Stöðugleiki hvatberahimnu eftir Angelica Sinensis fjölsykru í músablóðleysi

Tengiliður: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Netfang:audrey.hu@wecistanche.com

Ágrip

Til þess að kanna gangverk hvatberahimnustöðugleika með Angelica Sinensis fjölsykru (ASP) í vanmyndunarblóðleysi í músum (AA)ICR var músum skipt af handahófi í stjórn. AA- og ASP-meðhöndlaðir hópar AA-hópsmýsnar voru meðhöndlaðar með 60Co Y og inndælingum í kviðarhol af cýklófosfamíði og klóramfenikóli. Viðmiðunardýrin voru meðhöndluð með blýhlífðargeislun og saltvatnssprautun. Meðhöndluðu AA mýsnar voru gefnar með ASP í 2 vikur. Ofbygging hvatbera í beinmerg sást með rafeindasmásjá, og yfirhimnugeta beinmergskjarna frumna (BMNC) var kannað með flúrljómun litrófsmælinga. Cox og MDH innihald miðilsins var einnig rannsakað í hópunum þremur, Hvatberafjöldi og yfirhimnugeta BMNC í beinmerg minnkaði í AA hópnum samanborið við samanburðarhópinn en batnaði í ASP hópnum samanborið við AA hópnum. Fullkomin hvatberaklofin í hópnum sem fékk ASP seinkaði verulega (P< 0.05)="" as="" compared="" to="" the="" aa="" group.="" we="" conclude="" that="" asp="" might="" improve="" mitochondrial="" membrane="" stabilization,="" and="" suppress="" the="" downregulation="" of="" transmembrane="" potential="" and="" apoptosis="" of="" bmnc="" in="">

Lykilorð: vanmyndunarblóðleysi, Angelica Sinensis fjölsykra, hvatberar, himnugeta, ICR mýs

cistanche þykkni: eykur beinmyndun og eykur beinþéttni

Bakgrunnur

Vanmyndunarblóðleysi (AA) er blóðsjúkdómur þar sem beinmergurinn og tengdar blóðstofnfrumur eru skemmdar sem valda skorti á rauðum blóðkornum, hvítum blóðkornum og blóðflögum. Þessir annmarkar eru hver um sig þekktir sem blóðleysi, hvítfrumnafæð og blóðflagnafæð, í sömu röð, og sameiginlega þekkt sem blóðfrumnafæð. Útsetning fyrir efnum, lyfjum, geislun, geislavirkum efnum, tækjum sem framleiða geislun, sýkingu. ónæmissjúkdómur, erfðir (í 50 prósentum tilfella) og óþekkt orsök geta einnig leitt til þróunar AA.

Hvatberar eru taldir vera „orkuver frumunnar“ vegna þess að þeir framleiða adenósín þrífosfat (ATP) með því að vinna kerfisbundið orku úr næringarsameindum (hvarfefni)[1]. Þar að auki er mtDNA afritað með háum stökkbreytingarhraða þar sem það skortir verndandi histón og skilvirkt DNA viðgerðarkerfi. Stökkbreytingar í mtDNA tengjast blóðsjúkdómum eins og áunninni hliðarblæðingu, mergmisþroskaheilkenni og áunnum AA [2-4]. Fyrri rannsókn okkar 5] sýndi að virkniskerðing í hvatbera öndunarkeðjunni af völdum stökkbreytinga gæti átt þátt í blóðmyndandi bilun hjá AA sjúklingum. Burtséð frá formfræðilegum einkennum frumudauða á lokastigi (apoptotic, necrotic, autophagic eða mítótic), er hvatberahimnu gegndræpi (MMP) oft afgerandi atburðurinn milli lifun og dauða [6]

Samkvæmt hefðbundinni kínverskri læknisfræði hjálpar Angelica Sinensis við að sameina blóðið og efla blóðrás þess [7]. Nýlegar rannsóknir hafa sýnt að útdrættir af Angelica Sinensis hafa andoxunar- og taugaverndandi áhrif [8,9]. Hins vegar er andoxunarvirkni ASP enn óljós. Þessi rannsókn skoðaði snemma frumuskemmdir með því að nota hvatberalýsutímaferil og hvatberahimnustöðugandi áhrif ASP í AA.

cistanche viðbót eykur beinþéttni og eykur beinmyndun

Efni og aðferðir

Flokkun dýra

Heilbrigðar ICR karlkyns mýs, sem vega 18-22 g, 6-8 vikna að aldri, voru veittar af tilraunadýramiðstöð Shandong háskólans (Kína). Dýr voru hýst í hlýlegu, rólegu umhverfi með frjálsan aðgang að mat og vatni. og aðlagast í eina viku áður en tilraunirnar hófust.

