Part2: Lífvirk efnasambönd frá Ephedra Fragilis: Hagræðing útdráttar, efnafræðileg einkenni, andoxunarefni og virkni gegn glýkingum
Mar 26, 2022
Fyrir frekari upplýsingar. sambandtina.xiang@wecistanche.com
2.7.Blóðsykursvirkni
2.7.1.UV-sýnileg greining
UV-vis litrófið er hröð, stöðug og einföld tækni sem almennt er notuð til að greina próteinbreytingar og flókna myndun. Frásogsróf innfædds og glýkeraðs BSA ræktað í 15 daga í nærveru eða fjarveru CEE/brota sem ogquercetin(jákvæð stjórn) eru sýnd á mynd 3A.
Það var greinilega sýnt fram á að innfæddur BSA sýnir einkennandi hámark við 入2s0 nm, sem er að mestu leyti vegna arómatískra amínósýra, þar á meðal týrósíns, tryptófan og fenýlalaníns [47].
Við breytingu með glúkósa var gleypni við λ280 nm 60,57 prósent meira oflitað en upprunalegt BSA. Aukinn frásogsstyrkur við 入2s0 nm má rekja til glýkingar-framkallaðrar útbrots próteinhelixsins, sem getur haft áhrif á eðlilega lífeðlisfræðilega virkni þess.
Treatment with CEE/fractions reduced significantly the absorbance at入2so nm compared to glycated BSA, and this reduction varied markedly between fractions according to the solvent polarity. Overall, descending antiglycation activity was portrayed as EAF>WBF>DMF>CCE>WF>HE, sem voru 1.82,1.71,1.57,1.35,1.28 og 1.13-falt lægri en glýkrað BSA. Engu að síður var þessi starfsemi verulega minni en hjáquercetinnotað sem jákvæður samanburður (2.24-falt lægri en glýkrað BSA). Þannig að það má skýra ályktun af frásogsrannsóknum að EAF frá E.fragilis hafi verndandi áhrif gegn útbreiðslu BSA sem orsakast af prótein glýkingu.
2.7.2. Hindrun á próteingýkingu í BSA-Glu líkaninu
AGE eru ólíkur hópur efnasambanda með flúrljómunareiginleika við λ440 nm þegar þau eru spennt við ±370 nm. Geta CEE og ýmissa hluta þess úr E. fragilis til að hamla AGEs myndun var metin með því að nota BSA-glúkósaprófið og niðurstöðurnar eru sýndar á mynd 3B.
Eins og sést á mynd 3B sýndi AGEs hömlunarhlutfall allra prófaðra sýna upp á við með aukningu styrks. Við 1 mg/ml hamluðu CCE, HE, DME EAE, WBF, WF og quercetin myndun AGEs um 53.26,39.83,54.82,76.68,69.09.48.83 og 97.84 prósent, í sömu röð, eftir meðgöngu í 15 daga. EAF(ICs =0.375±0.034 mg/ml)var áhrifaríkasti AGEs hemillinn meðal allra hluta, þar á eftir WBF, DMF, CCE og WF með IC5 0 gildin 0.595 ± {{30}}.047, 0.857 ± 0.018, 0.951 ± 0.099 og 1.044± 0,032 mg/ml, í sömu röð. HF sýndi veikustu virknina með ICso gildið sem 1,212±0,063 mg/ml.
Hið háablóðsykurslækkandimöguleiki EAF gæti stafað af miklu magni af fenól- og flavonoid innihaldi, sem hefur verið lýst sem mjög góðum hemlum á AGEs myndun [48]. Hærri blóðsykurslækkandi áhrif EAF af Liquidambar formosana Hance blaðaþykkni var einnig tilkynnt af Zhang et al. [31] samanborið við díklórmetan, n-bútanól og vatnshluta þess.
