Intratumor Childhood Bóluefnissértækur geisladiskur4+ T-frumu endurköllunarhnitir Antitumor CD8+ T frumur og eósínófílar
Oct 17, 2023
ÁSTANDUR
Bakgrunnur
Æxlishemjandi kerfi CD4+ T-frumna eru enn gróflega skilgreind og leiðir til að virkja CD4+ T-frumuhjálp við ónæmismeðferð við krabbameini skortir. Fyrirliggjandi minnisgeisladiskur4+ T-frumur hafa möguleika á að nýtast í þessum tilgangi. Ennfremur er hlutverk ónæmis sem fyrir er í veirumeðferð, sérstaklega raðbrigða mænusóttarveiru ónæmismeðferð þar sem sértækt ónæmi fyrir mænusóttarbóluefni barna er alls staðar óljóst. Hér prófuðum við þá tilgátu að bóluefnissértækar minni T-frumur í æsku miðla æxlisónæmismeðferð og stuðla að æxlishemjandi verkun mænusóttarveirumeðferðar.
Kostir cistanche tubulosa-antitumor
Aðferðir
Áhrif mænusóttarbólusetningar á mænusóttarveirumeðferð og æxlishemjandi áhrif mænusóttar og stífkrampa innköllunar voru prófuð í músa sortuæxlum og brjóstakrabbameinslíkönum. CD8+ T-frumu og B-frumu útsláttur, CD4+ T-frumueyðing, CD4+ T-frumu ættleiðingarflutningur, CD40L blokkun, mat á ónæmi T-fruma gegn æxli og Eyðing eósínófíla skilgreindi æxlishemjandi kerfi innköllunarmótefnavaka. Gagnasöfn um umrit um pankrabbamein og klínískar rannsóknir á mænusótt veirumeðferð voru notuð til að meta mikilvægi þessara niðurstaðna hjá mönnum.
Niðurstöður
Fyrri bólusetning gegn mænusóttarveiru jók verulega æxlishemjandi virkni mænusóttarveirumeðferðar hjá músum og innköllun á mænusóttarveiru eða stífkrampaónæmi seinkaði æxlisvexti. Intratumor recall-mótefnavaka jók virkni T-fruma gegn æxli, olli merktri æxlisíferð í meðfæddum eitilfrumum af tegund 2 og eósínófílum, og minnkaði hlutfall stjórnandi T-frumna (Tregs). Æxlishemjandi áhrif innköllunarmótefnavaka voru miðlað af CD4+ T frumum, takmörkuð af B frumum, óháð CD40L, og háð eósínófílum og CD8+ T frumum. Andhverft samband milli eósínófíla og Treg undirskrifta sást í krabbameinstegundum The Cancer Genome Atlas (TCGA) og eósínófílaeyðing kom í veg fyrir lækkun á Treg eftir lömunarveiki. Mótefnatítrar fyrir mænusótt fyrir meðferð voru hærri hjá sjúklingum sem lifðu lengur og styrkur eósínófíla jókst hjá meirihluta sjúklinga eftir mænusóttarveirumeðferð
Niðurstaða
Fyrirliggjandi ónæmi gegn mænusótt stuðlar að æxlishemjandi verkun mænusóttarveirumeðferðar. Þetta verk skilgreinir krabbameinsónæmismeðferðarmöguleika barnabóluefna, sýnir fram á gagnsemi þeirra til að virkja CD4+ T-frumuhjálp fyrir geislavarnar-8+ T-frumur og tengir eósínófíla sem æxlishemjandi áhrif CD4+ T frumur.
KYNNING
Þrátt fyrir að CD4+ T frumur séu lykilmiðlarar fyrir aðlögunarhæfni ónæmisvirkni og minni, vantar 1–3 leiðir til að virkja möguleika þeirra á krabbameinsónæmismeðferð. Aðlögunarhæft ónæmisminni gerir öflug ónæmissvörun við sýkla sem áður hafa fundist. Í samræmi við það, muna svör, þ.e. virkjun aðlagandi minnisfrumna með tilheyrandi mótefnavaka, skipuleggja staðbundna meðfædda og aðlagandi bólgu.4 5 Byggt á nýlegri vinnu sem sýnir fram á gagnsemi krabbameinsónæmismeðferðar á geislaeyðandi CD8+ T-frumuviðbrögðum í æxli. , 6 7 við gerðum tilgátuna um að æxlisstaðsett, barnabóluefnistengd CD4+ T-frumu endurköllun gæti haft áhrif á æxlishemjandi virkni CD4+ T-frumna. PVSRIPO (nú þekkt sem 'Lerapolturev'), lifandi veiklaða mænusóttarveiru af tegund 1 (Sabin) bóluefni sem breytt hefur verið með innri ríbósómala inngöngustað manna rhinovirus tegund 2,8 hefur sýnt snemma vísbendingar um virkni við endurtekið glioblastoma (rGBM)9 og endurtekið , óskurðtæk sortuæxli10 11 eftir gjöf í æxli (it). Bólusetning gegn mænusótt (mænusótt) er hluti af hefðbundinni bólusetningaráætlun barna um allan heim, annaðhvort með lifandi veikluðu (Sabin) eða óvirkju (IPOL) bóluefninu. Kóðunarröð PVSRIPO er eins og Sabin bóluefni af tegund 1. Fyrirliggjandi mótefnahvarfefni gegn PVSRIPO/mænusótt í sermi var staðfest hjá öllum sjúklingum sem fengu PVSRIPO meðferð.9 10 12 Þar að auki felur klínísk notkun PVSRIPO í sér fyrri aukningu með þrígildu IPOL að minnsta kosti einni viku fyrir gjöf þess, sem olli hlutleysingu PVSRIPO í sermi eykst mótefni hjá öllum sjúklingum.9 10 Æxlishemjandi áhrif mænusóttarveirumeðferðar ná til skaða á æxlisfrumum og veirusýkingu í mergfrumur sem knýja áfram viðvarandi tegund I interferón (IFN) boð.12–15 Ónæmisminni gegn mænusótt hindrar líklega PVSRIPO afritun innan æxlsins en getur veitt annan verkunarhátt gegn æxli með því að innkalla T-frumur sértækar fyrir mænusóttarbóluefni. Með því að nota músaæxlislíkön af sortuæxlum og brjóstakrabbameini, sýnum við fram á að fyrirliggjandi ónæmi gegn lömunarveiki eykur æxlisvirkni mænusóttarveirumeðferðar með því að virkja æxlishemjandi virkni CD4+ T-frumna. Það muna eftir lömunarveiki eða stífkrampa sem kveikti merkta CD4+ T-frumu, tegund 2 meðfædda eitilfrumu (ILC2) og innstreymi eósínfíkla; miðla æxlishemjandi verkun í gegnum CD8+ T frumur og eósínófíla á CD40L óháðan hátt. Hjá hópum sjúklinga með rGBM sem voru meðhöndlaðir með Lerapolturev (PVSRIPO) tengdist hærra magn mænusóttarmótefna sem eru hlutleysandi fyrir meðferð lengri lifun og vart var við útlæga örvun eósínfíkla hjá sjúklingum með sortuæxli eftir meðferð með Lerapolturev. Þannig samræma mænusóttarveirumeðferð og bóluefnistengdir mótefnavakar æxlismótefnavaka af gerð I og II með CD4+ T-frumu innköllun.
cistanche viðbót kostir-auka friðhelgi
EFNI OG AÐFERÐIR
Ítarlegt efni og aðferðir eru kynntar í viðbótarupplýsingum á netinu.
Mýs, frumulínur, vírusar, fjöl(I:C) og mótefni in vivo
(Tókýó, Japan). Villigerð (wt) (#000664), CD8 útsláttur (k/o) (#002665), B-frumu k/o (#002288), OT-I (#003831) og CD45.1 C57BL/6 mýs (# 002014) voru frá Jackson Laboratory. OT-I og CD45.1 C57BL/6 mýs voru krossaðar til að mynda CD45.1+OT-I mýs. B16.F10 (American Type Culture Collection), E0771 (G. Palmer, Duke University, Bandaríkjunum), E0771hCD155, B16.F10hCD155 og B16. F10.9hCD155-OVA frumur voru ræktaðar í Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, Gibco) með háglúkósa sem innihélt 10% nautgripafóstursermi (FBS) (Sigma-Aldrich). B16. F10.9hCD155-OVA, B16-F10hCD155 og E0771hCD155 frumur voru áður fengnar.12 13 Staðfest var að allar frumulínur væru mycoplasma neikvæðar. PVSRIPO á rannsóknarstofu, músaaðlagað PVSRIPO (mRIPO) og UV-óvirkjað PVSRIPO (UVP) voru mynduð í HeLa frumum og fylgt eftir með stærðarútilokunarhreinsun á flotinu sem myndast eins og áður hefur verið lýst.12 13 PVSRIPO var notað til bólusetningar; UVP var notað til að einangra áhrif mænusóttarkapsíðs (sem inniheldur mænusóttarbóluefnissértækar epitopes); mRIPO er músaaðlöguð útgáfa af PVSRIPO sem var notuð til að prófa full áhrif mænusóttarveirumeðferðar í músum. VacciGrade hámólþunga poly(I:C) (InvivoGen) var blandað samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Mótefni in vivo gegn interleukin (IL)-5 (TRFK5) eða samanburðar (HRPN), CD4 (GK1.5) eða samanburðar (LTF-2), CD40L (MR-1) eða samanburðar (#BP0091), og CD40 (FGK4.5) eða samanburðar (2A3) voru frá Bio X Cell.