Músunum var skipt af handahófi í þrjá hópa: venjulegur hópur, AA hópur og meðhöndlaður hópur, í sömu röð. Vanmyndunarblóðleysislíkanið var búið til eins og áður hefur verið lýst [10].

Í stuttu máli voru mýsnar geislaðar með 2.0Gy 60Coy og síðan meðhöndlaðar með daglegum inndælingum í kviðarhol með 40 mg/kg/dag af cýklófosfamíði og 50 mg/kg/dag af klóramfenikóli næstu þrjá daga. Meðhöndlaði hópurinn var fóðraður í maga með ASP (200 mg/kg/d, samkvæmt kínversku læknaorðabókinni). Samanburðarhópurinn og mýsnar í AA hópnum voru gefnar í maga með lífeðlisfræðilegu saltvatni (10 ml/kg/d) fæðubótarefni. Ennfremur fengu allar mýs staðlað fæði meðan á rannsókninni stóð. Eftir meðferð með ASP eða lífeðlisfræðilegu saltvatni í 2 vikur var músunum fórnað með leghálsi.

Blóðfræðileg skoðun

Halablóðsýni úr hópunum þremur voru tekin á fyrsta og fjórtánda degi, í sömu röð. WBC og blóðflögur voru taldar í útlægum blóðsýnum og Hb gildi ákvarðað. Þegar tilraununum var lokið var músunum fórnað og lærleggsstrok voru undirbúin fyrir mismunatalningu á beinmergskjarnafrumum (BMNCs) (Mynd 1).

Sendingarrafeindasmásjárskoðun

Lærleggsmergurinn var smurður og skorinn í ofurþunna hluta. Hvatberar blóðmyndandi frumna í lærleggmerg voru greindir og taldir með rafeindasmásjá (JEM-2000EX, Japan) undir 50 sjónsviðum.

Hvatbera lysis tímaferill

Hvatberar voru dregin út úr BMNC úr músum í samræmi við samskiptareglur framleiðanda um hvatbera einangrunarbúnaðinn (Pierce Biotechnology Inc., USA). Styrkur mónóamínoxíðasa (MAO) gefur til kynna styrk hvatbera og var ákvarðaður með því að nota 200U/ml hvatbera sviflausn úr 20 sermisræktun, innan 12 klukkustunda á mismunandi tímapunktum (30 mínútna millibili). Innihald cýtókrómoxíðasa (Cox) og malatdehýdrógenasa (MDH) í miðlinum var einnig ákvarðað. Hámarkstímagreining á hvatberahimnu og fylkissértækum ensímstyrk-tíma ferlar sýndu umfang hvatberahimnulýsunar.

Hvatberahimnugeta

Eftir forræktun með MAO eða ASP voru einangruðu hvatberarnir úr hópunum þremur endurblandaðir í 0,5 ml fosfat-bufferuðu saltvatni (Wuhan Boster Biotechnology, Ltd., Kína), og 10 ul af rhodamine 123 vinnulausn ( Sigma-Aldrich, USA) var bætt við og ræktað við 37 gráður C í 5 prósent CO2 í 15 mín. Möguleiki hvatberahimnu var greindur með frumflæðismælingu með því að nota örvunarbylgjulengd 490 nm og losunarbylgjulengd 520 nm.

