Hvítandi snyrtivörur hafa umfangsmikinn markaðsstærð og víðtækar þróunarhorfur á meðan hvítunarvörur hefðbundinnar kínverskrar læknisfræði hafa alltaf verið rannsóknarstaður. Í þessari rannsókn var hvítandi virka útdrátturinn af Platycodon grandiflorum (PGE) einangraður og hreinsaður í fyrsta skipti og hvítunarvirkni og efnasamsetning PGE var skýrð. Alls voru 45 efnisþættir auðkenndir með hágæða vökvaskiljun-massagreiningu (HPLC-MS) greiningu, þar á meðal arbútín, syringín, klórógensýru, glýkósíð E, platycodin D3, baicalin, platycodin D, luteolin. Hreinsunarhlutfall PGE í átt að DPPH og ABTS sindurefnum var 98,03 prósent og 84,30 prósent, í sömu röð. Hömlun PGE á tyrosinasa var allt að 97,71 prósent. PGE hafði marktæk bólgueyðandi áhrif á RAW264.7 átfrumna örvaða af lípópólýsykru (LPS) og hafði marktæk hamlandi áhrif á týrósínasa og melanínmyndun B16F10 frumna örvuð af a-MSH. Niðurstöðurnar sýndu að PGE náði samverkandi hvítandi áhrifum með því að hindra virkjun sindurefna súrefnis á týrósínasa, andoxun, bólgueyðandi áhrif, ensímvirkni og melanínmyndun. Sem hvítunarefni sem unnið er úr náttúrulegum plöntum hefur PGE framúrskarandi möguleika í rannsóknum og þróun plöntuhvítandi snyrtivara, sem leggur grunn að frekari þróun og nýtingu Platycodon grandiflorum auðlinda og gefur fræðilegan grunn fyrir þróun grænna og lífrænna hvítandi snyrtivara.
Samkvæmt viðeigandi rannsóknum,cistancheer algeng jurt sem er þekkt sem "kraftaverkajurtin sem lengir lífið". Aðalþáttur þess erCistanósíð, sem hefur ýmis áhrif eins ogandoxunarefni, abólgueyðandi, og efling ónæmisvirkni. Meginreglan milli cistanche oghúðhvíttunliggur í andoxunaráhrifum cistanche glýkósíða. Melanín í húð manna er framleitt með oxun týrósíns sem hvatar aftýrósínasa, og oxunarviðbrögðin krefjast þátttöku súrefnis, þannig að súrefnislausu stakeindir í líkamanum verða mikilvægur þáttur sem hefur áhrif á melanínframleiðslu. Cistanche inniheldur cistanoside, sem er andoxunarefni og getur dregið úr myndun sindurefna í líkamanum, þannig aðhamlar framleiðslu melaníns.
Fyrir frekari upplýsingar:
david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
1. Inngangur
Í hinum alþjóðlega fegurðariðnaði eru til fjölmargar tegundir af hvítandi hagnýtum snyrtivörum og búist er við að markaðshlutdeildin aukist enn frekar. Til að mæta aukinni eftirspurn eftir húðhvítunarefnum í hvítandi snyrtivörum og ná húðhvítandi áhrifum, hefur snyrtivöruiðnaðurinn kynnt nokkur efnaaukefni, þar á meðal hýdrókínón, cystein, glútaþíon, A-vítamín og sykurstera. Þessi efnasambönd hafa góð hvítandi áhrif; þó, sum þeirra hafa eitraðar aukaverkanir; td veldur "rhododendron" hvítum blettum í húð notandans,1 "Hydroquinone" hefur frumueyðandi og stökkbreytandi eiginleika,2 "Glucocorticoid" getur valdið hormónaháðri húðbólgu.3 Sem stendur er bætt við þessum innihaldsefnum (rhododendron, hydroquinone, sykurstera) ) að snyrtivörum er ekki