tlhTungumál
Saga / Þekking / Innihald

Þekking

Verndaráhrif Cistanche gegn H2O2/UVB-örvuðu húðtrefjakollagenniðurbroti í gegnum Hsa-microRNA-4535-miðlað TGF /Smad merki

May 06, 2023

ÁSTANDUR

Þessi rannsókn miðar að því að rannsaka gangverkið sem liggur að bakiverndandi áhrif cistanchegegn skaða af völdum H2O2/UVB með því að nota in vitro og in vivo líkön af ljósskemmdum. Þar að auki bentum við á þátttöku miRNA reglugerðar í þessu ferli. H2O2/UVB-meðhöndluðu HS68 húðtrefjafrumurnar úr mönnum og UVB-framkallaðar C57BL/6J naktar mýs voru notaðar sem in vitro og in vivo líkön af ljósskemmdum. Niðurstöðurnar sýndu þaðcistanche meðferðlétta H2O2/UVB-framkallaða minnkun á lífvænleika frumna, TGF /Smad merkjaskerðingog húðöldrun. Byggt á niðurstöðum úr greiningum á míkróRNA fylki og gagnagrunnsleit, var has-miR-4535 auðkenndur semhugsanlegur frambjóðandi miRNA sem miðar á Smad4. In vitro virkjaði cistanche meðferð Smad2/3/4 flókið og hamlaði hsa-miR-4535 tjáningu í H2O2/UVB útsettum frumum. In vivo, staðbundin notkun á litlum (12 mg/kg) og stórum skömmtum (24 mg/kg) af cistanche á bakhúð C57BL/6J nakinna músa dró verulega úr UVB-völdum ljósskemmdum á húð með því að stuðla að TGF/Smad kollagen nýmyndun merkja, dregur úr ofvöxt húðþekju, hrukkumyndun og öldrun húðar, auk þess að hindra tjáningu hsa-miR-4535. Samanlagt benda niðurstöður okkar til tengsla á milli hsa-miR-4535 og TGF /Smad kollagen nýmyndunarmerkja og benda til þess að þessir þættir eigi þátt í ljósverndarmáta cistanche í húðtrefjum gegn öldrun af völdum H2O2/UVB. Sönnunargögnin bentu til þesscistanche með öldrunareiginleikagetur veriðlitið á sem viðbót íhúðvörur.

