tlhTungumál
Saga / Þekking / Innihald

Þekking

Fylgjuþykkni úr svíni eykur NAD-gildi frumna í húðþekjufrumum úr mönnum Ⅱ

Jun 25, 2023

Umræða

Margar rannsóknir hafa sýnt aðlækkun á NADvegna öldrunar er í tengslum viðvirkni hnignunar vefjaogþróun aldurstengdra sjúkdóma og krabbameins11,22. Í húðþekju veldur UV geislun, mikilvægasti ytri þáttur öldrunar húðarinnar, NAD eyðingu auktímaröð öldrun23. Þar sem húðin verður stöðugt fyrir útfjólubláum geislun í daglegu lífi, virðist staðbundin notkun NAD-örvandi efna vera sanngjörn aðferð til að koma í veg fyrir minnkun NAD og vernda húðina gegn UV skemmdum. Reyndar hefur verið sýnt fram á að auka NAD í húðinni kemur í veg fyrir UV-framkallað húðkrabbamein og ónæmisbælingu í músum24. Jacobson o.fl. greint frá því að staðbundnar nikótínsýruafleiður juku NAD innihald húðarinnar og bættu hindrunarvirkni25.

KSL12

Smelltu hér til að fá Cistanche-Bestu öldrunarjurtirnar

Buy Cistanche

Að auki hafa nokkrar klínískar rannsóknir sýnt að staðbundin notkun NAD forvera NAM minnkarmerki um öldrun húðarinnar26,27. Þessar in vivo og klínískar upplýsingar styðja möguleikann á því að hækkuð NAD gildi komi í veg fyrirhúðskemmdir og seinka öldrun. Við höfum einnig áður greint frá því að viðhalda fullnægjandi NAD gildum er nauðsynlegt til að vernda húðþekjufrumurnar úr UV streitu21. Í þessari rannsókn sýndum við fram á að PPE eykur innanfrumu NAD magn í keratínfrumum. Við komumst líka að því að virku innihaldsefni þess hafa LMW sem er minna en 3 kDa, sem er áhrifaríkt fyrir bæði einlaga og 3-víddar húðþekjuræktunarlíkön. Þessar niðurstöður benda til þess að virku innihaldsefnin í PPE gætu frásogast um húð og varpa því ljósi á hugsanlega notkun þess sem staðbundið efni til að auka magn NAD í húð.

cistanche anti-aging herbs

Mynd 3. Virka hluti LMW-PPE inniheldur nokkra NAD forvera. (A) LMW-PPE (1 mg) var aðskilið og fylgst með á margfaldri bylgjulengd (200-600 nm) með því að nota HPLC. (B) Skolefnum var safnaðá 2 mín og prófað fyrir NAD batavirkni í hverju broti. (C) Hluti 3 var greint með LC–MS/FRÖKEN. Öll efnasambönd greindust í jákvæðum jónaham.


image


Tafla 1. NAD forvera innihald persónuhlífa.

Í húðinni dregur NAD skortur úr virkni helstu efnaskiptaferla orku, svo sem glýkólýsu og oxandi fosfórun. Glýkólýsa er ómissandi til að viðhalda jafnvægi milli keratínfrumnafjölgunar og aðgreiningar28. Útsetning útfjólubláa dregur úr NAD stigum og getur því flýtt fyrir þessu ójafnvægi. Hlutfall aðgreiningar og fjölgunar sást vera verulega aukið í sólarljósri húð samanborið við sólverndaðri húð29. Tan o.fl. komst að því að FK866 meðferð flýtti fyrir aðgreiningu og minnkaði efnaskiptavirkni í NHEK, og að NAM sneri þessum FK866-framkölluðu atburðum við með því að endurheimta NAD gildi frumna28.

cistanche anti-aging herbs


Mynd 4. Staðbundið PPE sýnir NAD batavirkni en hefur ekki áhrif á efnaskiptavirkni frumna, í RHE. (A) Skýringarmynd af RHE líkaninu. (B) PPE (2 mg/ml) var borið á hornlagshlið RHE og ræktað í 48 klst. í nærveru eða fjarveru FK866 (5 nM). Heildarmagn NAD vefja var ákvarðað með því að nota NAD plús /NADH greiningarsett. (C) PPE (0, 1, 2 eða 10 mg/ml) eða 1 prósent TX-100 (sem jákvæð viðmiðun) var sett á hornlagshlið RHE og ræktuð í 48 klst. . Efnaskiptavirkni frumna var ákvörðuð með MTT prófi. **bls<0.01, the comparison to the control.

