Hluti 1: Acteoside bæld Microglia M1 skautun með hindruðum NF-KB boðleiðum og AMPK miðlaðri endurheimt hvatbera.

Tengiliður: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Netfang:audrey.hu@wecistanche.com

Vinsamlega smelltu hér til að hluta 2

Ágrip:

Bakgrunnur:Alzheimerssjúkdómur (AD)er algengasta tegund heilabilunar. Meðanakteósíð úr cistanche jurtum(ACT), efnasamband einangrað úr Cistanchetubulosa, hefur taugaverndandi eiginleika. Hins vegar er undirliggjandi aðferðin við að stjórna skautun örvera enn illa útfærð.Aðferðir:Hér var AlCl3-framkallað AD líkanið í sebra¦sh lirfum beitt til að afhjúpa meðferðaráhrif ACT. BV-2 frumur voru notaðar til að sýna fram á hlutverk ACT á skautun örvera. RNA-röð, HPLC-Q-TOF-MS, western blot og sameindatenging voru sameinuð til að staðfesta virkni þess.Niðurstöður:ACT bætti verulega á hreyfitruflunum í tilraunaskyni og taugakerfissjúkdómum í zebra. Í kjölfarið bældi það M1 skautun og stuðlaði að M2 svipgerðinni í LPS-framkölluðum BV-2 frumum. Við sýndum fyrst fram á að ACT hafði djúpstæð umritunaráhrif, sem fólu í sér stjórnun á lykilboðaleiðum í innblæstri, lífmyndun arginíns, sem og pantótenat og CoA lífmyndun, sem tengist starfsemi hvatbera. FRAMKVÆMA(akteósíð úr cistanche jurtum) meðferð dró úr míkróglia M1 skautun með því að hindra NF-KB boðleiðina. Og efnaskiptaleiðirnar voru enn frekar staðfestar með HPLC-Q-TOF-MS. Að auki leiðrétti ACT of mikið ROS til að endurheimta starfsemi hvatbera með AMPK-miðluðu PGC-1 og UCP-2 uppstjórnun, í samræmi við efnaskiptabreytingar. Það er forvitnilegt að ACT gæti tengst beint bæði NF-KB og AMPK, eins og sést af sameindatengingu.Ályktanir:Rannsóknin veitti innrennsliskerfi ACT og sýndi nýtt sjónarhorn sem byggist á truflun á starfsemi hvatbera til að sýna tengsl milli efnaskipta og pólunar á örverum.

Bakgrunnur:

Alzheimersjúkdóms(AD) er algengur taugahrörnunarsjúkdómur sem fylgir vitrænni skerðingu og hreyfitruflunum[1]. Það einkennist af alvarlegu tapi á taugafrumum, senile skellum og tauga-¦brillary-flækjum[2]. Meingerð AD er fjölvídd og tengd taugabólga. Neuroin§ bræðsla er knúin áfram af virkjun glial frumna, nátengd þróun AD[3, 4]. Meðan á framgangi og versnun taugabólga stendur, er microglia talin lykilþátturinn. Microglia eru aðal ónæmisfrumurnar í miðtaugakerfinu. Það er nátengt hlaupi ferla, sem inniheldur heilaþroska, viðhalda hlutlausu umhverfi, auk þess að bregðast við meiðslum og viðgerðum[1]. Þar að auki er hægt að örva microglia í M1 svipgerð og tjáning pro-in§amatory cýtókína eykst þegar taugabólga-tengdir sjúkdómar eins og AD komu fram[5]. Rannsóknir sýna einnig að skautun í M1 svipgerð fylgir oft efnaskiptasjúkdómum [6], sem veldur ójafnvægi í orkuefnaskiptum og truflun á starfsemi hvatbera[7]. Þessar skaðlegu breytingar eru fengnar af taugahrörnun, jafnvel AD.