Bóluefni, bólusetningar, og það veiru titrar
Nema annað sé tekið fram, bóluefni með PVSRIPO (1×107 skellumyndandi einingar (pfu)/mús), stífkrampa eiturefni (Tet) (MilliporeSigma; 0,5 µg/mús) eða hemocyanin-keyhole limpet (KLH, Sigma) -Aldrich; 100 µg/mús) voru þynnt í fosfat-bufferðri saltlausn (PBS) með alhýdrógeli (1:1; InvivoGen); 50µL af bóluefni var gefið tvíhliða í quadriceps vöðvana. Samsettar bólusetningar á IPOL og Tenivac (Sanofi Pasteur) voru gefnar einhliða fyrir hvert bóluefni. Aukning á bóluefni átti sér stað 14 dögum síðar. Fyrir það veiru títra voru æxli safnað, vigtuð og vélrænt einsleit í 1 ml af PBS. Einsleitni var prófuð með skellugreiningu.16
Tilraunir músaæxlislíkana
Kostir cistanche tubulosa-antitumor
Fyrir B16 ígræðslu voru 2×105 frumur græddar undir húð í hlið karl- og kvenmúsa; fyrir E0771 ígræðslu voru 5×105 frumur græddar í fjórða mjólkurfitupúða kvenkyns músa. hCD155-tg C57BL/6 mýs voru notaðar með mRIPO til að rifja upp mænusóttarveirumeðferð (virk veiruafritun ± ónæmi sem fyrir var); en wt C57BL/6 mýs, sem eru óheimilar fyrir lömunarveiki, voru notaðar með UVP til að einangra áhrif innköllunar á lömunarveiki. Æxli voru meðhöndluð með annaðhvort DMEM eða PBS (farartæki), mRIPO (1×107pfu), UVP (1×108 for-óvirkjað pfu), Tet (0,5µg) og/eða poly(I:C) (30µg) eins og tilgreint er. í fígúrusögum. Meðferðarhópum var slembiraðað eftir æxlisrúmmáli (stærðarmælingar, með jöfnunni L × B × W/2) á fyrsta degi meðferðar. Mýs voru aflífaðar þegar æxlisrúmmál fór yfir 1000 mm3 nema að undangenginni sáramyndun (sem var sjaldgæft og ekki tengt neinni sérstakri meðferð), í því tilviki voru mýs útilokaðar frá rannsókninni. Hópstærðir voru byggðar á kraftmati frá tilraunatilraunum eða fyrri reynslu.12 Æxlismælingar voru gerðar blindar á it-meðferðarhópinn sem byrjaði eftir síðasta skammtinn af it meðferð/mótefnavaka. Mýs með útlægri upphafsæxlisrúmmáli við slembiröðun (1 SD frá meðaltali) voru útilokaðar.
Flæðifrumugreining á æxlum
Æxli voru safnað á tímapunktum sem tilgreindir eru í myndsögum og sundruð í RPMI-1640 miðli (Thermo Fisher) sem innihélt 100 µg/mL Liberase-TM (Sigma-Aldrich) og 10 µg/mL DNAse I (Roche) í 30 mínútur við 37 gráður , fylgt eftir með því að fara í gegnum 70µM (Olympus Plastics) frumusíu, skilvindu og þvott í PBS. Fyrir tilraunir með því að nota Zombie Aqua (BioLegend) voru frumur litaðar með Zombie Aqua í PBS (1:500) eftir leiðbeiningum framleiðanda. Frumusviflausnir voru síðan ræktaðar með 1:50 mús TruStain FcX (BioLegend) fylgt eftir með spjaldsértækri litun í PBS sem innihélt 2% FBS. Litun á innanfrumu umritunarþáttum, frumu og gransími B var náð með því að nota Foxp3/umritunarþátta litunarstuðpúðasettið (Thermo Fisher) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Sjá viðbótarupplýsingar á netinu fyrir upplýsingar um spjöld og mótefni sem notuð eru. Gögnum var safnað á Fortessa X20 á Duke Cancer Institute Flow Cytometry Core Facility; FCS skrár voru greindar með því að nota FlowJo V.10 (BD Biosciences). Hliðaraðferðir eru kynntar í viðbótarupplýsingum á netinu; Samsætuviðmið, flúrljómun mínus eitt viðmið og samanburður við staðfesta neikvæða frumuhópa voru notaðir til að skilgreina jákvæðni.
Klínískar rannsóknir tengdar greiningar
PVSRIPO hlutleysingartítrapróf voru framkvæmd samkvæmt aðferðarlýsingu klínískra rannsókna,9, og gildi fyrir báðar rGBM klínískar rannsóknirnar voru notuð úr innskráningarprófum í klínískum rannsóknum. Áður var tilkynnt um mænusóttartítra I. stigs rGBM (NCT01491893) og lifun var uppfærð frá og með 29. apríl 2020; II. stigs lifun (NCT02986178) var uppfærð frá og með 27. apríl 2021. Sortuæxli (NCT03712358)10 11 hlutfall hvítra blóðkorna sem þátttakendur í klínískum rannsóknum voru fengnir úr klínískum heildar blóðtalningu (CBC) prófum.
Tölfræðileg greining og klínísk rannsóknahópar
Greiningarsértæk tölfræðipróf eru sýnd í samsvarandi myndsögum. GraphPad Prism V.8 var notað til að framkvæma tölfræðilegar greiningar. Tvíhliða dreifnigreining (ANOVA) var notuð til að meta mun á æxlisvexti yfir tíma milli hópa og ANOVA post hoc prófun var notuð til að gera grein fyrir mörgum samanburði nema annað sé tekið fram í myndinni og/eða myndsögunni. Tölfræðilegar líkur á (bls<0.05) was used unless otherwise noted; all p values are two-tailed. All data points reflect individual mice or patients.
NIÐURSTÖÐUR
Lömunarveiki bólusetning eflir mænusótt veirumeðferð
Við prófuðum fyrst mótefnamyndun gegn lömunarveiki (þ.e. sermisbreytingu) í músum sem eru erfðabreyttar fyrir mænusóttarveiruviðtakann CD155 (hCD155-tg) við bólusetningu með IPOL eða PVSRIPO (til að líkja eftir Sabin af tegund 1) með og án alum hjálparefni ( Alhýdrógel; ALH), hluti af leyfilegum bóluefnasamsetningum (td Pentacel, Pediarix, Kinrix).17 45 dagar milli fyrstu bólusetningar og æxlisígræðslu gerðu kleift að koma á ónæmisfræðilegu minni.18 IPOL náði takmörkuðum sermisbreytingu og PVSRIPO bólusetning framkallaði sterkari mótefnasvörun; ALH styrkti mótefnasvörun við báðum (viðbótarmynd S1A, B á netinu). Til að rifja upp mikið magn mænusóttarmótefna hjá sjúklingum með krabbamein9 völdum við PVSRIPO+ALH (hér eftir „mænusótt“) bólusetningu til að ákvarða hlutverk fyrirliggjandi mænusóttarónæmis í PVSRIPO ónæmismeðferð. Æxlislíkön úr músum og músum sem tjá hCD155 voru áður þróuð til að leyfa innkomu og afritun PVSRIPO, og PVSRIPO var aðlagað að músafrumum til að rifja upp veiruafritun í krabbameinsfrumum músa (mRIPO).13 19 Í fyrri rannsóknum á mænusóttarbóluefni, sammynduð músaæxlislíkön, ein innspýting af mRIPO krafðist forritaðs frumudauðapróteins-1 (PD1)/forritaðs dauðabindils-1 blokkunar eða æxlistjáningar ónæmisvaldandi ovalbumin (OVA) próteins til að miðla varanlegum æxlishemjandi áhrifum .12 13 Hins vegar, mRIPO miðlaði varanlegri æxlishemjandi verkun í mænusóttarbólusettum músum í sortuæxlum (B16) og brjóstakrabbameinslíkönum (E0771), miðað við samanburðar (KLH) ónæmisbundna hliðstæða (mynd 1A, B, viðbótarmynd S1C á netinu) . Þannig styrkir fyrri mænusóttarbólusetning æxlishemjandi virkni mænusóttarveirumeðferðar. Veirumeðferð með mænusótt tengist T-frumubólgu í æxlinu.12 13 mRIPO afritun innan æxla minnkaði verulega hjá músum sem hafa verið ónæmir fyrir mænusótt 2 dögum og 5 dögum eftir meðferð (mynd 1C, D), í samræmi við mikið hlutleysandi mótefni titrar (viðbótarmynd S1B á netinu). Samt sáum við aukinn heildarþéttleika ónæmisfrumna (CD45.2+) í mænusóttarmúsum eftir mRIPO meðferð, sem skýrist að mestu af innstreymi hefðbundinna CD4+ T-frumna og mergfruma (CD11b+, Ly6GNeg, F4/80+) (mynd 1E, viðbótarmyndir á netinu S2A, S3). Síðari greining leiddi í ljós að auknar CD11b+ mergfrumur í mænusóttarmúsum sem fengu mRIPO voru eósínófílar (mynd 1F); magn tannfrumna (DC) var ekki marktækt breytt. Hækkaður æxlisdrep þáttur (TNF), kyrninga-átfrumna nýlenduörvandi þáttur (GM-CSF), IL-1 og IL-17A gildi í æxlisjafnhæft og hærra IL-4 og IL{ {51}} í útgræddum æxlistæmandi eitlum (TDLN) ræktum frá mænusóttar bólusettum músum sem voru meðhöndlaðar með mRIPO bentu til mismunandi bólgusvörunar eftir mRIPO meðferð (viðbótarmynd S2B á netinu). GM-CSF og IL-5 eru þekktir hvatar til framleiðslu og nýliðunar eósínófíla,20 sem hugsanlega útskýrir innstreymi eósínófíla í æxli (mynd 1F). Hefðbundnar CD4+ T-frumur og íferð eósínófíla sem svar við mRIPO meðferð á mænusóttarmúsum sáust einnig í sérstakri gerð, E0771 (viðbótarmynd S2C, D á netinu). Þannig undirstrikar fyrirliggjandi ónæmi gegn lömunarveiki bólgusvörun við mRIPO sem tengjast aukinni æxlishemjandi verkun.
