Aðferð til að bera kennsl á efnafræðileg virk innihaldsefni Cistanche

Tengiliður:joanna.jia@wecistanche.com

Auðkenning efnahluta á Cistanche Deserticola með því að nota X500R QTOF kerfið

Li Yuejie, Cheng Haiyan, Liu Ting, Li Lijun, Jin Wenhai SCIEX, umsóknarmiðstöð Asíu-Kyrrahafs (Shanghai), Kína

Kynning

Cistanche deserticolavar fyrst skráð í "Shen Nong Materia Medica"; það er einnig þekkt sem "Dayun", "Rousong Rong" og "Zong rong." Sem hefðbundið jurtalyf hefur það þá eiginleika að næra nýrna-yang, bæta blóðflæði, virka sem hægðalyf, ónæmisörvun og önnur áhrif [1]. Árið 1983 hófu japanski fræðimaðurinn H. Kobayashi og fleiri að rannsaka efnasamsetninguCistanche Deserticola[2], og síðan þá hefur það orðið vinsælt umræðuefni í kínverskum læknisfræðirannsóknum sem hefur vakið mikinn áhuga bæði innanlands og erlendis á síðustu 30 árum.Cistanche Deserticolatilheyrir flokki plantna sem innihalda fenólglýkósíð, iridoids og þeirraglýkósíð, og lignans og þeirraglýkósíð.

Quadrupole time-of-flight (QTOF) massagreining er viðkvæmt og sérstakt tæki til að bera kennsl á íhluti kínverskra lækninga sem hafa smám saman orðið ómissandi fyrir rannsóknir. Þessi tækni hefur sigrast á hefðbundnum tæknilegum áskorunum með afturskyggnum greiningum á stakum inndælingum sem leyfa útdrátt mikilvægra gagna og umfangsmestu öflun sýnisupplýsinga. Með því að nota nákvæman massa og háupplausn TOF-MS og TOF-MS/MS gagna er hægt að gera samtímis, mjög sértæka markvissa og ómarkvissa eigindlega greiningu. Hins vegar hefur flókið rekstur tækisins og hugbúnaðarnotkun takmarkað útbreiðslu og þróun þessarar tækni verulega. Hér kynnum við nýtt QTOF kerfi sem notar byltingarkennda nýja N-gerð rúmfræði byggða TOF slóð, leiðandi hugbúnað og nákvæma mólþyngdartækni sem er auðveldara að nota við auðkenningu íhluta í kínverskum læknisfræði.

Ávinningurinn af þessari aðferð er sem hér segir:

1. X500R notar endingargóða, iðnaðarviðurkennda Turbo VTM jónagjafa og lofttjaldgas viðmótshönnun, sem hefur sterkan eiginleika gegn mengun;

2. SCIEX OS Software hefur samþætt öflun, vinnslu og skýrslugerð á einum vettvangi; viðmótið er leiðandi, auðvelt að ná góðum tökum og hefur sjálfvirka leiðréttingu með einni snertingu til að tryggja að sérfræðingar með hvaða sérfræðiþekkingu sem er geti fengið hágæða, áreiðanleg gögn;

3. Notkun SCIEX OS hugbúnaðar til að vinna úr gögnum til að bera kennsl á íhluti kínverskra lyfja eru einföld og leyfa hraðan útdrátt gagnlegra upplýsinga, þannig ;

4. Það fær nákvæmari og áreiðanlegri auðkenningarniðurstöður frá kínverskum lækningasöfnum sem innihalda MS/MS litróf;

5. Háupplausnar MS/MS gagnagrunnar um kínverska læknisfræði eru byggðar á "kínversku lyfjaskránni" Part 1 TCM virku innihaldsefnin; þar á meðal tilvísanir í innihaldsefni í lyfjaskránni og virk innihaldsefni í jurtum, það eru næstum 900 efnasambönd

cistanche deserticola sem bætir virkni

Tilraunaferli

1. Notaðu TOF-MS-IDA MS/MS ham, sprautaðu sýni og fáðu samtímis frumforverajónir og samsvarandi aukaróf;

2. Notkun SCIEX OS hugbúnaðar markviss skimun, staðfesting á markefnasamböndum og aukaróf ásamt skimun á kínverskum læknisfræðistöðlum og samsvörunaraðferðum getur aukið nákvæmni og vinnuframleiðni.

3. Verkflæði SCIEX OS Software til auðkenningar sem ekki er markvisst notar bókasafnsleit og fullkomnar óþekktar leitir í ChemSpider til að sannreyna niðurstöður og tryggja að fleiri íhlutir séu auðkenndir með einfaldara verkflæði.

Sýni og forvinnsluaðferð

Dæmi um heimild:

Keypt í Shanghai apótekum í sneiðum formi

Forvinnsluaðferð:

1. Sneiðar voru muldar til að mynda duft;

2. 0.9mg var vegið og sökkt í 3ml metanól í 40mín;

3. Sýnið úr skrefi 2) var ultrasonicated 1 klst;

4. Miðflótta og fjarlæging flotans til að nota sem sýni var framkvæmd.

Skilyrði fyrir vökvaskiljun (LC).

