Hvernig eykur vatnsútdrátturinn úr Cistanche meltingarvegi í þörmum og bætir hægðatregðu?

Shuai Yan,1,2 Yin-zi Yue,1 Xiao-peng Wang,1 Hong-li Dong,1 Shu-guang Zhen,1 Ben-sheng Wu,1 og Hai-hua Qian3

Sagt var að hefðbundin kínversk læknisfræði hafi góð áhrif við meðhöndlun á hagnýtri hægðatregðu. Í þessari vinnu var reynt að sanna áhrif vatnskenndra útdrátta af HerbaCistanche(AEHC) á STC meðferð og til að ákvarða mögulega aðferðir með loperamide-induced slow transit constipation (STC) líkani. HPLC var framkvæmt til að auðkenna og staðfesta lífvirku efnin í AEHC. Það kom í ljós að AEHC dró úr STC svörun á grundvelli aukins saurmagns, rakainnihalds og flutningshraða í þörmum, sem og sermisþéttni GAS, MTL, SS og CGRP. Prótein- og mRNA-magn c-settsins, merkingar millivefsfrumna Cajal (ICC), jukust einnig. Á sama tíma jókst aðeins próteinmagn SCF, bindils ckit. Greining á gögnum okkar benti til þess að AEHC gæti augljóslega bætt virkni ICC með merkjaleið sem felur í sér PI3K, SCF og c-kit og aukið ristilhreyfingarvísitölur eins og GAS, MTL, SS og CGRP. Það er áhugavert að hafa í huga að AEHC virtist hafa áhrif á hægðatregðu, svo frekari tilraunir eru nauðsynlegar til að skýra nákvæma aðferðina sem um ræðir.

Fyrir frekari upplýsingar vinsamlega hafið samband við:Joanna.jia@wecistanche.com

acteoside í cistanche hafa góð áhrif á andoxunarefni

1. Inngangur

Hægðatregða er algengur starfhæfur meltingarfærasjúkdómur og lýðheilsuvandamál sem einkennist af stöðugt erfiðum, sjaldgæfum eða ófullkomnum hægðum [1]. Algengi hægðatregðu er mismunandi frá 0,7 prósentum til 81 prósenta um allan heim, sérstaklega hjá öldruðum [2, 3]. Slow transit constipation (STC) er algeng kvörtun í meltingarvegi meðal 13-37 prósent sjúklinga með langvarandi meðferðarþolna hægðatregðu [4, 5]. Faraldsfræðilegar upplýsingar benda til hærri tíðni STC meðal ungra kvenna en karla [6]. STC veldur óleysanlegri hægðatregðu, sýnir lítil svörun við íhaldssamri meðferð og tilhneigingu til taugahrörnunarsjúkdóms. Ekki eins einfalt og hagnýtur sjúkdómur, það kallar á ífarandi og árásargjarn meðferð [7].

Fjöldi núverandi efnalyfja eins og osmótísk eða seytandi hægðalyf og fylliefni eru almennt notuð til að

meðhöndla hægðatregðu [8], þó notkun þeirra sé takmörkuð vegna mikillar eyðslu og aukaverkana á kvið eins og sársauka, krampa og uppþemba [9]. Sem stendur er stjórnun á meltingarvegi aðaláherslan í hægðatregðameðferðum. Cisapríð var fyrst framleitt sem aukaefni til að meðhöndla magasjúkdóma en var síðar hætt vegna hættu á hjartsláttartruflunum [10].

Tegaserod er sértækur 5-hýdroxýtryptamín viðtakablokki sem getur örvað peristalsis og seytingu í þörmum [11, 12]. Prucalopride er ný díhýdróbensófúran karboxamíðafleiða og 5-HT viðtakaörvi með mikla sértækni og sérhæfni, sem getur aukið hreyfanleika maga, smágirnis og ristils og virkar hraðar í gangverki [13–15]. Sem prostaglandín E1 afleiða getur lubiprostone valið virkjað CIC rásina til að stuðla að seytingu í meltingarvegi og auka áhrif flutnings í þörmum [16].

Hreyfanleiki í hægðatregðu er útbreitt vandamál, en orsök þess er ekki enn ljós. Engu að síður hafa sannfærandi sannanir sýnt fram á framlag millivefsfrumna Cajal (ICC) til meingerðar hægðatregðu [17]. ICC finnst á milli taugaenda og sléttra vöðvafrumna í meltingarvegi. ICC er almennt viðurkennt sem gangráðsfrumur fyrir virkni í meltingarvegi og sem miðlari tauga- og vöðvasendingar [18]. Rannsóknir hafa gefið til kynna að ICC þéttleiki í ristli sjúklinga með hægðatregðu með hægfara flutningi sé ótrúlega lægri en hjá venjulegum sjúklingum [19]. Í samræmi við það getur minnkandi fjöldi ICC leitt til skorts á hægbylgjuvirkni, sem hefur þannig áhrif á samdráttarsvörun og framkallað seinkun á flutningi hjá hægðatregðasjúklingum. Í þessu tilviki getur mótun ICC með því að nota lyf skipt sköpum til að lækna hæga hægðatregðu.

Ýmis náttúrulyf og hefðbundin kínversk for- Mula hafa nýlega vakið athygli sem nýmóðins lækningalyf til meðferðar á langvinnri hægðatregðu vegna bættrar hægðaframleiðslu [20, 21]. HerbaCistancheer hefðbundið jurtalyf sem notað er við meðhöndlun á langvinnum nýrnasjúkdómum, ófrjósemi kvenna, mikilli tíðahvörf og getuleysi [22, 23]. HerbaCistanchekemur í veg fyrir apoptosis í heila taugafrumum með því að tjá frumudauðatengda þætti og taugakerfisþætti í MES23.5 frumum [24]. Herba Cistanche hefur einnig sýnt fram á lyfjafræðilega möguleika við meðferð á Yang-Qi nýrna-Yang skortheilkenni. Nýleg rannsókn hefur sýnt fram á að HerbaCistancheeykur hvatbera öndun og glútaþíon andoxunarefnastöðu í H9c2 hjartavöðvafrumum [25].