Protective effects of cistanche

Cistanche húðvörur til sölu

KYNNING

Klínísk einkenni öldrunar á húð manna eru auknar hrukkum, slaka og óregluleg litarefni [1]. Ferlið við öldrun húðar er flókið og má skipta því í tvennt: innri öldrun og ytri öldrun. Innri öldrun stafar af liðnum tíma og erfðaþáttum, en ytri öldrun, einnig kölluð ljósöldrun, stafar aðallega af útsetningu fyrir útfjólubláum geislum [2, 3]. Fyrri rannsóknir hafa sýnt að mikið af hvarfefna súrefnistegundum (ROS) myndast við bæði innri og ytri öldrun. Uppsöfnun ROS getur framkallað mítógenvirkjaðan próteinkínasa (MAPK) boð og virkjað niðurstreymis umritunarþátt þess, virkjunarprótein-1 (AP-1). Virkjað AP-1 getur færst yfir í kjarna og tengst frumkvöðlasvæðum matrix metalloproteinasa (MMPs) [4]. MMP eru stór sinkháður endópeptíðasahópur, sem stuðlar að niðurbroti á húðdermis extracellular matrix (ECM). Sérstaklega tekur MMP-1, kollagenasi, þátt í klofningu kollagentegunda I og III [5]. Kollagen gerðir I og III, helstu efnisþættir ECM, eru færir um að veita húðhúðinni stuðning og styrk og röskun þeirra leiðir til einkennandi hrukku og slökunar á öldruðu húðinni [6]. Umbreytandi vaxtarþáttur-beta (TGF) er alls staðar nálægt og öflugt cýtókín með þremur mismunandi ísóformum, TGF 1, TGF 2 og TGF 3, sem getur á jákvæðan hátt stjórnað kollagenmyndun í húð manna [2]. TGF s hefja merki sitt með því að hafa samskipti við sértækar frumuyfirborðs serín/þreónín kínasa viðtaka fléttur, þar á meðal TGF viðtaka gerðir I (TRI) og II (TRII). TRI fosfórun kveikir á fosfórun R-Smads (Smad2 og Smad3). Virkjað R-Smads hafa samskipti við Smad4 til að stjórna kjarnaflutningi þess og umritunarvirkja kollagen tegundir I og III með því að bindast við hvata Smad-bindandi þátta (SBE) [7, 8]. Vaxandi sönnunargögn benda til þess að aukin ROS-myndun, framkölluð af innri eða ljósöldrun, stuðli að skerðingu á TGF/Smad boðleiðum, sem aftur leiðir til minni kollagenmyndunar í húðtrefjum í húð manna [9, 10]. cistanche (3,5,7-tríhýdroxýflavon), náttúrulegur meðlimur flavonoid fjölskyldunnar, er mikið í Alpinia officinarum og propolis. cistanche er hugsanlegur frambjóðandi til að meðhöndla blóðþurrðarslag, sykursýki og mismunandi krabbameinsgerðir [11-13]. Að auki hefur cistanche róttæka hreinsun og bólgueyðandi virkni [14, 15]. Við sýndum áður að cistanche dró úr H2O2-framkalla bólgu og stuðlaði að kollagenmyndun í gegnum insúlínlíkan vaxtarþátt 1 viðtaka (IGFI-R)/ERK1/2 boðleiðir í HS68 frumum [16, 17]. Ennfremur gaf rannsókn til kynna að cistanche væri auðkennt sem efnasamband af Alpinia officinarum og hefur kollagenasa hemjandi áhrif í húðtrefjafrumum [18]. Hins vegar er nákvæmari sameindakerfi sem tengist því hvernig cistanche stjórnar öldrun húðar óþekkt. MicroRNA (miRNA) eru hópur lítilla, einþátta, ókóðandi RNA sameinda með meðallengd 22 núkleótíða. Þroskuð miRNA eru umrituð úr DNA röðum. Í flestum tilfellum bindast þroskuð miRNA við 3′-óþýdd svæði (UTR) mark-mRNA til að þagga niður í mRNA þýðingu [19]. Í húð manna gegna miRNA mikilvægu hlutverki við að stjórna efnaskiptum frumna, krabbameini, öldrun og kollagenmyndun [20-23]. Til dæmis getur miR-377 framkallað öldrun vefjafrumna í húð með því að hindra DNA metýltransferasa 1 (DNMT1) tjáningu, sem í kjölfarið leiðir til minni metýleringar í p53 hvataefni og húðtrefja öldrun [22]. MiRNA prófíllinn í skemmdum af völdum UVB í húðpapillufrumum manna (nHDP) var áður rannsakað [24]. Hins vegar er að mestu óþekkt hvernig UVB-örvað öldrun húðtrefja í húð með miRNA stjórnun, sérstaklega í tengslum við náttúrulegt efnasamband. Þessi rannsókn miðar að því að kanna verndandi áhrif cistanche gegn H2O2/UVB völdum húðskemmdum sem og hlutverk microRNA-miðlaðrar kollagen niðurbrots í þessu ferli. Við ætluðum frekar að bera kennsl á míkróRNA sem taka þátt í að stjórna kollagenmyndun.

Protective effects of cistanche

NIÐURSTÖÐUR

cistanche hindrar UVB/H2O2-framkallað frumueiturhrif í HS68 húðtrefjum úr mönnum

Til að rannsaka frumueiturhrif cistanche (Mynd 1A) in vitro voru HS68 frumur meðhöndlaðar með mismunandi skömmtum af cistanche (0, 10, 20, 30, 40, 50 μM) í 24 klst. Niðurstöður MTT prófunar sýndu að cistanche var ekki frumudrepandi fyrir HS68 frumur (Mynd 1B). Næst útsettum við HS68 frumur fyrir mismunandi skömmtum af H2O2 (0, 100, 150, 200, 250, 300 μM) og UVB (0, 25, 30, 40, 50, 60 mJ/cm²) í 24 klst. H2O2 og UVB meðferð dró úr lífvænleika frumunnar á skammtaháðan hátt (Mynd 1C, 1D). Til að meta frumuverndandi eiginleika cistanche eftirfarandiH2O2 og UVB útsetningu, meðhöndluðum við HS68 frumu meðmismunandi styrkur cistanche (10, 20, 30 μM)eftir H2O2- (200 μM) og UVB framkallað (40mJ/cm²) skemmdir. H2O2 eða UVB meðferð eingönguminnkaði verulega (40 prósent) hagkvæmni HS68frumur. Hins vegar kom cistanche meðferð í veg fyrir frumudauðaá styrkleikaháðan hátt (Mynd 1E, 1F).Hærri styrkur cistanche (30 μM) áberandiAlleviborðaði H2O2- og UVB framkallað frumueiturhrif.Þess vegna var skammturinn af 30 μM cistanche notaður ísíðariin vitrorannsóknir til að meta verndun þessáhrif í HS68 frumum.