Eins og gefið er upp í töflu 5 var AGEs hömlun sterklega tengd á jákvæðan hátt við bæði TF(r=0.950;p<0.01)and tp(r=""><0.01)contents, which="" were="" in="" line="" with="" previously="" reported="" studies="" [2,29].="" the="" ages="" inhibition="" was="" also="" correlated="" in="" a="" positive="" way="" to="" dpph",abts,h2o2,reducing="" power,="" tac,andβ-carotene="" assays="" withr="">
r=0.914,r=0.983, r=0.975,r=0.923,og r=0.963 (bls.<0.01),respectively. these="" reflected="" that="" ages="" inhibition="" is="" linked="" to="" the="" efficiency="" of="" primary="" antioxidants="" [6].="" kaewseejan="" and="" siriamornpun="" [29]="" also="" reported="" that="" phenolic="" compounds="" prevented="" the="" formation="" of="" ages="" through="" its="">hreinsun sindurefnaogandoxunarefnigetu.
2.7.3. Áhrif á próteinoxun af völdum sykursýkingar
Gýkrun próteina (Maillard hvarf) er viðbrögð sem hefjast með samgildri tengingu afoxandi sykurs við amínóhóp próteina (aðallega lýsín og arginín leifar), sem leiðir til framleiðslu á óstöðugri og afturkræfu vöru þ.e. Schiffs basa sem gengst enn frekar undir Amadori endurröðun. til að mynda stöðugri ketamín sem heitir Amadori vörur. Í kjölfarið fara Amadori vörur í endiol viðbrögð til að framleiða karbónýleruð prótein [48]. Niðurbrot þessa ketamíns gæti myndaðsindurefnaeins og súperoxíðrótarefni, sem er frekar breytt í HO·via Fenton hvarf, sem veldur oxunar- og frumuskemmdum [49].
Protein oxidation is accompanied by carbonyl protein formation and loss of protein thiols, which are often employed as protein oxidation indicators[50]. As given in Figure 3C, the level of carbonyl content in native BSA was 1.16±0.04 nmol/mg protein, which was increased to more than 3.62-fold (4.21 ± 0.10 nmol/mg protein) upon glycation. The treatment with CEE and its various fractions reduced the level of carbonyl content with the increase of samples concentrations ranging from 0.1 to 1 mg/mL. Furthermore, the inhibition effect of quercetin on the formation of carbonyl proteins was stronger than that of all fractions at every concentration point. When the concentration was 1 mg/mL, CEE, HF, DMF, EAF, WBF, WF, and quercetin decreased the level of carbonyl content by 42.29, 17.37,58.68,73.44,69.17,28.84,and 98.68%, respectively, compared to native BSA. Overall descending, the inhibition of carbonyl content formation was portrayed as Q>EAF>WBF >DMF > CCE> WF >HF.
Áhrif CEE/brota á próteinþíóloxun af völdum glýkingar eru sýnd á mynd 3D. Í innfæddu BSA var magn próteins þíóls 1.06± 0.086nmól/mg prótein, sem minnkaði meira en þrefalt (0 .34± 0,021 nmól/mg prótein) í glýkuðu próteini. Í nærveru CEE/brota var magn tíólhópsins marktækt aukið á skammtaháðan hátt á bilinu 0,1 til 1 mg/ml. Þar að auki jókst magn próteinþíóls í eftirfarandi röð: HF<><><><>
Svipaðar niðurstöður sáust í plöntunni Teucrium polium þar sem EAF var áhrifaríkara en hinir þættirnir (díetýleter og vatnshlutar) gegn glýkunarmiðluðum próteinoxun[51]. Í rannsókn sinni greindu Golshahi og Bahramikia [52] einnig frá svipuðum niðurstöðum þegar notaðir voru nokkrir leysiefni með vaxandi pólun (díetýleter og vatn) við klofningu lækningajurtar Trachyspermum copticum. Samkvæmt þessum höfundum hefur EAF öflugustu verndandi áhrifin gegn glýkunarmiðlaðri próteinoxun, fjarlæg fylgt eftir af díetýleternum og vatni. Þetta sýnir tilvist slíkra efnasambanda í EAF sem gætu haft fyrirbyggjandi áhrif gegn oxunarskemmdum af völdum blóðsykurs á próteini, sem talið er að eigi sér stað við glýkoxunarferli með því að draga úr próteinkarbónýlmyndun og vernda próteinþíól gegn oxun eins og gögn gefa til kynna.
