Plöntuefnafræðileg greining, in vitro gegn fjölgun, andoxunarefni hluti 2

Vinsamlegast hafðu sambandoscar.xiao@wecistanche.comfyrir meiri upplýsingar

a-glúkósíðasa hemlunarpróf

Þynningarröð brota var gerð til að gefa styrk upp á 100,200,300.400 og 500mg/ml. Hvarfblöndurnar innihéldu 0,1 ml 1U/ml -glúkósíðasalausn blandað við 0,2ml af útdrætti þynningu og 0,5 ml af 100mM fosfatjafnalausn, pH 6,8. Blöndurnar voru ræktaðar við 37 gráður í 15 mín. Síðan, 0,2ml 5mM p-nítrófenýl-D-galaktópýranósíðPNPG var bætt við hvarfblönduna og ræktun var framlengd í 20 mínútur til viðbótar við 37 gráður. Hvarfinu var hætt með því að bæta við 0,1 M NazCO3. Gleypið var skráð við bylgjulengdina 405 nm fyrir öll sýni. Akarbósi var notaður sem jákvæður samanburður við sama styrk og plöntuútdrættirnir. Niðurstöðurnar voru gefnar upp sem prósentuhömlun samkvæmt eftirfarandi jöfnu:

þar sem Ag er gleypni án ensímhemils og As er gleypni í nærveru ensímhemils [26].

Frumulínur og MTS próf

HeLa og MCF7 krabbameinsfrumulínur voru fengnar frá ATCC, frumurnar voru ræktaðar í RPMI-1640 miðli sem bætt var við 10 prósent nautgripasermi, 1 prósent penicillín/streptomycin sýklalyfjum og 1 prósent L-glútamíni. Frumur voru ræktaðar í rakaðri andrúmslofti með 5 prósent CO2 við 37 gráður. Frumum var sáð í 2,6×10* frumur/brunn í 96-brunnsplötu. Eftir 48 klst. voru frumur samrennandi, skipt var um miðil. Frumur voru síðan ræktaðar með mismunandi styrk blaðahluta á bilinu 0,25-10 mg/ml af R. rothschildianus í 24 klst. Lífvænleiki frumna var metinn

með CellTilter 96 gráðu Aqueous One Solution Cell Proliferation (MTS) prófun samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda (Promega Corporation, Madison, WI). Í stuttu máli, í lok meðferðar, var 20 ul MTS lausn á 100 ul miðli bætt við hvern brunn og ræktuð við 37 gráður í 2 klst. Frásog var mæld við 490 nm [27,28].

Vinsamlegast smelltu hér til að vita meira

tölfræðigreining

Allar fengnar niðurstöður fjögurra rannsakaðra plöntuhluta (andoxunarefni, and-lípasa,and-amýlasa, and-glýkósíðasa, ogfrumueitrunstarfsemi) voru gefin upp sem meðaltal±SD staðalfrávik; niðurstaðan var talin marktæk þegar p-gildið var<0.05. data="" were="" compared="" using="" unpaired="">

Niðurstöður

Plantaefnafræðileg skimun

Niðurstöður bráðaplöntuefnafræðilegra prófana á R. rothschildianus vatnshlutunum sýndu nærveru sapóníns, fenóla, próteina, sterkju og flavonoids. Metanólútdrátturinn sýndi tilvist flókinna fjölsykra, fenóla, próteina og flavonoids, en fenól, tannín og flavonoids sáust í asetónhlutanum og í hexanhlutanum fenólum, tannínum og flavonóíðum, glýkósíðum, terpenóíðum og sterum. eins og sýnt er í töflu 1. Hins vegar, fyrir útdráttarferlið, sýndi metanól hæsta hlutfallsuppskeruna við 29,4 prósent, fylgt eftir af asetónhlutanum við 16,5 prósent. Vatnsútdrátturinn gaf 10,6 prósent, en lægsta afraksturinn (7,3 prósent) var í hexanhlutanum (tafla 2).

Magngreining á TPC, TFC og TTC Til að meta TPC, TFC og TTC voru frásogsgildi (Abs) fyrir nokkrum styrkjum gallic sýru, rútínsýru og katekin staðla (STD) fengin og varðandi þessi atriði. , voru fengnar þrjár jöfnur fyrir hvern kynsjúkdóm á móti styrkleika hans til að reikna út heildarfenól, flavonoid og tannín innihald hexan, asetóns, metanóls og vatnskenndra R. Rothschild-greiningarhlutanna eru sýndar í töflu 3.

