aðal eftirlitsaðili EMT í gallblöðru [53]. Þetta gefur til kynna að auðkennd gen gætu þjónað sem hugsanleg lífmerki fyrir framtíðarrannsóknir sem geta spáð fyrir og skilið frekar framvindu lungnakrabbameins. Samanlagt flokka niðurstöður okkar auðkenndu genin sem lykilstjórnendur EMT, sem stuðlar að hugsanlegri aukningu á minna meinvörpuðum svipgerð með millikím-til-þekjubreytingum (MET) lungnakrabbameinsfrumna.

4. Efni og aðferðir

4.1. Gagnasett til að bera kennsl á algengt tjáð gen (DEG) í lungnakrabbameinsfrumulínum sem verða fyrir hermi örþyngdarafls

Viðeigandi gagnasöfn úr almennum aðgengilegum Gene Expression Omnibus (GEO) gagnagrunni voru dregin út til fyrstu greiningar. Þessi gagnagrunnur er notaður sem almenningi aðgengileg hagnýt erfðafræðigreining á gögnum um genatjáningar með mikilli afköst og örfylki. Gagnasöfnin sem valin voru uppfylltu eftirfarandi skilyrði: gagnasöfn sem eingöngu notuðu lungnakrabbameinsfrumulínur úr mönnum, rannsóknir sem fela í sér samsvarandi þyngdarafl í jörðu (GG), gagnasöfn með skilgreindri flokkun á lungnakrabbameinsfrumulínum og gagnasöfn með genatjáningu í lungnakrabbameinsfrumum úr mönnum með örfylki. Tvö gagnapakka passa við þessa viðmiðun, GSE78210 og GSE36931. Alls voru 25 sýni tekin með í rannsóknunum og 14 lungnakrabbameinsfrumulínusýni í hermi örþyngdarafl (SMG) voru borin saman við 11 GG viðmið, eins og sýnt er í töflu 2 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov) /geo/; skoðaður 11. nóvember 2021).

Tafla 2. Upplýsingar um gagnasöfn sem dregin eru út úr Gene Expression Omnibus (GEO) sem notuð eru til að bera kennsl á DEG á milli herma örþyngdarafls (SMG) og lungnakrabbameinsfrumna í jörðu (GG).

4.2. Auðgunargreining GEO2R genasetts til að búa til DEG í hverjum gagnagrunni

GEO2R (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/geo2r; skoðaður 11. nóvember 2021), gagnvirkt nettól notað til að bera saman GEO röð, var notað í hverju gagnasafni til að flokka og bera kennsl á upp- og niðurstýrð gen við SMG aðstæður samanborið við GG aðstæður. Genin með p-gildi minna en 0,05 og faltbreytingar meiri en 2 voru valin sem mistjáð gen DEG við SMG aðstæður. Þar af leiðandi skarstuðu DEGs hvers gagnasafns hvert við annað og algeng gen voru auðkennd

4.3. Magngreining á klínískri meinafræðilegri þátttöku auðkenndra gena

Næst voru genin sem mynduðust á stuttum listanum staðfest með Kaplan-Meier plotter (http://www.kmplot.com/; aðgangur að 11. nóvember 2021), opinberum gagnagrunni á netinu sem metur áhrif valinna gena á klínískar niðurstöður sjúklinga. Heildarlifun (OS) var skilgreind sem lengdin frá greiningu (í mánuðum) þar til dauða. Upplýsingar um genatjáningu og lifunarupplýsingar eru fengnar úr Gene Expression Omnibus (GEO), The Cancer Genome Atlas (TCGA) og European Genome-phenome Atlas (EGA). Sjúklingar voru flokkaðir í tvo hópa: (1) há tjáning (með TPM gildi fyrir ofan efri fjórðungsmörk) og (2) lág/miðlungs tjáning (með TPM gildi undir efri fjórðungsmörkum). Kaplan-Meier reitir voru notaðir til að bera saman OS sjúklinga með kirtilkrabbamein í lungum (LUAD) með mikla/miðlungsáhrif á móti lágri tjáningu kandídata gena.