2.8.Auðkennd fenólsambönd í EAF
EAF, sem sýndi mesta líffræðilega virkni frá öðrum hlutum, var valið til að bera kennsl á helstu lífvirku efnasambönd þess með RP-HPLC. Alls voru sex efnasambönd auðkennd með því að bera saman varðveislutíma þeirra við viðmiðunarstaðla. Tilgreindu fenólsamböndin eru sýnd á mynd 4. Gallic, vanillic, caffeic og ferulic sýrur voru auðkenndar sem fenólsýrur, en aðeins tvö efnasambönd, nefnilega rútín og quercetin, voru auðkennd sem flavonoids. Samkvæmt rannsókn Soumaya o.fl. [53], ferúlínsýra, lúteólín-7-O-glúkósíð, mýrísetín og kaempferól 3-O-rútínósíð voru auðkennd sem til staðar í EAF í lofthluta Túnis E.fragilis, en tilvist rútíns , quercetin, gallic sýra og koffínsýra greindust aðeins í fyrsta skipti í rannsókn okkar. Mismunurinn í efnasamsetningu EAF sem fæst úr sömu plöntutegundinni getur verið mismunandi eftir mismunandi hlutum plöntunnar, þroskastig plantna, vaxtarskilyrði (td jarðveg, ljós, hitastig, vatn, raki og áburður), uppskerutíma, þurrkunarkerfi og útdráttaraðferð [54]. Niðurstöðurnar sem fengust úr plöntuefnafræðilegu fingrafaraprófílnum sýndu góðan auð af E.fragilis sem hafði nokkur fenólsambönd sem eru talin stór þátttakandi í hreinsun sindurefna og andoxunarvirkni [55]. Að auki eru þessi efnasambönd þekkt fyrir öfluga andglycerunargetu þeirra [48]. Nokkrar rannsóknir hafa leitt í ljós bein tengsl á milli andoxunarvirkni fenólefnasambanda og andoxunargetu þeirra.
2.9. Sameindatengingarrannsókn á auðkenndum efnasamböndum
Til að sjá skýrt hvernig ítarlega vélbúnaðurinn sem auðkenndur efnasambönd í EAF E. fragilis bindast við BSA og RAGE, gerðum við sameindatengingarrannsókn. Niðurstöður úr tengingu eru sýndar í töflu 6, en víxlverkanir á milli virkasta efnasambandsins og miðanna eru sýndar á mynd 5. Niðurstöður sýndu að quercetin passaði þétt inn í bindisæti, staðsett í vatnsfælna hola undirléns IB BSA með lægstu bindingarorku { {2}}.7 kcal/mól (Mynd 5A). Aftur á móti fékkst minni bindingarorka með ferúlsýru, vanillínsýru, koffínsýru, gallsýru og rútíni (-6.35,{{7} }.05, -5.84,-5.25 og -4.41 kkal/mól, í sömu röð). Venjulega er mikil neikvæðni bindiorku skilvirkari og efnasambandið væri notað til að stjórna glýkingarferlunum. Af mynd 5B er ljóst að quercetin myndar átta vetnistengi með SER109, ASP111, LEU112, LEU115, ARG144, ARG185 og ARG458of BSA, og fjórar vatnsfælnar milliverkanir sem miðlað er af alífatísku amínósýrunum (LRG1414,4) og LRG1414,4) . Einnig, fjórar amínósýrur (ASP108, HIS145, LEU189 og LEU462) sem umlykja quercetin víxluðust í gegnum krafta van der Waal. Greint hefur verið frá því að lýsín og arginín séu helstu amínósýruleifarnar sem taka þátt í glýkingarferlinu [56]. Þess vegna gæti gríma quercetins í lýsín og arginín leifar verið einn af mögulegum aðferðum E. fragilis til að hamla prótein glýkingu á upphafsstigi.