Figure 1 Polio immunization potentiates antitumor and inflammatory efficacy of polio virotherapy. (A) Polio or KLH-immunized hCD155-tg mice bearing hCD155-tg B16 or E0771 tumors were treated with DMEM (control) or mRIPO. (B) Survival cut-off was tumor volume >1000mm3; sjá viðbótarmynd S1C á netinu; fulltrúi frá tveimur tilraunum. (C) Skema fyrir tilraunir í D–H. (D) Æxli einsleitur veirutítrar eftir mRIPO; ND, ekki greint. (E) Flæðifrumumælingar á æxlum á 7. degi (n=13/hópur; n=14/hópur mRIPO). (F) Flæðifrumumælingar fyrir mergfrumur og dendritic frumur (DCs: Ly6CNeg, F480Neg, CD11c+, IA/IE+) á degi 11. (G) Virkjunarmerki í TILs á 7. og 12. degi; voru sameinaðar úr tveimur tilraunum; falt meðaltal KLH-DMEM gildi eru sýnd. (H) Tjáning TIL umritunarþáttar á degi 12; sömu sýni og dagur 12 í (A); Sýnd eru dæmigerð gögn um þrjár endurtekningar. Sjá viðbótarmyndir S1–S4 á netinu fyrir víðtæk gögn. (E–H) Post hoc próf Tukey bls< 0.05 versus mock controls (*) or all other groups (#). Data bars and brackets indicate mean+SEM. mRIPO, mouse adapted PVSRIPO; DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; IFN, interferon; i.t., intratumor; KLH, hemocyanin keyhole limpet; OVA, ovalbumin; TIL, tumor-infiltrating lymphocyte; TNF, tumor necrosis factor.
Auknar T-frumur virkar svipgerðir í mænusóttar músum sem fengu meðferð með mRIPO
CD8+ og CD4+ æxlisíferðar eitilfrumur (TILs) í mænusóttarbólusettum músum tjáðu hærra magn af innanfrumu IFN-, TNF og granzyme B eftir mRIPO meðferð, sem gefur til kynna aukna virknistöðu (mynd 1G , viðbótarmynd á netinu S4). TIL frá mænusóttar músum sem fengu mRIPO sýndu einnig aukna tjáningu á umritunarþáttunum T-bet, GATA3 og ROR t; auk örvunar á IRF4, sem stuðlar að virkjun og virkni T-frumna (mynd 1H).21 Tjáning á T-frumu eyðslumerkjunum PD1 og T frumu immúnóglóbúlíni og prótein 3 (TIM3) sem inniheldur músín lén á CD{{20 }} T-frumur í æxlinu og TDLN í mænusóttarbólusettum músum sem voru meðhöndlaðar með mRIPO lækkuðu (viðbótarmynd S2E á netinu). Breytingar á T-frumuvirkjun/aðgreiningarmerkjum voru í samræmi í E0771 brjóstakrabbameinslíkaninu með réttstöðu (netuppbótartölur S2F, G). Þannig muna viðbrögð við mænusótt auka starfrænar svipgerðir í TIL eftir mænusóttarveirumeðferð í æxli.
Mótefnavaka sem munar um lömunarveiki og stífkrampa miðla æxlishemjandi verkun
Reovirus-sérhæfð minni CD8+ T-frumur drepa beinlínis reovirus-sýktar krabbameinsfrumur meðan á krabbameinslyfjameðferð stendur,22 og stífkrampa-sértæk minni CD4+ T-frumur drepa krabbameinsfrumur sem eru sýktar af Listeria sem tjá Tet.23 Að öðrum kosti, Bólgusvörun af völdum endurköllunar T-frumna í minni í æxlisörumhverfinu (TME) gæti einnig styrkt ónæmiseftirlit.6 7 Við gerðum tilgátu um að bólga af völdum innköllunar útskýrði aukna æxlishemjandi virkni mænusóttarveirumeðferðar hjá mænusóttarbólusettum músum síðan veiruafritunar— sem þarf til að framleiða veirumótefnavaka í æxlisfrumum, krabbameinsgreiningu og veirueyðandi bólgu12 - minnkaði verulega í mænusóttarbólusettum músum (mynd 1D). Til að kanna æxlishemjandi áhrif mænusóttar innköllunar í TME notuðum við líkan án hCD155 (mýs og æxla; wt C57BL/6 mýs) og meðhöndluðum æxli með UV-óvirkjuð PVSRIPO (UVP) til að koma í veg fyrir veirusýkingu/afritun. Við tókum til samanburðar við annan bóluefnistengdan inköllunarmótefnavaka, Tet, sem sýnt hefur verið fram á að miðlar æxlishemjandi áhrifum í öðrum rannsóknum.23 24 Meðferð með UVP hafði eingöngu æxlishemjandi verkun í mænusóttarbólusettum músum; Tet meðferð miðlaði tímabundnum æxlishemjandi áhrifum í Tet bólusettum músum (mynd 2A-C, viðbótarskrá á netinu 1). Náttúruleg munaviðbrögð eiga sér stað þegar staðbundin meðfædd ónæmissvörun er við eftirmyndun sýkla. Til að líkja eftir þessu voru Tet eða mænusóttar mýs meðhöndlaðir með poly(I:C) einum sér eða í samsetningu með UVP eða Tet. Bæði UVP og Tet miðluðu áberandi æxlishemjandi áhrifum í þessu samhengi (mynd 2D). Þessar upplýsingar sýna að það muna eftir minni T-frumum í TME - óháð tjáningu / helstu vefjasamrýmanleika (MHC) kynningu á skyldum mótefnavaka þeirra með illkynja frumum - miðlar virkni gegn æxli.