tölfræðigreining

Tölfræðileg greining var framkvæmd með SPSS 19.0 hugbúnaði. Gögnin eru gefin upp sem meðaltal og staðalfrávik. T-próf ​​nemandans var notað til að bera saman mismunandi hópa. P < 0.05="" var="" talið="" vera="" tölfræðilega="">

cistanche jurt: fyrir betri beingæði

Niðurstöður

Útlægt blóð og BMC talningar

Með því að nota fullsjálfvirkan blóðfrumugreiningartæki kom í ljós að fjöldi útlægra blóðfrumna og BMC í AA músunum minnkaði verulega (P<0.05), indicating="" that="" the="" aa="" mouse="" model="" was="" successfully="" established="" (table="">

Uppbygging hvatbera í vanmyndunarblóðleysi músum

Sendingarrafeindasmásjárskoðun á beinmerg AA músa sýndi að útbygging hvatbera batnaði marktækt með ASP í meðhöndluðum hópi (tafla 2 og mynd 1), sem gefur til kynna að ASP stöðugir hvatberana í AA músum. Stærð og lögun hvatbera í samanburðarhópnum voru eðlileg. Aftur á móti. hvatberar AA hópsins höfðu stækkað kúlubyggingu, ásamt truflunum eða hvarfi á cristae (Mynd 1A-C).

Hvatberahimnugeta (MMP) í vanmyndunarblóðleysi músum

Þar sem rafeindasmásjárskoðun leiddi í ljós skemmdir á hvatberum, ákváðum við áhrif ASP á MMP í AA músum með því að mæla hlutfallslegan mun á flúrljómun Rh 123 meðal hópanna þriggja með því að nota flúrljómunarlitrófsmæli.

Niðurstöðurnar sýndu að Rh 123 flúrljómun beinmergsfrumna í AA hópnum (19,6±3,03) var lægri en í samanburðarhópnum (31,7±2,59, P<0.0). however,="" the="" rh="" 123="" fluorescence="" of="" the="" asp-treated="" aa="" group="" was="" higher="" than="" that="" in="" the="" aa="" group=""><0.0i)(table 2="" and="" figure="" 2),="" indicating="" that="" asp="" facilitated="" the="" recovery="" of="" the="" mmp="" in="" aa="">

Snemma frumuskemmdir hvatberalýsutímaferill

Í samanburðarhópnum tók innihald hvatbera in vitro ræktun Cox og MDH 3,5 klukkustundir að ná hámarki. MAO innihald í ræktuninni breyttist ekki marktækt með tímanum, en innihald COX og MDH jókst smám saman með tímanum, náði hámarki og minnkaði síðan smám saman. Þannig tók allt hvatberainnihald sem frumur losaði um 3,5 klukkustundir að ná klofningshámarki.

COX og MDH topparnir í AA hópnum komu fram við 1,5 klukkustundir, 1,375 U/, 36,732 U/l, í sömu röð. COX og MDH topparnir í hópnum sem fengu meðferð komu fram við 5,5 klst., 6,5 klst., 1,341U/l, 33,994U/, í sömu röð. Tvö sett af gögnum á hverjum tímapunkti voru notuð til tölfræðilegrar greiningar. Eftir 1,5 klst. voru COX og MDH gildi í AA hópnum marktækt hærri en í meðhöndluðum hópnum (P < 0.05).="" þess="" vegna="" seinkaði="" heill="" hvatberaklofi="" í="" sermi="" marktækt="" eftir="" að="" asp="" var="" bætt="" við="" (p="">< 0,05),="" með="" lítilsháttar="" lækkun="" á="" toppnum="" (mynd="">

Umræða

Vanmyndunarblóðleysi (AA) er beinmergsbilunarheilkenni sem einkennist af útlægum blóðfrumnafæð og mergskorti. Sýnt hefur verið fram á stökkbreytingar og óstöðugleika mtDNA í nokkrum sjúkdómum. Truflun á starfsemi hvatbera og fækkun hvatbera getur leitt til minnkunar á mtDNA. Reynt hefur verið að áunnin eyðing á mtDNA í blóðmyndandi hólfinu komi fram við alvarlega blóðfrumnafæð og netfrumnafæð [11]. Byggt á fyrri rannsóknum okkar [5] skoðuðum við hvort ASP geti komið á stöðugleika í hvatberahimnu AA músa.