Í þessari rannsókn komumst við að því að PPE endurheimti FK866-framkallaða NAD eyðingu. Þess vegna, að ákvarða hvort PPE geti haldið uppi aðgreiningu og fjölgun í NAD-tæmdum húðþekju getur veitt betriskilning á þvívélbúnaður gegn öldrun.

cistanche anti-aging herbs

Nýlega, Aioi o.fl. sýndi að staðbundin notkun PPE dró verulega úr hrukkum í andliti og bætti vökvun húðarinnar17. Fyrri klíníska prófið okkar sýndi að staðbundin notkun PPE krems leiddi til verulegs bata ábreytur gegn öldrun húðarinnar, eins oghrukkum,vökvun húðarinnar, lafandi, og augnpokar (óbirt gögn). Niðurstöður þessarar rannsóknar geta stuðlað að skilningi á undirliggjandi vélbúnaði þar sem PPE dregur úr hrukkum og bætir vökvun húðarinnar. Fyrri skýrsla sýndi að heildarmagn NAD innan frumu er jákvæð fylgni við tjáningu utanfrumu fylkisþátta, svo sem prókóllagens og elastíns, í fbroblastum í húð manna30. Meðhöndlun vefjafrumna með PPE leiðir til aukinnar framleiðslu á kollageni af tegund I17. Ásamt þessum staðreyndum getur PPE stuðlað að kollagenframleiðslu með því að auka NAD innihald í trefjakímfrumum, sem getur leitt til þess að draga úr hrukkum í húð sem sést í klínískum rannsóknum. Húðvökvi er nátengd hindrunarvirkni húðþekjulagsins. Nokkrar rannsóknir hafa bent til þess að NAD sé ómissandi þáttur til að viðhalda starfsemi húðhindrana. Ming o.fl. sýndi að NAD-háði deasetýlasi SIRT1 stjórnar tjáningu filaggrins, sem gegnir mikilvægu hlutverki sem undanfaraprótein náttúrulegra rakagefandi þátta í heilleika húðhindrana31. Að auki sýndi klínísk rannsókn fram á að staðbundin notkun NAD-örvandi efnis dró verulega úr vatnstapi yfir yfirþekju ásamt aukningu á þykkt hornlags í ljósskemmdri húð25. Þessar skýrslur benda til þess að PPE geti aukið virkni húðhindrana með því að auka frumuþéttni NAD í húðþekju, sem líklega leiði til bættrar vökvunar í húðinni sem kom fram í klínískum rannsóknum.


Á undanförnum árum hefur verið sýnt fram á að NAD örvunartæki eru gagnleg til að auka andoxunar- og bólgueyðandi áhrif. Í músalíkönum með sykursýki og rotþró minnkaði NR gjöf marktækt heilabólgu af völdum fituríkrar mataræðis og kom í veg fyrir oxunarálag af völdum fitufjölsykru í æðaþels, í sömu röð 32,33. Svipað og NR, hefur verið sýnt fram á að NMN viðbót í öldruðum músum snúi við bólgueyðandi mRNA tjáningarsniði í taugaæðaeiningunni og bætir hjarta- og æðastarfsemi með því að draga úr oxunarálagi34,35. Að auki leiddi klínísk rannsókn á öldruðum körlum í ljós að NR til inntöku minnkaði magn bólgusýtókína í blóðrásinni36. Samanlagt styðja þessar in vivo og klínískar rannsóknir þá hugmynd að notkun NAD-örvandi efna hafi andoxunar- og bólgueyðandi áhrif. Stungið hefur verið upp á aukinni SIRT virkni sem einn af trúverðugum aðferðum sem þessir NAD hvatarar hafa bólgueyðandi og andoxunaráhrif. PPE er þekkt fyrir að hafa andoxunarefni og bólgueyðandi áhrif15; Hins vegar hefur tiltölulega takmörkuð vélræn könnun verið gerð hingað til. Þessi rannsókn gefur að minnsta kosti hluta skýringar á áhrifum PPE.