leyfilegt. Áhrif vörunnar eru ekki eini staðallinn sem neytandinn hefur í huga þegar hann kaupir snyrtivörur. Undanfarin ár hefur stöðugt verið að springa af öryggisvandamálum snyrtivara í leit að heilsu. Vísindamenn hafa komist að því að hvítandi virk efni unnin úr náttúrulegum jurtum eru minna eitruð og hafa mun færri aukaverkanir. Sífellt fleiri neytendur meta öryggi vöru. Ennfremur hafa grænar, umhverfisvænar og lífrænar vörur orðið vinsælli, sem endurspeglast í kynningu á mörgum vörumerkjum í beinni sölu. Þess vegna hafa rannsóknir og uppgötvun á öruggum og heilbrigðum hvítandi húðumhirðuefnum orðið stefna í nútímaþróun. Að beita kínverskum jurtaseyðum úr náttúrulegum plöntum sem hráefni í snyrtivörur hefur smám saman orðið að heitum vettvangi fyrir rannsóknir í þróun hvítunar- og húðvörur.4
Platycodon grandiflorum, hefðbundið kínverskt lækningaefni, hefur verið notað í Kína í yfir 2000 ár. Elstu metin má rekja til „Shennong jurtaklassíkarinnar“.5 Hefðbundin lyfjafræðileg virkni Platycodon grandiose er að draga úr hósta og slípun. Platycodon grandiflorum inniheldur sapónín, leiðir, fenólsýrur, steról og fjölsykrur.6–8 Fjölbreytileiki og fjölbreytileiki efnaþátta ákvarðar fjölbreytileika líffræðilegrar virkni þeirra.9 Nútíma lyfjafræðilegar rannsóknir hafa sýnt að Platycodon grandiflorum hefur bólgueyðandi, bakteríudrepandi, -æxli, andoxun, ónæmisstjórnun og önnur lyfjafræðileg áhrif.10,11 Í Kóreu og norðurhluta Kína er Platycodon grandiflorum mikið notað sem hráefni í matvæli og snyrtivörur. Snyrtivörur framleiddar úr Platycodon grandiflorumas hráefninu, svo sem hvítandi kjarna, hvítandi mjólk og hvítandi sturtugel, njóta hylli neytenda í Kóreu, Japan og öðrum Asíulöndum.12 Útdrátturinn af Platycodon grandiflorum er einnig skráður í alþjóðlegu snyrtivöruhráefninu efnisskrá.13 Hins vegar eru hvítandi virku innihaldsefnin og verkunarháttur Platycodon grandiflorum enn óljós og fáar frumrannsóknir hafa verið gerðar á hvítunarvirkni þess. Gong XJ o.fl. bar saman týrósínasahemjandi virkni ýmissa kínverskra jurta og komst að því að Platycodon grandiflorum hafði sterkustu hamlandi áhrif.14 Á þessum grundvelli, Xu BJ o.fl. metið hvítunaráhrif virka innihaldsefnisins í Platycodon grandiflorum með tyrosinasa-hömlunartilraun og komst að því að virki innihaldsefni Platycodon grandiflorum var líklega heildar saponíninnihaldið.15 Í þessari rannsókn, til að skýra frekar virku hvítunarefnin og hvítunarkerfi Platycodon grandiflorums. , notuðum við hvítandi virka útdrættinn af Platycodon grandiflorum sem fengin var með lyfjafræðilegu mælingaraðferðinni sem rannsóknarhlut. Með því að rannsaka virkni og efnisþætti skýrum við samsetningu hvítandi virku efnanna í Platycodon grandiflorum og könnum hvítunarkerfi hvítandi virku efnanna í Platycodon grandiflorum. Rannsóknin mun gefa fræðilegan grunn fyrir betri nýtingu Platycodon grandiflorum sem hráefnis til hvítunar snyrtivara.