Angelica Sinensis fjölsykru-járnflétta (APIC) hefur ekki aðeins betri lækningaáhrif á IDA heldur einnig á að bæta við blóði og efla blóðrásina [12]. ASP getur verið gagnlegt til að meðhöndla sjúkdóma framkallaða af hepcidin oftjáningu með því að koma í veg fyrir Janus-kinase (JAK), son mæðra gegn utanfrumu decapentaplegi (SMAD) og 1signal-stýrðum kínasa (ERK) ferlum til að minnka hepcidin tjáningu í IDA rottum [13 ]. Qin J komst að því að ASP getur bætt próteóglýkan (PG) nýmyndun chondrocytes í rottum OA líkani in vivo og IL -1B örvuðum chondrocytes in vitro með því að stuðla að tjáningu aggrecans og GTs sem taka þátt í PG nýmyndun [14].

Í rannsókn okkar var AA músarlíkanið framkallað af blöndu af asetýlfenýlhýdrasíni, röntgengeislum og sýklófosfamíði. AA mýsnar sýndu tölfræðilega marktæka lækkun á hvítfrumum í útlægum blóði, Hb og blóðflögum (tafla 1), og alvarlega lækkun á humeral mergsfrumum og mergbundnum forfrumum, sem eru klínísk einkenni AA. AA mýsnar sem fengu ASP sýndu stigvaxandi aukningu á BM frumum samanborið við AA hópinn. Að auki hafði fjöldi hvatbera í blóðmyndandi frumum einnig áhrif. ASP leiddi til marktækt meiri fjölda hvatbera í meðhöndluðum hópi samanborið við AA hópinn (Mynd 1). Þessar niðurstöður sýndu að ASP gæti stuðlað að fjölgun mergkjarna frumna, aukið fjölda hvatbera og komið á stöðugleika í hvatberahimnu í AA músum.

Hvatberaáverka endurspeglast af mtDNA skemmdum og lækkun á magni mtRNA umrita, próteinmyndun og starfsemi hvatbera, sem gæti leitt til minnkaðrar frumuorku, truflunar á frumuboðum og truflunar á frumuaðgreiningu og frumudauða. Ennfremur gæti skortur á ATP framleiðslu hvatbera stuðlað að óstöðugleika í litningum [15]. Þar sem mtDNA umritar hluti af fjórum af fimm öndunarfléttum í hvatberum, leiða breytingar á mtDNA til hvatberasjúkdóms [16-18]. Fyrir utan hvatberasjúkdóma eru stökkbreytingar í mtDNA tengdar krabbameini, sykursýki. hjarta- og æðasjúkdóma. taugahrörnunarsjúkdómar, blóðsjúkdómar eins og hvítblæði sem og eðlilegt öldrunarferli [19]. Mikilvægt er að stökkbreytingar í mtDNA, sem og fækkun á fjölda mtDNA afrita, geta verið sjúkdómsvaldandi [20, 21]. Skilningur á frumuaðferðum til að viðhalda mtDNA heilleika og afritafjölda er afar mikilvægt þar sem það getur veitt markmið fyrir klínískar inngrip sem miða að því að koma í veg fyrir og meðhöndla blóðsjúkdóma eins og AA. Þessir þættir gætu einnig leitt til minni orkuefnaskipta, sem mun hafa áhrif á sjálfsendurnýjun og sérhæfingu blóðmyndandi stofnfrumna.

Niðurstöður þessarar rannsóknar sýna fram á að ASP getur bætt útbyggingu hvatbera og bælt niðurstýringu á yfirhimnugetu og frumufrumumyndun mergfrumuefna til að lækna beinmergsbilun.

Cistanche & cistanche þykkni: hæfir beinum

Heimildir

1 Chinnery PF, Schon EA. Hvatberar. J Neurol Neurosurg Psychiatry 2003, 74: 1188-1199.

2. Gattermann N. DNA stökkbreytingar í hvatbera í blóðmyndandi kerfinu. Hvítblæði 2004,18:18-22.

3. Gattermann N, Retzlaff S, Wang YL, o.fl. Heteroplasmic punktstökkbreytingar á hvatbera DNA sem hafa áhrif á undireiningu I af cýtókróm c oxidasa hjá tveimur sjúklingum með áunnið sjálfvakið hliðarblastískt blóðleysi. Blood 1997,90:4961-4972.