![. The 3D view of the binding mode between quercetin (A) and gallic acid (C) with BSA and RAGE, respectively. The 2D detailed view showed the interaction between quercetin (B) and gallic acid (D) with neighboring residues of BSA and RAGE, respectively. Engagement of AGEs products with RAGE are known to trigger, through ROS formation via NADPH oxidase and mitochondria [57], the activation of multiple intracellular signaling pathways (including JAK/STAT, phosphoinositol-3 kinase, rho GTPases, SAPK/JNK MAP kinases, p38 and erk1/2 (p44/p42) MAP kinases), and culminating in the activation of the NF-κB transcription factors [58], leading to the pathogenesis of diabetes and aging-associated disorders [5]. Therefore, blocking the AGEs–RAGE interactions can repress stress-provoking signals transduction, which is considered a therapeutic strategy of inhibiting glycation at a later stage. Docking results with RAGE, as shown in Table 6, proved that gallic acid has the highest docking score (ΔG= −6.8 kcal/mol) in comparison to those of vanillic acid, ferulic acid, caffeic acid, quercetin, and rutin (−6.68, −5.94, −5.89, −5.58 and −4.89 kcal/mol, respectively). Moreover, 2D modeling of gallic acid and RAGE showed that gallic acid formed five conventional hydrogen bonds with CYS38, GLY40, ALA41, LYS43, and SER83 of RAGE (Figure 5C,D). Also, LYS37 and LYS43 were responsible for the hydrophobic interactions of gallic acid with RAGE. Five amino acids surrounding gallic acid (GLU32, LYS39, PRO42, ASN81, and GLY82) were attached by van der Waal's forces, thereby stabilizing the gallic acid-RAGE complex by providing a strong cohesive environment. In summary, the current study has shown the efficient interaction of certain bioactive compounds in the EAF of E. fragilis with the target proteins of BSA and RAGE. E. fragilis could be a source of potential competitors to glucose and AGEs, which might resist their binding towards BSA and RAGE, respectively, and therefore reducing the subsequent development of oxidative stress and inflammation (Figure 6). Figure 5. The 3D view of the binding mode between quercetin (A) and gallic acid (C) with BSA and RAGE, respectively. The 2D detailed view showed the interaction between quercetin (B) and gallic acid (D) with neighboring residues of BSA and RAGE, respectively](/Content/uploads/2022842169/202203241046127d567c69ab264671b6814abd1b4544c7.png ". The 3D view of the binding mode between quercetin (A) and gallic acid (C) with BSA and RAGE, respectively. The 2D detailed view showed the interaction between quercetin (B) and gallic acid (D) with neighboring residues of BSA and RAGE, respectively. Engagement of AGEs products with RAGE are known to trigger, through ROS formation via NADPH oxidase and mitochondria [57], the activation of multiple intracellular signaling pathways (including JAK/STAT, phosphoinositol-3 kinase, rho GTPases, SAPK/JNK MAP kinases, p38 and erk1/2 (p44/p42) MAP kinases), and culminating in the activation of the NF-κB transcription factors [58], leading to the pathogenesis of diabetes and aging-associated disorders [5]. Therefore, blocking the AGEs–RAGE interactions can repress stress-provoking signals transduction, which is considered a therapeutic strategy of inhibiting glycation at a later stage. Docking results with RAGE, as shown in Table 6, proved that gallic acid has the highest docking score (ΔG= −6.8 kcal/mol) in comparison to those of vanillic acid, ferulic acid, caffeic acid, quercetin, and rutin (−6.68, −5.94, −5.89, −5.58 and −4.89 kcal/mol, respectively). Moreover, 