akteósíð úr cistanche jurtum(ACT), fenýletanóíð glýkósíð, er fyrst og fremst unnið úr Cistanchetubulosa. Vaxandi vísbendingar hafa bent til þess að ACT hafi fjölmarga lyfjafræðilega virkni, þar á meðal taugaverndandi [8], bólgueyðandi [9] og andoxunarefni [10] áhrif. Sérstaklega hefur verið greint frá því að ACT bætir náms- og minnisskerðingu ásamt því að stjórna orkuefnaskiptum í streptósótósín-völdum rottum [11]. Einnig hefur verið stungið upp á því að hindra frumudauða taugafrumu og hvatberaskemmda í tilraunamúsum með sjálfsofnæmisheilabólgu [12]. Hins vegar hafa færri rannsóknir beinst að áhrifum ACT á M1/M2 skautun microglia. Sérstaklega hafa ýmsar aðferðir, svo sem viðgerðir á starfsemi hvatbera og stjórnun á efnaskiptum frumna, ekki verið framkvæmd. Að auki hefur virkni ACT stuðlað að M1/M2 skautun örvera verið órannsökuð.

Þessi skýrsla miðar að því að rannsaka meðferðaráhrif ACT sem og undirliggjandi sameindakerfi ACT í AD. Hér sýndi ACT umtalsverð taugavarnaráhrif í AlCl3-framkölluðum AD sebra¦lirfum. Að auki hamlaði ACT M1 skautun á áhrifaríkan hátt og stuðlaði að M2 svipgerðinni í BV-2 frumum af völdum LPS. RNA-sequencing (RNA-Seq) samþætt við metabolomics aðferð til að skilja betur undirliggjandi fyrirkomulag ACT við að stjórna microglia skautun. Könnuð var víxlræðing á milli efnaskipta og skautunar á örverum með tilliti til starfsemi hvatbera. Þessi rannsókn mun veita nýja virðingu fyrir frekari rannsókn á ACT sem hugsanlegu lækningaefni til að meðhöndla AD.

Aðferðir:

Dýr og líkanflokkur:

Villigerð sebra¦sh (AB-stofn, 4 mánaða gamall) var valinn í þessari rannsókn (Nanjing Qi Wu Biotechnology Co., Ltd.). Þeim var haldið undir 14/10 klst ljós/myrkri hringrás við 28 gráður, samkvæmt fyrri aðferð [13]. Náttúrulegur áburður og eðlilega þroskaðir fósturvísar voru myndaðir og ræktaðir í 3 daga eftir frjóvgun (dpf) í lýsingu útungunarvél. Allar zebra¦sh tilraunir voru gerðar undir eftirliti dýrasiðanefndar Kína Pharmaceutical University.

Sebra¦sh lirfur voru skipt í sex hópa og meðhöndlaðir frá 3 dpf til 7 dpf: samanburðarhópur, líkanhópur, líkan plús dónepezílhýdróklóríð (DPZ) hópur, líkan plús ACT hópar. Viðmiðunarhópnum var haldið í miðlinum með 0,2 prósent DMSO og líkanhópurinn var meðhöndlaður með 150 μM AlCl3 (pH 5,8). Líkanið ásamt DPZ hópnum var meðhöndlað með AlCl3 og 8 μM DPZ. Líkanið ásamt ACT hópum var meðhöndlað með AlCl3 og mismunandi styrkleika ACT (200, 100, 50 μM). FRAMKVÆMA(akteósíð úr cistanche jurt)(HPLC hreinleiki meiri en eða jafnt og 98 prósent) var fengin frá Baoji Herbest Bio-Tech Co., Ltd. (Baoji, Kína). AlCl3·6H2O og DPZ voru keypt frá Shanghai Aladdin Bio-Chem Technology Co., LTD. (Shanghai, Kína).