TCM telur að hægðatregða hafi náið samband við nýru. Nýrun opnast við ytri kynfæri og endaþarmsop og stjórnar þvagi og hægðum. Flutningur úrgangs byggir á eflingu nýrna qi og næringu nýrna yin. Ef nýra yang er ábótavant eða eldlífshliðið deyr út, mun köld þrengsli í þörmum leiða til stöðnunar úrgangs. Hægðatregða stafar einnig af þurrum hægðum þar sem skortur á nýrnakjarna nær ekki að mynda nægan vökva [26].

HerbaCistancheer algeng sameinandi jurt, sem er sæt og sölt á bragðið og hlý í náttúrunni. Eignargirni í þörmum og meridíum nýrna, getur það styrkt nýrna-yang og vætt þarma til að létta hægðatregðu. Þessi eina jurt og kínverska lyfjablöndur hennar hafa verið mikið notuð til að meðhöndla hægðatregðu með ótrúlegri virkni [27].

Í Kína, áhrif HerbaCistancherætur á hægðatregðu hafa verið skráðar [28, 29] og vísað til í kínversku Materia Medica Shen Nong sem „þurrkaðir safaríkir stilkarCistanchetegundir“ [30]; hins vegar vísindaleg sönnun á áhrifum HerbaCistancherætur á hægðatregðu hafa ekki verið til hingað til, klínískt virkur skammtur er 20 g á dag í kínverska lyfjaskránni og klínísk áhrif aukast ekki frekar með skömmtum.

Síðan HerbaCistancheer svo af skornum skammti [31], að staðla klíníska skammta þess til meðferðar á STC með tilraunarannsókn kemur ekki aðeins í veg fyrir misheppnaða meðferð vegna ófullnægjandi skammta heldur heldur sjúklingum einnig frá efnahagslegu tapi og jafnvel lyfjamisferli vegna ofnotkunar. Við vonum

niðurstöðurnar gætu lagt vísindalegan grunn að nýjum lyfjum við hægðatregðu. Þess vegna er mikilvægt að rannsaka vatnskennda Herbahjá Cistanchevirkni þarmaeflingar og virkni þess á ICC í þessari rannsókn.

2. Efni og aðferðir

2.1. Framleiðsla á vatnskenndu útdrætti af Herba Cistanche.

Allt HerbaCistanchevoru keyptir frá Nanjing Haichang Chinese Medicine Group Co., Ltd. (Nanjing, Kína), sem voru safnað, safnað og unnin í samræmi við hefðbundnar þjóðernisfræðilegar venjur frá plantekrum í Sinkiang svæðinu í Kína. Prófessor Tu Lin Lu við Nanjing háskólann í kínverskri læknisfræði, Nanjing, Kína, staðfesti auðkenni plöntunnar formfræðilega. Skírteinissýni (NUCMCHS-2015628) var afhent hjá College of Health Sciences, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing, Kína.

Sneiðar af HerbaCistanche500 g að þyngd, voru mulin með rafmagnsblöndunartæki og dregin út í 5000 ml af eimuðu vatni, eftir það var vatnskenndi útdrátturinn hreinsaður við 100 C í 2 klst. með útdráttarbúnaði í hringrás.

himnuhola (Millipore, Billerica, MA, USA), og leifarnar sem fengust úr útdrættinum voru leystar upp í 4000 ml af vatni. Eftir bakflæðisútdrátt var útdrættinum safnað saman og þau látin gufa upp til að fá lokasýnisafurðina. Vatnskenndir útdrættir voru þéttir til að þurrka köggla (1 g/ml) með því að nota a

til síðari notkunar. Föst sýni voru blönduð í eimuðu vatni til að gefa nauðsynlega skammta af 10, 20 og 40 mg/kg líkamsþyngdar fyrir tilraunina.

2.2. Dýr.

Tilraunaaðferðin sem notuð var í þessari rannsókn var endurskoðuð og samþykkt byggð á siðferðilegum aðferðum og vísindalegri umönnun af Suzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine-Institutional Animal Care and Use Committee, Suzhou, Kína (SHTCM-IACUC; samþykkisnúmer: PNU{{2} }). Allar karlkyns rottur (Sprague Dawley stofn) með ag voru keyptar frá Shanghai Laboratory Animal Research Center í samræmi við leiðbeiningar National Institute of Health. Dýrin höfðu frjálsan aðgang að venjulegu fóðri (AIN-93 M) og kranavatni að vild og voru hýst hvert fyrir sig í ryðfríu stáli prósenta hlutfallslegum raka og útsett fyrir 12 klst. náttúrulegu ljósi og 12 klst. dimmu daglega.

2.3 Tilraunahönnun.

Lóperamíðið var notað til að framkalla hægðatregðu hjá rottum í samræmi við fyrri rannsóknir [32, 33]. Alls 60 rottum var skipt af handahófi í 5 hópa (í hverjum hóp): A: eðlilegur hópur (NG), B: líkanhópur (Lop plús burðarefnismeðhöndluð hópur), C: hópur hægðatregðurottna sem voru meðhöndlaðir með lítið vatnsþykkni af Herba Cistanche (Lop plús LAEHC-meðhöndluð hópur), D: hópur hægðatregðurottna meðhöndlaðir með miðlungs vatnskenndu útdrætti af Herba Cistanche (Lop plús MAEHC-meðhöndlaðir hópur), og E: hópur hægðatregðurottna meðhöndlaðir með mikið vatnskenndu útdrætti af Herba Cistanche (Lop plús HAEHC-meðhöndlaður hópur). Hópur A var meðhöndlaður með venjulegu saltvatni (10 ml/kg); Hópur B var meðhöndlaður með lóperamíði

