Fyrirbyggjandi áhrif fenýletanóls glýkósíða frá Cistanche Tubulosa

Tengiliður: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Netfang:audrey.hu@wecistanche.com

Shu-Ping You, o.fl

Ágrip

Bakgrunnur:Cistanchetubulosaer hefðbundið kínverskt jurtalyf sem er mikið notað til að stjórna ónæmi.Fenýletanólíðglýkósíð(CPhGs) frá þessari plöntu eru fyrst og fremst virk efni. Markmið þessarar rannsóknar var að meta fyrirbyggjandi og lækningaleg áhrif CPhGs á BSA-framkallaða lifrartrefjun í rottum og skylda sameindaaðferðir sem taka þátt í lifrarstjörnufrumum. Biejiarangan (BJRG), annað hefðbundið kínverskt jurtalyf, var notað sem jákvæð viðmiðun.

Aðferðir:Í in vivo tilraunum var 75 SD rottum skipt af handahófi í 6 hópa: venjulegar (meðhöndlaðar með eimuðu vatni), líkan (BSA-meðhöndlaðar), jákvætt lyf (BSA-meðhöndlaðar auk BJRG 600 mg/kg/dag) og BSA-meðhöndlaðar auk CPhGs (125, 250 og 500 mg/kg/dag) hópa. Lifur og milta vísitölur, sermisþéttni aspartat amínótransferasa (AST), alanín amínótransferasa (ALT), hexadecensýru (HA), laminín (LN), tegund III procollagen (PCIII), tegund IV kollagen (IV-C), hýdroxýprólín (Hyp) ), og umbreytandi vaxtarþáttur 1 (TGF- 1) voru mældir í rottu lifur. Vefjameinafræðilegar einkunnir fyrir lifrartrefjun voru metnar fyrir hvern hóp með því að nota H&E og Masson's trichrome litun. Tjáning á TGF- 1, kollageni I (Col-I) og kollageni III (Col-III) voru ákvörðuð með ónæmisvefjaefnafræðilegri litunaraðferð. Þessi áhrif voru metin frekar in vitro með því að ákvarða tjáningarmagn NF-KB p65 og Col-I með magnbundinni rauntíma PCR greiningum. Col-I próteintjáning var einnig skoðuð með Western blotting.

Niðurstöður: Allir skammtahópar (125, 250 og 500 mg/kg/dag) af CPhG lækkuðu marktækt lifrar- og miltavísitölu, lækkaði ALT, AST, HA, LN , PCIII, IV-C sermiþéttni, TGF- 1 innihald (P < 0.01,="" p="">< 0.01="" og="" p="">< 0.01),="" og="" hyp="" efni.="" cphgs="" léttu="" einnig="" verulega="" á="" bólgu="" í="" lifrarfrumum="" og="" komu="" í="" raun="" í="" veg="" fyrir="" drep="" í="" lifrarfrumum="" og="" íferð="" bólgufrumna.="" ónæmisvefjaefnafræðilegar="" niðurstöður="" sýndu="" að="" cphg="" minnkaði="" marktækt="" tjáningu="" tgf-="" 1="" (p="">< 0,01,="" p="">< 0,01="" og="" p="">< 0,01),="" col-i="" og="" col-iii.="" in="" vitro="" áhrif="" cphgs="" (100,="" 75,="" 50="" og="" 25="" ug/ml)="" á="" hsc-t6="" sýndu="" að="" cphgs="" drógu="" verulega="" úr="" mrna="" tjáningu="" nf-kb="" p65="" og="" col-i="" og="" cphgs="" drógu="" einnig="" úr="" tjáningu="" col-i="">

Ályktanir:CPhGs hafa veruleg andstæðingur-lifrartrefjunaráhrif og má nota sem lifrarvarnarefni til að meðhöndla lifrartrefjun.

Leitarorð:Lifrartrefjun,Cistanche tubulosa,Fenýletanólíðglýkósíð,Chemokine BSA, forvarnir og meðferð

FenýletanólíðglýkósíðinnCistanchetubulosa

Bakgrunnur

Lifrartrefjun er sáragræðandi viðbrögð við alvarlegum lifrarskaða sem á sér stað við meingerð langvinnrar bólgu af völdum ýmissa þátta. Þessir þættir eru veirusýking, áfengismisnotkun, gallteppa og efnaskipta- og sjálfsofnæmissjúkdómar [1-3]. Stigvaxandi uppsöfnun utanfrumufylkis (ECM) og minnkuð endurgerð truflar eðlilega uppbyggingu lifrarinnar, sem leiðir til lifrartrefjunar [4]. Lifrartrefjun er mikilvæg í langvinnum lifrarsjúkdómum og þróast oft í óafturkræf skorpulifur og krabbameinsvaldandi áhrif. Sem stendur eru engar aðferðir eða áhrifarík lyf til að meðhöndla lifrartrefjun. Þess vegna er brýnt að finna vefjagigtarlyf sem dregur úr framgangi lifrarskaða til bandvefs og krabbameins.

CistanchetubulosaW (af fjölskyldunni Orobanchaceae) er sníkjudýr planta sem er mikið ræktuð í suðurhluta Xinjiang í Kína [5]. Fólk notar það venjulega til að endurlífga nýrun, næra blóðið, slaka á þörmum og seinka öldrun. Það er opinberlega skráð í kínversku lyfjaskránni [6].Cistanchetubulosainniheldur margs konar virka efnisþætti. Þar á meðal eruFenýletanólíðglýkósíð(CPhGs), iridoids og fjölsykrur. Sem einn af mörgum virkum íhlutum íCistanchetubulosa, CPhGshave sýndi sannfærandi andoxunarefni, þreytueyðandi, taugaverndandi og bólgueyðandi áhrif í bæði in vivo og in vitro rannsóknum [7]. Á undanförnum árum hefur verið greint frá því að CPhGs hafi lifrarverndandi áhrif. Hugsanlegir aðferðir sem liggja að baki þessum áhrifum eru hreinsun á sindurefnum, verndun lifrarhimna, ónæmisstjórnun, hömlun á frumudauða, hömlun á tjáningu HBsAg og HBeAg og hömlun á HBV DNA eftirmyndun og fleira [8-11]. Hins vegar fjalla fáar rannsóknir í bókmenntum um bandvefsáhrif GPhCs gegn lifur. Þess vegna miðar þessi rannsókn að því að kanna lifrartrefjunaráhrif GPhCs með því að nota líkan af nautgripasermi albúmíni (BSA) framkallað lifrartrefjun í rottum. Skyldar sameindaaðferðir voru rannsakaðar í HSC-T6 frumum.

Aðferðir

Efni og hvarfefni

Hýdroxýprólínsett (basísk vatnsrof) (Lot:20140616) var keypt frá Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (Kína). Rotta TGF- 1 sandwichELISA sett (lota: 238240615) voru keypt frá Lianke Biotech Co., Ltd. (Kína). Rabbit Anti-CollagenI mótefni (lota: 140619), Rabbit Anti-Collagen III mótefni (lota: 980788 W), og Rabbit Anti-TGF- 1 mótefni (lota: 140619) var veitt af Beijing BiosynthesisBiotechnology Co., LTD ( Kína). Meðfylgjandi sauðfjársermi (vinnuvökvi) (hluti: WP141214), PV-6000(hluti: WK141225) og DAB setti (hluti: K136621D) voru keyptir frá Zhongshan Golden Bridge BiotechCo., Ltd. (Kína). Greining á frummótefnum var framkvæmd með því að nota 2. Mótefnalausn (Alk-Phos.Conjugated, Anti-rabbit) og 2. Mótefnalausn (Alk-Phos. Conjugated, Anti-mouse) (lota: 272387) keypt af Invitrogen Company (Bandaríkjunum) .