4.4. Auðguð verufræðiþyrping fyrir auðkennd gen

Til að kanna hvort auðkenndu genin deila sameiginlegum ferlum var auðgunargreining á genaferla (GO) fyrir auðkenndu genin gerð með því að nota Metascape veftólið (https://metascape.org/; skoðað 11. nóvember 2021) fyrir yfirgripsmikla greiningu á genalista og greiningarúrræði samhliða GEO2R

4.5. Frumulína og frumurækt

Frumulína úr kirtilkrabbameini í lungnablöðrum úr lungnablöðrum (A549), sem er mikið notuð sem líkan fyrir kirtilkrabbamein í lungum, var ræktuð í Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI)-1640 miðli ásamt 10% fóstursermi úr nautgripum (FBS; Sigma, St. Louis, MO, Bandaríkjunum) og 100 einingar/mL af penicillíni/streptomycini (P/S; Sigma, St. Louis, MO, Bandaríkjunum). Frumulínan var ræktuð í 37 ◦C rakaðri útungunarvél í andrúmslofti 5% CO2. Þegar frumurnar komu saman voru þær uppskornar með því að nota 0,5% trypsín, skilið í skilvindu við 100× g í 5 mínútur og notaðar þegar þörf krefur.

4.6. Örþyngdarafl

Lungnakrabbameinsfrumur (A549) voru ræktaðar í 2D clinostat kerfi sem líkir eftir nánast núllþyngdarafl umhverfi (microgravity). Þessi Rotary Culture Max (RCMW™; Synthecon® Inc—Houston, TX, USA) er lífreactor búinn frumuræktunaríláti sem inniheldur örgjúpan gegnflæðiskjarna og innbyggðu súrefniskerfi, sem veitir næringarefni og ytri gasun efnisins, þess vegna tryggja rétt gasskipti og frumuræktunarumhverfi með litlum skurði. Hólfið var pakkað með ræktunarmiðlinum sem innihéldu frumurnar. Þetta hólf snerist lárétt um einn ás hornrétt á þyngdarkraftinn á 10 snúninga hraða. 2D clinostatið var komið fyrir inni í 37 ◦C raka útungunarvélinni í andrúmslofti 5% CO2. A549 frumur voru teknar eftir hermi örþyngdarkrafts (SMG) eftir 24, 48 og 72 klst. Til að búa til sambærilegt lungnakrabbameinsumhverfi voru A549 frumur ræktaðar í ræktunarplötum við GG, í ósnúið eða kyrrstöðu ástandi, og var haldið í nálægð við tækið inni í rakaðri hitakassa (37 ◦C). Þessar frumur eru nefndar sem viðmiðunarhópur og voru einnig safnaðar á 24, 48 og 72 klst.

4.7. Frumulífvænleikapróf

Fyrir GG skilyrðin var A549 frumum sáð í 24-brunn frumuræktarplötur með þéttleikanum 3.0 × 104 frumur á 500 µL. Frumur voru teknar með trypsínvæðingu 24, 48 og 72 klst. eftir sáningu, síðan skilið í skilvindu við 200 x g í 5 mín. Fengnar frumukögglar voru endurgerðar í ræktunarmiðlum. Fyrir SMG aðstæðurnar voru A549 frumur sáð í 2D clinostat snúningskerfinu með þéttleika 6,0 × 104 frumur á 1 ml. Frumur voru teknar 24, 48 og 72 klst. eftir útsetningu fyrir SMG, síðan skilið í skilvindu við 200× g í 5 mínútur. Fengnar frumukögglar voru endurgerðar í ræktunarmiðlum. Trypan blue (Sigma, USA) litarefnisútilokunarpróf var gerð. Frumufjöldi var ákvarðaður með því að nota CellDrop™ sjálfvirkan frumuteljara.

