Ónæmisbælandi þættir í Cistanche Salsa

Tengiliður: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Netfang:audrey.hu@wecistanche.com

Shinjiro MARUYAMA," Koji YAMADA, Hirofumi TACHIBANA

Cistanche salsa(CAMever) G.Beck, Orobanchaceae er sníkjudýr planta sem er notuð sem austurlenskt lækningatonic í Japan. Í fyrri rannsókn okkar komumst við að því að C, salsa þykkni jók framleiðslu bæði IgM og IgG í Ivmph hnúta eitilfrumum. Ennfremur, C, salsa skilunarvatn (CSD) framleitt með því að nota skilunarhimnu með a3.500-Da mólþungaskerðing jók IgM framleiðslu í B-frumulínu manna BALL-1; auk þess olli það smávægilegri frumufjölgun. Hins vegar olli CSD vaxtarhömlun ásamt frumudauða í Burkitt eitilfrumufrumulínu Namalwa manna. Þessar niðurstöður gefa til kynna mögulega tilvist virkra innihaldsefna í CSD sem eru sértæk fyrir eitilfrumur. Enn sem komið er hafa efnafræðilegir eiginleikar þessara innihaldsefna ekki verið skýrðir. Í þessari rannsókn könnuðum við efnafræðilega eiginleika virku innihaldsefnanna í CSD. Bæði ofangreind starfsemi í B-frumulínum var ekki óvirkjuð með autoclave meðferð á CSD. Með því að nota gel síunarsúluskiljun komumst við að því að toppar virku brotanna voru þéttir í mismunandi brotum. Niðurstöður okkar benda til þess að það séu að minnsta kosti 2 tegundir af virkum innihaldsefnum í CSD og þær geta verið fjölsykrur þar sem þær eru vatnsleysanlegar og hitaþolnar efnisþættir með mikla mólþunga.

Leitarorð: Cistanche salsa, hár mólþungi, IgM, vaxtarhömlun.

Kynning

Cistanche salsa(CA Meyer) G.Beck, Orobanchaceae er sníkjudýr planta sem er notuð sem austurlensk lækningatonic í Japan. Í Kína er þessi planta mikilvægt hefðbundið lyf notað til að meðhöndla nýrnaskort og taugaveiki. Með in vitro rannsóknum höfum við þegar greint frá áhrifum C. salsa á ónæmiskerfið. Fyrst. við sýndum fram á að C. salsa þykkni jók framleiðslu á IgM og IgG í eitilfrumum manna. Í öðru lagi sýndum við fram á að C. salsa skilun (CSD) framleidd með því að nota 3,500-Da mólþunga skerðingarskilunarhimnu aukið IgM framleiðslu í B-frumulínu manna BALL-1; auk þess olli það frumufjölgun að litlu leyti.2Ennfremur hefur CSD öfug áhrif þar sem það framkallar vaxtarhömlun ásamt frumudauða í eitilfrumu Burkitt's eitilæxli mannsins, Namalwa.3)Þessar niðurstöður bentu til þess að þessi áhrif CSD tengdust virkjun B-frumna, en apoptosis stafaði af skorti á öðrum merkjum sem eru nauðsynlegar fyrir sérhæfingu B-frumna, svo sem frumu og frumu-snertingu; Hins vegar voru efnafræðilegir eiginleikar CSD ekki útskýrðir í neinum af fyrri rannsóknunum. Þess vegna, í þessari rannsókn, könnuðum við efnafræðilega eiginleika virku innihaldsefnanna í CSD.

Efni og aðferðir

CSD var útbúið með sömu aðferð í fyrri rannsókn okkar. CSD var leyst upp í fosfat-bufferuðu saltvatni (PBS) við 20 mg/ml. Tilbúna lausnin (0,8 ml) var látin fara í gegnum síu (0.22 um) áður en hún er borin á og síðan skoluð með sömu lausn í gegnum súlur sem innihéldu TOYOPEARL HW-40F (1.0×96.5 cm; Tosoh Corp, Japan),TOYOPEARL HW-55F(1.0 × 98.0 cm; Tosoh Corp.,Japan) , og Sephacryl S-400HR(1.0×98.0 cm; GE Healthcare UK Ltd.,.England); og 1 ml (30 dropar) brotum var síðan safnað. Til að ákvarða tómarúmmál hlaupanna og áætlaða mólþunga (MW) skiptu innihaldsefnanna, blátt dextran (BD) (Sigma-Aldrich Japan KK, Japan); og dextran af þekktu MW sem fæst frá Leuconostoc spp. (Sigma-Aldrich Japan KK, Japan), þ.e. af MW2, 000kDa(D1),500kDa(D2),70 kDa (D3) og 6 kDa (D4); og sýanókóbalamín (VB12, MW:1355.4) (Wako Pure Chemical Industries Ltd., Japan) voru notuð. Heildarsykur- og próteininnihald hvers hluta var ákvarðað með fenól-brennisteinssýruaðferðinni og Lowry-aðferðinni með PIERCETM bicinchoninic acids (BCA) próteingreiningarsettinu (Thermo Fisher Scientific Inc., Bandaríkjunum), í sömu röð. Glúkósi og albúmín úr nautgripasermi voru notuð sem staðlar fyrir sig. Ennfremur var gleypni við 320nm(A:2o) hvers hlutar mæld. Skolunartoppar bláu dextrans og sýanókóbalamíns voru ákvörðuð með gleypnigildi þeirra við 260 nm, og toppar dextrana af þekktu MW voru ákvörðuð með fenól-brennisteinssýruaðferðinni. CSD var sjálfkrafa við 120 gráður í 20 mínútur til að meta hitastöðugleika þess. Í lífgreiningum var frumuræktun og mæling á IgM gerð með sömu aðferð og fyrri rannsókn okkar.