(4 mg/kg); Hópur C var meðhöndlaður með lóperamíði (4 mg/kg) og lítið vatnskenndan útdrátt af Herba Cistanche (1 g/kg); Hópur D var meðhöndlaður með lóperamíði (4 mg/kg) og miðlungs vatnskenndu útdrætti af Herba Cistanche (2 g/kg), og hópur E var meðhöndlaður með loperamíði (4 mg/kg) og vatnskenndu útdrætti af Herba Cistanche (4 g/). kg). Öllum rottum úr venjulegum hópi var sprautað með 0,9 prósent natríumklóríði, en hinum var sprautað með loperamíði í 0,9 prósent natríumklóríði tvisvar á dag í 3 daga í röð til að framkalla hægðatregðu. Vatnsþykkni Herba Cistanche var dreift í vatni og var gefið til inntöku einu sinni á dag frá degi 4 til dags 18 í hópi C, hópi D og hópi E, en hópar A og B fengu stöðugt rúmmál af vatni í gegnum magaslöngu.

2.4. Litskiljunarástand.

HPLC prófílgreining var framkvæmd í Shimadzu vökvaskiljunarkerfinu (Tókýó, Japan), sem samanstendur af LC-20AT dælu og

voru fylgst með 330 nm við 30 C. Ísókratíski hreyfanlegur fasinn samanstóð af metanóli 0,1 prósent maurasýru (80:20, rúmmálshlutfall) og rann með flæðihraða 1,0 ml/mín. . Litskiljun var

kornastærð 5 m, Beijing Dikma Science and Technology Co., Ltd., Peking, Kína).

2.5. Greining á hreyfingu, fæðuinntöku, vatnsneyslu, líkama

Gúmmí til ræktunar (vatnslausn af 20 prósent kolum og 10 prósent ræktunargúmmí) var gefið til inntöku í rúmmáli 25 ml/kg af hverju dýri. Eftir 30 mínútur voru dýrin fórnuð á mannúðlegan hátt með leghálsi og krufin. Farið var yfir smágirni frá pylorus til cecum og mæld vegalengd sem kolamjölið náði og heildarlengd smágirnis. Fyrir einstaka rottu var hundraðshluti flutnings í þörmum reiknað út sem hlutfall af vegalengd sem kolamjölið fór í miðað við heildarlengd smágirnis. Eftirfarandi jafna reiknar út flutningshraða í þörmum (prósent): vegalengd sem kolin ferðast/fjarlægð frá pylorus til cecum 100 prósent.

2.6. Blóðsýni og vefjasöfnun. Í lok tilraunatímabilsins voru rottur látnar fara í 12 klst föstu en fengu frjálsan aðgang að vatni. Allar rottur voru síðan svæfðar 30 mínútum síðar með inndælingu í kviðarhol af natríumpentóbarbital (50 mg/kg) og settar á hitastýrt borð. Blóðsýnum var safnað og skilið í skilvindu við 3500 rpm í 15 mínútur til að fá sermi. Ristillinn var klofinn strax og skolaður með venjulegu saltvatni við 4 C og síðan skipt í tvo hluta. Annað brotið var fest í 10 prósent formalíni og unnið í klofnu paraffíni fyrir síðari ónæmisvefjaefnafræðilega (IHC) greiningu, en hitt var Þyngd og hár. Breytingar á hreyfingu, fæðuinntöku, vatni

geymd við 80 C þar til þau voru prófuð. inntaka, líkamsþyngd og hár voru fylgst með og skráð daglega allt tilraunatímabilið. Við sáum „breytingar á æfingu“ eftir sérstökum skrefum: Sjálfgerði kassinn (60 cm á hæð, 50 cm á lengd og 80 cm á breidd með dökkum jaðarvegg) er notaður fyrir próf á vettvangi; hvíta jörðinni var skipt í demanta (12 cm) með svörtu línunni í dimmu og rólegu herbergi; 100 W pera hékk 1 m fyrir ofan miðju kassans; rotturnar voru settar í miðju kassans á 4., 6., 12. og 18. degi líkangerðar. Fjöldi ferninga sem rottur fóru í gegnum innan 5 mínútna var notaður sem lárétt hreyfingarskor og uppréttur tími rottanna innan 5 mínútna var notaður sem lóðrétt hreyfingarskor. Lárétt og hreyfistig auk lóðrétta hreyfistiga gefa til kynna hversu mikið hreyfing rottur er. Hver rotta var mæld einu sinni [34, 35].

2.7. Fecal Parameter Mæling.

Á síðasta degi inntöku var ferskum hægðum úr hverri SD rottu safnað í hringbotna tappa rör í 6 klst og heildarþyngd hvers hóps skráð. Til að ákvarða rakainnihald saursins notuðum við rafmagnsvog til að þurrka hægðakornin þar til stöðugri þyngd er náð og þurrþyngdin mæld. Rakainnihaldið

2.8. Mat á GAS, MTL, SS og CGRP.

Styrkur gastríns (GAS), mótílíns (MTL), sómatóstatíns (SS) og kalsítóníngenatengds peptíðs (CGRP) í sermi var metinn með ELISA með því að nota settar sem eru fáanlegar í sölu.

2.9. Vefjafræðileg greining.

Þverristlar sem safnað var úr SD rottum voru festir með 10 prósent formalíni í 12 klst.

m þykkar sneiðar sem voru litaðar með hematoxýlíni og eósíni (H&E, Sigma- Aldrich, MO, Bandaríkjunum). Formfræðilegir eiginleikar þessara hluta komu fram við ljóssmásjárskoðun, eftir það voru villuslengd, þykkt dulmáls og vöðvaþykkt mæld með Leica Application Suite (Leica Microsystems, Sviss).

2.10. Ónæmisvefjaefnafræðileg greining.