Cistanche getur bætt ónæmi

Andoxunarvirkni

Niðurstöður mats á virkni sindurefnahreinsunar fjögurra hluta úr R. rothschildianus laufum, með því að nota Trolox sem öfluga andoxunarstaðlaviðmiðun, voru gefnar upp sem prósentu DPPH hömlun (mynd 1 og tafla 4). Þess vegna gætu R. rothschildianus lauf talist jurtauppspretta fyrir andoxunarefni, og fyrir asetónhlutinn, sem sýndi ICso gildi 6,3±0,4 ug/ml. Svipaðar niðurstöður fengust einnig fyrir hexan hlutinn, sem hafði ICso gildi 7,9±1,3 ug/ml (tafla 4). Niðurstöðurnar voru bornar saman við Trolox, öflugt andoxunarefnasamband, með einnig 3,1±0,9 ug/ml. Aftur á móti sýndi vatnshlutinn aðeins miðlungsmikla andoxunarvirkni, með hærra ICso gildi 19,9±0.7ug/ml, á meðan metanólútdrátturinn var óvirkur í þessari greiningu.

Lípasa hindrunarvirkni

Í þessari greiningu var virkni gegn offitu hluta úr R. rothschildianus laufþykkni borin saman við virkni þeirra á

orlistat, öflugur lípasa hemill (mynd 2 og tafla 4). R. rothschildianus lauf voru frábær náttúruleg uppspretta lípasahemjandi efna. Asetónhlutinn sýndi ICso gildi 26,3±0.6ug/ml, sem var mjög nálægt viðmiðunarefnasambandinu orlistat （12.3±0.3ug/ml）. Hexan- og metanólhlutar skráðu aðeins miðlungsmikil ICso-gildi, jöfn 39,8±0.3ug/ml og 60.3±0.4ug/ml, í sömu röð; meðan vatnshlutinn var óvirkur.

a-amýlasa hömlunarvirkni

Í þessari greiningu var and-amýlasavirkni hluta úr R. rothschildianus laufþykkni borin saman við virkni akarbósa, öflugs a-amýlasahemjandi efnis (mynd 3). Asetónhlutinn var öflugasti hemill -amylasa, með ICso upp á 19.0±0.7 ug/ml, samanborið við 28.8±1.2 ug/ml fyrir akarbósa, viðmiðunarefnasambandið. Þetta benti til þess að R. rothschildianus gæti verið öflugt náttúrulyf við sykursýki. Vatnshlutinn sýndi aðeins miðlungsmikla virkni í þessari greiningu með ICso gildi 45,7±0,3 ug/ml, en hexan var með ICso gildi 354,8±1,2 ug/ml. Metanólhlutinn var óvirkur gegn -amýlasa ensíminu. einnig voru reiknuð gildi fyrir brotin fjögur (tafla 4).

a-glúkósíðasa hömlunarvirkni

Niðurstöður fyrir a-glúkósíðasa voru bornar saman við niðurstöður fyrir akarbósa, sem er sterkur ensímhemjandi efni, og einnig voru reiknuð gildi fyrir brotin fjögur (tafla 4 og mynd 4). Asetónhlutinn hafði mesta hamlandi áhrif á -glúkósíðasa með ICso 54,9±0,3 ug/ml, samanborið við akarbósa, viðmiðunarefnasambandið, við 37,1±{{10} }.3 ug/ml. Aftur á móti sýndi metanólútdráttarhlutinn aðeins hóflega hömlun á -glúkósíðasa, með ICso upp á 251,2±0,4 ug/ml, á meðan hexan- og vatnshlutarnir voru óvirkir í þessari greiningu.