Húðhvítandi áhrif fela í sér minnkun á melanínframleiðslu í húðinni. Melanín er aðal litarefnið til að stjórna litum húðar og hárs. Það er hásameindaefnasamband sem er víða dreift í dýrum og plöntum. Þegar of mikið melanín myndast mun melanín safnast fyrir í húðinni og mynda bletti og freknur sem geta leitt til alvarlegs húðkrabbameins.16 Því er nauðsynlegt að hindra framleiðslu á melaníni til að koma í veg fyrir of mikla húðlitun. Melanocytes eru staðsettar í húðþekjugrunnlaginu og stjórnast af tyrosinasa. Hvarfgjarnar súrefnistegundir virkja týrósínasavirkni og týrósínasi hvatar 3,4-díhýdroxýfenýlalanín (DOPA) til að framleiða DOPA kínón og hvetur síðan DOPA kínón til að framleiða melanín með sjálfoxun og ensímhvarfi. Því getur hömlun á týrósínasa og sortufrumum hamlað framleiðslu melaníns verulega.17 Þar að auki geta góð andoxunar- og bólgueyðandi áhrif dregið úr skaða af völdum oxunar og bólgu í húðinni, seinkað öldrun húðarinnar og haldið húðinni teygjanlegri og sléttri og þar með hafa samverkandi hvítandi áhrif.18,19
Þess vegna, til að finna náttúrulegt virkt þykkni úr Platycodon grandiflorum með hvítandi, andoxunar- og bólgueyðandi eiginleika, beindi þessi rannsókn aðallega að áhrifum Platycodon grandiflorum þykkni (PGE) á tyrosinasa hömlun, innanfrumu tyrosinasa hömlun og hamlandi virkni frumna melanín kynslóð. Rannsóknin miðar að því að greina hamlandi áhrif PGE á týrósínasavirkni og melanínmyndun og meta ítarlega hvítunar- og húðumhirðuáhrif PGE og andoxunar- og bólgueyðandi áhrif þess. Efnasamsetning PGE var auðkennd og greind með hágæða vökvaskiljun (HPLC) og vökvaskiljun (LC)/massagreiningu (MS), og sérstakt hvítandi virka efni PGE var skýrt. Það er mikilvægt að þróa nýjar Platycodon grandiflorum vörur og stuðla að þróun Platycodon grandiflorum iðnaðarins.
2. Efniviður og aðferðir
2.1. Efni
Maurasýra, metanól, 2,2-dífenýl-1-píkrýlhýdrasýl (DPPH), 2,20-kasínó-bis (3-etýlbensóþíasólín-6-súlfónsýra) (ABTS) ), asetýlasetón, NaOH, K2S2O8 og Ehrlich hvarfefni voru fengin frá Beijing Chemical Plant. Platycodin D, arbutin, platycodin D3, glycoside E, syringin, chlorogenic acid, baicalin og luteolin viðmiðunarvörur voru fengnar frá China Institute of Pharmaceutical Biological Products Identification. Litskiljanlega hreina asetónítrílið og metanólið var fengið frá JT Baker Co., Bandaríkjunum. Týrósínasi, L-týrósín, natríumhýalúrónat og hýalúrónat voru fengin frá Beijing Solebo Technology Co., Ltd. Upprunalegu 264,7 frumurnar og B16F10 frumurnar voru keyptar frá frumuauðlindamiðstöð Shanghai Institute of Biological Sciences, Kína, og geymdar í rannsóknarstofu læknaháskóla sem tengist Changchun háskólanum í kínverskri læknisfræði. Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM), fóstursermi nautgripa og sýklalyf (penicillín og streptómýsín) voru fengin frá Gibco USA. Triton X-100, a-MSH, ELISA kit (NO, IL-6, TNF-a), og frumutalningarsett-8 (CCK-8) sett voru fengin frá Changchun Baijin Biotechnology Co., Ltd. Hreint vatn var fengið frá Wahaha Food Co. Ltd.
2.2. Undirbúningur Platycodon grandiflorum whitening active extract
Platycodon grandiflorum var útvegað af Hebei Renxin Pharmaceutical Co. Ltd. Platycodon grandiflorum var mulið í duft, hitað og endurnýtt með 95 prósent etanóllausn þrisvar sinnum, 1 klst. í hvert skipti. Síðan var afurðin síuð, og síuvökvinn var endurheimtur og sameinaður síuvökvanum sem fékkst úr þremur útdrætti. Síuvökvinn var þurrkaður og blandaður með eimuðu vatni til upplausnar og n-bútanól (1:1 rúmmál) mettað með vatni var dregið út fimm sinnum. n-bútanóllagið var sameinað, n-bútanóllausnin var fjarlægð og PGE fékkst. Útdráttarhlutfall PGE úr Platycodon grandiflorum var 8,9 prósent.
2.3. Frumuræktun
B16F10 sortuæxlisfrumur úr músum og RAW264.7 frumur voru ræktaðar í DMEM ásamt 10 prósenta nautgripafóstursermi, 100 U mL-1 penicillíni og 100 g ml-1 streptomycini í rakaðri lofti með 5 prósent CO2 við 37 gráður C. Þegar frumurnar voru ræktaðar í samrunaástand, þær voru meltar með trypsíni og frumurnar fóru í gegnum á tveggja daga fresti. Allar tilraunir voru gerðar þrisvar sinnum og endurteknar þrisvar sinnum til að tryggja endurtekningarhæfni.