Vitað er að PPE inniheldur mikið af frumuvaxtarhvetjandi próteinum eins og laminin, cýtókín og vaxtarþætti. Nýlegar rannsóknir, þar á meðal okkar, hafa bent til þess að NAD-gildi frumna tengist frumuvexti í húðþekjufrumum21,28. Þess vegna veltum við því fyrir okkur að sum þessara próteina gætu stuðlað að aukningu á NAD innihaldi. Hins vegar, þvert á væntingar okkar, komumst við að því að hluti sem innihélt sameindir með lágmólþunga undir 3 kDa stuðlaði að framleiðslu NAD í glærufrumum. Athyglisvert er að skipting á PPE hlutanum með því að nota HPLC leiddi í ljós að NAD framleiðsla sást aðeins í broti 3. Við komumst líka að því að forverar NAD, eins og NMN, NR og NAM, voru til staðar í þessu broti, sem bendir til þess að þeir gætu útskýrt áhrifin PPE á NAD framleiðslu, að minnsta kosti að hluta. Hins vegar, þar sem hvert innihaldsefni í PPE var greint í mjög lágum styrk, virðist erfitt að útskýra að þessir efnisþættir einir og sér séu ábyrgir fyrir getu PPE til að stuðla að NAD innihaldi í keratínfrumum. Nýlegar skýrslur hafa sýnt að minnkað form þessara NAD forvera, NRH og NMNH, hafa meiri getu til að framleiða NAD en NR og NMN37–40. Þó að frekari greiningar séu nauðsynlegar til að ákvarða hvort PPE inniheldur NRH og NMNH, má rekja NAD-örvandi getu PPE sem sést í þessari rannsókn til margra NAD-aukandi efna, þar á meðal NMN, NR, NMNH, NRH og aðra óþekkta NAD-forvera.

cistanche best anti-aging herbs

Að lokum opna niðurstöður okkar möguleikann á að nota PPE til að bæta ýmsa sjúkdóma og einkenni með því að auka innanfrumumagn NAD, sem er ómissandi þáttur sem tekur þátt í ýmsum lífefnafræðilegum viðbrögðum í frumum.



efni og aðferðir

Undirbúningur persónuhlífa. PE var einangrað frá frosnu svínafylgjunni. Eftir að öll leifar af blóði og naflastreng hafa verið fjarlægð var svínafylgan þvegin, einsleit og sett í þrjár frystingar-þíðingarlotur. Vefjajafnvægið var skilið í skilvindu við 120×g í 1 mín og flotinu var safnað og notað sem PPE. Til að reikna út þurrefnisinnihaldið var PPE þétt og þurrkað við 105 gráður í 5 klst. Eftir kælingu í herbergi

hitastig í þurrkara, þyngdin var mæld með nákvæmni jafnvægi. Innihald þurrefnis í PPE var 10,98 mg/ml.

best anti-aging herbs

Frumuræktun.

NHEK (nýfætt/karlkyns, Termo Fisher Scientifc, Waltham, MA, Bandaríkin) voru ræktuð í EpiLife™ miðli sem innihélt 60 μM kalsíum ásamt vaxtaruppbót fyrir keratínfrumna úr mönnum (bæði frá Termo Fisher Scientifc) við 37 gráður í rakaðri andrúmslofti með 5 prósent CO2 . Skipt var um miðil annan hvern dag þar til ræktunin náði um það bil 50 prósent samruna, eftir það var skipt um hana á hverjum degi. Frumurnar fóru yfir þegar þær náðu 80–90 prósenta samruna. NHEKs voru ekki notuð umfram leið 5.



NAD magngreining og endurheimtargreining.