4.8. Magnbundin rauntíma pólýmerasa keðjuverkun (qRT-PCR)

Genatjáningarstig (mRNA-magn) af in silico auðkenndum genum (AZGP1, CFB, NOX1, VTCN1, AGR3, GDA, TCN1, CST1, F5, CEACAM6, BPIFB1, FCGBP og BPIFA1) ásamt EMT genamerkjum (tafla 3) voru einnig ákvörðuð í A549 frumum með qRT-PCR. Í stuttu máli var útdráttur á heildar-RNA úr frumum framkvæmdur með því að nota RNEasy Mini Kit (QIAGEN, Hilden, Þýskalandi) við 24, 48 og 72 klst. við GG og eftir útsetningu fyrir SMG með því að fylgja samskiptareglum framleiðanda. Eitt µg af heildar-RNA var öfugt umritað yfir í einþátta viðbótar-DNA (cDNA) í 20 µL hvarfrúmmáli með því að nota iScript™ cDNA nýmyndunarbúnað (Thermo, Waltham, MA, USA). qRT-PCR var framkvæmt með því að nota PowerUp™ Sybr™ Green master mix (Thermo, Bandaríkin) í Quant Studio 5 pcr vél (Thermo, Bandaríkjunum). PCR mögnunarþrep voru sem hér segir: Upphafsdenatureringsskref við 95 ◦C í 3 mín., hitastig við hitastig markgensins í 30 sekúndur og síðan 72 ◦C í 30 sek. Flúrljómunarviðmiðunargildið var fengið fyrir hvert geni. ∆∆Cq aðferðin var notuð til að reikna út hlutfallslega faltbreytingu á tjáningu gena eftir eðlileg breyting á heimilisgenið, glýseraldehýð 3-fosfat dehýdrógenasa (GAPDH).

Tafla 3. Listi yfir frumefni úr mönnum. NOX1, NADPH Oxidasi 1; GDA, gúanín deaminasi; TCN1, Transcobalamin 1; FCGBP, Fc Gamma Binding Protein; BPIFA1, BPI Fold sem inniheldur fjölskyldumeðlim 1; AZGP1, Alfa-2-Glýkóprótein 1; CFB, viðbót þáttur B; VTCN1, V-sett lén sem inniheldur T frumuvirkjunarhemil 1; AGR3, Anterior Gradient 3; CTS1, chimeric æxlisbæli 1; F5, storkuþáttur V; CEACAM6, CEA frumuviðloðunarsameind 6; BPIFB1, BPI fold sem inniheldur fjölskyldu B meðlimur 1; ZO-1, Zonula occludens prótein 1; MMP-9, Matrix metalloproteinase 9; MMP-2, Matrix metalloproteinasi 2; og GAPDH, glýseraldehýð 3-fosfat dehýdrógenasa

4.9. Gen-gena víxlverkunargreining

Gögn frá in vitro qRT-PCR voru innleidd í gena-gena víxlverkunargreiningu með því að nota í silico vefverkfærinu GeneMANIA (http://genemania.org/; skoðað 11. nóvember 2021), netalgrím til að spá fyrir um virkni gena með því að nota mikið safn af hagnýtur félagsgögn. Þetta var gert til að meta frekar víxlverkanir milli/meðal valinna umsækjenda gena; FCGBP, CST1, F5, CFB og BPIFB1 með EMT genum; CDH1, CDH2, TJP1, CTNNB1 og SNAI1, auk frumuflutningstengdra gena, MMP2 og MMP9.

4.10. Tölfræðigreining

GraphPad Prism hugbúnaður var notaður til að framkvæma tölfræðilega greiningu. Niðurstöður eru gefnar upp sem einstök gögn eða sem meðaltal ± staðalfrávik (SD). T-próf ​​nemenda var notað til að bera saman ýmsa hópa. Munur á milli hópa var metinn með einstefnu ANOVA of varians (ANOVA). p-gildi voru ákvörðuð og gildi p < 0.05, p < 0.01, p < 0.001 ( *, ** og ***, í sömu röð) voru talið marktækt. Allar tilraunir voru gerðar í þríriti (n=3).