2.4. Frumulífvænleikapróf
Til að meta öryggi PGE voru áhrif PGE á B16F10 og RAW264.7 frumur ákvörðuð með CCK-8 aðferðinni samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda.20 Fyrst voru B16F10 frumur og RAW264.7 frumur ræktaðar í {{ 10}}brunnsplötur í styrk 5 × 103 frumur í hverri brunn og 1 × 10⒋ frumur í brunn í 24 klst og síðan meðhöndlaðir með PGE eða DMEM í mismunandi styrk í 72 klst. Eftir meðferð var 10 ml CCK-8 hvarfefni bætt við hvern brunn og fruman var ræktuð frekar í 2 klst. Gleypið við 450 nm var mælt með því að nota örplötulesara.
2.5. Andoxunarvirkni
Andoxunarvirkni PGE var ákvörðuð með DPPH og ABTS hreinsunarprófum fyrir sindurefna og askorbínsýra var notuð sem jákvæð viðmiðun.21,22 Niðurstöðurnar voru gefnar upp sem prósentuhlutfall hömlunar.
Ennfremur PGE lausn, askorbínsýra og platýkódín D með mismunandi styrkleika ({{0}}.2, 0.4, 0.6, 0.8 , 1.0 og 1,2 mg ml—1) var bætt í stíflað tilraunaglas. Síðan var 2 ml DPPH lausn bætt í hvert tilraunaglas; rörunum var hringið í hringiðu, blöndunni var blandað saman og henni leyft að hvarfast í myrku hólfi í 30 mín., og gleypni A1 við 520 nm var ákvörðuð. Síðan var 2 ml metanól notað sem viðmiðunarhópur í stað DPPH lausnarinnar til að ákvarða gleypnigildið A2. Gleypigildið A0 var ákvarðað með því að skipta sýnislausninni út fyrir 2 ml metanóls sem núllviðmiðunarhópur. Stillti gleypnigildið í 0 með metanóli. DPPH róttæka hreinsunarhraði var reiknaður út samkvæmt eftirfarandi formúlu:
Til að undirbúa ABTS auk $ móðurvíns var 35,2 mg ABTS og 6,139 mg af kalíumpersúlfati blandað saman í stöðugt rúmmál 10 ml. Vökvinn var þynntur með metanóli eftir 12–16 klst. hvarf við stofuhita þar til frásogsgildi lausnarinnar við 734 nm var um það bil 7.{{10}} × 0.2. Síðan, 30 mL PGE lausn, askorbínsýra og platýkódín D með mismunandi styrkleika (0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2 mg mL-1) var blandað saman við 220 ml ABTS plús c lausn í 96-brunn ensímmerktri plötu og gleypni við 734 nm var mæld eftir hvarf í myrkri í 6 mín.
þar sem A0 er gleypni núllsýnisins og AS er gleypni sýnisins sem á að mæla.
2.6. Bólgueyðandi virkni RAW264.7 átfrumna af völdum fitufjölsykru
RAW264.7 átfrumum í 1 ml miðli var sáð í 24-brunnsplötu, með 1×104 frumum í hverri brunn, og ræktaðir yfir nótt þannig að frumurnar festust við vegginn. Frumurnar voru ræktaðar í 24 klst eftir útsetningu fyrir lípópólýsykru (LPS) og PGE útdrætti í mismunandi styrkleika (10, 50, 100 mg mL-1). Styrkur NO, IL-6 og TNF-a í frumufrumvökvanum var ákvarðaður með því að nota ELISA sett, eins og framleiðandinn mælti fyrir.23
2.7. Tyrosinasa virkni
Með því að nota aðferð sem greint er frá í bókmenntum, með fosfatbuffi (25 mmól, pH=6,8) sem leysi, L-týrósín hvarfefnislausn (0,5 mg ml-1), týrósínensím lausn (50 U mL-1), og aðrar lausnir í 96-brunnsplötum með 240 mL heildarhvarfkerfi, ásamt 120 mL hvarfefnislausn, 40 mL fosfatjafnalausn, 40 mL sýnislausn og blandara. Síðan var 40 ml af týrósínensímlausn bætt við ofangreint kerfi. Viðbrögð við stöðugum hita í 37 gráðu C vatnsbaði í 20 mínútur komu fram og gleypni var mæld við 475 nm.24
þar sem A er gleypni sýnislausnarinnar sem skipt er út fyrir jafngilda jafnalausn, B er gleypni sýnislausnarinnar, týrósínasalausn er skipt út fyrir jafngilda jafnalausn, C er gleypni sýnislausnarinnar og D er gleypni sýnislausnarinnar jafngildi jafnalausnarinnar í stað týrósínasalausnarinnar (tafla 1).