Kim HR, Shin MG, Kim MJ, o.fl. Hvatbera

4 . DNA frávik beinmergsfrumna frá sjúklingum með vanmyndunarblóðleysi. Korean Med Sci 2008, 23:1062-1067. X Cui, JO Wang, ZG Cai, o.fl. Heill röð

5. greining á DNA hvatbera og lengd telómera í vanmyndunarblóðleysi.Int J Mol Med 2014.34:1309-1314.

6. Chiu TL, Su CC. Tanshinone IA framkallar apoptosis í A549 frumum í lungnakrabbameini í mönnum með því að örva hvarfgjarnar súrefnistegundir og minnka möguleika hvatberahimnu. Int J Mol Med 2010,25:231-236.

7. Liu PJ. Hsieh WT. Huang SH, o.fl. Blóðmyndandi áhrif vatnsleysanlegra fjölsykra frá Angelica Sinensis á mýs með bráðan blóðmissi. Exp Hematol 2010, 38: 437-445.

8. Kuang X, Yao Y, Du JR, o.fl. Taugaverndandi hlutverk 8F af Z-ligustilide gegn blóðþurrðarskaða í framheila í ICR músum. Brain Res 2006,1102:145-153.

9. Xin J.Zhang J. Yang Y, et al.Radi Angelica Sinensis sem inniheldur efnisþáttinn Z-ligustilide stuðlar að taugamyndun fullorðinna til að miðla bata frá vitrænni skerðingu Curr Neurovasc Res 203, 10:304-315.

10. Chen YF, Wu ZM, Xie C, et al. Tjáningarstig IL-6 sem seytt er af beinmergsstómfrumum í músum með vanmyndunarblóðleysi.ISRN Hematol 2013:986219.

11. Hatfill SJ, LaCock CJ, Laubscher R, et al. Arole fyrir hvatbera DNA í meingerð geislunar af völdum mergfrumna og aukahvítblæðis. Leuk Res 1993,17:907-913.

12. Wang PP, Zhang Y, Dai LQ, et al. Áhrif Angelica Sinensis fjölsykru-járnfléttu á járnskortsblóðleysi í rottum. Chin J Integr Med 2007, 13:297-300.

13. Zhang Y, Cheng Y, Wang N, o.fl. Virkni JAK, SMAD og ERK merkjaleiða á hepcidin bælingu með fjölsykrum frá Angelica Sinensis hjá rottum með járnskortsblóðleysi. Food Funct2014.5: 1381-1388.

14. Qin J, Liu YS, Liu J, o.fl. Áhrif Angelica Sinensis fjölsykra á slitgigt in vivo og in vitro: mögulegt kerfi til að stuðla að myndun próteóglýkana. Evid Based Supplement Alternat Med 2013,79476.

15. Gattermann N. DNA stökkbreytingar í hvatbera í blóðmyndandi kerfinu. Hvítblæði 2004,18:18-22.

16. Holt IJ, Harding AE, Morgan-Hughes JA. Eyðing á DNA hvatbera vöðva hjá sjúklingum með hvatbera vöðvakvilla. Nature 1988, 331:717-719.

17. Lestienne P, Ponsot G Kearns-Sayre heilkenni með eyðingu DNA hvatbera í vöðvum. Lancet 1988, 1:885.

18. Wallace DC, Singh G, Lott MT, o.fl. Hvatbera DNA stökkbreyting tengd Lebers arfgengum sjóntaugakvilla.Science 1988,242:1427-1430.

19. Wallace DC. Hvatbera hugmyndafræði um efnaskipta- og hrörnunarsjúkdóma, öldrun og krabbamein: dögun fyrir þróunarlækningar. Annu Rev Genet 2005, 39: 359-407.

20. Clay Montier LL, Deng JJ, Bai Y. Fjöldi skiptir máli: eftirlit með DNA afritafjölda spendýra hvatbera. J Genet Genomics 2009,36:125-131.

21. Rötig A, Poulton J. Erfðafræðilegar orsakir DNA eyðingar hvatbera í mönnum. Biochim Biophys Acta 2009,1792:1103-1108.

cistanche þykkni: eykur beinmyndun og eykur beinþéttni