Við fylgdum aðferðum Zhu o.fl. (2016) [36]; ólitaðir 5 m kaflar voru

litað með kanínu-anti-c-setti (1: 100) við 4 C yfir nótt. Önnur mótefni og avidin-bíótín-peroxidasa flókin aðferð voru notuð samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Immúnóglóbúlín-neikvæð stýring var notuð til að útrýma ósértækri bindingu. Tjáningarstig c-kits

2.11. Greining á flutningshraða í þörmum.

Þarmaflutningshlutfall var framkvæmt í samræmi við áður tilkynntar samskiptareglur [36]; stuttlega, eftir 14 daga meðferð, voru allar SD rottur háðar 12 klst föstu en fengu frjálsan aðgang að vatni.

Rauntíma pólýmerasa keðjuverkun. Gentjáningarstig c-kit, SCF og PI3K mRNA í ristli voru ákvarðað með því að nota heildar RNA útdráttarbúnað (TIANGEN Biotech,

Peking, Kína) samkvæmt samskiptareglum framleiðanda. Rauntíma PCR var framkvæmd með ABI StepOnePlus Real-Time PCR System (ABI). SYBR Green I Real-Time PCR Master Mix (QPK201, Toyobo, Japan) var notað til að greina PCR vörur. Viðbrögð voru framkvæmd í þreföldum keppnum. Í kjölfarið var ferskur ristli vefur rottu sem vó 0,5 g einsleitur-

l) var dregið út samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda með því að nota TRIzol Reagent (Invitrogen, USA). Reverse Transscription-PCR Kit (Takara Biotechnology Co., Inc.) var notað til að búa til fyrsta streng cDNA í samræmi við siðareglur framleiðandans. Allar markbreytur eru sýndar í töflu 1. Hjólreiðaraðferðin var við eftirfarandi aðstæður: 95 C í 5 mín (DNA-afvæðing), fylgt eftir af 40 lotum af 95 C í 15 sek., 60 C í 20 sek., og 72 C fyrir 40 sek. Bræðsluferilgreining var gerð í lok mögnunarlotanna.

2.12. Western Blot greining.

Próteininnihald c-kits og SCF í einsleitum ristilsýnum var metið með Western blot. Í stuttu máli var heildarprótein einsleitra efna ákvörðuð með því að nota bicinchoninsýrupróf (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA). Natríumdódecýlsúlfat-pólýakrýlamíð hlaup (SDS-PAGE) var notað til að aðskilja prótein í BioRad rafdrættiskerfinu (BioRad Laboratories, Hercules, CA, Bandaríkjunum). Prótein voru síðan flutt yfir á pólývínýlídendíflúoríð (PVDF) himnur. Eftir 2 klst. meðferð með blokkandi stuðpúða í TBS sem innihélt 5 prósent fitulausa mjólk við stofuhita, voru PVDF himnur ræktaðar yfir nótt með 1 : 1000 þynntu and-c-setti (Santa Cruz, CA, USA), 1 : 500 þynnt andstæðingur- SCF (Sigma, MO,

Bandaríkin), og 1: 8000 þynnt andaktín (Kangchen, Shanghai, Kína) mótefni, í sömu röð. Binding aðalmótefnisins var greind með því að nota samsvarandi HRP-tengd aukamótefni (Beyotime, Jiangsu, Kína). Aukið efnaljómunarsett (Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL, Bandaríkjunum) og Odyssey innrauða myndgreiningarkerfið (Gene Company Ltd., Hong Kong) voru notuð til að greina efnaljómun. Húsþrif prólaktín var notað sem hleðslustjórnun. Magn próteintjáningar er sett fram miðað við magn aktíns.

2.13. Tölfræðigreining.

Greint var frá mæligögnum sem meðalstaðalvillu meðaltals (SEM) og greind með SPSS

16.0 hugbúnaður (SPSS, Chicago, IL, Bandaríkin). Einhliða dreifnigreining (ANOVA) fylgt eftir af Duncans margfeldisprófum var notuð til að ákvarða marktækan mun á öllum breytum. Gildi voru talin tölfræðilega marktæk kl

3. Úrslit

3.1. Samsetning og hagnýtir íhlutir Herba Cistanche.

Eins og sýnt er á mynd 1, innihalda rætur Herba Cistanche háan styrk nokkurra lífvirkra þátta sem tengjast hægðalosandi áhrifum. Styrkur heildar echinacosides og heildar verbacosides var 0,64 mg/g og 0,16 mg/g, í sömu röð. Tveir toppar sem gefa til kynna hátt magn echinacoside og verbascoside greindust í LP á viðeigandi varðveislutíma með hágæða vökvaskiljun (HPLC).

3.2. Almenn athugun.

SP rottur dóu ekki meðan á tilrauninni stóð, sem gefur til kynna betra öryggi og virkni dýralíkanssins. Í samanburði við hóp A sýndu rottur í líkanahópnum dúnkenndan feld, þreytu, þurra hægðir og

versnað með lengingu líkanatímans.

3.3. Áhrif AEHC á hægðafjölda og rakainnihald hjá loperamíð-völdum hægðatregðu rottum.

Samanborið við venjulegan saur var saur í hópum B, C, D og E þurr, lítill og harður og var án þess að brenna fyrir meðferð.

eftir allt saman, rottum var sprautað með lóperamíði (meðhöndlaðar með lyfjum hafa dregið úr einkennum eins og líkami og 3(b)).

þyngdin var ekki marktækur munur meðal allra tilraunahópa, þó að hópur E sýndi aðeins lægri líkamsþyngd en hinir hóparnir (Mynd 2(a)). Að auki borðuðu SD rottur með hægðatregðu marktækt minna mat en hópur A ( ), á meðan munur á milli hópa B, C, D og E (mynd 2(b)) var ekki marktækur. Vatnsnotkun breyttist heldur ekki milli hóps A og hóps B. Þar að auki greindist engin marktæk aukning á vatnsnotkun í

að meðferð með AEHC olli engum breytingum. Þrátt fyrir að þarmaflutningshraði í hópum C, D, og ​​var einnig marktækt hærri, höfðu hópar C, D og E marktækt lægra hlutfall en hópur A.