2.8. Hindrandi virkni melanínmyndunar
B16F10 sortuæxlisfrumur í 1 ml miðli voru sáð í 24-brunn ræktunarplötu, með 1×104 frumum í hverri brunn, og ræktaðar yfir nótt til að frumurnar festust við vegginn. Frumurnar voru ræktaðar með a-melanocyte-örvandi hormóni (100 nM a-MSH) í 48 klst og ræktaðar með mismunandi PGE og arbutin styrk (100, 150, 200 mg mL-1) í 24, 48 og 72 klst.
Eftir inngjafartímann voru frumurnar þvegnar tvisvar með PBS (pH=7.2) og blandað saman við PBS 200 ml sem innihélt 1 prósent Triton X-100. Frumurnar voru leystar með frystingu og þíðingu. Eftir að kerfið var skilið í skilvindu við 12 000 snúninga á mínútu í 30 mínútur, var flotið fjarlægt og 1 M NaOH sem innihélt 10 prósent dímetýlsúlfoxíð (300 mL) var bætt við frumukyrnin; hvarfaði síðan við 80 gráður í 2 klst til að greina melanín í frumunum.25 Gleypið við 450 nm var ákvarðað.
2.9. Týrósínasavirkni frumna
B16F10 sortuæxlisfrumur í 1 ml miðli voru sáð í 24-brunn ræktunarplötu, með 1 × 104 frumum í hverri brunn, og ræktaðar yfir nótt til að frumurnar festust við vegginn. Frumurnar voru ræktaðar með a-melanocyte-örvandi hormóni (100 nM a-MSH) í 48 klst og ræktaðar með mismunandi styrk (100, 150, 200 mg mL-1) af PGE og arbutíni í 24, 48 og 72 klst. Eftir inngjafartímann voru frumurnar þvegnar tvisvar með PBS (pH =7.2) og þeim blandað saman við PBS 200 ml sem innihélt 1 prósent Triton X-100. Frumurnar voru leystar með frystingu og þíðingu. Eftir skilvindu við 12 000 snúninga á mínútu í 30 mínútur, var flotinu sett í 96-brunnsplötu, 100 ml í hverri brunn, og blandað saman við 100 ml 0,1 prósenta L-DOPA lausn. Eftir ræktun við 37 gráður í 2 klst. var gleypni við 475 nm strax ákvörðuð.26
2.10. Efnasamsetning greining
2.10.1. HPLC greining.PGE sýnislausnin var greind með Shimadzu LC{{0}}AHT HPLC kerfi með ELSD6000 uppgufunarljósdreifingarskynjara (Alltech CHROM).27 Litskiljunin var gerð á Sepax Bio -C18 súla (4,6×250 mm, 5 mm, frá Sepax Technologies, Delaware, Bandaríkjunum). Farfasakerfið var samsett úr hreyfanlegum fasa A (asetónítríl) og hreyfanlegum fasa B (0,1 prósent maurasýruvatn). Leysistiglinn er sýndur í töflu 2. Skiljunaraðstæður voru sem hér segir: flæðihraði var 0,8 mL mín-1, upphafshiti uppgufunarljósdreifingarskynjunar (ELSD) var 105×C, gasflæðishraðinn var 2,8 L mín-1. 1, og inndælingarmagnið var 20 L. Tuttugu lotur af PGE voru útbúnar.