Protective effects of cistanche

Mynd 1. cistanche hindrar UVB/H2O2-framkallað frumueiturhrif í HS68 húðtrefjum úr mönnum. (A) Efnafræðileg uppbygging cistanche. (B) Frumulífvænleiki HS68 frumna sem eru meðhöndlaðar með mismunandi styrk af cistanche (10, 20, 30, 40, 50 µM ) í 24 klst. (C og D) Frumulífvænleiki HS68 frumna sem verða fyrir mismunandi skömmtum af H2O2 (100, 150, 200, 250, 300 µM) eða geislaðar með UVB (25, 30, 40, 50, 60 J/cm2) í 24 klst. (E og F) Frumulífvænleiki HS68 frumna sem verða fyrir H2O2 (200 µM) eða geislaðar með UVB (40 J/cm2) í 1 klst og síðan meðhöndlaðar með cistanche (10, 20, 30 µM) í 23 klst. Frumvörnandi áhrif cistanche voru ákvörðuð með MTT prófinu. Viðmiðunarfrumum var úthlutað 100 prósent lífvænleika. Gildi eru sýnd sem meðaltal ± SE. Magngreining á niðurstöðum er sýnd (n=3) *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001 á móti ómeðhöndluðum viðmiðunarfrumum; ##P < 0,01, ###P < 0,001 á móti H2O2 eða UVB-meðhöndluðum frumum.



Cistanche dregur úr H2O2-örvuðum HS68 frumumöldrun frekar en apoptosis

Til að ákvarða hvort minnkun á lífvænleika frumna væri vegna frumudauða eða vaxtarhömlunar, athuguðum við tjáningu nokkurra frumudauða og lifunarmerkja með Western blotting í HS68 frumum sem voru útsettar fyrir mismunandi skömmtum af H2O2 (50, 100, 200, 300, 400 μM ) í 24 klst. Við fundum marktækt minnkaða tjáningu á lifunarmerkjum, eins og p-Akt, og aukna tjáningu áapoptosis-related markers, such as cleaved-caspase 3 and cytochrome c, at concentrations >200 μM H2O2 (Mynd 2A). Ennfremur framkvæmdum við frumuflæðismælingu til að meta apoptotic frumur með því að nota Annexin V og PI litun og sáum svipaðar niðurstöður. Samanlagt olli 200 μM H2O2 ekki HS68 frumufrumumyndun (Mynd 2B). Næst fundum við tjáningu nokkurra öldrunarmerkja, eins og p16, p21 og SA- -gal, til að ákvarða öldrunarfrumurnar. Niðurstöður okkar sýndu að cistanche-meðferð minnkaði marktækt H2O2-framkallað p16 og p21 próteinmagn sem og fjölda SA- -gal-jákvæðra frumna (Mynd 2C, 2D).


Cistanche dregur úr UVB/H2O2-framkallaðri innanfrumu/hvatbera ROS framleiðslu og MMP ójafnvægi í HS68 frumum

Oxunarálag gegnir lykilhlutverki í ýmsum sjúkdómum og getur verið framkallað af innrænum eða utanaðkomandi þáttum. Hér notuðum við H2O2 sem innrænan og UVB sem utanaðkomandi þátt til að framkalla oxunarskemmdir og könnuðum síðan ROS-útrýmingarvirkni cistanche. Til að bera kennsl á upptök ROS voru MitoSOX og DCFH-DA notuð til að ákvarða innanfrumu og hvatbera ROS. Niðurstöður litunar sýndu að H2O2 og UVB meðferð olli ROS uppsöfnun á meðan cistanche meðferð minnkaði ROS myndun (Mynd 3A, 3B). ÍÞar að auki, þar sem ójafnvægi MMP getur hafið frumudauða, notuðum við JC-1 til að ákvarða breytingar á MMP. Venjulegir hvatberar flúruðu rauðir (JC-1 tvíliða) á meðan skertir hvatberar flúruðu græna (JC-1 einliða). UVB og H2O2 útsetning olli miklu magni af grænu flúrljómun. Sérstaklega breytti cistanche meðferð græna flúrljómun í rautt, sem gefur til kynna endurvakningu á starfsemi hvatbera (Mynd 3C).

