Ákvörðun fimm efnisþátta í Rehmannia Glutinosa og stofnun HPLC fingrafars

Ágrip:Ákvörðunaraðferð á innihaldi fimm þátta íRehmannia glutinosa, nefnilega,rehmannoside D, leonurin,echinacoside,cistancheside Aogverbascoside, var stofnað og hágæða vökvaskiljun (HPLC) fingrafar Rehmannia glutinosa var komið á fót til að veita vísindalegan grunn fyrir gæðaeftirlit Rehmannia glutinosa. Shiseido CAPCELL PAK C18 súlan var notuð, með asetónítríl-0.1% maurasýrulausn sem hreyfanlegur fasa, hallaskolun, súluhitastig 30 gráður, breytileg bylgjulengdarákvörðun og flæðihraði 1,0 ml/mín. HPLC fingrafar Rehmannia glutinosa var greint með "Kínversk læknisfræði litskiljunarfingrafaralíkindamatskerfi (2012 Edition)" software to evaluate its quality consistency. The results showed that according to the established content determination method, the five components had a good linear relationship within their respective concentration ranges (R2>{{0}}.999 0), RSD nákvæmniprófunar, endurtekningarprófs og stöðugleikaprófs var 0,12%~1,58% og meðalendurheimtunarhlutfall sýna var 96,5% ~98,6%; hið staðfesta Rehmannia glutinosa HPLC fingrafar greindi 23 algenga toppa og líkindin milli Rehmannia glutinosa sýnisins og viðmiðunarfingrafarsins var 0.904~0.950. Niðurstöðurnar benda til þess að hin þekkta innihaldsákvörðunaraðferð og HPLC fingrafar henti til að meta gæði Rehmannia glutinosa og auðkenningu á hráum Rehmannia glutinosa og soðnum Rehmannia glutinosa, með mikilli nákvæmni og góðum endurgerðanleika, og geti veitt tæknilega aðstoð við gæðaeftirlit með Rehmannia glutinosa lyfjaefni.

Leitarorð:Rehmannia glutinosa; innihaldsákvörðun; fingrafar; gæðamat

NÝ JURT CISTANCHE MEÐECHINACOSIDE,CISTANCHESIDE AOGMYNDATEXTI

Rehmannia glutinosaer ferskur eða þurrkaður rótarhnullur Scrophulariaceae plöntunnar Rehmannia glutinosa Libosch. Vegna mismunandi vinnsluaðferða er henni aðallega skipt í ferskt rehmannia, hrátt rehmannia og soðið rehmannia [1-2]. Helstu framleiðslusvæðin eru Henan, Shanxi, Shaanxi, o.fl. land. Meðal þeirra hefur hrár rehmannia glutinosa þau áhrif að hreinsa burt hita og kæla blóð, næra yin og stuðla að vökvaframleiðslu, og er aðallega notað til að meðhöndla hita í blóði, heitum eiturefnum og blettum osfrv .; soðin rehmannia glutinosa hefur þau áhrif að næra blóð og yin, endurnýja kjarna og endurnýja merg, og er aðallega notað til að meðhöndla blóðskort, klórósu o.s.frv. Hjartsláttarónot, eirðarleysi osfrv.[1-2]. Þeir tveir hafa mismunandi eiginleika og bragð, en báðir tilheyra lifrar- og nýrnameridíunum. Rehmannia glutinosa inniheldur flókna efnaþætti, aðallega þar á meðal iridoids, jónón, fenýletanól glýkósíð, flavonoids o.fl. [3-5].

Eftir að Rehmannia glutinosa hefur verið unnið með mismunandi vinnsluaðferðum, eru gerðir, innihald og hlutfall efnaþátta í hverri unnin vöru mjög mismunandi, sem leiðir til verulegs munar á lyfjafræðilegri virkni hennar [6-10]. skv

Tengdar rannsóknir[11-12] sýna að í því ferli að Rehmannia glutinosa breytist úr "hrá" í "eldað", minnkaði innihald efnaþátta eins og catalpol, móðurjurt, stachyose og amínósýrur verulega og innihaldið af frúktósa, 5-hýdroxýmetýlfúrfúral, osfrv. Innihald , ísórebaskósíðs osfrv. jókst verulega. Sem stendur notar gæðaeftirlit á hráu og soðnu rehmannia glutinosa aðallega innihald catalpol og rehmanniaside D sem matsvísa. Matskerfisvísarnir eru tiltölulega einir, sem gerir það erfitt að stjórna gæðum rehmannia glutinosa í heild sinni. Auk þess hafa rannsóknir sýnt að innihald rehmannia glutinosa D breytist fyrir og eftir vinnslu. Það er lítið og hefur lélega sérstöðu við að einkenna samsetningarbreytingar eftir vinnslu og vinnslustig [12-13].