Litskiljunarsúla: XSelect HSS T3, 2,1*150mm, 3,5µm;

Farsímafasi: Stuðningsskolun var notuð

Farsími: A er 0,1 prósent maurasýruvatn-2mM NH4FA

B er 95 prósent asetónítríl-5 prósent vatn-2mM NH4FA

Rennslishraði: 0,5ml/mín

Súluhitastig: 40ºC

Magn sett í: 5µL

Massagreiningaraðferð:

Skönnunaraðferð: TOF MS-IDA-15 MS/MS eigindleg skimun

ESI jónauppspretta færibreytur:

Lofttjaldgas CUR: 35psi; IS spenna: 5500V/-4500V

Upprunshiti: 600ºC

Atómgas GAS1: 55psi; Hjálpargas GAS2: 60psi

Leit í tækjabúnaði:

Með einni snertingu (veljið MS Check neðst til hægri), fullkomlega sjálfvirk TOF-MS og TOF-MS/MS leiðréttingarhamur tryggja að sérfræðingar á hvaða sérfræðistigi sem er geti fengið nákvæmar, áreiðanlegar og endurtakanlegar gögn.

BPCs með jákvæðum og neikvæðum jónum:

Aðferð til að auðkenna efnasambönd

1. Markviss verkflæði til auðkenningar íhluta

1.1: Sameindaformúluleit

Aðeins er krafist nafns efnasambands og sameindaformúlu; þetta er hægt að setja beint inn eða flytja inn með því að nota afrita og líma aðgerð Excel til að búa til vinnsluaðferð

Þegar niðurstöðutafla er búin til er hægt að skoða megindlegar og eigindlegar niðurstöður í sama glugga. Rautt/grænt vísirkerfi er notað til að gefa til kynna massanákvæmni, varðveislutíma, samsætugerð og traust á auðkenningu með samsvörun gagnagrunns.

SCIEX OS hugbúnaður gerir notendum kleift að sía niðurstöður og sýna aðeins þau efnasambönd sem uppfylla viðurkenningarskilyrði og falla innan öryggisbila sem notandinn skilgreinir. Það getur fljótt fundið markvissar niðurstöður í stórum gagnagrunnum.

TCM gagnagrunnur MS/MS litrófs gerir ráð fyrir aukasamsvörun og gefur áreiðanlegri niðurstöður (grár litur í gagnagrunninum gefur til kynna MS/MS gögn)

Bókmenntir innihalda nöfn og sameindaformúlur fyrir fenólglýkósíðvirk efni. Með því að nota ofangreint ferli til að bera kennsl á markhluti, var ákvarðað að sýnið inniheldur 39 tegundir fenólglýkósíða:

Fyrir utan fenóliðglýkósíðvirka efnisþætti, Cistanche inniheldur einnig mikinn fjölda efnasambanda eins og iridoids, glýkósíð og lignans. Niðurstöður auðkenningar eru sem hér segir:

Iridoids, glycosides og lignans auðkenningarlistinn:

1.2: Gagnagrunnsleit:

53 efnasambönd voru fengin úr samsvarandi auðkenningu í TCM gagnagrunninum: 43 jákvæðar jónir, 22 neikvæðar jónir og 12 endurtekningar, taldar upp hér að neðan. Fyrir utan virkt fenólglýkósíð, iridoids, glýkósíð og lignans, Cistanche inniheldur einnig

2. Ómarkviss íhlutagreining

Ómarkviss auðkenning íhluta er hægt að framkvæma með innbyggðu ChemSpider leitaraðgerðinni til að ákvarða flokkun og gerð óþekktra. Til að bera kennsl á íhluti sem ekki er markviss, veldu einfaldlega „ómarkvissan“ háttinn og sameindaformúluleitin mun þróa vinnsluaðferð. Verkflæðið er sem hér segir:

Fyrir algjörlega óþekkt, eru leitarniðurstöður sameindaformúlu sýndar í hámarks vafraglugga í neðri hluta TOF MS massarófsins; með ChemSpider gagnagrunnsleit eru niðurstöður skráðar eftir forgangi og byggingarupplýsingarnar sem fengnar eru í ChemSpider eru sjálfkrafa bornar saman við MS/MS litrófið sem fæst, sem veitir aukaviðbrögð fyrir skjóta auðkenningu.

Samantekt

1. Hröð gagnaöflun í mikilli upplausn; ein inndæling gaf háupplausn TOF MS og MS/MS gögn, með 39 auðkennanlegum fenól glýkósíð virkum þáttum og 16 iridoids, lignans og glýkósíðum;

2. TCM gagnagrunnur með auka litróf veitir viðbótarupplýsingar um samsvörun og hugbúnaðurinn gefur sjálfkrafa upp stig fyrir samsvörun í gagnagrunni. Með því að nota stigið getur maður auðveldlega, fljótt og nákvæmlega greint kínverska læknisfræðihluta;

3. Tækið er einfalt og hefur sjálfvirka leiðréttingu með einni snertingu til að tryggja að sérfræðingar með hvaða sérfræðiþekkingu sem er geti fengið hágæða, áreiðanleg gögn;

4. Nýja SCIEX OS hugbúnaðarútgáfan samþættir gagnaöflun, vinnslu (megindlega og eigindlega), birtingu, skýrslugerð og gagnagrunnsstjórnun. Það leysir erfiðleikana sem margir notendur standa frammi fyrir með leiðandi og auðvelt í notkun viðmót;

5. Bæði markvissa og ómarkvissa skimunarferlið er einfalt og innbyggða aðferðahandbókin hjálpar notendum að búa til aðferðir nákvæmlega og hratt.

Heimildir

1. ISBN 978-7-5067-7337-9, PRC lyfjaskrá [S]. Peking: National Pharmacopeia Commission, 2015

2. Lei, Song Zhihong, Tu Pengfei; Framfarir í rannsóknum í efnasamsetningu plantna af ættkvíslinni Cistanche, "Chinese Herbal Medicine," bindi 34, nr. 5, maí 2003,473-476.