Magn NAD var mælt með því að nota NAD plús /NADH prófunarsett-WST (Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japan) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Í stuttu máli var 1.0× 105 NHEK sáð í 12-brunnsplötur. Eftir 24 klst. voru frumur meðhöndlaðar með PPE með mismunandi þykknivalkostum (0, 0,25, 0,5 og 1 mg/ml) og ræktaðar í 1–24 klst. í viðurvist eða fjarveru 5 nM FK866 (AdooQ Bioscience, Irvine, CA, Bandaríkjunum). Frumurnar voru ljósaðar með meðfylgjandi NAD plús /NADH útdráttarbuffi og ofsíaðar með Ultracel-10 K miðflótta síubúnaði (Merck, Darmstadt, Þýskalandi). Til að reikna út NADH styrk var helmingur síuvökvanna ræktaður við 60 gráður í 60 mínútur til að brjóta niður NAD plús. Allar síuvökvar voru látnar undirgangast ensímhvarf við 37 gráður í 1 klst. Síðan var gleypni sýnanna mæld við 450 nm með Infinite 200 Pro plötulesara (Tecan, Männedorf, Sviss). NAD plús innihaldið var reiknað út með því að draga NADH innihaldið frá heildar NAD innihaldinu. NAD plús /NADH magn var staðlað í viðkomandi próteinstyrk sem ákvarðaður var með Pierce BCA próteinprófun (Thermo Fisher Scientific).


MTT próf. NHEKs voru sáð í {{0}}brunnsplötu við 0.5× 105 frumur í hverri brunn og ræktaðar í 24 klst. Frumurnar voru síðan meðhöndlaðar með PPE (0,5, 1, 2 og 5 mg/ml) eða 0,2 prósent TX-100 í 24 klst. Frumurnar voru ræktaðar

með 300 μL af 1 mg/ml MTT (Thermo Fisher Scientific) lausn við 37 gráður og 5 prósent CO2 í 3 klst. Eftir þvott þrisvar með PBS var formazan síast inn í NHEKs dregið út með 200 μL af dímetýlsúlfoxíði við stofuhita í 2 klst. Ljósgleypni við 560 nm var ákvarðað með Infnite 200 Pro plötulesara (Tecan).


Ofsíun persónuhlífa. PPE (500 μL) var sett á Ultracel-3K miðflóttaflter tæki (Merck Millipore) og skilið við 16.100×g við 4 gráður í 60 mínútur. Síuvökurnar voru notaðar sem LMW brot af PPE. Til að endurheimta leifarnar á síunni voru síutækin sett á hvolf í nýtt skilvindurör og skilið í skilvindu við 1000×g við 4 gráður í 5 mín. Leifin voru leyst upp með 500 μL af fosfat-bufferðri saltlausn (PBS) og notuð sem HMW brot af PPE.


HPLC skipting. Til að skipta LMW-PPE, notuðum við HPLC hallakerfi útbúið með inndælingartæki fyrir sýni með sprautu, tvöföldum dælum, MD-2010 fjöl-UV skynjara (Jasco, Tókýó, Japan) og
C 18 öfugfasa súla (Inertsil ODS-3, 5 μm, 4,6×250 mm, GL Science, Tokyo, Japan). Fyrir mikla endurgerðanleika var greiningarsúla notuð til að sundra hluta frekar en undirbúningssúlu. Te HPLC leysiefni
voru 0.05 prósent tríflúorediksýra í vatni (A) og HPLC-gráðu asetónítríl (B). Eitt hundrað míkrólítra af LMW-PPE var borið á HPLC súluna og aðskilið með því að nota eftirfarandi halla með straumhraða 1 mL/

mín: Haltu við 100 prósent leysi A frá 0 til 10 mín, síðan línulegur halli frá 0 prósent B á 10 mínútum í 95 prósent B á 30 mínútum. Þeytunum var safnað í sýnaglös á 2 mínútna fresti og þurrkað með miðflóttauppgufunartæki CVE-3100 (EYELA, Tókýó, Japan). Leifarnar voru blandaðar upp með 100 μL af PBS og síaðar í gegnum 0,22 μm himnu áður en NAD endurheimtargreiningin var notuð.


Greiningar á NAD forverum.