Protective effects of cistanche


cistanche dregur úr H2O2-framkölluðum TGF /Smadskerðing á kollagenmyndun í HS68 frumum

TGF / Smad boð eru stuðlað að kollagenmyndun í húðtrefjum í húð manna [25-27]. Þess vegna könnuðum við hlutverk cistanche incollagen nýmyndunar með TGF /Smad ferli í HS68 frumum sem verða fyrir H2O2. Western blot niðurstöður bentu til þess að cistanche jók marktækt TGF /Smad boð sem og kollagenmyndun í H2O2-útsettum HS68 frumum (Mynd 4A). Þar að auki er óskipulag kollagens tegunda I og III eitt af dæmigerðum einkennum aldraðra húðvefjafrumna [28]. Þar sem MMP fjölskyldan hefur verið bendluð við niðurbrot kollagen [29], staðfestum við næst áhrif cistanche á MMP-1 virkjun. Við komumst að því að cistanche kom í veg fyrir niðurbrot kollagen í HS68 frumum með því að bæla H2O2-aukið MMP-1 magn (Mynd 4A).
Ennfremur greindum við undirfrumusameindaverkunina sem liggur að baki þessari verndaraðgerð með því að bera saman HS68 frumur sem voru meðhöndlaðar með H2O2 einum sér eða meðhöndlaðar með cistanche með því að nota ónæmisblettingu og ónæmisflúrljómunarlitun. cistanche meðferð jók kjarnasöfnun p-smad2/3 og Smad4 sem var truflað vegna útsetningar fyrir H2O2 í HS68 frumum(Mynd 4B, 4C). Þessar niðurstöður bentu til þess að cistanche gæti bætt H2O2-framkallað kollagenbrot með því að virkja TGF /Smad feril í HS68 frumum.


Cistanche meðferð dregur úr H2O2-framkallaðri uppstýrðri tjáningu hsa-miR-4535, sem spáð er miða á Smad4

The miRNA fylki greining ácistanche-meðhöndluðHS68 frumur leiddu í ljós að tjáning hsa-miR-4535 minnkaði í hópi sem var meðhöndluð með cistanche samanborið við samanburðarhópinn (Mynd 5A). Ennfremur, með því að nota miRNA gagnagrunna, eins og miRDB og TargetScanHuman, spáðum við fyrir um hugsanlega varðveitta marksíðu fyrir hsa-miR-4535 í Smad4-3′-UTR (Mynd 5B). Eftir staðfestingu á marksíðunni voru Smad4-3′-UTR-WT og Smad4-3′-UTR MT fréttaritarsmíðar fluttar inn í HS68 frumur til að sannreyna beina bindingu hsa-miR-4535 við Smad4-3′-UTR. Við sáum 50 prósenta minnkun á lúsiferasavirkni milli villigerðar og stökkbreyttra Smad4-3′-UTR hópa sem fylgdu hsa-miR-4535 herma transfections (Mynd 5C). Við metum síðan áhrif H2O2 (100.200 μM) á stjórnun hsa-miR-4535 og Smad 4 í HS68 frumum og komumst að því að H2O2 jók skammtaháð hsa-miR-4535 og bæli Smad4 RNA tjáning (Mynd 6A, 6B). Að auki var þessari þróun í hsa-miR-4535 og Smad4 tjáningu snúið við eftir cistanche-meðferð, sem gefur til kynna að stjórnun Smad-boða gæti átt þátt í cistanche-miðlaðri léttingu á H2O2-völdum HS68 frumuskemmdum (mynd 6C, 6D). Samanlagt bentu þessar niðurstöður til þess að cistanche dregur úr H2O2-völdum skerðingu á TGF/Smad ferli með því að minnka tjáningu hsa-miR-4535 í húðtrefjum í húð manna.