2.10.2. Greining á PGE efnasamsetningu með HPLC ásamt massagreiningu.Q-Orbitrap háupplausnar LC/MS tæknin var notuð ásamt Q Exactive háupplausnarmassarófsmælinum á Ultimate 3000 RS litskiljunarkerfinu til að greina og bera kennsl á efnasamsetning PGE sýnislausnarinnar í gegnum MS.28 MS skilyrðin eru sem hér segir: jóngjafi: rafúðajónunargjafi; skannastilling: jákvæðar og neikvæðar jónaskönnunarrofi; greiningaraðferð: full massi/dd-MS2; upplausn: 70 000 (fullur massi), 17 500 (dd-MS2); skönnunarsvið: 150.0–2000,0 m/z; rafúðaspenna: 3,8 kV (jákvæð); háræðahitastig: 300 gráður C; árekstra gas: hár-hreinleika argon (hreinleiki $ 99.999 prósent); slíðurgas: köfnunarefni (hreinleiki $ 99.999 prósent, 40 arb); hjálpargas: köfnunarefni (hreinleiki $ 99,999 prósent, 350 gráður); gagnaöflunartími: 30,0 mín. Litskiljunarskilyrði: litmyndasúla: RP-C18 (150× 2,1 mm, 1,8 mm, Welch); Rennslishraði: 0,30 ml mín—1; vatnsfasi: 0,1 prósent maurasýru vatnslausn; lífrænn fasi: 0,1 prósent maurasýru asetónítríl; nálarþvottavökvi: metanól; súluhitastig: 35 gráður C; inndælingarrúmmál: 5,00 ml. Leysistiglinn er sýndur í töflu 3.
2.11. Gagnatölfræði
Allar tilraunir voru gerðar að minnsta kosti þrisvar sinnum. Gögnin voru skráð sem meðalgildi ± staðalfrávik. Tölfræðilegar greiningar voru gerðar með því að nota SPSS 21.0 og Origin 9.0. Fyrir margvíslegan samanburð voru gögn látin fara í einstefnu ANOVA (Post hoc Tyrklands) og parað t-próf til að ákvarða tölfræðilega marktekt. p < 0.05 var talinn tölfræðilega marktækur munur á milli hópanna.
3. Úrslit
3.1. Áhrif PGE á lífvænleika B16F10 frumna og 264,7 frumna
Áhrif PGE á B16F10 sortuæxlisfrumur og RAW264.7 átfrumur greindust með CCK-8 aðferðinni. Frumurnar voru meðhöndlaðar með mismunandi PGE styrk í 24 klst og síðan greindar með CCK-8 aðferð. Niðurstöðurnar eru gefnar upp sem hlutfall af lifun miðað við samanburðarhópinn. Undir PGE styrkleika 10–100 mg ml-1 (lífvænleiki frumna: 99,42 ±1,951–107,17 ±2,601 prósent), sýndi PGE engin frumueiturhrif á 264,7 frumurnar (mynd 1). Hins vegar varð marktæk minnkun á frumuvirkni við PGE styrkinn 200 mg ml-1 (lífvænleiki frumna: 74,91 ± 1,574 prósent). Þess vegna er skammtabil á bilinu 10–100 mg mL–1 (Útdráttarhraði PGE í Platycodon Grandiflorum var 8,9 prósent. Styrkur 10–100 mg mL–1 af PGE jafngildir 0,11–1,12 mg mL–1 af Platycodon Grandiflorum. Að bæta við 1 ml af miðli sem inniheldur lyf í hverri brunn jafngildir því að bæta við 0,11–0,12 mg af Platycodon Grandiflorum.) ætti að velja. Hér voru 10 mg ml-1, 50 mg ml-1 og 100 mg ml-1 (styrkur jurtalyfjaefna: 0,11 mg ml-1, 0,56 mg ml-1, 1,12 mg ml-1, í sömu röð) valdir sem lág, miðlungs og hár styrkur.
Virkni B16F10 frumna var aðeins frábrugðin virkni 264,7 frumna. Þegar styrkur PGE var 10–200 mg mL-1 (lífvænleiki frumna: 99,03 ±1,965 prósent –91,48 ±1,382 prósent), var virkni B16F10 frumna ekki marktækt frábrugðin virkni viðmiðunarhópsins. Hins vegar, þegar styrkurinn var 250 mg ml-1 (lífvænleiki frumna: 85,69 ± 2,284 prósent ), byrjaði virkni B16F10 frumna að minnka og frumuvirkni undir PGE styrk 1000 mg ml-1 (lífvænleiki frumna: 70,75 Þess vegna, skammtabilið 10–200 m3,337 prósent ) var lægst. g mL-1 (Útdráttarhraði PGE í Platycodon Grandiflorum var 8,9 prósent. Styrkur 100-200 mg mL-1 af PGE jafngildir 1,12-2,24 mg mL-1 af Platycodon Grandiflorum. Að bæta við 1 ml af lyfi sem inniheldur lyf miðill í hverja brunn jafngildir því að bæta við 1,12– 2,24 mg af Platycodon Grandiflorum.) ætti að velja. Hér eru 100 mg ml-1, 150 mg ml-1 og 200 mg ml-1 (styrkur jurtalyfjaefna: 1,12 mg ml-1, 1,68 mg ml-1 2,24 mg ml-1, í sömu röð ) voru valdir sem lágur, miðlungs og hár styrkur, í sömu röð (mynd 2).