Nautgripasermi albúmín (BSA) (lota: SLBG8239V) var keypt frá Sigma (Bandaríkjunum). Fyrir notkun var BSA útbúið við 18 g/L í venjulegu saltvatni, bakteríurnar fjarlægðar með síun og BSA geymt við 4 gráður. Ófullnægjandi hjálparefni Freunds sem innihélt 1 g af lípíði úr sauðfjárhári (Lot: AF0220LA14, Shanghai yuan ye Bio-Technology Co., Ltd. (Kína,) var blandað saman við 2 g fljótandi paraffín (Lot:20130815, Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd. (Kína,), sótthreinsuð í gufuautoclave og geymd við 4 gráður. Jákvæða lyfið BJRG var fengið sem Biejiarangan töflur frá Inner Mongolia Furui Medical Science Co., Ltd. (Kína). BJRG lyfjabirgðir voru útbúnar með því að leysa upp BJRG töflur í eimað vatn í styrkleikanum 600 mg/kg.

Fenýletanólíð glýkósíðinnCistanchehefur fyrirbyggjandi áhrif

Plöntuefni

Cistanche tubulosa(Orobanchaceae fjölskyldan) var keypt frá Minfeng svæðinu í Xinjiang í Kína. Efnið var staðfest af vísindamanninum Jun Zhao, Key Laboratory for Uighur Medicine, Institute of Materia Medica of Xinjiang. Skírteinissýni voru afhent í Materia Medica-stofnuninni í Xinjiang.

Undirbúningur CPhGs

Þurrkaðir og sneiddir rhizomes afCistanchetubulosa(6,0 kg) voru dregin út í röð undir bakflæði þrisvar sinnum með 70% etanóli, og leysirinn var fjarlægður til að fá etanólútdráttinn. Etanól útdrættir voru hreinsaðir með því að nota AB-8 plastefni til að fáfenýletanóíðglýkósíð(CPhGs). Stofnlausnir CPhGs sem notaðar voru fyrir mismunandi skammtahópa í dýrarannsóknum (500 mg/kg, 250 mg/kg, og 125 mg/kg, í sömu röð) voru leystar upp í 0,5 prósent (5 g/L) karboxýmetýl sellulósa ( natríumsalt).

Magngreining CPhGs

Innihald tveggja þátta (echinacoside andacteoside) í CPhGs var ákvarðað með HPLC með því að nota áður tilkynnt aðferð (Zhang o.fl. 2004)[12]. HPLC var framkvæmt með því að nota Shimadzu LC-10AHPLC með UV skynjara. HPLC súlan var Phenomenex Gemini ODS súla (250 × 4,6 mm,5 μm). Ísókratíski hreyfanlegur fasinn samanstóð af metanól-asetónítríl -1 prósenta ediksýru (15:10:75, rúmmál / rúmmál / rúmmál). Skolun var í 40 mínútur og flæðihraða var haldið við 0,6 ml/mín. Súluhitanum var haldið stöðugu við 30 gráður. UV uppgötvun var við 334 nm.

Dýr og HSC-T6 frumulína

Heilbrigðar fullorðnar Sprague–Dawley (SD) karlrottur (180–220 g) voru keyptar frá Xinjiang MedicalUniversity Animal Center, leyfisnr.: SCXK (New)2011–0004. Rottum var gefið fæðu án sértækra sjúkdómsvalda (SPF). Allar aðferðir sem tengjast dýratilraunum voru samþykktar af dýrasiðanefnd fyrsta tengda sjúkrahússins í Xinjiang læknaháskólanum. Rottur voru geymdar í búrum við stýrðar umhverfisaðstæður (25 gráður og 12 klst ljós/myrkur hringrás) og höfðu frjálsan aðgang að venjulegu rottukornafóðri og kranavatni. Rottur voru aðlagðar fyrir meðferð.

Ódauðleg rotta lifrarstjörnufrumulína, HSC-T6, var fengin frá Wuhan Procell Gene BiotechnologyCo., LTD. (Wuhan, Kína). HSC-T6 frumur voru ræktaðar í Dulbecco's Modified Eagle's Medium (High Glucose) (DMEM, Peking, Kína) bætt við 10 prósent fósturbóvinsermi (Gibco, Suður-Ameríka), 100 ae/ml penicillín og 100 ug/ml streptomycin (Peking, Kína) ) í rakaðri hitakassa við 37 gráður með 5 prósent CO2.

BSA af völdum lifrarskaða og meðferðir

Sjötíu og fimm SD rottum var skipt af handahófi í sex hópa: Venjuleg (meðhöndluð með eimuðu vatni), líkan (BSA meðhöndluð), jákvætt lyf (BSA-meðhöndluð auk BJRG 600 mg/kg/dag) , og BSA-meðhöndlaðir auk CPhGs (125, 250, 500 mg/kg/dag) hópar. BSA-meðhöndlaðir auk CPhGs (125, 250, 500 mg/kg/dag) hópar voru með 13 rottur í hverjum hópi og í hinum hópnum voru 12 rottur í hverjum hópi. BSA-framkallaða lifrarskaða líkaninu er skipt í frumnæmingu og fylgt eftir með ónæmisfræðilegu árás) [13]. Fyrir utan eðlilega hópinn fengu hinir hóparnir margar inndælingar undir húð með 0,5 ml (9 mg/ml) ófullkomnu BSAFreund's ófullnægjandi hjálparefni á 1. degi, 15. degi, 22. degi, 29. og 36. degi fyrir frumnæmingu. Sjö dögum eftir fimmtu inndælinguna var blóð fengið í gegnum ratretinal vein plexus og prófað með tilliti til albúmínmótefna í sermi. BSA mótefni í rottusermi var greint með tvöföldum agardreifingaraðferð. Árásarsprautan var framkvæmd með því að gefa 0,4 ml af BSA í venjulegu saltvatni í gegnum æðabláæð í BSA mótefnajákvæðum rottum tvisvar í viku í tíu sinnum. Styrkur og inndælingartími var 5.00, 5.50, 6.00, 6.50,7.00, 7.50, 8.50, 9.00, 9.50 og 10.00 g/L á degi 46 , dagur 50, dagur 53, dagur 57, dagur 60, dagur 64, dagur 67, dagur 71, dagur 74 og dagur 78, í sömu röð. Í venjulegum hópi var venjulegt saltvatn notað til ónæmisfræðilegra frum- (næmingar) og auka- (árásar) inndælinga í stað BSA og aðrar aðstæður voru þær sömu og í líkanahópnum.