3.4. Áhrif AEHC á flutningshraða í smáþörmum í loperamíð-völdum hægðatregðu rottum.

Eins og sést á mynd 4, greindist enginn munur á flutningstíma smáþarma í grunnlínu meðal hópanna fimm. Hópur B hefur áberandi lægra drifhlutfall koldufts í samanburði við hóp A (𝑃 < 0.01).="" þrátt="" fyrir="" að="" þarmaflutningstíðni="" í="" hópum="" c,="" d="" og="" e="" hafi="" einnig="" verið="" marktækt="" hærri="" en="" í="" hópi="" b="" (𝑃="">< 0,05),="" voru="" hópar="" c,="" d="" og="" e="" með="" marktækt="" lægri="" hlutföll="" en="" hópur="">

3.5. Inngrip með AEHC eykur að hluta ristilhreyfingarvísitölu.

Sermisþéttni GAS og MTL sem fengust úr rottum í hópi B lækkaði marktækt samanborið við þær úr hópi A (𝑃 < {{0}}.01,="" tilh.).="" á="" hinn="" bóginn="" hafa="" hópar="" c,="" d="" og="" e="" (𝑃="">< 0.05,="" til="" dæmis)="" í="" raun="" hærra="" magn="" af="" gas="" og="" mtl="" frá="" gjöf="" herba="" cistanche="" útdráttar="" samanborið="" við="" hóp="" b="" ss="" gildi="" hjá="" rottum="" í="" hópi="" b="" voru="" hærri="" samanborið="" við="" hóp="" a="" (𝑃="">< 0.01);="" hópar="" c,="" d="" og="" e="" hafa="" minnkað="" magn="" ss="" (𝑃="">< 0,05)="" (mynd="" 5).="" í="" samanburði="" við="" hægðatregðurottur="" voru="" cgrp-gildin="" í="" venjulegum="" rottum="" í="" hópi="" a="" (𝑃="">< 0,01)="" og="" í="" hópum="" c,="" d="" og="" e="" sem="" fengu="" herba="" cistanche="" stöðug="" (𝑃=""> 0,05).

3.6. Vefjafræðileg breyting á ristli.

Til að kanna hvort AEHC meðferð geti framkallað uppbyggingu breytinga á ristilvef, voru villuslengd, þykkt cryptlags og vöðvaþykkt mæld í þverristum rotta í hópunum fimm eftir H&E litun. Með því að bera saman meinafræði ristils rottanna í hverjum hópi var ristilslímhúð slétt og inniheldur litlar slagæðar og litlar bláæðar í undirslímhúðinni og mikinn fjölda fitufrumna. Auk þess samanstóð vöðvalagið af sléttum vöðvafrumum og undirlagið var heilt. Meðallengd villus var marktækt styttri í hópi B en í hópi A (𝑃 < {{0}}.01).="" hins="" vegar="" jókst="" meðallengd="" villus="" í="" hópi="" c="" mjög="" um="" meira="" en="" 30="" prósent="" samanborið="" við="" hóp="" b="" (myndir="" 6="" og="" 7)="" (𝑃="">< 0,05).="" á="" sama="" tíma="" eykst="" meðallengd="" villus="" mjög="" í="" hópum="" d="" og="" e="" samanborið="" við="" hóp="" b="" (myndir="" 6(a)="" og="" 6(b))="" (𝑃="">< 0,01).="" ennfremur="" var="" breyting="" á="" vöðvaþykkt="" mjög="" svipuð="" og="" villuslengd.="" í="" hópi="" b,="">

var verulega þynnri samanborið við hóp A. Hins vegar jókst vöðvaþykkt í hópum C, D og E um 30–35 prósent miðað við hóp B (myndir 6 og 7). Á heildina litið benda þessar niðurstöður til þess að AEHC geti aukið villuslengd og vöðvaþykkt í ristli hægðatregðu rotta.

3.7. Gjöf AHEC-meðferðar Aukin próteintjáning c-Kit og SCF.

Ónæmissvörun þess greindist í ristli þar sem frumurnar í öllum hópum reyndust jákvæðar fyrir c-kit. Eins og sýnt er á mynd 8 var tjáningarstig c-kits í hópi B lægra en í hópi A (𝑃 < 0.05).="" tjáningarstig="" c-kits="" í="" hópi="" c="" var="" hærra="" en="" í="" hópi="" b="" (𝑃="">< 0.{{20}}5),="" á="" meðan="" meira="" c-sett="" var="" til="" staðar="" í="" hópum="" d="" og="" e="" en="" í="" hópi="" b="" (𝑃="">< 0.05).="" eftir="" meðhöndlun="" með="" mismunandi="" styrk="" af="" vatnskenndu="" útdrætti="" af="" herba="" cistanche="" í="" 2="" vikur="" greindust="" próteintjáningarstig="" c-kits="" og="" scf="" með="" western="" blot="" greiningu.="" western="" blot="" greining="" sýndi="" að="" c-kit="" og="" scf="" tjáningarstig="" voru="" ótrúlega="" lægri="" eftir="" lóperamíð="" meðferð="" í="" ristli="" rotta="" (mynd="" 9).="" mynd="" 8(e)="" sýnir="" að="" minnkað="" c-sett="" hjá="" rottum="" með="" hægðatregðu="" jókst="" marktækt="" um="" 31,2="" prósent="" eftir="" að="" hafa="" meðhöndlað="" rotturnar="" með="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc="" (𝑃="">< 0,05).="" að="" auki="" hækkaði="" meðferð="" með="" 100="" og="" 200="" g/ml="" aehc="" gildi="" c-kit="" prótein="" tjáningar.="" scf="" prótein="" tjáning="" jókst="" marktækt="" um="" 20,1,="" 24,7="" og="" 8,4="" prósent="" við="" meðferð="" með="" 100,="" 200="" og="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc,="" í="" sömu="" röð="" (mynd="" 9).="" 3.8.="" áhrif="" aehc="" á="" mrna="" tjáningu="" c-kit,="" scf="" og="" pi3k.="" til="" að="" kanna="" hvort="" aehc="" meðferð="" geti="" haft="" áhrif="" á="" stjórnun="" mrna="" sem="" tengist="" vöðvasamdrætti,="" sáust="" breytingar="" á="" tjáningargildum="" c-kit,="" scf="" og="" pi3k="" í="" ristli="" hægðatregðurottna="" með="" því="" að="" nota="" sérstaka="" primera.="" niðurstöðurnar="" sýndu="" að="" mrna="" gildi="" c-kits="" í="" hópi="" b="" voru="" marktækt="" lægri="" samanborið="" við="" hóp="" a="" (𝑃="">< 0,05),="" en="" mrna="" gildi="" í="" hópum="" c,="" d="" og="" e="" voru="" hærri="" en="" í="" hópi="" b="" (𝑃="">< 0,05)="" (mynd="" 10).="" við="" skoðuðum="" einnig="">