Atferlisgreining

Hreyfingar sebra¦sh lirfa voru skráðar með ViewPoint atferlisgreiningartæki (Zebralab 2018, ViewPoint Life Sciences Co., Ltd.) við 28 gráður. Í stuttu máli, hegðunarbreytur og úrvinnsla niðurstaðna voru í samræmi við aðferðina sem við stofnuðum áðan[13]. Hér var meðalhraði (AS), hraðabreyting (ΔS), batahraði hreyfitruflana (DRR) og svörunare¨ciency (RE, prósent ) valin til að meta bata á hreyfitruflunum í zebra¦sh.

Eftir meðferð frá 3 dpf til 7 dpf, var sebra¦sh lirfum safnað til að mæla AChE og ChAT virkni. Byggt á samskiptareglum framleiðandans var virknin greind með ensímtengdum ónæmissogandi prófun (ELISA) settum (MLBIO biotechnology Co. Ltd., Shanghai, Kína). Og próteinstyrkur mismunandi sýna var ákvarðaður með BCA aðferðinni.

BV-2 frumum var sáð í 6-brunnsskál sérstaklega (n=6/hópur). Eftir meðferð var miðillinn fjarlægður og frumurnar þvegnar þrisvar sinnum með köldu PBS. Síðan strax útsett fyrir fljótandi köfnunarefni til að bæla umbrot frumna. Frumurnar voru safnaðar með köldu 80 prósenta metanóli (1 ml/brunn) og sviflausnin var flutt í 2 ml Eppendorf rör. Til að auðvelda útfellingu próteina, hringið kröftuglega í 1 mín og skilið við 13,000 snúninga á mínútu í 15 mínútur við 4 gráður. Frumusviflausnin var flutt yfir í nýtt 2 ml Eppendorf rör og þurrkuð undir köfnunarefnisstraumi og geymd við -80 gráðu þar til greiningar. Þurrkuðu leifin var blönduð í 150 μL af forkældu 25 prósent asetónítríl. Til að tryggja stöðugleika og nákvæmni raðgreiningarinnar voru jöfn rúmmál (10 μL) af hverju frumusýni sameinuð sem gæðaeftirlitssýni (QC). Við greiningu umbrotsefna voru þessi sýni sprautuð eftir sex frumusýni til að staðfesta stöðugleika þeirra. 1 μL skammtur var sprautaður fyrir HPLC-Q-TOF-MS.

HPLC-Q-TOF-MS greining var gerð á Agilent 1290 HPLC kerfi tengt Agilent 6530 Quadrupole Time-of-Flight (Q-TOF) massarófsmælinum (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, Bandaríkjunum). Aðskilnaðurinn var framkvæmdur á ACQUITY UPLC BEH C18 súlu (2,1×100 mm, 1,7 μm). Hreyfanlegur fasi var samsettur úr 0,1 prósent maurasýru-vatni (v/v; A) og asetónítríl (B).

Hraðinn á §hraða var stilltur á {{0}},4 mL/mín með eftirfarandi ákjósanlega halla skolunarskilyrði: 0 til 2 mín, 5 prósent B; 2 til 20 mínútur, 5 prósent til 95 prósent B (jákvæð jónastilling); 0 til 2 mín., 5 prósent B; 2 til 20 mínútur, 5 prósent til 95 prósent B (neikvæð jónastilling). Rekstrarfæribreytur massarófsmælisins voru stilltar sem hér segir: gashiti, 320 gráður; þurrkunargas, 10 l/mín; úðabrúsa, 35 psi; VCap, 4000 V; brot, 120 V.

Hrágögnin voru rekin undir MassHunter Workstation Software útgáfu B.07.00 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, Bandaríkjunum). Hrá gögnin voru fyrirfram unnin af XCMS pallinum. Aðalhlutagreining (PCA) og aðgreining minnstu ferninga að hluta (PLS-DA) á staðlaðu gögnunum voru gerðar með MetaboAnalyst (https://www.metaboanalyst.ca). Ásamt bókmenntum, mismunandi umbrotsefni (VIP > 1, T-próf ​​P< 0.05)="" were="" identi¦ed="" on="" hmdb="" (https://hmdb.ca).="" finally,="" pathway="" analysis="" was="" conducted="" with="">