3.2. Andoxunargeta PGE
DPPH og ABTS hreinsiefnishreinsipróf voru notuð til að mæla andoxunarvirkni PGE. Hreinsunarvirkni PGE gagnvart DPPH og ABTS róttækum var ákvörðuð með mismunandi PGE styrk (0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 mg mL–1). Platycodin D og askorbínsýra voru notuð sem jákvæð viðmið. Eins og sýnt er á mynd 3, jókst hreinsunarvirkni PGE gagnvart DPPH og ABTS sindurefnum á skammtaháðan hátt, svipað og niðurstöður jákvæða samanburðarhópsins. Þegar styrkur PGE var 6,25 mg mL–1 var hreinsivirknin gagnvart DPPH stakeindinni 98.03 ±0.60 prósent, næstum því sú sama og hreinsivirkni askorbínsýru. Þar að auki sýndi PGE einnig sterka hreinsunarvirkni gagnvart ABTS róttæku (84,30 ± 0,53 prósent), sem var hærra en platycodin D samanburðarhópsins.
3.3. PGE minnkun áhrif á LPS-örvuð bólgusvörun RAW264.7 átfrumna
Samkvæmt niðurstöðum um áhrif PGE á virkni RAW264.7 átfrumna í kafla 3.1, var PGE styrkur 10, 50 og 100 mg mL-1 valinn sem lítill, miðlungs og stór skammtur, í sömu röð, til að prófa áhrifin af PGE á LPS-örvaðri RAW264.7 átfrumnabólgu. Eins og sýnt er á mynd 4, minnkaði PGE skammtaháð NO framleiðslu í LPS-örvuðum RAW264.7 átfrumum og minnkaði skammtaháð magn IL-6 og TNF-a bólguþátta.
3.4. Áhrif PGE á týrósínasavirkni sveppa, melaníninnihald í B16F10 sortufrumum og virkni týrósínasa innan frumu
Eins og sýnt er á mynd 5, jókst týrósínasa hindrandi virkni PGE marktækt með aukningu á styrk útdráttar. Því hærri sem PGE styrkurinn er, því sterkari er hamlandi virkni týrósínasa. Týrósínasahemjandi virkni PGE við 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 og 3.0 mg ml-1 voru 6{ {29}}.29 prósent , 79.32 prósent , 85.14 prósent , 95.23 prósent , 96.43 prósent og 97.71 prósent . Hins vegar, þegar PGE styrkurinn var 2,5–3.0 mg mL- 1, jókst týrósínasahemjandi virknin ekki marktækt; því var ekki nauðsynlegt að gera tilraunir með hærri styrk. Við sömu aðstæður var hömlunarhraði 3,0 mg mL‵1 PGE (styrkur jurtalyfjaefna: 33,71 mg mL-1) svipaður og arbútíns (3 mg mL-1, 96,97 ±1,849 prósent) og hærri en það. af platýkódíni D (3 mg ml-1, 81,67 ± 2,331 prósent).
Samkvæmt áhrifum PGE á virkni B16F10 sortufrumna í kafla 3.1 var PGE styrkur 100, 150 og 200 mg ml-1 PGE valinn sem lágir, miðlungs og stórir skammtar til að prófa áhrif PGE á melaníninnihaldið og týrósínasavirkni B16F10 sortufrumna örvuð af a-MSH. Eins og sýnt er á mynd 6 var týrósínasavirkni B16F10 frumna örvuð af 100 nM a-MSH (viðmiðunarhópur) marktækt meiri en óörvaðar frumna. Með aukningu á PGE styrk jókst hamlandi virkni týrósínasa og melanínframleiðslu á B16F10 frumum verulega á skammtaháðan hátt. Með auknum gjafatíma jókst hamlandi virkni PGE á B16F10 frumur tyrosinasa og framleiðsla melaníns smám saman.
Fyrir frekari upplýsingar: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