Protective effects of cistanche

Mynd 4. cistanche dregur úr H2O2-völdum TGF /Smad kollagen nýmyndun feril skerðingu í HS68 frumum. (A) HS68 frumur voru útsettar fyrir H2O2 (200 µM) í 1 klst og síðan meðhöndlaðar með cistanche (30 µM) í 23 klst. Próteintjáning á þáttum sem tengjast kollagenmyndun (TGF , p-smad2/3, Smad4, COL1A1, COL3A1) og kollagenniðurbrotstengdu próteini (MMP-1) greindust með Western blot. (B) Próteintjáning p-smad2/3 og Smad4 í kjarna- og frumubrotum var greind með Western blotting. GAPDH var notað sem hleðslustýring. Gildi eru sýnd sem meðaltal ± SE. Staðfesting niðurstaðna er sýnd (n=3) *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001 vs. ómeðhöndlaðar stjórnfrumur; #P < 0,05, ##P < 0,01, ###P < 0,001 á móti H2O2-meðhöndluðum frumum. (C) And-p-Smad2/3, Smad4 mótefni og FITC/PE-tengd aukamótefni voru notuð til að greina tjáningu p-Smad2/3 (grænt) og Smad4 (rautt). DAPI gaf til kynna staðsetningu kjarna (blár). Myndirnar voru teknar með flúrljómunarsmásjá (200×).


Mótun Smad4 með has-miR-4535 tekur þátt í kollagenmyndun í H2O2-húðtrefjum í húð manna

Til að ákvarða frekar með hvaða hætti has-miR-4535 hefur áhrif á tjáningu Smad4 og niðurstreymismerki þess í HS68 frumum, fluttum við HS68 frumur með hsa-miR-4535 hermi eða hemlum og mældum Smad4 og kollagen tjáningu þess niðurstreymis. Niðurstöðurnar sýndu fram á að hsa-miR-4535 hemill hömlun á hsa-miR-4535 sneri marktækt við niðurstjórnun Smad4 mRNA og próteintjáningar í H2O2-meðhöndluðum HS68 frumum (Mynd 7A–7C) . Þar að auki, bæling hsa-miR-4535 að hluta endurheimt H2O2-örvaði COL1A1 og COL3A1 skerðingu í H2O2-meðhöndluðum HS68 frumum (Mynd 7C). Aftur á móti hindraði aukin hsa-miR-4535 tjáning sem afleiðing af hsa-miR-4535 herma transfection cistanche-miðlaða uppstjórnun Smad4 í HS68 frumum sem verða fyrir H2O2 (Mynd 7D–7F). Oftjáning hsa-miR-4535 minnkað að hluta til COL1A1 af völdum cistanche

og COL3A1 stigum (Mynd 7F). Oftjáning hsa-miR-4535 (Mynd 8A–8C) eða hömlun á Smad4 með siRNA (Mynd 8D, 8E) leiddi til minni kollagenmyndunar við cistanche-meðferð eftir útsetningu fyrir H2O2. Það kom á óvart að við komumst að því að bæði bein Smad4 þögn og meðferðir með hsa-miR-4535 líkja eftir snúinni cistanche-framkölluðu kollagenmyndun í H2O2- meðhöndluðum HS68 frumum. Samanlagt komumst við að þeirri niðurstöðu að cistanche stjórnaði kollagenmyndun, hugsanlega með lækkandi hsa-miR-4535 stigi til að auka Smad4 boð í HS68 frumum sem verða fyrir H2O2.

KSL30


cistanche eykur TGF /Smad kollagen nýmyndunarferil og dregur úr húðöldrun sem og hömlun á has-miR-4535 tjáningu í UVB-útsettum HS68 frumum