tjáning á SCF, bindli úr setti. mRNA tjáning SCF í hópi B rottum var marktækt minni en í hópi A, en meðferð með AEHC í hópum C, D og E jók SCF mRNA tjáningu (Mynd 10). Að auki skoðuðum við áhrif AEHC á PI3K genatjáningu. Á degi 14 var PI3K gena tjáning marktækt hærra í hópum C, D og E en í hópi B (𝑃 <>

4. Umræður

Hægðatregða er mjög algeng sjúkdómur sem einkennist af lélegum hægðum. Það dregur verulega úr lífsgæðum og hefur í för með sér miklar efnahagslegar byrðar á bæði sjúklinga og sjúkratryggingar [32]. Náttúruvörur og lækningamatur vekja nú sífellt aukna athygli vegna möguleika þeirra til að verða ný lyf notuð til að meðhöndla hægðatregðu [37, 38]. Þess vegna rannsökuðum við meðferðaráhrif AEHC á hægðatregðu rottur af völdum loperamíðs. Lóperamíð, atrópín-dífenoxýlat og morfín eru mikið notuð til að framkalla hægðatregðu hjá tilraunadýrum. Meðal lyfjanna þriggja veldur loperamíð langvarandi hægðatæmingu og seinkun á flutningi þarma, þar sem það hindrar bæði vatnseytingu og slétta hreyfingu í þarmaveggnum [39]. Greining á líkamsþyngd í þessari rannsókn fann engan mun innan hvers hóps. Eftir tilraunina fannst heldur enginn munur. Lágskammtahópurinn af AEHC sá enn lægstu líkamsþyngdina, en líkanhópurinn og venjulegi hópurinn voru vitni að hæstu líkamsþyngdinni. Hægðatregða er almennt starfhæfur sjúkdómur. Hæg flutnings hægðatregða, framkölluð í þessari rannsókn, hafði ekki áhrif á næringarupptöku rottanna og líkamsþyngd þeirra meðan á tilrauninni stóð. Munur á saurmagni rottanna og rakainnihald þeirra var ekki til staðar á milli hópa fyrir líkangerð; þó lækkuðu þau bæði ótrúlega mikið eftir líkangerð og rakainnihald saurs jókst eftir notkun AEHC í mismunandi skömmtum. Eftir að hafa rannsakað drifefnishraða kolefnisdufts í ristli.

af rottum sá fyrirmyndarhópurinn augljósa lækkun á hraðanum á meðan það hélst eðlilegt í hópum með lága, miðlungsskammta og stóra skammta af AEHC. Niðurstöðurnar sýndu að langvinn hægðatregða af völdum loperamíðs sem meðhöndluð er með mismunandi skömmtum af Herba Cistanche getur endurheimt drifvirkni ristlins í mismiklum mæli. Meltingarhormón eru afkastamikil lífvirk efni sem skilin eru út af innkirtlafrumum í slímhúð og brisi í meltingarvegi og hafa áhrif bæði spennu og hömlunar til að stjórna hreyfivirkni meltingarvegar [40, 41], þar af hafa GAS, MTL og SS mikil áhrif. Fyrrnefndu hormónin tvö örva seytingu meltingarsafa, draga saman slétta vöðva í meltingarvegi, stuðla að hreyfingu innihalds í meltingarvegi og örva hreyfigetu í meltingarvegi. SS, þvert á móti, hamlar seytingu meltingarsafa, samdrætti sléttra vöðva í meltingarvegi og tæmingu meltingarvegar [42]. GAS og MTL gildi í ristilvef líkanhópsins reyndust vera lægst, sem gefur til kynna að líkanaaðferðin lækkaði vissulega styrk GAS og MTL í ristilvef. Sem helstu hormón í meltingarvegi hreyfanleika ristils jókst styrkur GAS og MTL með mismunandi skömmtum af AEHC og jók þannig hreyfanleika ristils. Aftur á móti var SS-magn í ristilvef líkanhópsins hæst, sem gefur til kynna að líkanaaðferðin geti stuðlað að styrk SS í ristilvef. CGRP er eitt öflugasta æðavíkkandi lyfið og slökunaráhrif þess eru 10-falt sterkari en samdráttaráhrifin. Sem mikilvægur taugaboðefni eða taugamótandi sem stjórnar meltingarstarfsemi getur CGRP hamlað meirihluta hreyfingar í meltingarvegi og seytingu ýmissa meltingarsafa [43]. Styrkur CGRP í líkanahópnum var hærri en í hópi A, sem gefur til kynna að líkanaaðferðin geti aukið CGRP styrk í ristilvef, sem getur einnig verið einn af þáttunum fyrir minnkuðu ristli í ristli sem leiðir til hægðatregðu. Styrkur CGRP í ristilvef AEHC hópa var lægri en í líkanahópnum, sem bendir til þess að AEHC hafi tiltölulega veik hamlandi áhrif á hreyfingu ristils. c-Kit er yfirhimnuprótein. Stofnfrumuþátturinn (SCF) bindils þess er framleiddur af taugafrumum og sléttum vöðvafrumum. Það stuðlar að þróun og aðgreiningu ICC og viðheldur eðlilegri lífeðlisfræðilegri virkni þess. c-Kit merkingar endurspegla óbeint magn og þéttleika ICC [44, 45]. Að auki gegnir ICC fruman lykilhlutverki við að stjórna hreyfanleika meltingarvegar og virkar sem gangráður hreyfingar í meltingarvegi. Þannig að sumar truflanir á hreyfigetu í meltingarvegi geta fundið fyrir samdrætti í magni og virkni ICC frumna. Samkvæmt fyrri rannsóknum minnkaði frumufjöldi í ristli sjúklinga með langvarandi flutningssjúkdóm. Þess vegna fylgdist þessi rannsókn með ristilfrumum rotta með því að nota sértæka tjáningu og ónæmisvefjaefnafræðilegar aðferðir. Í samanburði við venjulega hópinn fækkaði frumum í líkanahópnum ótrúlega en fjölgaði eftir meðferð. Rannsóknin sýndi að ICC frumur og stofnfrumuþættir (SCF) eru náskyldir c-kit/SCF merkjaferli. SCF er náttúrulegur bindill c-kitsins sem er tjáður í ýmsum vefjum líkamans en aðallega