2D modeling of gallic acid and RAGE showed that gallic acid formed five conventional hydrogen bonds with CYS38, GLY40, ALA41, LYS43, and SER83 of RAGE (Figure 5C,D). Also, LYS37 and LYS43 were responsible for the hydrophobic interactions of gallic acid with RAGE. Five amino acids surrounding gallic acid (GLU32, LYS39, PRO42, ASN81, and GLY82) were attached by van der Waal's forces, thereby stabilizing the gallic acid-RAGE complex by providing a strong cohesive environment. In summary, the current study has shown the efficient interaction of certain bioactive compounds in the EAF of E. fragilis with the target proteins of BSA and RAGE. E. fragilis could be a source of potential competitors to glucose and AGEs, which might resist their binding towards BSA and RAGE, respectively, and therefore reducing the subsequent development of oxidative stress and inflammation (Figure 6). Figure 5. The 3D view of the binding mode between quercetin (A) and gallic acid (C) with BSA and RAGE, respectively. The 2D detailed view showed the interaction between quercetin (B) and gallic acid (D) with neighboring residues of BSA and RAGE, respectively")
Vitað er að þátttaka AGEs vara með RAGE kveikir, með ROS-myndun í gegnum NADPH oxidasa og hvatbera [57], virkjun margra innanfrumuboðaleiða (þar á meðal JAK/STAT, fosfóínósítól-3 kínasa, rho GTPasa, SAPK/INK MAP kínasar, p38 og erk1/2 (p44/p42) MAP kínasar), og ná hámarki í virkjun NF-kB umritunarþátta [58], sem leiðir til meingerðar sykursýki og öldrunartengdra sjúkdóma [5]. Þess vegna getur hindrun á AGEs-RAGE milliverkunum bælt streituvaldandi merkjaflutning, sem er talin meðferðaraðferð til að hindra blóðsykur á síðari stigum. Niðurstöður við tengingu með RAGE, eins og sýnt er í töflu 6, sönnuðu að gallsýra hefur hæstu tengingarstig (G=-6,8 kcal/mól) í samanburði við vanillínsýru, ferúlsýru, koffínsýru, quercetin og rútín(-6.68,-5.94,-5.89,-5.58 og -4.89 kkal/mól, í sömu röð). Þar að auki sýndi 2D líkan af gallsýru og RAGE að gallsýra myndaði fimm hefðbundin vetnistengi með CYS38, GLY40, ALA41, LYS43 og SER83 af RAGE (Mynd 5C, D). Einnig voru LYS37 og LYS43 ábyrgir fyrir vatnsfælnum milliverkunum gallsýru við RAGE. Fimm amínósýrur sem umlykja gallsýru (GLU32, LYS39, PR042, ASN81 og GLY82) voru tengdar með krafti van der Waal, og komu þar með stöðugleika á gallsýru-RAGE flókið með því að veita sterkt samloðandi umhverfi. Í stuttu máli hefur núverandi rannsókn sýnt fram á skilvirka víxlverkun ákveðinna lífvirkra efnasambanda í EAF E. fragilis við markprótein BSA og RAGE.E.fragilis gæti verið uppspretta hugsanlegra keppinauta glúkósa og AGE, sem gætu staðist þeirra bindast BSA og RAGE, í sömu röð, og dregur því úr síðari þróun oxunarálags og bólgu (Mynd 6).
3. Efni og aðferðir
3.1. Efni og hvarfefni
22-azínóbis-(3-etýlbensóþíasólín-6-súlfónsýra)(ABTS), bútýlerað hýdroxýtólúen (BHT), natríumasíð, gúanidínhýdróklóríð, tween-40,1,{ {7}}dífenýl-2-píkrýlhýdrasýl (DPPH), Folin Ciocalteau hvarfefni, -karótín, línólsýra, glúkósa, 2,4-dinitrófenýlhýdrasín(DNPH),5,5'-Dithiobis-({{16 }}Nítróbensósýra)(DTNB), ammóníummólýbdat og pólýfenól staðlar voru keyptir frá Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, Bandaríkjunum). Vetnisperoxíð (H2O2) var keypt frá Fluka (Basel, Sviss). Álklóríð (AICl3), natríumkarbónat (NazCO3), járnklóríð (FeCl3), kalíumpersúlfat (K2S2Os), kalíumferrísýaníð (K3Fe(CN)6), brennisteinssýra og öll leysiefni voru fengin frá Merck Life Science (Darmstadt, Þýskalandi) ). Askorbínsýra og tríklórediksýra (TCA) voru fengin frá Scharlau (Barcelona, Spáni).