Heimildir

1. Hvítur, RJ; Averner, MJN Menn í geimnum. Náttúra 2001, 409, 1115–6828. [Krossvísun]

2. Bradbury, P.; Wu, H.; Choi, JU; Rowan, AE; Zhang, H.; Poole, K.; Lauko, J.; Chou, J. Líkan á áhrifum örþyngdarafls á frumustigi: Áhrif á sjúkdóma í mönnum. Framan. Cell Dev. Biol. 2020, 8, 96. [CrossRef] [PubMed]

3. Yuan, M.; Liu, H.; Zhou, S.; Zhou, X.; Huang, Y.-E.; Hou, F.; Jiang, W. Samþætt greining á stjórnunareiningum sýnir tengsl örþyngdarafls við truflun á fjöllíkamakerfum og æxlismyndun. Alþj. J. Mol. Sci. 2020, 21, 7585. [CrossRef] [PubMed]

4. Crucian, BE; Chouker, A.; Simpson, RJ; Mehta, S.; Marshall, G.; Smith, SM; Zwart, SR; Heer, M.; Ponomarev, S.; Whitmire, A.; o.fl. Óstjórn ónæmiskerfis í geimflugi: Mögulegar mótvægisaðgerðir fyrir djúpgeimkönnunarleiðangra. Framan. Immunol. 2018, 9, 1437. [CrossRef] [PubMed]

5. Nassef, MZ; Melnik, D.; Kopp, S.; Sahana, J.; Infanger, M.; Lützenberg, R.; Relja, B.; Wehland, M.; Grimm, D.; Krüger, M. Brjóstakrabbameinsfrumur í örþyngdarafl: Nýjar hliðar á krabbameinsrannsóknum. Alþj. J. Mol. Sci. 2020, 21, 7345. [Krossvísun]

6. Takamatsu, Y.; Koike, W.; Takenouchi, T.; Sugama, S.; Wei, J.; Waragai, M.; Sekiyama, K.; Hashimoto, M. Vörn gegn taugahrörnunarsjúkdómum á jörðinni og í geimnum. NPJ Microgravity 2016, 2, 16013. [CrossRef]

7. Nassef, MZ; Kopp, S.; Wehland, M.; Melnik, D.; Sahana, J.; Krüger, M.; Corydon, TJ; Oltmann, H.; Schmitz, B.; Schütte, A. Raunverulegur örþyngdarkraftur hefur áhrif á frumubeinagrindina og fókusviðloðun í brjóstakrabbameinsfrumum manna. Alþj. J. Mol. Sci. 2019, 20, 3156. [Krossvísun]

8. Dietz, C.; Infanger, M.; Romswinkel, A.; Strube, F.; Kraus, A. Apoptosis örvun og breyting á viðloðun frumna í lungnakrabbameinsfrumum manna undir herma örþyngdarafl. Alþj. J. Mol. Sci. 2019, 20, 3601. [Krossvísun]

9. Ricci, G.; Cucina, A.; Proietti, S.; Dinicola, S.; Ferranti, F.; Cammarota, M.; Filippini, A.; Bizzarri, M.; Catizone, A. Örþyngdarkraftur framkallar tímabundið EMT í keratínfrumum úr mönnum með því að lækka E-cadherin snemma og endurgerð frumuviðloðun. J. Appl. Sci. 2020, 11, 110. [Krossvísun]

10. Ahn, CB; Lee, J.-H.; Han, DG; Kang, H.-W.; Lee, S.-H.; Lee, J.-I.; Sonur, KH; Lee, JW Hermt örþyngdarafl með fljótandi umhverfi stuðlar að flutningi lungnakrabbameina sem ekki eru smáfrumukrabbamein. Sci. Rep. 2019, 9, 14553. [CrossRef] [PubMed]

11. Pisanu, ME; Noto, A.; De Vitis, C.; Masiello, MG; Coluccia, P.; Proietti, S.; Giovagnoli, MR; Ricci, A.; Giarnieri, E.; Cucina, A. Stofnfrumur úr lungnakrabbameini missa sjálfgefið stífni eftir útsetningu fyrir örþyngdarafl. BioMed Res. Alþj. 2014, 2014, 470253. [CrossRef] [PubMed]