CD4+ T-frumur miðla æxlishemjandi virkni endurköllunarmótefnavaka
Til að ákvarða hvaða aðlögunarhólf skýra æxlishemjandi virkni mænusóttarsvörunar (óháð veiruafritun), bárum við það saman meðferð með UVP í CD8+ T-frumu og B-frumu k/o músum miðað við wt mýs (mynd 3A). CD4 k/o mýs voru ekki prófaðar vegna hlutverks CD4+ T-frumna við að virkja bæði CD8+ T-frumu- og B-frumuviðbrögð við bólusetningu. Eins og búist var við leiddi mænusóttarbólusetning í WT og CD8 k/o músum, en ekki B-frumu k/o músum, til mótefnaframleiðslu gegn PVSRIPO (mynd 3B). B16 æxlisvöxtur var svipaður í hverju erfðafræðilegu samhengi eftir sýndarmeðferð. Miðað við wt mús, var æxlishemjandi verkun UVP í mænusóttar músum takmörkuð í CD8 k/o músum á síðari tímapunktum en var aukin í B-frumu k/o músum (mynd 3C; p=0.007wt á móti B-frumu k/o UVP meðhöndluðum ferlum, tvíhliða ANOVA). Þar að auki, B-frumu k/o kom ekki í veg fyrir innstreymi eósínófíla eða CD4+ TILs (viðbótarmynd S6A á netinu) sem tengist endurköllun mænusóttar (mynd 1). Þannig er æxlishemjandi virkni endurköllunar lömunarveiki að hluta til háð CD8+ T-frumum og takmarkast af B-frumum. Þessar athuganir, ásamt auknum CD4+ TIL eftir mRIPO meðferð í mænusóttarsmituðum músum (mynd 1E), gefa til kynna að CD4+ T frumur ráði æxlishemjandi virkni mænusóttarsvörunar. Þannig prófuðum við næst æxlishemjandi áhrif mænusóttarminnkunar með og án tímabundinnar CD4+ T-frumueyðingar (mynd 3D, sem hefst 1-dagsformeðferð). Þrátt fyrir mikla tæmingu á CD4+ T-frumum í TDLN, þá var eyðing CD4+ T-frumna í æxlinu ófullnægjandi og helst minnkaði reglubundnar T-frumur (Treg) íbúafjölda, sem gæti skýrt hóflega æxlishemjandi áhrif og aukin CD 8+ T-frumuþéttleiki eftir CD4+ T-frumueyðingu (mynd 3D, aukamynd S6B á netinu). Engu að síður, eyðing CD4+ T-frumna eyddi næstum æxlishemjandi verkun UVP í mænusóttarmúsum og kom í veg fyrir nýliðun eósínófíla sem svar við UVP (mynd 3D); Eyðing CD4+ T-frumna kom einnig í veg fyrir örvun gransíms B í CD8+ T-frumum eftir UVP-meðferð (viðbótarmynd S6B á netinu). Samanlagt benda þessar niðurstöður til þess að æxlishemjandi og bólgueyðandi áhrif endurköllunar lömunarveiki séu háð CD4+ T-frumum. Staðfesta að mænusóttarsértækar CD4+ T-frumur nægja til að auka æxlishemjandi virkni mænusóttarveirumeðferðar (með virkri veiruafritun), ættleiðingarflutningi CD4+ T-frumna frá milta mænusóttar bólusettra músa, en ekki Tet, styrkti æxlishemjandi verkun mRIPO (mynd 3E, viðbótarmynd S6C á netinu).
Það minnir á mótefnavakameðferð eykur virkni gegn æxli CD8+ T-frumu
Sýnt var fram á að æxlissértækar CD4+ T-frumur drepa æxlisfrumur beint,25–27 taka þátt í frumudrepandi meðfæddum ónæmisfrumum,28 29 og veita hjálp við áhrifavalda CD8+ T-frumur.1–{ {7}} Í samræmi við hið síðarnefnda komu fram æxlishemjandi áhrif innköllunarmótefnavaka eftir afhendingu til TME (myndir 2 og 3), voru að hluta háð CD8+ T frumum (mynd 3C) og CD{{12 }} TILs höfðu bættar fjölvirkar svipgerðir eftir mRIPO meðferð í mænusóttarbólusettum músum (mynd 1G).
Mynd 2 Mótefnavaka sem munar um lömunarveiki og stífkrampa miðla æxlishemjandi verkun. B16 (A) eða E0771 (B) æxlisberandi mýs bólusettar með lömunarveiki eða Tet voru meðhöndlaðar í æxli með Tet eða UV-óvirkjuð PVSRIPO (UVP). (C) Aldurssamsvörunar ónæmisbundnar eða Tenivac og IPOL bólusettar mýs voru meðhöndlaðar með PBS, Tet eða UVP. (D) Mýs sem voru bólusettar eins og í (A, B) voru meðhöndlaðar í æxli með gervi, fjöl(I:C) (30 µg), fjöl(I:C) + Tet, eða fjöl(I:C) + UVP eins og sýnt er. (A–D) Meðaltal+SEM úr dæmigerðri tilraun með að minnsta kosti tveimur endurteknum er sýnd; stjörnur gefa til kynna próf Dunnetts bls< 0.05 versus all other groups; online supplemental figure S5 presents extended data. IPOL, inactivated polio vaccine; i.t., intratumor; PBS, phosphate buffered saline; UVP, UV-inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid.
Þess vegna reyndum við næst að ákvarða hvort lömunarveiki (UVP) og Tet innköllun eykur virkni CD8+ T-frumna gegn æxli. Í þessu skyni fluttum við CD45.1+OT-I CD8+ T-frumur (OVA-sértækar) til mænusóttar- eða Tet-bólusettra músa og ákváðum áhrif UVP og Tet-framkallaðrar innköllunar á B{ {7}}OVA OT-I TIL svipgerðir (mynd 4A). Örvun endurköllunarsvörunar í æxlinu eftir UVP eða Tet tengdist seinkun á æxlisvexti og aukinni æxlisíferð innrænna CD45.2+ frumna, eósínófíla og hefðbundinna CD4+ T-frumna; Athyglisvert var að magn OT-I T-frumna gegn æxli jókst ekki marktækt (mynd 4B). Hins vegar leiddi greining á æxlisíferð í OT-I CD8+ T-frumum í ljós aukið gransím B, TNF og IFN-; og minni tjáningu á endalausa þreytumerkinu TIM3 eftir lömunarveiki eða Tet innköllun (mynd 4C). Fjölbreytt Th-tengd umritunarþáttatjáning sást bæði í OT-I og innrænum T-frumum, þar á meðal í GATA3, ROR t og BCL6 (mynd 4C). Transcriptomic greining á OT-I TIL eftir að mænusótt hefur afturkallað leiddi í ljós aukna tjáningu gransíma; gen tengd við virkjun T-frumu, virkni eða jafnvægi (Taok3, CD86, CCR5, Egr2, Adgre1, Vdr, IRF4 og BCL6); gen sem tengjast Th1 ónæmi (Ptger4, Fgl2); auk gena sem tengjast Th2 ónæmi (Alox15, Ccl8 og GATA3) (mynd 4D, viðbótarmynd 8C á netinu). Við staðfestum þessar athuganir með því að prófa áhrif innkalla lömunarveiki á innræna TRP 2-sértæk (innrænn B16 mótefnavaka) CD8+ TIL í B16 æxlum án OVA tjáningar. TRP2-sértæk CD8+ TIL sýndu aukið gransím B og minni TIM3 tjáningu eftir lömunarveiki á CD4+ T-frumuháðan hátt (viðbótarmynd S9 á netinu). Saman gefa þessi gögn til kynna bætt frumudrepandi og starfræn svipgerð T-frumna gegn æxli eftir mænusóttarminnkun. Sýnir fram á aukið ónæmi gegn æxli T-frumna eftir að það rifjaðist upp, T-frumur einangraðar úr milta músa sem voru meðhöndlaðar með því muna mótefnavaka (UVP í mænusóttarbólusettu, eða Tet í Tenivac bólusettu) seinkuðu æxlisvexti eftir flutning til barnalegra viðtakenda (mynd 4E). CD4+ T-frumur hjálpa til við að efla virkni gegn geisladiski8+ T-frumum að hluta með því að CD40L sendir til CD40 á frumum sem sýna mótefnavaka,1 en geta einnig hjálpað til við að vera óháðar geislahemjandi CD8+ T frumum af CD40L.31 CD40L blokkun kom ekki í veg fyrir UVP-framkallaða eósínófíla, hefðbundna CD4+ T frumu eða OT-I T innflæði gegn æxli; það kom heldur ekki í veg fyrir æxlishemjandi áhrif (viðbótarmynd S10 á netinu). Að auki endurskoðaði CD40 binding ekki innstreymi eósínófíla sem sást eftir mótefnavakameðferð (viðbótarmynd S10 á netinu). Þannig styrkir það CD4+ T-frumuminnkun æxlishemjandi virkni CD4{77}} T-frumna gegn æxli á CD40L-óháðan hátt.
Mynd 3 CD4+ T-frumur miðla æxlishemjandi verkun mænusóttarminnkunar. (A) Hönnun fyrir tilraunir í (B, C). (B) ELISA fyrir mænusóttarmótefni í hverjum erfðafræðilegum bakgrunni á degi 0 (n=4/hópur). (C) Meðalæxlisrúmmál + SEM eftir sýndarmeðferð (vinstri) eða spotta á móti UVP-meðferð (hægri spjöld) fyrir hvert arfgerðarsamhengi; p gildi eru frá tvíhliða dreifigreiningu (ANOVA) samanburði á UVP við samanburðarhópinn. (D) Mýs sem voru bólusettar með lömunarveiki voru meðhöndlaðar með spotti eða UVP eins og í (A), með inndælingum í kviðarhol (ip) af IgG (viðmiðunar) eða CD4+ T-frumueyðandi mótefni (250 µg gefið á 3 daga fresti frá degi til dags) -1); meðalæxlisrúmmál+SEM og flæðifrumumælingar eru sýndar á CD4 T frumum sem síast inn í æxli og eósínófílum; n=9 á hóp; p gildi er frá tvíhliða ANOVA sem ber saman UVP IgG á móti UVP CD4; (*) gefur til kynna post hoc bls Tukey<0.05. (E) CD4+ T cells from spleens of mice immunized with Tet (control) or polio were adoptively transferred to naïve B16 tumor-bearing recipients 1day-prior to intratumor treatment with DMEM or mRIPO. Mean tumor volume+SEM for mock or mRIPO treated mice for each CD4+ T-cell transfer condition; p values are from two-way ANOVA comparison of the two curves shown in each panel. See online supplemental figure S6 for extended data. DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; i.t., intratumor; UVP, UVinactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; mRIPO, mouse adapted PVSRIPO; Tconv, conventional CD4+ T cells.