framleidd af stromal frumum í beinmerg. Sérhver c-kit einliða sameinast SCF í gegnum utanfrumu lénin 1–3. Eftir SCF dimerization breytist uppbygging c-kit einliða og framleiðir homodimerization, sem síðan leiðir til sjálffosfórunar á amínósýruleifum í frumuhimnunni og örvar ýmsar seinni merkjasameindir til að stjórna frumustarfsemi ICC. Önnur merkjasameindin er fosfatidýlínósítól 3-kínasi (PI3K), apólípóprótein sem breytir 4,5- tvífosfóínósítíði í 3,4,5-þrífosfóínósíð með blöndunni við týrósín 721 í c-kitinu. Fyrri rannsóknir sýndu að PI3K hemlar Wortmannin og LY294002 leiddu til óeðlilegrar þróunar ICC með því að hindra merkið [46]. Tilraunin okkar leiddi í ljós að c-kit og SCF prótein og mRNA tjáning í líkanahópnum minnkaði í fyrstu en jókst síðan í AEHC hópum með mismunandi skömmtum, að vísu undir eðlilegu magni. mRNA tjáning PI3K jókst ótrúlega. Þess vegna getur SCF/c-sett tekið gildi í gegnum PI3K. Niðurstöðurnar sýndu að AEHC gæti stjórnað sléttum vöðvum í meltingarvegi með því að auka magn ICC frumna. Lítill skammtur af AEHC hafði engin marktæk áhrif á hægðatregðu, á meðan miðlungs skammtur og stór skammtur stytti fyrsta saurtíma rottanna, jókst rakainnihald saursins, bætti drifefni í ristlinum, hreinsaði magn saursins, jók GAS , MTL og CCK stigum, og styrkti samdráttarhæfni ristilsins. Virkur skammtur af AEHC er upphaflega 20 g/d eftir umbreytingu, sem jafngildir miðlungsskammti og háum skammti í þessari rannsókn.

5. Ályktanir

AEHC stuðlar að hreyfanleika þarma með því að bæta ICC virkni og stjórna taugaboðefnum í þessari rannsókn, sem sannaði að AEHC hefur tilhneigingu til að meðhöndla og koma í veg fyrir hægðatregðu. Útdrættirnir bættu hægbylgjuframleiðslu ristilsins og stjórnuðu takti samdráttarvirkninnar SCF mRNA magn PI3K mRNA magn c-Kit mRNA magn12 sönnunargrunduð viðbótar- og óhefðbundin lyf sléttra vöðva með því að auka ICC magn með PI3K/SCF/ c-kit merkjaleið. Hins vegar gætu ítarlegar tilraunarannsóknir aukið skilning á öðrum sameindaferlum AEHC við að lækna STC og hjálpað til við að leiðbeina væntanlegum klínískum rannsóknum sem meta áhrif þess og öryggi.

Hagsmunaárekstrar

Höfundar lýsa því yfir að ekki sé um hagsmunaárekstra að ræða.

Framlög höfunda

Shuai Yan og Yin-Zi Yue lögðu jafnt sitt af mörkum til þessa verks. Allir höfundar hafa samþykkt lokaritgerðina.

Viðurkenningar

Þessi vinna var styrkt með styrk frá National Natural Science Foundation of China (NSFC) og styrkt af kínverskum stjórnvöldum (81573979). Rannsóknin var einnig studd af tækniverkefni Jiangsu Provincial Administration of Traditional Chinese Medicine, Kína (nr. YB2017061), Suzhou Scientific and Technological Development Program, Kína (nr. SYSD2015172), Project of Suzhou Industrial Technology Innovation, Kína ( nr. SYSD2016136, nr. SYS201775 og nr. SYS201776), og háskólaverkefni Suzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine, Kína (YQN2015007). Höfundarnir þakka fjárhagslegan stuðning frá verkefni sem styrkt er af China Postdoctoral Science Foundation (2017M620220).