Venjulegur hópur fékk eimað vatn til inntöku með skammti upp á 10 ml/kg/dag. Fyrirmyndarhópnum var gefið til inntöku 10 ml/kg/dag 0,5 prósenta CMC-Na lausn. Jákvæði lyfjahópurinn var gefinn til inntöku 600 mg/kg/dag BJRG. Hóparnir sem fengu BSA og CPhG (125.250 og 500 mg/kg/dag) fengu til inntöku 125, 250 og 500 mg/kg/dag CPhGs, í sömu röð. Dagsskammtar rottur héldu áfram í tvær vikur eftir síðustu inndælingu.

Eftir tilraunatímabilið voru rottur fastaðar í 12 klst áður en þær fengu 10 prósent klóralhýdrat og síðan strax aflífaðar. Sermissýnum var safnað úr hverjum rottum sem notaður var strax. Lifur voru tíndar í tvennum tilgangi: (1) varðveislu í fljótandi köfnunarefni fyrir Hyp kits og (2) festingu í 10 prósent formaldehýði fyrir vefjafræðilegar og ónæmisvefjafræðilegar rannsóknir. Heildartími dýrarannsóknanna var 93 dagar.

Fenýletanólíð glýkósíðinnCistanchehefur fyrirbyggjandi áhrif

Lifur og milta vísitölur

Lifur og milta voru krufin með kviðarholi og þvegin með 4 gráðu venjulegu saltvatni. Eftir að umfram vatn hefur verið tekið upp með síupappír voru lifur og milta vigtuð til að reikna út samsvarandi vísitölur: Hlutfallsleg líffæraþyngd=líffæramassi (g)/massi einstaklings (g) × 100 prósent [14].

Greining á merkjum um fibrosis í lifur

Verndaráhrif CPhGs gegn lifrarskaða af völdum BSA voru metin með því að mæla ALT og AST (Mind ray automatic biochemical analyzer, A086A0182). Þróun lifrartrefjunar og áhrif meðferðar voru ákvörðuð með því að skoða HA, LN, PC III og IV-C (Cemiluminescence Analyser, TaiGeKeXin, MP2808).

Hyp efni og TGF- 1 greining

Magn Hyp í lifrarvef var ákvarðað með litrófsmælingu samkvæmt leiðbeiningum settsins. Magn Hyp var gefið upp sem Hyp (ug)/prótein (mg). Hyp (ug/mg)=(Mæld OD - auðan OD)/(staðall OD auðan OD)×5 (ug/ml) × 10/blautþyngd vefja (ml/mg). Lifrarstyrkur TGF- 1 var greindur með því að nota ELISA-sett í samræmi við leiðbeiningar framleiðanda. Hindrandi áhrif CPhGs á bandvefsmyndun voru staðfest með tjáningargildum TGF- 1.

Vefjameinafræðileg skoðun

Lifrarvefurinn í sama hluta vinstra blaðsins var skorinn og festur í 10 prósent formaldehýðlausn. Vefur var litaður með hefðbundinni H&E og Masson'strichrome litun til að fylgjast með vefjameinafræðilegum breytingum í ljóssmásjá. Tjáning á kollageni tegund I, kollagen tegund III og TGF - 1 í lifrarvef var greind með ónæmisvefjaefnafræðilegri litun [15].

Hálf megindleg ónæmisvefjafræði var framkvæmd samkvæmt aðferðum sem greint hefur verið frá [16, 17]. Eftirfarandi flokkanir voru notaðar fyrir TGF- 1 jákvæðar frumur: "-" gefur til kynna nánast enga tjáningu, 20=l; " plús " gefur til kynna jákvæðar frumur sem safnað er hver fyrir sig á meinsvæðinu, 21=2; " plús plús " gefur til kynna jákvæðar frumur í litlum hópum sem eru samankomnar í kringum skemmdasvæðið, 22=4; " plús plús plús " gefur til kynna dreifðar jákvæðar frumur sem gefnar eru upp sem 23=8. Niðurstöðurnar tákna stigveldissamþættingu. Kollagen tegund I og kollagen tegund III litningastig og umfang var breytt í CRI fyrir tölfræðilega greiningu (litninga gráðu × litningasvið). Litningastiginu er skipt í veikt " plús ", miðlungs " plús plús " og sterkt " plús plús plús ". Litningasviðinu er skipt í " plús ", litningasvið þess < skoða="" 1/4;="" "="" plús="" plús="" ",="" litningasvið="" sjónarinnar/4-2/4;="" "="" plús="" plús="" plús="" ",="" litningafræðilegt="" sjónsvið="" 2/4-3/4;="" "="" plús="" plús="" plús="" plús="" ",="" litningasvið="" þess=""> 3/4. Blinded skorun var framkvæmd af tveimur aðilum þar sem " plús " er 1; " plús plús "er 2, " plús plús plús " er 3 og " plús plús plús plús " er 4. Þrjú smásjárskoðunarsvið (stækkun × 200) voru valin af handahófi fyrir hvern hluta, þar sem meðalstig sýnanna var notað sem hálfmagnað stig.

Frumutilraunir

HSC-T6 frumur voru húðaðar í 96-brunnsplötu. Upphaflega voru frumur ræktaðar með DMEM sem innihélt 10 prósent FBS í 48 klst. Miðlinum var síðan skipt út fyrir DMEM án FBS til að svelta frumurnar í 12 klst. Frumurnar voru síðan ræktaðar með DMEM sem innihélt 5,0 ng/mLTGF - 1 (án FBS) í 24 klst. Að lokum, mismunandi styrkur CPhGs (100 ug/ml, 50 ug/ml og 25 ug/ml), akteósíðs (6 ug/ml, 3 ug/ml og 1,5 ug/ml), andechinacoside (500 ug/ml, 250 ug/ml, og 125 ug/ml) voru gerðar í plötunni í fjórfalda brunna og ræktuð í 48 klst.

Rauntíma PCR greining

MRNA tjáningarstig NF-KB, p65 og kollagen I var ákvarðað með rauntíma PCR. Til að ákvarða tjáningu mRNA í HSC-T6 frumum voru frumurnar (4 × 105 frumur) sáð í sex-brunna plötur með 3 mL DMEM með 10 prósent FBS og ræktaðar yfir nótt við 37 gráður og 5 prósent CO2, eftir það frumuræktunarmiðlum var skipt um serumfrítt DMEM. Næst, CPhGs (100 ug/ml, 50 ug/ml og 25 ug/ml), acteoside (6 ug/ml, 3 ug/ml og 1,5 ug/ml) og echinacoside (500 ug/ml, 250 ug) /ml, og 125 ug/ml) var bætt við brunnana. Eftir 48 klst. ræktun með CPhGs eða einliða samsetningum var heildar-RNA dregið út með því að nota TRIzol hvarfefni (Invitrogen, USA) og hrist kröftuglega með klóróformi í 15 s. Eftir að hafa setið við stofuhita í 3 mínútur var lýsatið skilið í skilvindu við 12,000 x g í 15 mínútur við 4 gráður. RNA í vatnsfasa var fellt út með ísóprópanóli og efri vatnsfasinn var fluttur í nýtt örskilvindu rör. RNA var fellt út með því að bæta við 0,75 prósent etanóli, eftir það var örskilvindurörið sett í skilvindu við 12,000 × g við 4 gráður í ekki meira en 5 mínútur. Vökvinn var fjarlægður og RNA-efnið var þurrkað við stofuhita í 5-10 mínútur. Sérstök sett af frumum (Sangon, Shanghai, Kína) sem voru notuð til mögnunar á rottu-aktíni [GenBank: NM_031144.3], Kollagen I [GenBank: NM_ 053304.1] og NF- κB p65[GenBank: NM_199267.2] gen voru hönnuð með því að nota Batch Primer 3. Fram (FW) og afturábak (RV) frumur voru sem hér segir: Kollagen I (FW: GGA GAGAGC ATG ACC GAT GG, RV: GGG ACT TCT TGAGGT TGC CA), NF-κB p65 (FW: CAT ACG CTG ACCCTA GCC TG, RV: TTT CTT CAA TCC GGT GGCGA), -aktín (FW: TAA GGC CAA CCG TGA AAA GATG, RV: AGA GGC ATA CAG GGA CAA CAC A). Niðurstöður voru staðlaðar við mRNA af housekeepinggeninu -aktíni sem innra eftirlit og eru sýndar sem hlutfallsleg mRNA stig