3.2. Plöntuefni
E. fragilis (lofthlutar) var safnað frá Dour Lagfifat, Oulad Teima, Taroudant, Marokkó (breiddargráðu, 30 gráðu 24'0"N; lengdargráðu, 9 gráður 12'36"V) í maí 2019. var auðkenndur af prófessor Najat ELKHIATI, grasafræðingi frá stofnuninni okkar, þar sem safn af fylgiskjölum var afhent. Álverið var skolað með eimuðu vatni, loftþurrkað, duftformað í blandara og geymt við 49C fram að notkun.
3.3.Tilraunahönnun
3.3.1.Val á breytum
Vitað er að margar breytur hafa veruleg áhrif á útdrátt fenólefnasambanda, svo sem tegund leysis, styrkur leysis, útdráttartími og útdráttshitastig [59]. Mismunandi leysiefni eins og asetón, metanól og etanól henta til útdráttar á mismunandi fenólsamböndum [16], en etanól var valið sem leysir í þessari rannsókn, vegna mataröryggis þess og græns framleiðslu [60]. Þess vegna voru allir þættir, þ.mt etanólstyrkur (X), útdráttshitastig (X2) og útdráttartími (X3), valdir sem breytur.
3.3.2. BBD fyrir hagræðingu útdráttar
Hagræðingaraðferð var þróuð með því að nota RSM til að ákvarða áhrif útdráttarþátta og velja bestu tilraunaútdráttarskilyrði E. fragilis fenólefnasambands. Þriggja þrepa, þriggja þátta BBD var framkvæmd til að kanna áhrif þriggja óháðra þátta, þar á meðal X1 (styrkur etanóls, prósent), X, (útdráttshitastig, gráðu) og X3 (útdráttartími, h) á TP og TF innihald af E, fragilis útdrætti [17]. Í hagræðingarskyni voru alls 15 tilraunir, þar á meðal þrír miðpunktar, gerðar af handahófi (tafla 1). Byggt á bráðabirgðatilraun okkar með einum þáttum (gögn ekki sýnd), voru allar breytur stilltar á þrjú stig (-1,0 og plús 1), með X,(40,60 og 80 prósent ), X ,(25,42,5 og 60 gráður), og X3(6, 15 og 24 klst)(tafla 1). Eftirfarandi 2. stigs margliðujöfnu (jöfnu (1)) var notuð til að passa við svörunarbreyturnar:
þar sem Y er spáð svar; ó,; ég og ; eru aðhvarfsstuðlar fyrir skurðarhugtök, línuleg, fjórðungs- og víxlverkunarhugtök, í sömu röð; og X;, og X; eru óháðu breyturnar (i ≠ j).
3.3.3. Útdráttaraðferð
Sýnið í duftformi (10 g) var dregið út með blöndunaraðferð í hönnuðum etanólstyrk (40-80 prósent ;1:10, w/v), við mismunandi hitastig (25-60 gráður) í mismunandi tímabil ({ {5}} h) á útungunarvél með svighristara (160 rpm). Grisja og Whatman síupappír nr.1 voru notaðir til að fjarlægja óleysanlega massann. Síuvökvinn var síðan þurrkaður við 40 gráður við lágan þrýsting með því að nota R-3 Rotavapor(Büchi) til að fá hráa etanólútdráttinn (CEE).
3.4. Hlutabrot af CEE fengin við bestu aðstæður
CEE sem fékkst við ákjósanleg skilyrði var leyst upp í eimuðu vatni (100 ml) og vökva-vökva útdráttur var framkvæmdur með ýmsum leysum með vaxandi pólun til að fá hexanhluta (HF, 3×100 ml), díklórmetanhluta (DMF, 3×100) ml), etýlasetathluti (EAF.3×100 ml), vatnsmettaður n-bútanólhluti (WBF, 3×100 ml),
og vatnshlutfallið sem eftir er (WF). Þessir hlutar voru síðan síaðir og þurrkaðir eins og lýst er hér að ofan, og útdráttarafraksturinn var skráður samkvæmt jöfnu (2):
Were Wo og W eru þyngd þurrkaðra CEE/hluta og upphafsþyngd E.fragilis dufts; í sömu röð.