Virkni gegn fjölgun

Niðurstöður meðferðar á HeLa og MCF7 krabbameinsfrumum með fimm mismunandi styrkleika í mg/ml fyrir mismunandi útdrætti sýndu að virkni gegn HeLa krabbameinsfrumulínu var betri en gegn MCF7 krabbameinsfrumulínu. Hins vegar var hexan útdrátturinn öflugastur

útdráttur við 4mg/ml styrk með hömlunarprósentu upp á 98,9 og 97,4 prósent gegn HeLa og MCF7 krabbameinsfrumulínum, í sömu röð, en metanólútdráttur í sama styrk sýndi öfluga virkni gegn HeLa og MCF7 krabbameinsfrumulínum með 97,2 og 95,6 prósenta hömlunarprósentu. HeLa frumuhlutfall hömlun á útsetningu fyrir brotum úr R. rothschildianus laufum var skjalfest, samanborið við jákvæða samanburðinn doxórúbicín (mynd 5a). Hömlun MCF7 frumna var á sama hátt ákvörðuð fyrir fjóra hlutana úr R. rothschildianus laufum, samanborið við samanburðarhópinn (mynd 5b).

Umræða

DPPH radical scavenging prófið er vel þekkt sem einföld aðferð til að greina andoxunargetu í efnasamböndum. DPPH er stöðug sindurefni sem gefur fjólubláan lit í áfengislausnum og við minnkun í nærveru vetnisgjafa andoxunarefna gerir lausnin litlaus [29]. Þess vegna gætu R. rothschildianus lauf talist náttúruleg uppspretta andoxunarefna, sérstaklega fyrir asetónhlutann, sem sýndi ICso gildi 6,3±0.4ug/ml. Svipaðar niðurstöður fengust einnig fyrir hexanhlutann sem hafði ICso gildi 7,9±1,3 ug/ml (tafla 4). Niðurstöðurnar voru bornar saman við Trolox, öflugt andoxunarefnasamband, með einnig 3,1±0.9 ug/ml. Aftur á móti sýndi vatnshlutinn aðeins miðlungs andoxunarvirkni, með hærra ICso gildi 19,9±0,7 ug/ml, á meðan metanólútdrátturinn var óvirkur í þessari greiningu. Þessar niðurstöður voru í samræmi við nærveru fenóla og flavonoids í plöntunni, öflugri hreinsiefni fyrir sindurefna eins og sýnt er með DPPH í þessari rannsókn. Þessar niðurstöður voru í samræmi við fjölbreytileika fenólefnasambanda í plöntum, einföld fenól eins og gallsýra og flóknari fenólsýrur eins og anthocyanín, hýdroxýl kanilsýruafleiður og flavonoids. Allir þessir flokkar efnasambanda hafa hlotið mikla athygli vegna margvíslegra lífeðlisfræðilegra virkni þeirra, sérstaklega til að hreinsa sindurefna, stökkbreytandi, bólgueyðandi og krabbameinsvaldandi virkni [30]. Eins og tilgreint er í töflu 3, skráði asetónseyðið hæsta innihald bæði fenólefnasambanda og flavonoids, 28,2±0,8mg af GAE/g og 107,3±4,6mg af RU/g, í sömu röð. Í fyrri skýrslu um sumar Rumex tegundir fundust fenólsambönd í etanólútdrætti úr laufum Rumex staðgengils L., sem hugsanlega tóku þátt í sindurefnahvörfum, sem minnkaði stöðugt notaða DPPH stakeindina í gulleit litaða dífenýlpíkrýlhýdra-sínafleiðu úr upprunalegu fjólubláu sinni. litur [31].

R. rothschildianus leaves were an excellent alternative natural source of lipase inhibitory agents. The acetone fraction showed an ICso value of 26.3±0.6μg/ml, which was very close to that of the reference compound orlistat （12.3±0.3μg/ml）. Hexane and methanol fractions only re-corded moderate ICso values, equal to 39.8±0.3 μg/ml and 60.3±0.4μg/ml, respectively; while the aqueous fraction was inactive. Pancreatic lipase is a major enzyme involved in enterocyte triglyceride absorption. Therefore, its inhibition represents an important strategy in the management of obesity [32]. Plants rich in phenolic compounds have been screened in several reports for anti-lipase activity. Lipase inhibitory activity ranging from 40 to >70 prósent hafa fundist með in vitro prófum í mörgum mismunandi fjölskyldum, þar á meðal Solanaceae (Solanum tuberosum), Brassicaceae (Brassica nigra og Raphanus sativus), Rosaceae (Malus Domestica Borkh. og Filipendula ulmaria (L.) Maxim.),

(Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng. og Ericaceae Vaccinium myrtillus L.), og Fabaceae (Pisum sativum L. og Phaseolus vulgaris L.)[33].