Mynd 4 Intratumor recall antigen therapy eflir antitumor CD8+ T-frumuvirkni. (A) Lömunarveiki eða Tet (Tenivac) bólusettar mýs voru græddar með B16-OVA æxlum, fylgt eftir með ættleiðingarflutningi á virkum OT-I (CD45.1+) frumum og meðferð með annað hvort Tet eða UVP . (B) Æxlisrúmmál og frumuflæðisgreining á ónæmisfrumum (B) og TIL undirhópum (C); viðbótarmynd S7 á netinu sýnir hlið á OT-I TIL. (D) Umskrift OT-I TIL sem einangruð voru úr mænusóttar músum 12 dögum eftir meðferð (DMEM eða UVP) voru greind. Miðju- og mælikvarði staðlaðar meðaltalningar eru sýndar fyrir afrit sem voru marktækt frábrugðin eftir rangri uppgötvunartíðni p-gildi í tveimur aðskildum tilraunum (efri spjaldið, n=4/hópur, og n=3/ hópur, í sömu röð ) eða fyrir eiginleika sem skipta máli fyrir (C) sem nálguðust mikilvægi í báðum gagnasettum, þar á meðal gransímum, IRF4, BCL6 og GATA3 (neðsta spjaldið); n=4 endurtekningar/hópur eru sýndar á hitakorti. Viðbótarmynd S8B og C á netinu sýnir staðlaða fjölda fyrir einstök sýni og útbreidd gögn. (E) Æxlisframgangur í barnalegum músum sem fluttar eru til ættleiðingar með T-frumum úr milta músa í AC-C. Meðal æxlisrúmmál+SEM er sýnt; p-gildið er úr tvíhliða dreifnigreiningu. Allar gagnastikur tákna meðaltal+SEM; hitakort í (C) voru staðlað með falt meðaltali ósamræmdu mótefnavakaviðmiðunar; Post hoc próf Tukey bls<0.05 relative to all other groups (#) or respective DMEM control (*). (A–C) pooled results from two experiments; data in (E) were repeated twice. DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; TIM3, T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3; IFN, interferon; i.t., intratumor; OVA, ovalbumin; PD1, programmed cell death protein-1; UVP, UV inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; TIL, tumor-infiltrating lymphocytes; TNF, tumor necrosis factor.
Eósínófílar sem síast inn í æxli tengjast öfugt við Tregs í æxlum í mönnum
Tenging annarra ónæmisvalda gegn æxli með frumuseytingu er lykill CD40L-óháður aðferð CD4+ T-frumna.31 32 Það mænusótt (UVP) og veirumeðferð (mRIPO) ollu stöðugt öflugri íferð eósínfíkla ( myndir 1, 3 og 4), á CD4+ T-frumuháðan hátt (mynd 3D). Innstreymi eósínfíkla í æxli tengist ónæmismeðferðarsvörun,33–35 og nýleg vinna sýndi fram á að CD4+ T frumur fá æxlishemjandi virkni eósínfíkla eftir PD1 blokkun með IL-5.36 Í fyrsta lagi spurðum við hvort þéttleiki eósínfíkla ætti við að CD4+ T frumur eða önnur einkenni í TME æxla í mönnum með því að spyrjast fyrir um gagnasett fyrir krabbamein í The Cancer Genome Atlas (TCGA).37 Með því að nota CIBERSORT38 spá um frumuíferð, 37 sýni úr hverri krabbameinstegund voru lagskipt með tilvist eða fjarveru greindra eósínófíla genatjáningarundirskrifta (mynd 5A, viðbótarmynd S11,12 á netinu); Kímfrumuæxli í eistum (TGCT) og Uveal sortuæxli (UVM) voru útilokuð vegna takmarkaðra tilvika með auðgun eósínfíkla (n<3). While limited association of eosinophil presence was observed with CD8+ or CD4+ T-cell enrichment, eosinophil presence was associated with significantly lower Treg signatures across all cancer types (figure 5A, online supplemental figure S11B, C). Eosinophil presence was associated with longer survival in Low-Grade Glioma (LGG), where eosinophil density was also the highest (online supplemental figure S11A), but not in other tumor types (figure 5B, online supplemental figure S11D). Importantly, significant differences in Treg density on stratification by eosinophil enrichment were observed within several cancer types, with heterogenous relationships between CD4+ and CD8+ T-cell density (online supplemental figure S12). Notably, eosinophil influx was associated with reduced Treg proportions after polio recall in our studies (figures 1E and 4B, online supplemental figure S2). Together, these data may reflect a role for eosinophils in countering tumor-infiltrating Tregs.
cistanche tubulosa-bæta ónæmiskerfið
Smelltu hér til að skoða Cistanche Enhance Immunity vörur
【Biðja um meira】 Netfang:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Ónæmi gegn æxlum af tegund II eftir mRIPO meðferð á mænusóttar músum
Næst reyndum við að ákvarða þýðingu eósínófíla íferðar eftir lömunarveiki í músum. Eósínófílar eru miðlarar ónæmissvörunar af tegund II, sem gegna hlutverki í ónæmi gegn helminth og ofnæmisbólgu.39 Nýliðun eósínófíla getur verið miðlað af öðrum ónæmismiðlum af tegund II, þar á meðal ILC2s, sem samræma Th2 svörun með beinum samskiptum við CD{{4} } T frumur,40 tjá umritunarþáttinn GATA3 og eósínófíla sem ýtir undir cýtókín IL-5, en skortir tjáningu T-frumuviðtaka. Reyndar fjölgaði GATA3+ CD3Neg frumum í æxlum í músum eftir að það rifjaðist upp (mynd 5C), sem hugsanlega endurspeglar ILC2 innstreymi. Næst prófuðum við hvernig eósínófílar hafa áhrif á mænusótt veirumeðferð (mRIPO) í mænusóttar músum og mældum ILC2s beint. Eyðing eósínófíla (með IL-5 hlutleysingu41) dró úr æxlishemjandi áhrifum mRIPO í B16-OVAHCD155-berandi, mænusóttar-ónæmismúsum (mynd 5D, E); minnkaði ekki CD4+ innstreymi T-fruma; en hindrað lækkun á Treg hlutfalli (mynd 5F). Þar að auki leiddi það mænusóttarveirumeðferð (mRIPO) til ILC2 innflæðis (mynd 5F) og breytti ILC2 svipgerðum í mænusóttum músum, með minnkaðri IL-5 og framkallaði PD1 og granzyme B tjáningu (mynd 5G). Burtséð frá hlutverki sínu við að stjórna magni eósínófíla, er IL-5 einnig mikilvægt fyrir sérhæfingu B-frumna.42 Hins vegar, þar sem æxlishemjandi áhrif mænusóttarinnkallunar eru óháð – og hugsanlega á móti – B-frumum (mynd 3C), og vegna stöðugrar sterkrar íferðar eósínófíla við innköllun mænusóttar, þá ályktum við að IL-5 hlutleysing dragi úr æxlishemjandi áhrifum mænusóttarminnkunar með eósínófílaþurrð. Samanlagt sýna þessi gögn æxlishemjandi hlutverk fyrir eósínófíla og nýliðun ILC2s með breyttum svipgerðum eftir mænusóttarminnkun og gefa til kynna að eósínófílar stjórna henni Treg þéttleika.