Cistanche salsa þykkni

Niðurstöður og umræður

Mynd 1 sýnir hlaupsíunarsúluskiljun CSD á HW-40F. Frá mynd la var MW virku innihaldsefnanna metið vera meira en 6 kDa miðað við dextranmerkið D4. Ennfremur voru bæði CSD-virknin, þ.e. auka IgM-framleiðslu og örva vaxtarhömlun, ekki óvirkjuð með autoclave-meðferð (Mynd 2), þó að sum innihaldsefnin hafi safnast saman og týndust eftir að CSD var farið í gegnum 0.{{6} }um sía. Skolunarmynstur CSD og autoclaved CSD voru næstum eins, hins vegar var hlutfallsleg virkni til að auka IgM framleiðslu í autoclaved CSD lægri en ómeðhöndlað CSD. Sumar af ástæðunum virðast vera að safnefnin hafi haldið virku efnisþáttunum eða sum virku innihaldsefnin hafi verið óvirkjuð. Niðurstöður litskiljunar á HW-55F sýndu mögulega tilvist 2 tegunda ónæmisstýrandi þátta: sá fyrri, einbeitt í fr. nr.32. var virkur efnisþáttur með mikla mólþunga (HCS) sem gæti aukið IgM framleiðslu, en sá seinni, einbeitt í fr. nr.50, var virkur efnisþáttur með miðmólþunga (MCS) sem gæti hamlað frumufjölgun (mynd 3). Hins vegar voru topparnir sem fengust fyrir bæði HCS og MCS (fr.nr.32 og 50 í sömu röð) ekki eins skarpir og þeir fyrir dextrana af þekktum MW (gögn ekki sýnd). Þessar athuganir benda til þess að það séu aukaafurðir sem myndast tilbúnar við undirbúning CSD, fjölliður virkra innihaldsefna sem auðvelt er að eyða og samanstanda af mörgum einingum, eða ýmis virk efni sem hafa mismunandi upprunalega MW. Skolunarmynstrið á litskiljunum sýna að það er ekki auðvelt að fá hrein efni úr HCS og MCS þar sem það virðast vera ýmis efni sem hafa aðeins mismunandi MW eins og fyrr segir. Þó að báðar séu blöndur virkra efna, virðist sem HCS samanstendur af innihaldsefnum með MW yfir 70 kDa, en MCS samanstendur af innihaldsefnum MW yfir 6 kDa. HCS var skolað út á HW-55F í broti sem var utan aðskilnaðarsviðsins. Á Sephacryl-S400. var hluti af HCS(fr.nr.36) skolaður út í sama broti og D1 merkið, sem er af MW 2,000 kDa (Mynd 4). Almennt eru fjölsykrur og prótein tekin með í reikninginn sem vatnsleysanleg há MW innihaldsefni í plöntuþykkni. Þar sem næstum öll virk prótein eru óvirkjuð með hitameðferð virðast þau vera fjölsykrur. Hins vegar, Park et. al. hafa greint frá hitastöðugu frumudrepandi smápróteini sem kallast viskóeitur, sem er framleitt úr mistilteins (Viscum album L., Viscaceae) útdrætti.4Ennfremur hefur verið sýnt fram á að viskóeitur auka ónæmisbælandi virkni náttúrulegra drápsfrumna úr mönnum.5Á mynd 3, MCS, sem hefur lægra MW, sýnir hærra innihald próteina. Miðað við þessar staðreyndir gæti MCS verið próteinbundið fjölsykra8 eða gæti verið hitastöðugt prótein eins og viskóeiturefnin. Þessar niðurstöður sýna að 2 virku innihaldsefnin geta verið fjölsykrur. Annars gæti MCS verið hitastöðug prótein.

Heimildir

1) Deng, M., Zhao, JY, Ju, XD, Tu, PF, Jiang, Y., Li, ZB: Verndaráhrif tubuloside B á TNF alfa-framkallaða apoptosis í taugafrumum.Acta Pharmacol. Sin.,25, 1276-1284,2004.

2) Maruyama, S., Yamada, K., Tachibana, H.:Cistanche salsa þykkniaukin IgM framleiðslu í B-frumulínu manna, BALL-1.J. Trad. Med.,24,209-211,2007.

3) Maruyama, S., Yamada, K., Tachibana, H:Cistanche salsaþykkni framkallað apoptosis í Burkitt's eitilfrumufrumulínu Namalwa. J.Trad. Med.,25,24-27,2008.

4) Garður. JH,Hyun, CK,Shin HK: Frumueitrandi áhrif efnisþáttanna í hitameðhöndluðum mistilteini (Viscum album).Cancer Let, 139, 207-213,1999.

5) Tabasco, J., Pont, F, Fournic, JJ, Vercellone, A.: Mistilteinsviskóeitur auka frumueiturhrif sem miðlað er af náttúrulegum drápsfrumum. Eur.J. Biochem.,269,2591-2600, 2002.

6) Fisher, M., Yang, LX: Anticancer effects and mechanisms of poly Saccharide-K (PSK): implications of cancer immunotherapy.Anticancer Res.,22,1737-1754,2002.

cistanche bætiefni