NMN, NR og NAM voru greind og magngreind með samsætuþynningu LC–MS/MS. Greiningar voru gerðar með því að nota ACQUITY UPLC H-Class kerfi ásamt TQS-micro þrefaldur fjórpóla massagreiningarmæli (Waters, Milford, MA, USA) með rafúðajónun starfrækt í jákvæðri jónaham. Capcell Pak ADME HR súla (2 μm, 2,1×100 mm, Osaka Soda, Osaka, Japan) var notuð til að aðskilja hvert sýni. Faranlegir fasar A–B voru vatn–metanól (innihélt {{10}},1 prósent maurasýru og 10 mM ammóníumformat). Hallaástandið var sem hér segir: 0–0,5 mín (99 prósent A), 0,5–3 mínútur (99–60 prósent A), 3–5 mínútur (60–2 prósent A) og 5–7 mínútur (2 prósent A). Rennslishraði var 0,2 ml/mín. Háræðsspennan var 0,75 kV, uppsprettahitastigið var 150 gráður og upplausnarhitastigið var 500 gráður. Keilugasflæðið var 50 l/klst og losunargasflæðið 1100 l/klst. Til að magngreina hvern NAD forvera var NAM-13C6 bætt við sýnin í styrkleikanum 78 nM sem innri staðall. Fylgst var með jónunum með því að nota margfeldisviðbragðseftirlit (MRM) með eftirfarandi umbreytingum: m/z 335→123 fyrir NMN, m/z 255→123 fyrir NR, m/z 123→80 fyrir NAM og m/z 129→85 fyrir NAM-13C6. NMN var keypt af Oriental Yeast (Tókýó, Japan). NR og NAM-13C6 voru fengin frá Merck (Darmstadt, Þýskalandi). NAM var keypt frá Wako Pure Chemical Industries (Osaka, Japan).



RHE. In vitro RHE líkanið EpiDerm™ (EPI-200) var keypt frá MatTek (Ashland, MA, Bandaríkjunum) og ræktað í EPI-100-ASY miðli (MatTek) við 37 gráður og 5 prósent CO2. Eitt hundrað míkrólítra af PPE (1, 2 og 10 mg/ml) eða 1 prósent TX-100 var borið á stratum corneum hlið RHE. RHE var ræktað í 48 klst. í EPI-100-ASY miðli í nærveru eða fjarveru FK866 (5 nM). Eftir ræktun var RHE þvegin þrisvar sinnum með PBS. Fyrir NAD endurheimtarprófið var heildarmagn NAD í RHE magnmælt með því að nota NAD plús /NADH prófunarsettið-WST. Fyrir greiningu á efnaskiptavirkni frumna var RHE flutt yfir á 24-brunnplötu og ræktuð með 300 μL af 1 mg/ml MTT (Thermo Fisher Scientific) lausn við 37 gráður og 5 prósent CO2 í 3 klst. Eftir þvott þrisvar með PBS, var formazan síast inn í RHE dregið út með 2 ml af dímetýlsúlfoxíði við stofuhita í 2 klst. Ljósgleypni við 560 nm var ákvarðað með Infnite 200 Pro plötulesara (Tecan). Frásogin með 1 prósent TX-100 meðhöndluðum RHE var notuð sem jákvæða eftirlitið fyrir efnaskiptavirkni frumunnar.

Tölfræðigreining. Gögn eru sett fram sem meðaltal±staðalvilla meðaltals að minnsta kosti þriggja óháðra tilrauna. Allar tölfræðilegar greiningar voru gerðar með EZR hugbúnaðarútgáfu 1.55 (Saitama Medical

Center, Jichi Medical University, Saitama, Japan). Áður en gagnasamanburður var gerður var eðlileg dreifing staðfest með Shapiro-Wilk prófinu. Einsleitni frávika var metin með F prófinu (tveir hópar) og
Bartlett próf (margir hópar). Munurinn á milli margra hópa var ákvarðaður með því að nota einstefnu ANOVA og síðan Tukey's post hoc próf. T-próf ​​nemenda var notað til að prófa marktækan mun á þessu tvennu
hópa. Tölfræðileg marktækni var sett á bls<0.05 and p<0.01. Asterisks and daggers indicate statistical significance compared to the control (*p<0.05, **p<0.01) and indicated (†p<0.05 and ††p<0.01) groups, respectively.
Siðferðilegt samþykki. Á ekki við. Svínafylgjur sem voru teknar og frystar strax innan 3 klst. eftir að fóstrið fæddist sjálfkrafa voru keyptar frá býli í Hokkaido, Japan, með samþykki eigandans. Ekkert lifandi dýr hefur tekið þátt í þessari rannsókn