Viðbrögð voru framkvæmd með 8 μL IQ SYBR GreenSupermix, 1 μL 10 pM grunnpar, 8,5 μL eimuðu vatni og 2,5 μL cDNA. Hver pólýmerasa keðjuverkun var framkvæmd við eftirfarandi aðstæður: 95 gráður í 3 mínútur, síðan 40 lotur af 10 sekúndum við 95 gráður, 30 sekúndur við 55 gráður og 10 sekúndur við 55 gráður – 95 gráður til framlengingar, fylgt eftir með einflúrljómunarmælingu. Lokaniðurstöðum var lýst með hlutfallslegum gildum (2-ΔΔCt). Útreikningur og greining voru framkvæmd með iQ5 rauntíma PCR uppgötvunarkerfinu.

Western blot greining

Kollagen I (Abcam, Cambridge, Bretlandi, vörunúmer: ab34710)próteintjáningarmagn var ákvarðað með Westernblotting [með -aktíni (Lot: 60008-1-lg; Proteintech, Kína) sem eftirlit með heimilishaldi. Heilfrumuútdrættir voru útbúnir með því að nota Radioimmunoprecipitation assay (RIPA) (Thermo Scientific, USA) jafnalausn með 1 prósent Haltproteasa hemla kokteil (Thermo Scientific, USA) og 1 prósent Halt fosfatasa hemla kokteilum (Thermo Scientific, Bandaríkjunum). Próteinstyrkurinn var mældur og magnmældur með Bradford aðferðinni [18]. Prótein (10–50 ug) var aðskilið á 10 prósent SDS-PAGE hlaupi og flutt yfir á PVDF himnur (Millipore, USA). Himnur voru stíflaðar í 1 klst við stofuhita með 5 prósent BSA og aðal mótefnin (Anti-Colla gen I) mótefni, 1:200 þynningu eða mAb mAb af -aktíni, 1:5000 þynningu) voru ræktaðar við 4 gráður yfir nótt. Samsvarandi Alk-Phos. samtengd aukamótefni voru ræktuð við stofuhita. Að lokum voru himnurnar þvegnar þrisvar sinnum með 1 × Tris-HClsaline með 0,1 prósent Tween 20, og merki voru skannaðar og sýnd með GEL DOC XR Imaging System (Bio-Rad). Densitometric greining var framkvæmd á próteinum sem vekur áhuga og staðlað í -aktín með GEL DOCImage Studio hugbúnaði (Bio-Rad). -aktín var notað sem innra eftirlit.

tölfræðigreining

Shapiro-Wilk eðlilegleikaprófið og Levene's dreifnijafnvægisprófið var beitt til að sannreyna eðlilegt og einsleitt dreifni. Dreifnigreining (ANOVA) fylgt eftir með Tukey's post hoc prófi var notað til að bera kennsl á tölfræðilegan mun á ójafnri, normaldreifðum gögnum. Kruskal-Wallis prófið sem ekki var parametrískt var notað til að greina gögn sem voru ekki eðlilegdreifð eða einsleit. Niðurstöður voru gefnar upp sem meðaltal ± SD. Merking var stillt á P < 0.05.="" öll="" gögn="" voru="" greind="" með="" spss="" 16.0="" hugbúnaði="" (xinjiang="" medical="">

Niðurstöður

Magnbundin ákvörðun CPhGsCPhGs íCistanchetubulosainniheldur tvöFenýletanólíðglýkósíð, echinacoside og acteoside, og innihald þeirra í CPhGs var ákvarðað með HPLC greiningu (mynd 1) til að vera 42,71 ± 0.42 prósent og 14.27 ± 0,18 prósent, í sömu röð.

Lifur og milta vísitölur

Eins og tafla 1 var sýnd hækkuðu lifrar- og miltavísitölur líkanahópsins marktækt [P < 0.01,p="">< 0,05].="" lifur="" og="" miltavísitölur="" jákvæða="" lyfsins="" bjrg="" og="" cphgs="" við="" mismunandi="" skammtahópa="" voru="" marktækt="" lækkuð="" samanborið="" við="" líkanahópinn[pliver="0.004," pliver="0.003," pliver="0.004," pliver="0.005;" pspleen="0.017," pspleen="0.027," pspleen="0.024,PSpleen=0.070," í="" sömu="" röð].="" lifur="" og="" milta="" vísitölur="" voru="" lægri="" en="" hjá="">

Áhrif CPhGs á ALT, AST starfsemi og lifrartrefjunarmerki

Í þessari rannsókn var styrkur lifrarensíma AST og ALT marktækt aukinn í líkanahópnum, sem endurspeglar lifrarfrumuskemmdir í lifrartrefjunarrottum af völdum BSA. Hins vegar sýndu tilraunirnar að meðferð með BJRG (600 mg/kg) og CPhGs (125, 250 og 500 mg/kg) minnkaði verulega AST[PAST < 0,001,="" past="">< 0,001,="" past="">< 0,001,="" past="">< 0,001,="" hver="" fyrir="" sig]="" og="" alt="" [palt="0.117," palt="0.139," palt="0.189" ,="" palt="0.255," í="" sömu="" röð]="" gildi="" í="" fibrosisrats="" í="" lifur.="" (tafla="">

Magn HA, LN, PC og IV-C í módelrottum jókst marktækt [PHA < 0.001,="" pln="">< 0.{{39}="" }01,="" ppciii="0.002," piv-c="">< 0,001,="" í="" sömu="" röð].="" samanborið="" við="" líkanahópinn,="" gildi="" ha="" [pha="0.009," pha="0.007," pha="0.009," pha="0.023," í="" sömu="" röð],="" ln="" [pln="0.011," pln="0.004," p="" ln="0.026," p="" ln="0.069," í="" sömu="" röð],="" pc="" iii[p="" pciii="" {{26="" }}.006,="" p="" pciii="0.067," p="" pciii="0.136," p="" pciii="0.296," í="" sömu="" röð]="" og="" iv-c="" [p="" iv-c="">< 0,001,="" p="" iv-c="">< 0,001,="" p="" iv-c="">< 0,001,="" p="" iv-c="">< 0,001,="" í="" sömu="" röð]="" hjá="" rottum="" lækkuðu="" verulega="" vegna="" bjrg="" (600="" mg/kg)="" og="" cphgs="" við="" mismunandi="" skammtahópa="" (125,="" 250="" og="" 500="" mg/kg)="" )="" (tafla="">

Hyp efni og TGF- 1

Kollageninnihald var einnig greint með því að mæla Hyplevels í lifrarvef. Eins og sést í töflu 4 var meðaltal Hyp-stigs í líkanahópnum marktækt hærra en venjulegs hóps, en það var verulega lækkað í BJRG hópnum og mismunandi CPhGs skammtahópum.