Þess vegna, til að meta gæði Rehmannia glutinosa ítarlegra, staðfesti þessi rannsókn sambandið milli rehmanniaside D og Yimu í Rehmannia glutinosa.

Ákvörðunaraðferðir fyrir innihald fimm algengra innihaldsefna, þar á meðal glúkósíð, echinaceaside, cistancheoside A og verbascoside, og komið á HPLC fingrafar af Rehmannia glutinosa til að greina innihald helstu innihaldsefna í Rehmannia glutinosa frá mismunandi framleiðslusvæðum og fyrir og eftir vinnslu, til að veita upplýsingar um gæðaeftirlit með Rehmannia glutinosa. Tæknileg aðstoð.

Tæki, hvarfefni og prófunarlyf

Agilent 1260 hágæða vökvaskilji (skynjari er díóða fylki); breytilegt svið rafrænt greiningarjafnvægi (METTLER TOLEDO); stafræn úthljóðshreinsiefni (Shanghai Ultrasonic Instrument Factory, KH-500DE). Metanól (Sinopharm Group) er greiningargráðu; asetónítríl (Merck) er litskiljunarflokkur; vatn er Watsons flöskuvatn. Rehmannia glutinosa D viðmiðunarefni (lotunúmer RFSD8401909016, hreinleiki 98,0%), leonurus glýkósíð viðmiðunarefni (lotunúmer RFS-Y22002208010, hreinleiki 98,0%) og cistancheside A viðmiðunarefni (lotu númer RFS-R05002009014, hreinleiki 96,0%) voru allir keyptir frá Chengdu Ruifensidedan Biotechnology Co., Ltd.; echinacoside tilvísunarefni (lotunúmer 111670-201907, hreinleiki 91,8%) og verbascoside viðmiðunarefni (lotunúmer 11530-201914, hreinleiki 95,2%) voru öll keypt frá China Food and Drug Inspection Institute. Rehmannia sýnum (SX1~SX4, HN1 og HN2) var safnað frá mismunandi framleiðslusvæðum (sjá töflu 1), þar af voru SX4 og HN2 gufusoðaðir af SX1 og HN1 í sömu röð og SX2 og SX3 var safnað frá sama framleiðslusvæði. Öll sýnin voru auðkennd af Song Pingshun, yfirlækni í kínverskum læknisfræði við Gansu Provincial Institute of Drug Control.

Tafla 1 Upplýsingar um sæðissýni úr Rehmanniae

2.1 Litskiljunarskilyrði

Shiseido CAPCELL PAK C18 (250.0 mm×4,6 mm, 5 μm) súlan var notuð, asetónítríl var notað sem hreyfanlegur fasi A og 0,1% maurasýrulausn var notuð sem hreyfanlegur fasi B Halli skolunarskilyrði voru: 0-3 mín., 1%A; 3-9 mín., 1%A→5%A; 9-24 mín., 5%A→35%A; 24-35 mín., 35%A→65%A; 35-40 mín., 65%A→90%A. Greining með breytilegri bylgjulengd (0-24 mín., 203 nm; 24-40 mín., 330 nm). Inndælingarrúmmálið var 15 μL af viðmiðunarlausninni og 20 μL af sýnislausninni.

2.2 Undirbúningur lausnar

2.2.1 Undirbúningur viðmiðunarlausnar

Taktu viðeigandi magn af ofangreindum fimm viðmiðunarefnum, bættu við 70% metanóli til að búa til blandaða viðmiðunarlausn með massastyrk 0,4 mg/ml.

2.2.2 Undirbúningur próflausnar

Vigtið um 1.0 g af Rehmannia dufti (farið í gegnum sigti nr. 2), vegið nákvæmlega, setjið í tappa keiluflösku, bætið nákvæmlega 25 ml af 70% metanóli út í, innsiglið, vigtið, meðhöndlið með úthljóði (kraftur 300) W, tíðni 50 kHz) í 30 mínútur, látið það kólna niður í stofuhita, vigtið aftur, bætið saman tapaðan massa með 70% metanóli, síið og takið síuvökvann til að ná.