Heimildir

1. Imai, Si. & Guarente, L. NAD plús og sirtuins í öldrun og sjúkdómum. Trends Cell Biol. 24, 464–471 (2014).
2. Chaleckis, R., Murakami, I., Takada, J., Kondoh, H. & Yanagida, M. Einstaklingsbreytileiki í blóði manna Umbrotsefni auðkenna aldurstengdan mun. Frv. Natl. Acad. Sci. Bandaríkin 113, 4252–4259 (2016).
3. Massudi, H. o.fl. Aldurstengdar breytingar á oxunarálagi og NAD auk umbrota í vefjum manna. PLoS ONE 7, e42357 (2012).
4. Camacho-Pereira, J. o.fl. CD38 ræður aldurstengdri hnignun NAD og truflun á starfsemi hvatbera í gegnum SIRT3-háð kerfi. Cell Metab. 23, 1127–1139 (2016).
5. Braidy, N. o.fl. Aldurstengdar breytingar á NAD auk oxunarálags umbrota og sirt1 virkni í Wistar rottum. PLoS ONE 6, e19194 (2011).
6. Guest, J., Grant, R., Mori, TA & Croft, KD Breytingar á oxunarskemmdum, bólgu og [NAD(H)] með aldri í heila- og mænuvökva. PLoS ONE 9, e85335 (2014).
7. Rajman, L., Chwalek, K. & Sinclair, DA Meðferðarmöguleikar NAD-örvandi sameinda: Te in vivo sönnunargögn. Cell Metab. 27, 529–547 (2018).
8. Yaku, K., Okabe, K. & Nakagawa, T. NAD umbrot: Áhrif á öldrun og langlífi. Öldrun Res. 47, 1–17 (2018).
9. Revollo, JR, Grimm, AA & Imai, SI Te NAD lífmyndunarferill sem miðlað er af nikótínamíð fosfóríbósýltransferasa stjórnar Sir2 virkni í spendýrafrumum. J. Biol. Chem. 279, 50754–50763 (2004).
10. Yoshino, J., Baur, JA & Imai, SI NAD plús milliefni: Líffræði og meðferðarmöguleikar NMN og NR. Cell Metab. 27.513–528 (2018).
11. Garrido, A. & Djouder, N. NAD auk skorts á aldurstengdum sjúkdómum og krabbameini. Trends Cancer 3, 593–610 (2017).
12. Pogozhykh, O., Prokopyuk, V., Figueiredo, C. & Pogozhykh, D. Fylgja og fylgjuafleiður í endurnýjunarmeðferðum: Tilraunarannsóknir, saga og horfur. Stofnfrumur Int. 2018, 4837930 (2018).
13. Kong, MH o.fl. Áhrif fylgjuútdráttar manna á tíðahvörf, þreytu og áhættuþætti hjarta- og æðasjúkdóma hjá miðaldra kóreskum konum. Tíðahvörf 15, 296–303 (2008).
14. Yoshikawa, C. Áhrif svínafylgjuþykkni á kollagenframleiðslu í trefjafrumum í húð manna in vitro. Gynecol. Obstet. 03, 0–4 (2013).
15. Heo, JH, Heo, Y., Lee, HJ, Kim, M. & Shin, HY Staðbundin bólgueyðandi og andoxunaráhrif svínafylgjuútdráttar á 2,4-dinitróklórbensen-völdum snertihúðbólgu. BMC viðbót. Varamaður. Med. 18, 331 (2018).
16. Tiwary, SK o.fl. Áhrif fylgjuþykkni hlaups og krems á sár sem ekki gróa. J. Wound Care 15, 325–328 (2006).
17. Aioi, A. o.fl. Fylgjuþykkni úr svíni minnkaði hrukkumyndun með því að auka vökvun húðþekju. J. Snyrtivörur. Dermatol. Sci.

Appl. 11, 101–109 (2021).

Biðja um meira:


Netfang:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Sími: plús 86 15292862950













Þér gæti einnig líkað