Lifrarstyrkur TGF{{0}} í líkanahópnum í rottum jókst marktækt [P < 0.001].="" samanborið="" við="" líkanahópinn,="" tgf-="" 1="" gildi="" jákvæða="" lyfsins="" og="" mismunandi="" cphgs="" skammtahópa="" lækkuðu="" verulega="" [p="" tgf-="" 1="">< 0.001,="" p="" tgf-="" 1="">< 0.001,p="" tgf{{10="" }}="">< 0,001,="" ptgf-="" 1="">< 0,001,="" í="" sömu="" röð].="" niðurstöðurnar="" eru="" teknar="" saman="" í="" töflu="">

Vefjameinafræðileg skoðun

Athuganir á eðlilegum lifrarvefshlutum lituðum með H&E og Masson's trichrome sýna aðgreindar lifrarfrumur og lifrarskúta. Lifrarvefsbyggingin í módelrottunum var röskuð og lifrarvef og lifrarskúta var skipt út fyrir mikið magn af bandvef. Hins vegar greindust eðlilegri frumuarkitektúr og minni bandvefur í meðferðarhópnum en í líkanahópnum.

H&E litun

Hjá venjulegum hópi sást burðarvirki lifrarblaða án óeðlilegra gáttsvæða og sinushola í lifur. Lifrarstrengjunum var raðað á skipulegan hátt, með kjarnanum hringlaga og skýra. Kjarnar eru staðsettir í miðju frumunnar, með miklu umfrymi. Aðeins gáttarsvæðið hefur lítið magn af trefjavef (mynd 2a).

Í líkanahópnum var lobular uppbyggingin mjög skemmd. Lifrarfrumur sýndu væga vatnskennda hrörnun, aðallega blöðruhrörnun og/eða fituhrörnun. Einnig varð vart við myndun bólgufrumuíferðar, umfangsmikillar offjölgun trefjavefs, myndun á fjölmörgum trefjaskilum, klofnum blöðrum og marktækri fjölgun lifrarfrumna. Þessar athuganir staðfestu árangurinn við að koma á fót ónæmisdýralíkani með rottum. lifrartrefjun (mynd 2b).

Í samanburði við líkanahópinn var minnkun á íferð bólgufrumna í mismunandi CPhGs. Einnig sást minna drep og fituhrörnun lifrarfrumna sem og léttir á bandvefsmyndun. CPhG dró verulega úr meinafræði BSA-framkallaðrar lifrartrefjunar í rottum, létti bólgu í lifrarfrumum og kom á áhrifaríkan hátt í veg fyrir lifrarfrumudrep og íferð bólgufrumna, sem bendir til þess að CPhG hafi verndandi áhrif á BSA-framkallaða lifrartrefja í rottum. (Mynd 2c–f ).

Trichrome litun Masson

Í venjulegum hópi var lifrarvefurinn eðlilegur. Lifrargáttarsvæðið sýndi lítið magn af blákollagenþráðum og lifrarvefurinn var eðlilega uppbyggður (mynd 3a). Í samanburði við lifrarvef venjulegs hóps fjölgaði trefjavefur með miðlæga fylgiseðlinum og stækkaði í lifrarhlífina. Kollagenþræðir stækkuðu og tengdu og umvefðu allan blaðlegginn og umkringdu miðbláæð. Þessi áhrif, ásamt bandvefsmyndun í lifrarfrumum, skemmdum á burðarvirki í blöðrubyggingu, bandvefsmyndun í periportali og myndun gervifrumna (mynd 3b) gáfu vísbendingar um að líkanið væri komið á fót.

Samanborið við fyrirmyndarhópinn voru kollagenþræðir í jákvæða lyfjaviðmiðunarhópnum örlítið teygðir út frá útlæga gáttsvæðinu (mynd 3c). Samanborið við líkanahópinn minnkuðu kollagenþræðir í mismunandi CPhGs skammtahópum marktækt, trefjafjölgun var hindruð og útbreiðslu trefjavefs innan lifrarhlífarinnar minnkaði verulega. Þessar niðurstöður bentu til þess að CPhGs verndaði rottur gegn BSA-völdum lifrartrefjun (mynd 3d-f).

Ónæmisvefjaefnafræðileg litun

Mikilvægt er að tjáning kollagens tegundar I og kollagens tegundar III gegnir mikilvægu hlutverki í þróun lifrartrefjunar, og myndun þeirra og útfelling í lifrarvef gæti verið mikilvægur ákvörðunaraðili um verkun bandvefsmyndunar í lifur. Niðurstöðurnar eru teknar saman í töflu 5.

Kollagen tegund I

Venjulegur hópur tjáði kollagen af ​​tegund I aðallega í æðum og gáttarsvæðinu. Módelhópurinn tjáði mjög kollagen tegund I æðavefsmyndun á gáttasvæðum. Í rými Disse sást litun á kollageni af tegund I sem rák eða sem flekkótt dreifing. Kollagenhjúpuð fibroussepta til að mynda gervihólf. Í þessum tilraunum mynduðust færri trefjaskil fyrir BJRJ (600 mg/kg) og mismunandi skammtahópa af CPhGs (125, 250 og 500 mg/kg) [PCol I= 0.002, PCol I {{6 }}.001, PCol I=0.023, og PCol I=0.044, hver fyrir sig]. Hálftöldu niðurstöðurnar leiddu í ljós að tjáning á kollagengerð I þeirra var marktækt lægri samanborið við líkanahópinn (mynd 4).

Kollagen gerð III

Kollagen tegund III var veikt tjáð í venjulegum hópi og útlæg svæði umhverfis gáttina og lifraræðar sýndu lítið magn af fíngerðu gulu í stað samfelldra trefja (mynd 5a). Í líkanahópnum sýndu kollagenþræðir breiðar og þykkar strengir, sem gefa til kynna sterka tjáningu, aðallega staðsett á gátt- og trefjavefssvæðum (mynd 5b).

Kollagentrefjar BJRJ (600 mg/kg) og mismunandi skammtahópar CPhGs (125, 250 og 500 mg/kg) voru þráðlaga og dreifðust um miðbláæð og gáttasvæði. Í samanburði við líkanahópinn voru kollagenþræðir verulega skertir, litun var föl og þunn og ónæmisvefjaefnafræðileg litun var veikt jákvæð (mynd 5c-f). Þessar hálf-magnlegu niðurstöður sýna að frumurnar sem tjáðu sig jákvætt í jákvæðu og mismunandi skammtahópunum [PCol III=0.015, PCol III=0.001, PColIII=0.010 og PCol III=0.037, í sömu röð] voru frábrugðnar þeim í líkanahópnum.