Heimildir

[1] JY Chang, GR Locke, MA McNally, o.fl., „Áhrif virkra meltingarfærasjúkdóma á lifun í samfélaginu,“ American Journal of Gastroenterology, vol. 105, nr. 4, bls. 822– 832, 2010. [2] SM Mugie, M. A Bennington, og C. Di Lorenzo, "Epidemiology of constipation in children and adults: a systematic review," Best Practice & Research Clinical Gastroenterology, vol. 25, nr. 1, bls. 18, 2011. [3] NC Suares og AC Ford, "Algengi og áhættuþættir fyrir, langvarandi sjálfvakta hægðatregðu í samfélaginu: kerfisbundin endurskoðun og meta-greining," American Journal of Gastroenterology, vol. 106, nr. 9, bls. 1582–1591, 2011. [4] A. Lembo og M. Camilleri, „Chronic constipation,“ The New England Journal of Medicine, bindi. 349, nr. 14, bls. 1360–1368, 2003. [5] S. Singh, S. Heady, E. Coss-Adame og SSC Rao, "Clinical utility of colonic manometry in slow-transit constipation," Neurogastroenterology & Motility, vol. 25, nr. 6, bls. 487–495, 2013. [6] DM Preston og JE Lennard-Jones, „Alvarleg langvinn hægðatregða ungra kvenna: „ídiopathic slow transit constipation,“ Gut, vol. 27, nr. 1, bls. 41–48, 1986. [7] P. Kashyap, PJ Gomez-Pinilla, MJ Pozo, o.fl., "Immunoreactivity for Ano1 detect depletion of Kit-positive interstitial cells of Cajal in patients with slow-transit constipation ," Neurogastroenterology & Motility, bindi. 23, nr. 8, bls. 760–765, 2011. [8] JD Belsey, M. Geraint og TA Dixon, "Kerfisbundin endurskoðun og meta-analysis: Polyethylene glycol in adults with non-organic constipation," International Journal of Clinical Practice, vol. . 64, nr. 7, bls. 944–955, 2010. [9] AC Ford og NC Suares, "Áhrif hægðalyfja og lyfjafræðilegra meðferða við langvarandi sjálfvakta hægðatregðu: kerfisbundin endurskoðun og meta-greining," Gut, vol. 60, nr. 2, bls. 209–218, 2011. [10] OM Aboumarzouk, T. Agarwal, R. Antakia, U. Shariff og RL Nelson, "Cisapride fyrir hægðatregðu í þörmum," Cochrane Database of Systematic Reviews, vol. 19, nr. 1, bls. CD007780, 2011. [11] MA Kamm, S. Muller-Lissner, NJ Talley, o.fl., "Tegaserod for ¨ the treatment of chronic constipation: A randomized, double-blind, placebo-controlled multinational study," American Journal of Gastroenterology, árg. 100, nr. 2, bls. 362–372, 2005. [12] A. Shin, M. Camilleri, G. Kolar, P. Erwin, CP West og MH Murad, „Kerfisbundin endurskoðun með meta-greiningu: Mjög sértækur {{80} }HT4 örvar (prucalopride, velusetrag eða naronapride) við langvarandi hægðatregðu," Alimentary Pharmacology & Therapeutics, bindi. 39, nr. 3, bls. 239–253, 2014. [13] J.-H. Chen, Q. Zhang, Y. Yu o.fl., "Neurogenic and Myogenic Properties of Pan-Colonic Motor Patterns and their Spatiotemporal Organization in Rats," PLoS ONE, vol. 8, nr. 4, greinarnúmer e60474, 2013. [14] VL Serebruany, ME Mouelhi, H.-J. Pfannkuche, K. Rose, M. Marro og DJ Angiolillo, "Rannsóknir á 5-HT4 viðtaka tjáningu og áhrif tegaserod á blóðflögusamsöfnun manna in vitro," American Journal of Therapeutics, bindi. 17, nr. 6, bls. 543–552, 2010. [15] HS Winter, C. Di Lorenzo, MA Benninga, o.fl., "Oral prucalopride in children with functional constipation," Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition, vol. 57, nr. 2, bls. 197–203, 2013. [16] A. Bove, F. Puccini, M. Bellini, o.fl., "Consensus statement AIGO/SICCR: Diagnosis and treatment of chronic constipation and obstructed defecation (part I: Diagnosis) )," World Journal of Gastroenterology, bindi. 18, nr. 14, bls. 1555–1564, 2012. [17] GL Lyford, C.-L. Hann, E. Soffer, o.fl., „Lækkun á millivefsfrumum í Cajal í ristli í ristli hjá sjúklingum með hægðatregðu í hægagangi,“ Gut, vol. 51, nr. 4, bls. 496–501, 2002. [18] J.-P. Wang, G.-F. Ding og Q.-Z. Wang, "Millivefsfrumur Cajal miðla örvandi sympatískum taugaboðum í blöðruhálskirtli naggrísa," Cell and Tissue Research, vol. 352, nr. 3, bls. 479–486, 2013. [19] W.-D. Tong, B.-H. Liu, L.-Y. Zhang, S.-B. Zhang og Y. Lie, „Minni millivefsfrumur í Cajal í sigmoid ristli sjúklinga með hægðatregðu með hægfara flutningi,“ International Journal of Colorectal Disease, bindi. 19, nr. 5, bls. 467–473, 2004. [20] D. Wu, X. Wang, J. Zhou, o.fl., „Hefðbundin kínversk formúla, smurjandi þörmum, bætir hægðatregðu hjá rottum af völdum loperamíðs sem tekur þátt í að auka Cl- seytingu yfir fjarlæga ristilþekjuna," Journal of Ethnopharmacology, bindi. 130, nr. 2, bls. 347–353, 2010. [21] D.-Y. Hann og S.-M. Dai, "Bólgueyðandi og ónæmisbælandi áhrif Paeonia lactiflora Pall., Hefðbundin kínversk jurtalyf," Frontiers in Pharmacology, vol. 2, 10. grein, 2011. [22] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao og C.-M. Tzeng, "Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Ein af bestu lyfjagjöfum hefðbundinnar kínverskrar læknisfræði," Frontiers in Pharmacology, vol. 7, 41. grein, 2016.