Fyrirliggjandi mótefni gegn lömunarveiki tengjast lengri lifun eftir Lerapolturev (PVSRIPO) meðferð; útlægar eósínófílar aukast eftir Lerapolturev
In trials of Lerapolturev in rGBM9 and melanoma,10 all patients were confirmed seropositive for anti-PVSRIPO neutralizing antibodies (from polio vaccine crossreacting antibodies) at the time of enrollment, a feature anticipated to correlate with pre-existing PVSRIPO specific CD4+ T-cell immunity. We queried both phase I (n=61)9 and II (n=72 at the time of data cut-off) clinical rGBM cohorts for the relationship between pretreatment Lerapolturev neutralizing antibodies and survival. In both cohorts, patients living >18 mánuðum eftir Lerapolturev (dæmigert miðgildi lifunar í rGBM er ~9 mánuðir) 9 43 hafði marktækt hærri hlutleysandi mótefnatítra fyrir meðferð (mynd 6A, B). Til að takast á við hvort ónæmissvörun af tegund II gæti komið fram hjá sjúklingum sem meðhöndlaðir eru með mænusóttarveirumeðferð eða ekki, greindum við langvarandi CBCs sem eru fáanlegar úr lítilli skammtaaukningarrannsókn á Lerapolturev við endurtekið sortuæxli sem ekki er hægt að skera úr (fasa I, n=12) .10 11 Þessar upplýsingar sýndu aukið magn eósínófíla í blóði eftir Lerapolturev hjá 8/12 sjúklingum (mynd 6C), samhliða fækkun daufkyrninga (10/12 sjúklingar). Þessar niðurstöður gætu bent til þess að ónæmi sem fyrir er stuðli að æxlishemjandi verkun mænusóttarveirumeðferðar og að mænusóttarveirumeðferð framkalli ónæmissvörun af tegund II hjá sjúklingum með krabbamein.
Mynd 5 Eósínófílar tengjast öfugt við Tregs í æxlum í mönnum; mRIPO framkallar ónæmi gegn æxli af tegund II í mænusóttarmúsum. (A) CIBERSORT deconvoluted T-frumu undirmengi í The Cancer Genome Atlas krabbameinstegundum (n=29) lagskipt eftir eosinophil stöðu, p gildi frá pöruðu t-prófi. (B) HRs (lifun) ± 95% CI fyrir eósínófíla stöðu eftir krabbameinstegund; krabbameinstegundir með færri en 20 dauðsföll voru útilokaðar; p gildi eru úr Mantel-Cox log-rank prófinu. (C) Hlutfall af GATA3+ CD3Neg frumum úr gögnum á mynd 4C, p gildi eru úr ópöruðu t-prófi. (D) Hönnun fyrir (E–H): mænusóttarbólusettar, B16-OVAHCD155 æxlisberandi hCD155-erfðabreyttar mýs voru meðhöndlaðar með sýndar- eða PVSRIPO ± eósínófílaeyðingu (and-IL-5 eða stjórna IgG, 1 mg vikulega). Meðalæxlisrúmmál+SEM (E), eósínófíla og ILC2 þéttleiki í æxlum (F), og svipgerð æxlisíferðar ILC2s (lineageNegCD90+ CD127+ CD25+) á móti ættarneikvæðum CD 90+ hólf til samanburðar eru sýndar (G). (E) (*)Tvíhliða dreifnigreining bls<0.05; (F–G) (*)Tukey's post hoc test p< 0.05 versus mock+IgG control. Online supplemental figure S11–S13 presents extended data. IL, interleukin; ILC2, type 2 innate lymphoid cell; i.p., intraperitoneal; i.t., intratumor; OVA, ovalbumin; PD1, programmed cell death protein-1; UVP, UV-inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; Tregs, regulatory T cells; mRIPO, mouse-adapted PVSRIPO.
Kínversk jurt cistanche planta - Antitumor
UMRÆÐA
Þessi vinna sýnir möguleika á ónæmismeðferð við krabbameini af æxlisstaðbundinni CD4+ T-frumu innköllun. CD4+ T-frumuhjálp er lykillinn að því að búa til fullvirkt æxlisgeisladisk8+ T-frumuónæmi1 44 og langtímaminni.2 45 Antitumor CD8+ T-frumur sýndu meiri fjölvirkar svipgerðir eftir innköllun, ættleiðingarflutningur T-frumu frá músum sem fengu endurkallandi mótefnavaka seinkaði æxlisvexti hjá óþekktum viðtakendum og UVP æxlishemjandi áhrif voru slökkt í mænusóttarmúsum sem skorti CD8+ T-frumur. Þetta gefur til kynna að geisladiska4+ T-frumur hjálpi til við að æxla CD8+ T-frumur. Reyndar er CD4+ T-frumuhjálp tengd við stjórnun á þreytumerkjum, aukinni TNF/IFN-/granzyme B tjáningu og Tbet/IRF4 örvun í „hjálpuðum“ áhrifa-T-frumum,3 sem allt áttu sér stað með lömunarveiki veirumeðferð hjá bólusettum músum. Slík T-frumuhjálp er að öllum líkindum margþætt, þar á meðal að „leyfi“ DCs; CD4+ T-frumuseyting cýtókína (td IL-21, IFN-); TME endurforritun; eða með jákvæðum áhrifum nýtekinna eósínófíla á CD8+ T-frumu ónæmiseftirlit.36 46 Hugsanlega vegna virkni mænusóttar hlutleysandi mótefna sem takmarka CD4+ T-frumuvirkjun með því að draga úr aðgengi að endurkallamótefnavaka eða þrálátleiki, B-frumur virkuðu á móti æxlishemjandi áhrifum af innköllun lömunarveiki. Muna eftir lömunarveiki miðlaði stöðugt sterkari æxlis- og bólgusvörun en Tet í rannsóknum okkar. Einn möguleiki er að þetta sé vegna mismunar á styrkleika og/eða gæðum fyrirliggjandi ónæmis sem framkallað er eftir lömunarveiki á móti Tet bólusetningu í líkankerfum okkar. Þessum möguleika til stuðnings voru æxlishemjandi áhrif Tet og UVP svipuð þegar mýs voru bólusettar með klínískt IPOL bóluefni (mynd 2C), sem olli veikara ónæmi gegn mænusótt en mænusóttarbólusetningaraðferðin (PVSRIPO+ALH) sem notuð var fyrir aðrar tilraunir í rannsókn okkar (viðbótarmynd S1B á netinu). Hins vegar er það einnig vel staðfest að eðli mótefnavaka (td epitope þéttleiki, sem er líklega meiri í mænusóttarhylki) getur haft áhrif á aðlögunarhæf ónæmissvörun. 47 48 Æxlishemjandi virkni mænusóttarinnkallunar var aðeins að hluta til háð CD8+ T-frumum. Munamótefnavakameðferð olli innstreymi eósínófíla og ILC2 og eyðing eósínófíla dró úr æxlishemjandi áhrifum í mænusóttarmúsum sem fengu mRIPO. Til að undirstrika mikilvægi samhengis var sýnt fram á að bæði eósínófílar og ILC2s miðla frumfrumandi áhrifum.49 50 Í astma fá CD4+ T frumur eosinophils51 í gegnum ILC2s.52 ILC2s tjá MHC flokk II og fjölga Th2 svörun í helminth sýkingar.40 Í krabbameini er íferð æxlis eósínófíla tengd við ónæmismeðferðarsvörun, 33 34 eósínófílar voru sýndar að styðja CD8+ T-frumu ónæmiseftirlit,46 og ILC2s stuðla að verkun gegn PD1 æxlishemjandi verkun. 35 53 Vinna okkar bendir til þess að æxlishemjandi virkni eósínfíkla, og hugsanlega ILC2s, geti tengst CD4+ T-frumum. Hvernig CD4+ T-frumur endurheimtir eósínófíla í æxlið á enn eftir að vera fullkomlega ákvörðuð, hins vegar gefur nýleg vinna mögulega skýringu með því að sýna að meðan á PD1 blokkun stendur IL-5 seyting með CD4+ T frumur örva stækkun eósínófíla og nýliðun þeirra.36 Þar að auki leiddi frumuefnagreining á einsleitni æxlis og TDLN útgræðslu eftir mænusótt veirumeðferð einnig í ljós aukið eósínófílahvetjandi GM-CSF og IL-5 í mænusóttar músum (viðbótarmynd S2B á netinu ).