Þar sem UV-ljós gegnir mikilvægu hlutverki í ýmsum húðsjúkdómum í húð, þar á meðal bólgu, ónæmisbælingu, krabbameini og ótímabæra öldrun [30-32], skoðuðum við áhrif cistanche á boðefni tengd kollagenmyndun í HS68 frumum sem verða fyrir UVB geislun. Próteinmagn TGF/Smad ferilþátta og niðurstreymis COL1A1 og COL3A1 lækkuðu í UVB-meðhöndluðum HS68 frumum en var í raun uppstillt eftir cistanche meðferð (Mynd 9A). Niðurstöður úr vestrænum bletti staðfestu þaðbældi UVB-bætta MMP-1 tjáningu í HS68 frumum (Mynd 9A). Ennfremur skýrðum við öldrunaráhrif cistanche í HS68 frumum sem verða fyrir útsetningu fyrir UVB með því að sýna fram á að cistanche dró úr UVB-völdum hækkun á p16 og p21 stigum (Mynd 9A). Til að meta hvort cistanche gæti dregið úr UVB framkallað kollagen niðurbrot með hömlun á hsa-miR- 4535 sem miðar að Smad4, könnuðum við has-miR-4535 og Smad4 gildi í UVB og cistanche samhliða meðhöndluðum frumum með qPCR. Við fundum þessa has-miR-4535 tjáninguvar marktækt uppstýrt í UVB-útsettum frumum en minnkaði eftir cistanche meðferð. Aftur á móti var Smad4 tjáning bæld með UVB útsetningu og þessari bælingu var verulega snúið við með cistanche meðferð (Mynd 9B, 9C). Samanlagt bentu niðurstöður okkar til þess að cistanche hafi svipuð áhrif og H2O2 til að endurheimta UVB-framkallaða lækkun á kollagenmyndun með því að bæla hsa-miR-4535 stigin til að stuðla að Smad4 merkjum í HS68 frumum.

Protective effects of cistanche


Staðbundin notkun cistanche dregur úr UVB-framkallaðri ofvöxt í húð og niðurbrot á kollageni auk þess að auka TGF/Smad boð í bakhúð C57BL6/J nakinna músa

Til að skýra ljósverndandi áhrif cistanche á húðskaða af völdum UVB in vivo, metum við magn microRNA-4535, Smad4 og húðvefsbreytinga. Mynd 10A sýnir skýringarmyndina fyrir tilraunahönnun og tímalínu fyrir staðbundna notkun á cistanche eftir UVB geislun á bakhúð C57BL6/J nakinna músa. Myndun hrukka sást á dorsal húðhlutum C57BL/6J músa í UVB-útsettum hópnum. Staðbundin notkun cistanche dró verulega úr hrukkumyndun, sem gefur til kynna cistanche-miðlaða aukningu á kollageninnihaldi til að viðhalda heilleika húðarinnar (Mynd 10B). Þar að auki sýndi vefjafræðileg greining á húðlaginu að kollageninnihald og þéttleiki í húðinni
voru marktækt lægri í UVB-geisluðum hópnum samanborið við samanburðarhópinn fyrir burðarefni. Hins vegar, staðbundin notkun cistanche (12 mg/kg og 24 mg/kg)


Protective effects of cistanche


Mynd 6. cistanche stjórnar Smad4 tjáningu með því að lækka hsa-miR-4535 stig. (A, B) HS68 frumur voru meðhöndlaðar með mismunandi styrk H2O2 (0, 100, 20{{30}} µM ) í 24 klst. (C, D) HS68 frumur voru útsettar fyrir H2O2 (200 µM) í 1 klst og síðan meðhöndlaðar með cistanche (30 µM) í 23 klst. Tjáning hsa-miR-4535 og Smad4 var greind með qRT-PCR. Gildi eru sýnd sem meðaltal ± SE. Magngreining á niðurstöðum er sýnd (n=3) *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001 á móti ómeðhöndluðum viðmiðunarfrumum; ##P < 0,01, ###P < 0,001 á móti H2O2-meðhöndluðum frumum.


stuðlað að aukinni kollageninnihaldi og þéttleika á skammtaháðan hátt samanborið við það hjá músum sem voru undir UVB-geislun (Mynd 11). Formgerð húðarinnar var metin með H&E litun. Útsetning fyrir UVB jók þykkt húðþekju samanborið við samanburðarhóp fyrir burðarefni. Hins vegar, staðbundin notkun cistanche dregur verulega úr UVB-völdumofvöxtur húðþekju (mynd 11). Að auki, ónæmisvefjaefnafræðileg litun á -gal gaf til kynna cistanche-notkun dró úr há-gal tjáningu í UVB-geislaðri húð (Mynd 11). Til að ákvarða hvort cistanche geti bætt kollagen af ​​völdum UVB