3.5. Plantefnafræðileg greining
Litrófsmælingaraðferðirnar sem notaðar eru til að meta jurtaefnainnihald E. fragilis útdrætti eru ítarlegar í viðbótarefnum [61,62].
3.6. Líffræðileg starfsemi
Upplýsingar um andoxunarefnið [43,63-67] og blóðsykurslækkandi virkni [68-70] prófin in vitro voru gefnar upp í viðbótarefninu.
3.7.RP-HPLC Greining á EAF
Greining á fenólsamböndum í EAF var gerð með Agilent 1100(Agilent Technologies, Santa Clara, CA, Bandaríkjunum) búin ZORBAX Eclipse SB-C18 öfugfasa greiningarsúlu 100×4 mm og 3,5 um kornastærð [71]. Súluhitanum var haldið stöðugu við 48 gráður. Ísókratísk skolun með asetónítríl, 0,1 prósent ediksýru í vatni (12:88, v/v) sem hreyfanlegur fasi og 1 ml/mín. flæðihraði tryggðu góðan aðskilnað pólýfenóla í EAF E.fragilis. Inndælt rúmmál var 10 μL og litskiljun mæld við 330 nm. Varðveislutími fenólefnasambanda í EAF var borinn saman við þá staðla sem eru eingöngu tiltækir til að bera kennsl á þau.
3.8. Molecular Docking
AutoDock Tools(ADT) útgáfa 1.5.6 var notuð til að framkvæma sameindatengingarrannsókn. SDF snið allra efnasambanda var fengið úr PubChem gagnagrunninum og síðan breytt í 3Dpdb skrá með því að nota Open Babel GUI (útgáfa 2.4.1). Kristalbyggingum BSA(PDB ID:4ORO) og RAGE(PDB ID:4LP5) var safnað úr RCSB Protein Data Bank (PDB). Í stuttu máli, próteinin voru fyrst undirbúin fyrir tengingu með því (i) að fjarlægja öll heteróatóm og vatnssameindir, (i) bæta við skautuðum vetnisatómum og (ii) úthluta Kollman hleðslum. Stærð hnitakassa var stillt á x{{10}},y=126,z=126 og x=80,y=80.Z{{ 15}} með miðju hnitanetsins ×=8.415,y=21.626,z=106.57 andx=37.98,y=-43.581 ,z=9.371 með ristbili upp á 0,375A sem er búið til í kringum bindisstað BSA og RAGE, í sömu röð. Kvíarhugbúnaðurinn var keyrður 100 sinnum með Lamarckian Genetic Algorithm (LGA) til að finna bestu bindingarstöðuna. Bindillinn með lægsta bindiorkustigið var valinn til frekari rannsóknar. Discovery Studio hugbúnaðarútgáfa 2020 (BIOVIA, San Diego, CA, Bandaríkin) var notuð til að sjá niðurstöður úr bryggju.
3.9. Tölfræðigreining
Design-Expert hugbúnaðarútgáfa 119 (Stat-Ease Inc., og Minneapolis, MN, Bandaríkjunum) var notuð til að framkvæma RSM. Gagnagreining var framkvæmd með einhliða dreifigreiningu (ANOVA) og fylgt eftir með Duncan's post-hoc prófi með SPSS 26.0(IBM Co., USA);p<0.05 was="" considered="" statistically="" significant.="" pearson="" correlation="" analysis="" was="" conducted="" to="" investigate="" correlations="" between="" variables="" and="" their="" significance.="" all="" graphics="" were="" constructed="" using="" graphpad="" prism="" 7.0="" software="" (san="" diego,="" ca,="" usa).="" all="" experiments="" were="" conducted="" in="" triplicate="" and="" presented="" as="" mean="" values="" ±standard="" deviation="">
4. Niðurstöður
RSM með BBD var notað til að stilla fínstilltu færibreytur fyrir útdrátt lífvirku efnasambandanna úr marokkósku lækningajurtinni E. fragilis. Spáð var fyrir hámarksstyrk etanóls, hitastig útdráttar og útdráttartíma