TGF- 1

Það var lítil tjáning á TGIF- 1 í venjulegum rottulifrarfrumum. Tjáning var takmörkuð við lítinn fjölda millivefsfrumna (mynd 6a). Í líkanahópnum dreifðist TGF- 1 tjáningin víða á gáttsvæðinu, trefjarýmum, lifrarstjörnufrumum, bólgufrumum, sinusoidal veggnum og umfrymi. Tiltekið gáttarsvæði sýndi mjög jákvæða tjáningu með brúngulum litun (mynd 6b)

Það var lítil tjáning á gáttsvæðinu og trefjaskilum BJRJ (600 mg/kg) og mismunandi skammtahópa af CPhGs (125, 250 og 500 mg/kg). Umfang jákvæðrar litunar í þessum hópum minnkaði verulega samanborið við fyrirmyndarhópinn. Litun í millivefsfrumum í trefjaskilum og umfrymi bólgufrumna minnkaði (mynd 6c–f). Hálftaldar niðurstöður leiddu í ljós að BJRJ og mismunandi skammtahópar af CPhGs [P TGF- 1=0.001, P TGF- 1 < 0.001,="" p="" tgf-="" 1="0.009," ptgf-="" 1="0." 004,="" í="" sömu="" röð]="" voru="" marktækar="" samanborið="" við="">

Eins og nefnt er fyrr í greininni er TGF- 1 mikilvægt frumufrumuefni í meinalífeðlisfræði lifrartrefjunar, sem örvar framleiðslu utanfrumuefnis [19]. Við sýndum að magn TGF- 1 jókst í líkanahópnum í samræmi við alvarleika lifrartrefjunar. Tjáningarmagn TGF- 1 í lifur var í samræmi við serumTGF- 1 gildi. Þetta gefur til kynna að CPhGs geti dregið verulega úr lifrartrefjun vegna TGF- 1 tjáningar með því að taka þátt í myndun og niðurbroti ECM.

Tjáning kollagens tegundar I, kollagens tegundar III og TGF- 1 getur greint meinafræðilegt ferli lifrartrefjunar. Tjáningarmagn þeirra í meðferðarhópunum minnkaði marktækt og sýndi að CPhGs geta bætt kollagenasavirkni, viðhaldið kraftmiklu jafnvægi lifrar-ECM nýmyndunar og niðurbrots, þannig að seinka og koma í veg fyrir myndun lifrartrefjunar.

NF-KB p65 og kollagen I tjáning eftir lyfjainngrip í HSC-T6 frumum

Til þess að einkenna merki um bandvefsmyndun í lifur voru tvö lykilstjórnargen í lifur ákvörðuð með RT-PCR prófi. Gögnin sýndu að tHSC-T6 frumur úr viðmiðunarhópnum höfðu lægra magn af NF κB og kollagen tegund I mRNA. Aftur á móti örvaði TGF- 1 HSC-T6 frumur til að stýra NF-kB (P < 0.01)="" og="" col-i="" (p="">< 0,01)="" mrna="" verulega,="" með="" hærra="" magni="" en="" þeir="" sem="" eru="" í="" samanburðarhópnum.="" í="" viðurvist="" mismunandi="" styrks="" cphgs,="" niðurstöður="" nf-κb="" p65="" [p="" nf-κb="0.001" fyrir="" 100="" ug/ml,="" p="" nf-kb="0.002" fyrir="" 75="" ug/ml="" ,="" p="" nf-kb="0.007" fyrir="" 50="" ug/ml,="" og="" p="" nf-kb="0.012" fyrir="" 25="" ug/ml,="" í="" sömu="" röð]="" og="" col-i="" [p="" col-i="" {{32="" }}.006,="" p="" col-i="0.009," p="" col-i="0.014," p="" col-i="0.019," í="" sömu="" röð]="" sýndu="" minni="" tjáningu="" þessara="" mrna="" (="" mynd="">

Western blot greining á kollageni I stigi eftir lyfjainngrip í HSC-T6 frumum

Mynd 8 sýnir tjáningu kollagen I prótein í HSC-T6 frumum mismunandi tilraunahópa. Kollagen I prótein tjáning var marktæk minnkuð í hinum ýmsu skammtahópum CPhGs (100 ug/ml, 75 ug/ml, 50 ug/ml, og 25 ug/ml) samanborið við TGF- 1 hópinn.

Umræða

CPhGs er fenýletanóíð glýkósíð einangrað og hreinsað úr rhizome Cistanche, sem er notað sem hefðbundin kínversk jurtalyf. Á undanförnum árum hefur verið sýnt fram á að CPhGshad hafi öfluga hæfileika til að koma í veg fyrir lifrarskaða [20]. Þess vegna var stefnt að því að kanna hvort CPhGs hafi hamlandi áhrif á lifrarbólgutrefjun vegna BSA-framkallaðrar lifrartrefjunar í rottum. BJRG er almennt notað sem lækningalyf við lifrartrefjun í Kína. Það er búið til úr skjaldbökuskeljum. Radix PaeoniaRubra, Cordyceps Sinensis, Radix isatidis o.s.frv. hafa þau áhrif að endurnýja Qi og blóð, draga úr þreytu, mýkja hnúta. Að auki sýna fyrri rannsóknir að það hefur þá augljósu virkni að hindra snemmbúna lifrartrefjun, hindra útbreiðslu fitugeymslufrumna og draga úr kollagenmyndun [21]. Þess vegna var BJRG notað sem jákvætt lyf í þessari rannsókn.

Meinafræðilegar breytingar á lifrartrefjun í rottum af völdum BSA inndælinga eru svipaðar og í skorpulifur á mönnum [22]. CPhGs léttu skammtaháð magni lifrartrefjunar og hamluðu HSC umbreytingu í myofibroblast-líkar frumur, minnkuðu hækkuðu magn ALT, AST, HA, LN, CIV, TGF- 1 og lifrarvísitölu og bældu verulega tjáningu kollagens I, kollagen III og TGF- 1 í lifrarvef.

Stig lifrartrefjunar eru í fylgni við þéttni HA, LN og IV-C í lifrinni, sem geta gegnt hlutverki við að greina gráðu lifrartrefjunar [23]. Greint hefur verið frá því að HA sé helsta auðlind utanfrumu fylkisins. IV-C, sem nauðsynlegur þáttur í grunnhimnunni, verður tilbúinn í ríkum mæli og afhentur mikið í fyrri stigum lifrarskorpulifrar. Sermismagn LN og IV-C eru mælikvarðar á veltuhraða grunnhimnunnar og sýna hversu mikið bandvef er í portsvæðinu og sinusoidal háræðum [24]. PC III er merki í greiningu á lifrartrefjun og snemmkominni skorpulifur, en næmi þess og sérhæfni er ekki mikil og það er ekki marktækur munur á hinum ýmsu stigum vefjagigtar í mörgum tilvísunum [24, 25]. Þessi rannsókn fékk svipaða niðurstöðu.

Að auki sýna athuganir H&E og Masson's trichrome-litaða hluta eðlilega lifrarvef með aðgreindum lifrarblöðrum og lifrarskútum. Uppbygging lifrarvefja í líkanahópnum var röskuð og lifrarvef og lifrarskúta var skipt út fyrir mikið magn af bandvef. Hins vegar sást marktækur framför í meðferðarhópunum samanborið við líkanahópinn.