Mynd 6 Fyrirliggjandi mótefni gegn lömunarveiki tengjast lengri lifun eftir Lerapolturev (PVSRIPO) meðferð; útlægar eósínófílar aukast eftir Lerapolturev. (A, B) Formeðferð Lerapolturev hlutleysunartítrar í sermi voru mældir í endurteknum glioblastoma (rGBM) fasa I (A, Ph1, NCT01491893) og II fasa (B, Ph2, NCT02986178) rannsóknum. Lifun eftir aðskilnað með miðgildi hlutleysunartítra (1:2000), ásamt meðaltali+SEM títra fyrir sjúklinga sem lifa af
Við uppgötvuðum einnig öfugt samband milli innstreymis eósínófíla og þéttleika eósínófíla í æxlum í mönnum, og munamótefnavakameðferð leiddi til minnkaðra hlutfalls eósínófíla sem voru samhliða innstreymi eósínófíla, sem gefur til kynna gagnkvæmt hlutverk eósínófíla við að stjórna CD4+ T-frumu líffræði. Að ákvarða nákvæmlega hvernig eósínófílar miðla æxlishemjandi áhrifum eftir CD4+ T-frumu muna og hvort ILC2s stuðla að þessu ferli krefst frekari rannsóknar. Mismunur á þéttleika eósínfíkla einn og sér virðist ekki vera forspár í flestum krabbameinstegundum, að hugsanlega undanskildum LGG, þar sem styrkur eósínófíla var einnig hæstur meðal allra annarra æxlistegunda. Athyglisvert hefur verið greint frá neikvæðri fylgni á milli útlægra eósínófíla og glioma gráðu54; og öndunarfæraofnæmi og atopy eru tengd lægri tíðni glioma.55 Við notuðum Th2 skautunarbólusetningaraðferðir, í samræmi við klíníska notkun mænusóttar- og stífkrampabóluefna, til að ráða æxlishemjandi möguleika á endurköllun CD4+ T-frumna. Þó að – með kanónískum hætti – Th1/Tc1, Th2/Tc2 og Th17/Tc17 skautun útiloki hvor aðra, mundu að mótefnavakameðferð í þessu samhengi framleiddi Th1 (CD8+ T-frumuþátttöku, Tbet/IFN- tjáningu í CD{{ 20}} T frumur); Th2 (eosinophil/ILC2 nýliðun, GATA3 tjáning í CD4+ T frumum); og í minna mæli, Th17 (ROR t tjáning í CD4+ /CD8+ T frumum) skautunareiginleika. Þessi gögn bæta við vaxandi sönnunargögnum um að margvísleg CD4+ T-frumuskautun, umfram það sem er í Th1, geti myndað samhæfð og afkastamikil ónæmissvörun gegn æxli. æxlið, eykur það æxlishemjandi virkni mænusóttarveirumeðferðar. Takmörkun þessarar vinnu er að hún var framkvæmd í músakerfum sem fanga hvorki misleitni mænusóttar/Tet minni CD4+ T-frumuviðbragða eða TME í mönnum. Þar að auki, vegna örs vaxtar æxlislíkana sem notuð voru, voru æxli tiltölulega lítil þegar meðferð hófst. Engu að síður, sem bendir til notagildis athugana okkar á menn, fyrir meðferð mænusótt hlutleysandi mótefnatítrar voru hærri hjá sjúklingum með rGBM sem lifðu lengur eftir mænusótt veirumeðferð, og eósínófílamagn í blóði jókst hjá meirihluta sjúklinga með sortuæxli (8/12) eftir meðferð með mænusótt veirumeðferð (Lerapolturev). Sem fyrirvari geta hærri hlutleysandi mænusóttarmótefnatítrar endurspeglað betri virkni ónæmiskerfisins. Þó að við getum ekki útilokað þennan möguleika, sýna þessar upplýsingar að minnsta kosti að ónæmi sem fyrir er útilokar ekki árangursríka mænusóttarveirumeðferð hjá sjúklingum. Athuganir okkar gefa einnig til kynna að margfalda skammta af Lerapolturev gæti verið réttlætanleg til að undirstrika æxlishemjandi áhrif mænusóttarinnköllunar. Reyndar voru svörun hjá sjúklingum með sortuæxli meðhöndlaðir með Lerapolturev í hópi með flestar meðferðir.10 Í ljósi þess hversu mikilvæg CD4+ T frumur eru í ónæmismeðferð með krabbameini, miðar1 32 vaxandi viðleitni að því að nýta CD4+ T-frumuhjálp innan æxla, til dæmis með CD40 örvandi mótefnum,59 eða með peptíðbóluefnum, þar á meðal MHC flokki II epitopes44 sem forgangsraða nýmótefnavaka-sértækum CD4+ og CD8+ T frumur.60 Verk okkar afhjúpa möguleikann á því að nýta bóluefnissértækar minni CD4+ T-frumur til að virkja margþætta æxlishemjandi kerfi CD4+ T-frumna.
HEIMILDIR
1 Borst J, Ahrends T, Bąbała N, o.fl. Cd4+ T frumur hjálpa til við ónæmisfræði krabbameins og ónæmismeðferð. Nat Rev Immunol 2018;18:635–47.
2 Ahrends T, Busselaar J, Severson TM, o.fl. Cd4+ T frumur hjálpa til við að búa til minni CD8+ T frumur með meðfædda og hjálparóháða endurköllunargetu. Nat Commun 2019;10:5531.
3 Ahrends T, Spanjaard A, Pilzecker B, o.fl. CD4+ t-frumur hjálpa til við að gefa frumudrepandi t-frumuáhrifaáætlanir, þar með talið samtengda viðtaka niðurstýringu og aukinni vefjaírás. Ónæmi 2017;47:848–61.
4 Schenkel JM, Fraser KA, Beura LK, o.fl. T-frumu minni. íbúa minni CD8 T frumur kalla fram verndandi meðfædd og aðlögunarhæf ónæmissvörun. Vísindi 2014;346:98–101.
5 Ariotti S, Hogenbirk MA, Dijkgraaf FE, o.fl. T-frumu minni. minnis-cd8+t frumur í húð koma af stað viðvörunarástandi um allan vef sýkla. Vísindi 2014;346:101–5.
6 Rosato PC, Wijeyesinghe S, Stolley JM, o.fl. Veirusértækar minni t-frumur búa til æxli og hægt er að endurnýta þær í æxlisónæmismeðferð. Nat Commun 2019;10:567.
7 Çuburu N, Bialkowski L, Pontejo SM, o.fl. Virkja ónæmi gegn cýtómegalóveiru fyrir staðbundna ónæmismeðferð gegn föstum æxlum. Proc Natl Acad Sci USA 2022;119:e2116738119.
8 Gromeier M, Lachmann S, Rosenfeld MR, et al. Fjölsamsett mænusóttarveiru raðbrigðalyf til meðferðar á illkynja glioma. Proc Natl Acad Sci USA 2000;97:6803–8.
9 Desjardins A, Gromeier M, Herndon JE 2., et al. Endurtekið glioblastoma meðhöndlað með raðbrigða mænusóttarveiru. N Engl J Med 2018;379:150–61.
10 Beasley GM, Nair SK, Farrow NE, o.fl. I. stigs rannsókn á PVSRIPO í æxli hjá sjúklingum með óskurðtækt, meðferðarþolið sortuæxli. J Immunother Cancer 2021;9:e002203.
11 Beasley GM, Brown MC, Farrow NE, o.fl. Fjölbreyta greining veitir forspárvænan ávinning af örumhverfi æxlis sem síast inn í T-frumu og útlæga ónæmisstöðu hjá sjúklingum með sortuæxli. J Immunother Cancer 2022;10:e005052.
12 Brown MC, Mosaheb MM, Mohme M, o.fl. Veirusýking frumna í örumhverfi æxlis miðlar ónæmismeðferð gegn æxlum með sértækum tbk1-irf3 merkjum. Nat Commun 2021;12:1858.
13 Brown MC, Holl EK, Boczkowski D, o.fl. Krabbameinsónæmismeðferð með raðbrigða mænusóttarveiru veldur IFN ríkjandi virkjun á dendritic frumum og æxlismótefnavaka sértækum CTLs. Sci Transl Med 2017;9:eaan4220.
14 Holl EK, Brown MC, Boczkowski D, et al. Raðbrigða krabbameinslyf mænusóttarveira, PVSRIPO, hefur öflug frumudrepandi og meðfædd bólguáhrif, miðlar meðferð í brjósta- og blöðruhálskirtilskrabbameini ígræðslulíkönum í mönnum. Oncotarget 2016;7:79828–41.
15 Yang Y, Brown MC, Zhang G, o.fl. Veirumeðferð með mænusótt beinist að illkynja glioma mergfrumuíferð með dreifðri örveruvirkjun sem umlykur miðtaugakerfið. Neuro Oncol 2023:noad052.
16 Brown MC, Bryant JD, Dobrikova EY, o.fl. Örvun veiru, 7-metýl-gúanósín cap-óháð þýðingu og krabbameinsgreiningu með mítógenvirkjuðum próteinkínasa-víxlverkandi kínasa-miðluðum áhrifum á serín/arginín-ríkan prótein kínasa. J Virol 2014;88:13135–48.
17 Hawken J, Troy SB. Hjálparefni og óvirkt mænusóttarbóluefni: kerfisbundin endurskoðun. Bóluefni 2012;30:6971–9.
18 Swain SL. Myndun og viðvarandi in vivo skautaðra th1 og th2 minnisfrumna. Ónæmi 1994;1:543–52.
19 Mosaheb MMet al. Erfðafræðilega stöðugir mænusóttarveirur virkja dendritic frumur og virkja ónæmi gegn æxli CD8 T frumu. Nat Commun 2020;11:524.
20 Blanchard C, Rothenberg ME. Líffræði eósínófílsins. Adv Immunol 2009;101:81–121.
21 Mittrücker HW, Matsuyama T, Grossman A, o.fl. Krafa um umritunarþáttinn lsirf/irf4 fyrir fullþroska b og t eitilfrumuvirkni. Vísindi 1997;275:540–3.