2.3 Aðferðafræðileg rannsókn

2.3.1 Sértæknirannsókn

Taktu blönduðu viðmiðunarlausnina undir „2.2.1“ og prófunarlausnina (sýni SX1) undir „2.2.2“ og sprautaðu og mældu í samræmi við skiljunaraðstæður undir „2.1“. Niðurstöðurnar sýna að litskiljun Rehmannia sýnisins sýnir litskiljunartopp með sama varðveislutíma og viðmiðunarstaðlar Rehmannia glutinosa D, Leonurin, Echinacoside, Cistanche deserticola A og Verbascoside (sjá mynd 1), sem gefur til kynna að þessi aðferð hafi sterka sérhæfni.

2.3.2 Línuleg sambandsrannsókn

Bætið 70% metanóli við blönduðu viðmiðunarlausnina, þynnið 5 sinnum, 10 sinnum, 25 sinnum, 50 sinnum, 100 sinnum og 250 sinnum, í sömu röð, og sprautið og mælt í samræmi við skiljunaraðstæður undir "2.1". Stöðluðu ferlurnar voru dregnar upp með massastyrk hvers viðmiðunar sem lárétta ásinn (x) og samsvarandi litskiljunartoppsvæði sem lóðrétta ásinn (y). Niðurstöðurnar eru sýndar í töflu 2, sem gefur til kynna að hver efnisþáttur hafi gott línulegt samband innan samsvarandi massastyrkleikasviðs.

1.rehmannioside D; 2. leónúríð; 3. Echinacoside; 4. kastanósíð A;5. akteósíð

Mynd 1 Litskiljun sérfræðirannsóknar

Tafla 2 Línulegt samband 5 þátta í Semen Rehmanniae

2.3.3 Nákvæmni rannsókn

Taktu prófunarlausnina (sýni SX1) undir „2.2.2“ og framkvæmdu inndælingarprófið í samræmi við skiljunaraðstæður undir „2.1“. Sprautaðu sýninu 6 sinnum samfleytt, skráðu toppflatarmál hvers efnisþáttar og reiknaðu út toppflatarmál RSD fyrir rehmannia glutinosa D, motherwort glycoside, echinacea glycoside, cistanche glycoside A og verbascoside í prófunarsýninu til að vera 0. 46%, 0,12%, 0,85%, 0,48% og 0,82%, í sömu röð, sem gefur til kynna að tækið hafi góða nákvæmni.

2.3.4 Endurtekningarrannsókn

Sex sýni af sama Rehmannia rótarsýni (SX1) voru útbúin samhliða samkvæmt aðferðinni í "2.2.2" og sprautuð og ákvörðuð í samræmi við litskiljunarskilyrði í "2.1". RSD innihalds rehmannia rót glýkósíðs D, móðurjurtar glýkósíðs, echinacea glýkósíðs, cistanche glýkósíðs A og verbaskósíðs í sýnunum sex voru 0,46%, 0,69%, 1,42%, {{ 12}},48% og 1,58%, í sömu röð, sem gefur til kynna að aðferðin hafi góða endurtekningarhæfni.

2.3.5 Stöðugleikarannsókn

Taktu prófunarlausnina (sýni SX1) undir "2.2.2" og sprautaðu og mæltu í samræmi við litskiljunarskilyrði undir "2.1" á 0 klst., 2 klst., 4 klst., 6 klst., 8 klst., 1{{ 15}} klst., 12 klst., 18 klst. og 24 klst., í sömu röð. RSD á toppsvæðunum rehmannia glutinosa D, móðurjurt glýkósíð, echinacoside, cistanche glýkósíð A og verbascoside voru 0,94%, 1.04%, 0,73% , 0,83% og 0,71%, í sömu röð, sem gefur til kynna að prófunarlausnin hafi góðan stöðugleika innan 24 klst.

2.3.6 Endurheimtuhlutfall sýna

{{0}},5 g af Rehmannia rótarsýni (SX1) með þekktu innihaldi 5 innihaldsefna var vegið nákvæmlega í tappa keiluflösku og 6 samhliða skömmtum var bætt við og 5 viðmiðunarlausnum með ákveðnum styrk í sömu röð. Sýnin voru útbúin samkvæmt aðferðinni undir "2.2.2", og sýnin voru sprautuð og mæld í samræmi við skiljunaraðstæður undir "2.1". Endurheimtunarhlutfallið var reiknað út og niðurstöðurnar eru sýndar í töflu 3. Að meðaltali endurheimtarhlutfall sýna fyrir hvern íhlut var 96,5%~98,6% og RSD var 0,73%~1,52%, sem gefur til kynna að aðferðin hafi góða nákvæmni.