útdráttarafrakstur fenólefnasambanda og reyndist vera 61,93 prósent, 44,43 gráður C og 15,84 klst., í sömu röð. CEE sem fékkst við bestu útdráttaraðstæður og ýmsir hlutar þess voru greindir með tilliti til TP og TF innihalds þeirra, svo ogandoxunarefniog blóðsykurslækkandi virkni. EAF hluti sýnir hæsta TP og TF innihald og sterkustu andoxunarvirkni samanborið við önnur brot. Einnig sýndi mat á nokkrum lífmerkjum eins og UV-vis frásogsrófi, sértækum AGE flúrljómun, karbónýlinnihaldi og frjálsum tíólhópum mestu verndandi áhrif EAF gegn glýkingu sem miðlað er af glúkósa. Ennfremur sást marktækt jákvætt samband á milli andoxunargetu fenólefnasambanda og andoxunarvirkni þeirra. Þetta gefur til kynna að fenólefnasambönd geti verið aðal ríkjandi þættirnir sem bera ábyrgð á bæði andoxunar- og andoxunarvirkni. Lífvirku efnasamböndin í EAF einkenndust af RP-HPLC greiningu og alls voru sex efnasambönd auðkennd. Í kísil sameindatengingargreiningu sýndi einnig árangursríkt samspil quercetins og gallsýru við BSA og RAGE sem markprótein, í sömu röð. Sameiginlega bendir þessi rannsókn til þess að E.fragilis gæti verið hugsanleg uppspretta náttúrulegra lífvirkra efnasambanda með öfluga andoxunar- og andoxunarvirkni og ætti að nota til að meðhöndla og koma í veg fyrir öldrun og fylgikvilla tengda blóðsykri. Frekari rannsóknir á einangrun lífvirkra efnasambanda og lyfjafræðilega skimun (þ.e. frumudrepandi rannsókn) þarf að gera til að kanna jurtaefnafræði og verkunarmáta lyfjafræðilegra eiginleika E. fragilis.
Heimildir
1. Martins, N.; Barros, L.; Santos-Buelga, C.; Silva, S.; Henriques, M.; Ferreira, ICFR decoction, innrennsli og vatnsáfengt útdráttur úr ræktuðu timjani: Andoxunar- og bakteríudrepandi virkni og fenóleinkenni. Food Chem. 2015, 167, 131–137. [Krossvísun]
2. Deetae, P.; Parichanon, P.; Trakunleewatthana, P.; Chanseetis, C.; Lertsiri, S. Eiginleikar taílenskt jurtate og andoxunarefni og andstæðingur-gýkingar í samanburði við hefðbundið te. Food Chem. 2012, 133, 953–959. [Krossvísun]
3. Yao, Q.; Liang, Y.; Shao, Y.; Bian, W.; Fu, H.; Xu, J.; Sui, L.; Yao, B.; Li, M. Advanced Glycation End Product Concentration in Follicular Fluid of Women in IVF/ICSI with a GnRH agonist Protocol. Reprod. Biomed. Á netinu 2018, 36, 20–25. [CrossRef] [PubMed]
4. Grimm, S.; Ott, C.; Hörlacher, M.; Weber, D.; Höhn, A.; Grune, T. Advanced-Glycation-End-Product-Induced Formation of Immunoproteasome: Þátttaka RAGE og Jak2/STAT1. Biochem. J. 2012, 448, 127–139. [Krossvísun]
5. Meenatchi, P.; Purushothaman, A.; Manneemegalai, S. Andoxunarefni, blóðsykurslækkandi og insúlínótrofískir eiginleikar Coccinia Grandis (L.) in Vitro: Mögulegt hlutverk í að koma í veg fyrir fylgikvilla sykursýki. J. Tradit. Viðbót. Med. 2017, 7, 54–64. [CrossRef] [PubMed]
6. Nakagawa, T.; Yokozawa, T.; Terasawa, K.; Shu, S.; Juneja, LR Verndarvirkni græns tes gegn skaða af próteini sem tengist sindurefnum og glúkósa. J. Agric. Food Chem. 2002, 50, 2418–2422. [CrossRef] [PubMed]