Protective effects of cistanche

Mynd 7. Oftjáning eða hömlun á hsa-miR-4535 stjórnar kollagenmyndun í HS68 frumum. (A–C) HS68 frumur voru færðar með hsa-miR-4535 hemli (40 nM) eða hemli NC (40 nM) í 1 klst og síðan samhliða meðhöndlaðir með H2O2 (2 00 μM) í 23 klst. (D–F) HS68 frumur voru umbreyttar með hsa-miR-4535 herma (10 nM) eða herma NC (10 nM) í 1 klst og síðan meðhöndlaðar með cistanche (30 μM) í 23 klst. hsa-miR-4535 gildi greindust með qPCR til að tryggja árangursríka flutning. Próteinmagn Smad4, COL1A1 og COL3A1 voru greind með Western blotting. GAPDH var notað sem hleðslustýring. Gildi eru sýnd sem meðaltal ± SE. Magngreining á niðurstöðum er sýnd (n=3) *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001 á móti ómeðhöndluðum samanburðarfrumum; #P < 0,05, ##P < 0,01, ###P < 0,001 á móti H2O2 eða cistanche-meðhöndluðum frumum.


trefjatap með hsa-miR-4535 niðurstýringu til að auka Smad4 in vivo, RNA tjáning þess var metin í útskornu sýnishúðhúðinni með qRT-PCR. Hsa-miR-4535 tjáning var aukin í UVB-geislaðri húð en verulega bæld ícistanche-meðhöndluð húðbæði í litlum og stórum skömmtum. Ennfremur var lágt magn Smad4 RNA tjáningar í UVB-geislaðri húð endurheimt með cistanche meðferð (Mynd 12A, 12B)


Protective effects of cistanche

Mynd 8. Hömlun á Smad4 með siRNA eða hsa-miR-4535 líkingu snýr við cistanche-miðluðum aukningu á kollagenmyndun í húðtrefjum. (A–C) HS68 frumur voru færðar með hsa-miR-4535 herma (10 nM) eða herma NC (10 nM) í 1 klst. fylgt eftir með sammeðferð með cistanche (3 {{40}} μM) og H2O2 (200 μM) í 23 klst. Hsa-miR-4535 (A) og Smad4 (B) gildi greindust með qPCR til að tryggja árangursríka flutning. (D–E) HS68 frumur voru umbreyttar með siRNA Smad4 (20 nM) eða siRNA NC (20 nM) í 1 klst. fylgt eftir með sammeðferð með cistanche (30 μM) og H2O2 (200 μM) í 23 klst. Smad4 gildi greindust með qPCR til að tryggja árangursríka transfection (D). Próteinmagn Smad4, COL1A1 og COL3A1 voru greind með Western blotting (C, E). GAPDH var notað sem hleðslustýring. Gildin sem sýnd eru eru meðaltal ± SE. Magngreining á niðurstöðum er sýnd (n=3) *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001 á móti ómeðhöndluðum viðmiðunarfrumum; #P < 0,05, ##P < 0,01, á móti H2O2-meðhöndluðum frumum; $$P < 0,01, $$$P < 0,001 á móti H2O2 plús meðhöndluðum frumum

Að auki bjargaði cistanche umsókn TGF, psmad2/3 og Smad4 prótein tjáningu í UVB skertum húðvef (Mynd 12C). Niðurstöður okkar gáfu til kynna að cistanche gæti hugsanlega verndað húðina fyrir skaða af völdum UVB með því að hindra hsa miR-4535 til að auka Smad4 tjáningu fyrir virkjun P-smad2/3 til að loksins að stuðla að kollagenmyndun (Mynd 13)


image

Mynd 9. cistanche eykur TGF /Smad kollagen nýmyndunarferil og dregur úr húðöldrun sem og hömlun á hsa-miR-4535 tjáningu í UVB-útsettum HS68 frumum. HS68 frumur voru útsettar fyrir UVB (40 mJ/cm2) og síðan meðhöndlaðar með cistanche (30 µM) í 23 klst. (A) Próteintjáning á þáttum í tengslum við myndun kollagenmyndunar (TGF , p-smad2/3, Smad4, COL1A1, COL3A1), prótein sem tengist kollagenniðurbroti (MMP{{20}}) og öldrun- tengd merki (p16 og p21) greindust með Western blot. GAPDH var notað sem hleðslustýring. (B og C) RNA tjáning hsa-miR-4535 og Smad4 greindist með qRT-PCR. Gildi eru sýnd sem meðaltal ± SE. Magngreining á niðurstöðum er sýnd (n=3) *P < 0.05, **P < 0.01, á móti ómeðhöndluðum samanburðarfrumum; #P < 0,05, ##P < 0,01 vs UVB-útsettar frumur.

Biðja um meira:

Netfang:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plús 86 15292862950


Þér gæti einnig líkað