Asetónhlutinn var öflugasti hemill -amylasa, með ICso 19.0±0.7 ug/ml, samanborið við 28.8±1.2 ug/ml fyrir akarbósa, viðmiðunarefnasambandið. Þetta benti til þess að R. rothschildianus gæti verið öflugt náttúrulyf við sykursýki. Vatnshlutinn sýndi aðeins miðlungsmikla virkni í þessari greiningu með ICso gildi 45,7±0,3 ug/ml, en hexan var með ICso gildi 354,8±1,2 ug/ml. Metanólhlutinn var óvirkur gegn -amýlasa. Möguleg skýring á því að vatnshlutinn væri góður ensímhemill var tilvist sapónína. Fyrri vísindarannsóknir komust að því að sapónín voru lífvirk gegn sykursýki [34]. Öflug áhrif asetónseyðihlutans gegn amýlasa gætu stafað af háu innihaldi bæði fenólefnasambanda og flavonoids. Corchorus olitorius sérfræðingar -amýlasa og -glúkósíðasa hamlandi áhrif vegna innihaldsefna, sérstaklega fenólsambönd eins og kaffisýra [35].

Asetónhlutinn hafði mesta hamlandi áhrif á a-glúkósíðasa með ICso 54,9±0.3ug/ml, samanborið við acarbose, viðmiðunarefnasambandið, við 37.1±0.3ug/ml . Aftur á móti sýndi metanólútdráttarhlutinn aðeins í meðallagi hömlun á a-glúkósíðasa, með ICso upp á 251,2±0.4ug/ml, á meðan hexan- og vatnshlutarnir voru óvirkir í þessari greiningu. Þriðji flokkur blóðsykurslækkandi lyfja til inntöku inniheldur -glúkósíðasahemla. Það eru til margs konar -glúkósíðasahemlar, svo sem acarbose og voglibose, sem venjulega finnast í plöntuuppsprettum. Þeir sýna verðmæta stöðugleika á blóðsykri eftir máltíð og hafa verið notuð klínískt til að meðhöndla sykursýki [36, 37].

Niðurstöður meðferðar á báðum krabbameinsfrumum (HeLa og MCF7) með mismunandi styrkleika í mg/ml fyrir mismunandi útdrætti sýndu að almenn virkni gegn HeLa krabbameinsfrumulínu var betri en MCF7 krabbameinsfrumulína. Hexan þykkni sýndi öfluga krabbameinsvirkni við 4mg/ml styrk með hömlunarprósentu upp á 98,9 og 97,4 prósent gegn HeLa og MCF7 krabbameinsfrumulínum, í sömu röð, en metanólútdráttur í sama styrk sýndi öfluga virkni gegn HeLa og MCF7 krabbameinsfrumulínum með 97,2 og 95,6 prósenta hömlunarprósenta. Frá fyrri niðurstöðum hafði hexanhlutinn marktæk frumudrepandi áhrif á bæði HeLa og MCF7 frumur, með hömlunarprósentu sem náði 99 og 92,4 prósentum við 4mg/ml af styrk hexanhluta, í sömu röð. Þetta var í samræmi við frumudrepandi áhrif bæði terpenóíða og stera, sem fundust í hexanhlutanum. Sýnt hefur verið fram á að Diosgenin, sem er náttúrulegt steri og triterpenoid sem finnast í sumum plöntum, hamlar brjóstakrabbameini [38, 39].

Niðurstaða

Niðurstöður þessarar rannsóknar á R. rothschildianus laufum bentu til þess að asetónseyðihlutinn hefði verulega möguleika á að veita plöntumeðferð við sykursýki og offitu, byggt á öflugri hömlun þess á lípasa, a-amýlasa og a-glúkósíðasa. Að auki sýndi asetónhlutinn einnig marktæka virkni til að hreinsa sindurefna. Á hinn bóginn sýndi hexanhlutinn marktæka hömlun á bæði HeLa og MCF7 frumulínum, sem gæti tengst háu innihaldi af terpenum og sterum. Þessar athuganir í þessari rannsókn gætu leitt til frekari rannsókna í lífi til að þróa nýjar náttúrulegar lyfjasamsetningar sem eru árangursríkar við meðhöndlun offitu, sykursýki og sumra krabbameina.

Þessi grein er dregin út úr Jaradat o.fl. BMC Complementary Medicine and Therapies (2021) 21:107