22 Groeneveldt C, Kinderman P, van Stigt Thans JJC, o.fl. Forframkallað reovirus-sérhæft t-frumuónæmi eykur krabbameinsvirkni reoveirumeðferðar. J Immunother Cancer 2022;10:e004464.
23 Selvanesan BC et al. Listeria gefur stífkrampa eiturefni prótein til brisæxla og veldur dauða krabbameinsfrumna í músum. Sci Transl Med 2022;14:eabc1600.
24 Tähtinen S, Feola S, Capasso C, o.fl. Að nýta ónæmi sem fyrir er til að auka ónæmismeðferð með krabbameinslyfjum. Cancer Res 2020;80:2575–85.
25 Cachot A, Bilous M, Liu YC, o.fl. Æxlissértækar frumuleysandi cd4 t frumur miðla ónæmi gegn krabbameini í mönnum. Sci Adv 2021;7:eabe3348.
26 Ó DY, Kwek SS, Raju SS, o.fl. Intratumoral cd4+ t frumur miðla frumudrepandi eiturverkunum gegn æxli í þvagblöðrukrabbameini í mönnum. Cell 2020;181:1612–25. 27 Quezada SA, Simpson TR, Peggs KS, o.fl. Æxlishvarfandi CD4 (+) T frumur þróa frumudrepandi virkni og uppræta stór staðfest sortuæxli eftir flutning yfir í eitilfrumnahýsil. J Exp Med 2010;207:637–50.
28 Perez-Diez A, Joncker NT, Choi K, o.fl. Cd4 frumur geta verið skilvirkari við æxlishöfnun en CD8 frumur. Blóð 2007;109:5346–54.
29 Corthay A, Skovseth DK, Lundin KU, o.fl. Aðal ónæmissvörun gegn æxlum miðlað af CD4+ T frumum. Ónæmi 2005;22:371–83.
30 Church SE, Jensen SM, Antony PA, o.fl. Æxlissértækar CD4+ T frumur viðhalda áhrifa- og minni æxlissértækum CD8+ T frumum. Eur J Immunol 2014;44:69–79.
31 Lu Z, Yuan L, Zhou X, o.fl. Cd40-Óháðar ferlar T-frumna hjálpa til við frumun CD8 (+) frumudrepandi T eitilfrumna. J Exp Med 2000;191:541–50.
32 Hung K, Hayashi R, Lafond-Walker A, o.fl. Aðalhlutverk CD4 (+) T frumna í ónæmissvörun gegn æxlum. J Exp Med 1998;188:2357–68.
33 Simon SCS, Hu X, Panten J, o.fl. Eósínófílasöfnun spáir fyrir um svörun við sortuæxlameðferð með ónæmiseftirlitshemlum. Oncoimmunology 2020;9:1727116.
34 Mackensen A, Meidenbauer N, Vogl S, et al. I. stigs rannsókn á ættleiðingarmeðferð með T-frumumeðferð með mótefnavaka-sértækum CD8+ T frumum til meðferðar á sjúklingum með sortuæxli með meinvörpum. J Clin Oncol 2006;24:5060–9.
35 Jacquelot N, Seillet C, Wang M, o.fl. Blokkun sam-hamlandi sameindarinnar PD-1 losar um ILC2-háð æxlisónæmi í sortuæxlum. Nat Immunol 2021;22:851–64.
36 Blomberg OS, Spagnuolo L, Garner H, o.fl. IL-5-framleiðandi cd4+ t frumur og eósínófílar vinna saman til að auka svörun við blokkun ónæmiseftirlits í brjóstakrabbameini. Krabbameinsfruma 2023;41:106–23.
37 Thorsson V, Gibbs DL, Brown SD, o.fl. Ónæmislandslag krabbameins. Ónæmi 2018;48:812–30.
38 Newman AM, Steen CB, Liu CL, o.fl. Ákvörðun frumutegunda og tjáningar úr magnvef með stafrænni frumugreiningu. Nat Biotechnol 2019;37:773–82.
39 Lloyd CM, Snelgrove RJ. Ónæmi af tegund 2: auka sýn okkar. Sci Immunol 2018;3:eaat1604.
40 Oliphant CJ, Hwang YY, Walker JA, o.fl. MHCII-miðluð samráð milli meðfæddra eitilfruma í hópi 2 og cd4(+) t-frumna eykur ónæmi af tegund 2 og stuðlar að brottrekstri sníkjudýra. Ónæmi 2014;41:283–95.
41 Moynihan KD, Opel CF, Szeto GL, o.fl. Útrýming stórra stofnaðra æxla í músum með samsettri ónæmismeðferð sem tekur þátt í meðfæddri og aðlagandi ónæmissvörun. Nat Med 2016;22:1402–10.
42 Kouro T, Takatsu K. IL -5- og eósínófíla-miðluð bólga: frá uppgötvun til meðferðar. Int Immunol 2009;21:1303–9.
43 Barthel FP, Johnson KC, Varn FS, o.fl. Lengdar sameindaferlar dreifðs glioma hjá fullorðnum. Náttúra 2019;576:112–20.
44 Alspach E, Lussier DM, Miceli AP, et al. MHC-II nýmótefnavakar móta æxlisónæmi og svörun við ónæmismeðferð. Náttúra 2019;574:696–701.
45 Laidlaw BJ, Craft JE, Kaech SM. Margþætt hlutverk CD4 (+) T frumna í CD8 (+) T frumuminni. Nat Rev Immunol 2016;16:102–11.
46 Arnold IC, Artola-Boran M, Gurtner A, et al. GM-CSF-IRF5 merkjaásinn í eósínófílum stuðlar að ónæmi gegn æxlum með því að virkja T-frumuviðbrögð af tegund 1. J Exp Med 2020;217:e20190706.
47 Bachmann MF, Rohrer UH, Kündig TM, o.fl. Áhrif mótefnavakasamtaka á svörun B frumna. Vísindi 1993;262:1448–51.
48 Link A, Zabel F, Schnetzler Y, o.fl. Meðfædd ónæmi miðlar eggbúsflutningi agna en ekki leysanlegra próteinmótefnavaka. J Immunol 2012;188:3724–33.
49 Trabanelli S, Chevalier MF, Derré L, o.fl. Hlutverk ilc2s fyrir og gegn æxli. Semin Immunol 2019;41:101276.
50 Simon SCS, Utikal J, Umansky V. Andstæð hlutverk eósínófíla í krabbameini. Cancer Immunol Immunother 2019;68:823–33.
51 Lloyd CM, Hessel EM. Virkni T-frumna í astma: meira en bara T (H) 2 frumur. Nat Rev Immunol 2010;10:838–48.
52 Smith SG, Chen R, Kjarsgaard M, et al. Aukinn fjöldi virkjaðra meðfæddra eitilfrumna úr hópi 2 í öndunarvegi sjúklinga með alvarlegan astma og viðvarandi eósínfíkn í öndunarvegi. J Allergy Clin Immunol 2016;137:75–86.
53 Moral JA, Leung J, Rojas LA, o.fl. Ilc2S magnar PD-1 blokkun með því að virkja vefjasértækt krabbameinsónæmi. Náttúra 2020;579:130–5.
54 Huang Z, Wu L, Hou Z, o.fl. Eósínófílar og önnur lífmerki í útlægum blóði í flokkun glioma: forrannsókn. BMC Neurol 2019;19:313.
55 Ostrom QT, Lu D, Lu R, o.fl. Algengi sjálfsofnæmis og atopy hjá fullorðnum í Bandaríkjunum með glioblastoma og heilahimnuæxli. Neuro Oncol 2022;24:1807–9.
56 Tuzlak S, Dejean AS, Iannacone M, o.fl. Það hjálpar til við að endurskipuleggja frumuskautunina úr stökum frumudrepum yfir í flókin. Nat Immunol 2021;22:1210–7.
57 Nishimura T, Iwakabe K, Sekimoto M, et al. Sérstakt hlutverk mótefnavaka sértækrar T hjálpar tegund 1 (Th1) og Th2 frumna við útrýmingu æxla in vivo. J Exp Med 1999;190:617–27.
58 Lorvik KB, Hammarström C, Fauskanger M, et al. Æxlissértækar Th2 frumur útrýma æxlum með því að koma af stað bólguónæmissvörun á staðnum. Cancer Res 2016;76:6864–76.
59 Vonderheide RH. Cd40 örva mótefni í ónæmismeðferð með krabbameini. Annu Rev Med 2020;71:47–58. 60 Ott PA, Hu Z, Keskin DB, o.fl. Ónæmisvaldandi persónulegt nýmótefnavaka bóluefni fyrir sjúklinga með sortuæxli. Náttúra 2017;547:217–21.