Mikilvægt er að tjáning kollagen af ​​tegund I og kollagen tegund III gegna mikilvægu hlutverki í þróun lifrartrefjunar, en blokkun þess getur komið í veg fyrir og meðhöndlað lifrartrefjun. Þess vegna gæti myndun og útfelling í lifrarvef af kollagengerð I og kollagengerð III verið mikilvægur ákvörðunaraðili um verkun bandvefsmyndunar í lifur. TGF- 1 er einnig mikilvægt profibrogenic cýtókín við lifrarskaða og það er líffræðilega virkt með margvíslegar lyfjafræðilegar aðgerðir[26]. Jafnvægi á milli þessara aðgerða er nauðsynlegt til að viðhalda vefjajafnvægi. Afbrigðileg tjáning TGF 1 tekur þátt í meingerð lifrarsjúkdóma [27, 28]. Vitað er að TGF- 1 er mikilvægt frumuvaka sem tekur þátt í fyrstu stigum lifrartrefjunar. Oxunarálag kallar á TGF- 1, sem leiðir til þess að hið síðarnefnda örvar ECM-framleiðslu og útfellingu [29]. Þess vegna er ein af áhrifaríkum aðferðum til að framleiða bandvefslyf gegn lifur að bera kennsl á and-TGF- 1 lyf. Ónæmisvefjaefnagreining sýndi að tjáning kollagens tegundar I, kollagens tegundar III og TGF- 1 gæti greint meinafræðilegt ferli lifrartrefjunar. Tjáning kollagengerð I, kollagen tegund III og TGF- 1 í meðferðarhópunum minnkar, sem voru marktækt lægri sérstaklega í háskammta CPhGs meðferðarhópnum, og benti til þess að CPhGs væri áhrifaríkt kollagen tegund I, kollagen tegund III , og TGF- 1 hemill. Væntanlega bætir CPhGscan kollagenasavirkni, viðheldur kraftmiklu jafnvægi ECM nýmyndunar og niðurbrots, sem seinkar og kemur í veg fyrir myndun lifrartrefjunar.

CPhGs gætu ekki aðeins bætt lifrartrefjun af völdum BSA í rottum heldur gætu einnig tengst því að hindra virkjun HSC in vitro. HSC virkjun er talin tákna mikilvæga skref trefjamyndunar. Í þessari rannsókn sýndu niðurstöðurnar að gjöf CPhGs frá 25 til 100 ug/ml dró ótrúlega úr minni NF-KB p65, kollagen I mRNA tjáningu og kollagen I prótein tjáningu í HSC.

NF-KB gegnir mikilvægu hlutverki við að móta ónæmissvörun við sýkingu eða áreiti [30]. Uppsöfnun NF-KB í lifrarfrumum getur leitt til nýliðunar bólgusýtókína/miðlara, sem veldur þannig trefjaþroska [31, 32]. Þar að auki er kollagen einnig næmur stuðull sem endurspeglar bandvefsstigið og stendur fyrir um það bil 50 prósent af heildarpróteini í trefja lifur [33]. Fyrir vikið héldum við fram að sameindakerfið gegn lifrartrefjun tengist CPhGs-miðlaðri óvirkjun á NF-KB tjáningu, þar sem ávinningurinn stuðlar að samverkandi hlutverki að draga úr ónæmiseiturhrifum og bólguálagi í BSA-skemmdum lifrarvef, sem leiðréttir enn frekar efnaskipti í lifrarstarfsemi.

Ályktanir

Að lokum benda rannsóknir okkar til þess að CPhGs dragi verulega úr umfangi lifrartrefjunar af völdum BSA í rottum. Verkunarháttur þess getur að minnsta kosti að hluta til stafað af hamlandi áhrifum CPhGs á samsetningu ECM og örvun á niðurbroti ECM og/eða með beinni hömlun á myndun kollagens tegundar I, kollagens tegundar III og tjáningar TGF{{0 }}. Þess vegna bjuggumst við við því að hægt væri að nota CPhGs í heilsuvörur eða í klínískum lyfjum til að koma í veg fyrir lifrartrefjun manna. Framtíðarrannsóknir eru nauðsynlegar til að staðfesta virkni CPhGs sem öflugs lyfs gegn lifrartrefjum.

Skammstafanir

CPhGs: anól glýkósíð frá cistanche;

BSA: Nautgripasermi albúmín;

HSC-T6: Lifrarstjörnufrumur;

Hyp: Hýdroxýprólín;

BJRG: CompoundBiejiarangan töflur;

TGF- 1: Umbreytandi vaxtarþáttur 1;

ALT: Alanínamínótransferasi;

AST: Aspartat amínótransferasi;

HA: Hýalúrónsýra;

LN: Laminín; PC III: Procollagen af ​​gerð III;

IV-C: Tegund IV kollagen;

NF-KB: Kjarnaþáttur kappa-léttkeðjuaukandi virkjað B frumur;

RT-PCR: Reversetranscriptase-polymerase keðjuverkun;

SDS-SÍÐA: Natríumdódecýlsúlfat-pólýakrýlamíð hlaup rafdráttur.

Samkeppnishagsmunir

Höfundar lýsa því yfir að þeir hafi engra hagsmuna að gæta

Framlag höfunda

TL, JZ, SPY, LM, MT og SLZ hugsuðu og hönnuðu tilraunirnar. SPY, TL og JZ greindu gögnin. SPY og JZ skrifuðu handritið. TL,LM og JZ fóru yfir handritið. Allir höfundar lásu og samþykktu lokahandritið.

Viðurkenning

Þessi rannsókn var studd af National Natural Science Foundation of China (81260624). Höfundarnir vilja koma á framfæri innilegum þökkum til prófessors Tao Liu fyrir tillögur hans um úrbætur við ritun þessarar greinar.

Upplýsingar um höfund

1Eiturefnadeild, School of Public Health, Xinjiang Medical University, No. 393 Xinyi Road, Urumqi 830011Xinjiang Uyghur Autonomous Region, Kína. 2Key Laboratory for Uighur Medicine, Institute of MateriaMedica of Xinjiang, Urumqi 830004, Kína. 3Nei. 140 Xinhua South Road, Tianshan District, Urumqi 830000Xinjiang Uyghur sjálfstjórnarsvæðið, Kína.