12. Infanger, M.; Kossmehl, P.; Shakibaei, M.; Bauer, J.; Kossmehl-Zorn, S.; Cogoli, A.; Curcio, F.; Oksche, A.; Wehland, M.; Kreutz, RJC; o.fl. Líkt eftir þyngdarleysi breytir umfrymi og utanfrumu fylkispróteinum í papillary skjaldkirtilskrabbameinsfrumum. Cell Tissue Res. 2006, 324, 267–277. [CrossRef] [PubMed]

13. Chen, J.; Microgravity, L. Æxlisfrumur í microgravity. Into Space: A Journey of How Humans Adapt and Live in Microgravity; IntechOpen: London, Bretlandi, 2018; 139. bindi, bls. 259–268.

14. Grimm, D.; Schulz, H.; Krüger, M.; Cortés-Sánchez, JL; Egli, M.; Kraus, A.; Sahana, J.; Corydon, TJ; Hemmersbach, R.; Wise, PM Baráttan gegn krabbameini með örþyngdarafl: Fjölfrumuhnötturinn sem meinvörp líkan. Alþj. J. Mol. Sci. 2022, 23, 3073. [Krossvísun]

15. Schabath, MB; Cote, ML Framfarir og forgangsröðun krabbameins: Lungnakrabbamein. Krabbameinsfaraldur. Biomark. Fyrri 2019, 28, 1563–1579. [CrossRef] [PubMed]

16. Chung, JH; Ahn, CB; Sonur, KH; Yi, E.; Sonur, HS; Kim, H.-S.; Lee, SH Hermdu örþyngdaráhrif á útbreiðslu og flutning lungnakrabbameinsfrumna sem ekki eru smáfrumur. Aerosp. Med. Humm. Framkvæma. 2017, 88, 82–89. [Krossvísun]

17. Chang, D.; Xu, H.; Guo, Y.; Jiang, X.; Liu, Y.; Li, K.; Pan, C.; Yuan, M.; Wang, J.; Logandi.; o.fl. Hermt örþyngdarafl breytir möguleikum á meinvörpum kirtilkrabbameinsfrumulínu í lungum úr mönnum. Vitr. Cell. Dev. Biol. Anim. 2013, 49, 170–177. [Krossvísun]

18. Hanahan, D.; Weinberg, R. Einkenni krabbameins: Næsta kynslóð. Cell 2011, 144, 646–674. [Krossvísun]

19. Ribatti, D.; Tamma, R.; Annese, T. Þekjuvefs-mesenchymal umskipti í krabbameini: Sögulegt yfirlit. Þýðing. Oncol. 2020, 13, 100773. [Krossvísun]

20. Shi, S.; Li, Q.; Cao, Q.; Diao, Y.; Zhang, Y.; Yue, L.; Wei, L. EMT umritunarþættir taka þátt í breyttri viðloðun frumna undir herma örþyngdaráhrifum eða ofhleðslu með stjórnun á E-cadherin. Alþj. J. Mol. Sci. 2020, 21, 1349. [Krossvísun]

21. Topal, U.; Zamur, C. Örþyngdarkraftur, stofnfrumur og krabbamein: Ný von um krabbameinsmeðferð. Stofnfrumur Int. 2021, 2021, 5566872. [Krossvísun]

22. Ksiazkiewicz, M.; Markiewicz, A.; Zaczek, AJ Þekjuvefs-mesenchymal umskipti: Aðalsmerki í myndun meinvarpa sem tengir æxlisfrumur í blóðrás og krabbameinsstofnfrumur. Meinafræði 2012, 79, 195–208. [CrossRef] [PubMed]

23. Yan, T.; Tian, ​​D.; Chen, J.; Tan, Y.; Cheng, Y.; Já, L.; Deng, G.; Liu, B.; Yuan, F.; Zhang, S. FCGBP er forspár lífmerki og tengist ónæmisíferð í glioma. Framan. Oncol. 2021, 11, 769033. [CrossRef] [PubMed]