Smelltu hér til að athugaCistanchetubulosavörur

Heimildir
1. Cohen-Naftaly M, Friedman SL. Núverandi staða nýrra trefjalyfjameðferða hjá sjúklingum með langvinnan lifrarsjúkdóm. Ther Adv Gastroenterol. 2011;4(6):391–417.
2. Puche JE, Saiman Y, Friedman SL. Lifrarstjörnufrumur og lifrartrefjun. Compr Physiol. 2013;3(4):1473–92.
3. Hernandez-Gea V, Friedman SL. Meingerð lifrartrefjunar. Annu séra Pathol. 2011;6:425–56.
4. Sohrabpour AA, Mohamadnejad M, Malekzadeh R. Yfirlitsgrein: afturkræfur skorpulifur. Aliment Pharmacol Ther. 2012;36(9):824–32.
5. Raven PH, Zhang LB, Ventenat O. Kínverska vísindaakademían. 23. útgáfa. Kína: Ritnefnd Flora of China; 2013. bls. 1–16.
6. Kínverska lyfjaskrárnefndin í hollustuhætti Alþýðulýðveldisins Kína. Kínversk lyfjaskrá, hluti 1. Kína: Chemical Industry Publishing House; 2010. bls. 126.
7. Yan GH, Tian JH, Long BW, Li N. RannsóknarframfarirfenýletanóíðglýkósíðfráCistanchetubulosa. Mið South Pharm. 2012;10:692–5.
8. Li J, Huang D, He L. Áhrif Rou Cong Rong (Herba Cistanches Deserticolae) á eiturverkanir á æxlun í músum af völdum glýkósíðs Leigongteng (Radix et Rhizoma Tripterygii). J Tradit Chin Med. 2014;34(3):324–32.
9. Xing Y, Liao J, Tang Y, Zhang P, Tan C, Ni H, o.fl. ACE og blóðflögusamloðunarhemlar frá Tamarix hohenackeri Bunge (gestgjafi fráHerbaCistanches) vaxandi í Xinjiang. Pharmacogn Mag. 2014;10(38):111–7.
10. Jia Y, Guan Q, Jiang Y, Salh B, Guo Y, Tu P, o.fl. Úrbót á ristilbólgu af völdum dextransúlfatnatríums í músum með echinacoside-auðguðu útdrætti afCistanchetubulosa. Phytother Res. 2014;28(1):110–9.
11. Wong HS, Ko KM. Herba Cistanches örvar frumuglútaþíon redox hringrás með hvarfgjörnum súrefnistegundum sem myndast við hvatberaöndun í H9c2 hjartavöðvafrumum. Pharm Biol. 2013;51(1):64–73.
12. Zhang SJ, Liu L, Yu JY. ARP: RP-HPLC aðferð til samtímis ákvörðunar á echinacoside og acteoside í Herbie Cistanches. Chin Pharm J 2004; 39(10): 740-741.
13. Zhu QG, Fang BW, Zhu QN, Wu HS, Fu QL. Rannsóknin á ónæmislifrartrefjunardýralíkani framkallað af albúmíni í sermi nautgripa. Chin J Pathol. 1993;22:121–2.
14. Qin DM, Wen ZP, Nie YR, Yao GM. Áhrif Cichorium glandulosum útdráttar á CCl4-framkallaða lifrartrefjun. Íran Rauði hálfmáninn Med J. 2013;15, e10908.
15. Niu HM, Zeng DQ, Long CL, Peng YH, Wang YH, Luo JF, o.fl. Clerodane diterpenoids og prenylated flavonoids frá Dodonaea viscosa. J Asian Nat Prod Res. 2010;12(1):7–14.
16. Li WW, Song XW, Wang HW, Shen BS, Wang QC. Fylgni NF-KB og meinafræðilegrar stigun lifrartrefjunar hjá sjúklingum með langvinna lifrarbólgu B. Chin J Immunol. 2013;29(3):251–4.
17. Zhang GL, Shi XF, Ran CQ, Xu M, Zhu ZJ. Áhrif heildarsapónína af Panax notoginseng gegn lifrartrefjun hjá rottum. Acta Academiae Medicinae Militaris háskólastig. 2007;29:2212–4.
18. Rossi O, Maggiore L, Necci F, Koberling O, MacLennan CA, o.fl. Samanburður á litamælingum við megindlega amínósýrugreiningu fyrir próteinmagngreiningu á almennum einingum fyrir himnumótefnavaka (GMMA). Mol líftækni. 2015;57(1):84–93.
19. Dang SS, Li YP. Framfarir í skilningi á hlutverki umbreytandi vaxtarþáttar- 1 í meingerð lifrartrefjunar. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi. 2010;18:1631–6.
20. Zhao J, Liu T, Ma L, Yan M, Zhao Y, Gu Z, o.fl. Verndaráhrif akteósíðs á ónæmisfræðilega lifrarskaða af völdum Bacillus Calmette-Guerin auk lípópólýsykru. Planta Med. 2009;75(14):1463–9.
21. Yang FR, Fang BW, Lou JS. Áhrif Fufang Biejia Ruangan pilla á lifrartrefjun in vivo og in vitro. Heimur J Gastroenterol. 2013;19(32):5326–33.

22. Liu P, Fang BW, Liu C. Hlutverk umbreyta vaxtarþáttar 1 og viðtaka hans í ónæmisfræðilegri framkölluðu lifur trefjamyndun hjá rottum og áhrif cordyceps fjölsykru á þær. Chin J Hepatol. 1998;6:232–3.

23. Xu GG, Luo CY, Wu SM, Wang CL. Sambandið milli stigunar lifrarbandvefsmyndun og magn lífefnafræði í sermi. HBPD INT. 2002;1:246–8.Þú o.fl. DARU Journal of Pharmaceutical Sciences (2015) 23:52 Bls 12 af 13

24. Liu J, Wang JY, Lu Y. Serum bandvefsmerki við greiningu á lifrartrefjun. HakaJ Intern Med. 2006;145:475–7.

25. Li CZ, Wan MB, Zeng MD, Mao YM, Fan ZP, Cao AP, o.fl. Forrannsókn á samsetningu óífarandi þátta við greiningu á lifrartrefjun. Chin J Hepatol. 2001;9:261–3.

26. Chen YL, Li ZY. Tengsl TGF- 1, PDGF-BB, CTGF og langvinnrar lifrarbólgu B við bandvefsbólgu. Chin J Diffic Compl Cas. 2010;9:19–20.

27. Sferra R, Vetuschi A, Catitti V, Ammanniti S, Pompili S, Melideo D, et al. Boswellia serrata og Salvia miltiorrhiza útdrættir draga úr DMN-völdum lifrartrefjun í músum með TGF-beta1 niðurstjórnun. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2012;16(11):1484–98.
28. Liu L, Li XM, Chen L, Feng Q, Xu LL, Hu YY, o.fl. Áhrif Gypenosides á TGF- 1/Smad feril í lifrartrefjun af völdum koltetraklóríðs í rottum. Nemandi J Integr Med. 2013;1:1–6.
29. Zhang BJ, Xu D, Guo Y, Ping J, Chen LB, Wang H. Vernd með andoxunarefni berberíns gegn lifrartrefjun í rottum af völdum margra lifrareiturþátta. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2008;35(3):303–9.
30. Tornatore L, Thotakura AK, Bennett J, Moretti M, Franzoso G. Kjarnaþáttur kappa B merkjaleiðin: samþætta umbrot með bólgu. Trends Cell Biol. 2012;22(11):557–66.
31. Luedde T, Schwabe RF. NF-KB í lifrartengdum skaða, bandvefsmyndun og lifrarfrumukrabbameini. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2011;8(2):108–18.
32. Petrasek J, Csak T, Szabo G. Toll-eins viðtaka í lifrarsjúkdómum. Adv Clin Chem. 2013;59:155–201.
33. Wang Y, Cheng M, Zhang B, Nie F, Jiang H. Fæðubótarefni bláberjasafa eykur lifrartjáningu metallothionein og dregur úr lifrartrefjun í rottum. PLoS One. 2013;8, e58659.