Mat á fitusýrusamsetningum, andoxunarefnum og lyfjafræðilegri virkni grasker (Cucurbita Moschata) fræolíu úr vatnskenndri ensímútdrætti 1. hluti

May 08, 2023

Ágrip:Graskerfræolía er aukaafurð, mikið af næringarefnum og lífvirkum hlutum sem stuðla að ýmsum heilsufarslegum ávinningi. Þessi rannsókn miðar að því að bera saman efnasamsetningu, andoxunarefni og lyfjafræðilega virkni graskersfræolíu sem unnin er úr Cucurbita moschata Duch. Fyrrverandi Poir. (PSO1) og Cucurbita moschata (japanskt grasker) (PSO2) með ensímútdrætti í vatni. Ensímblanda sem samanstendur af pektínasa, sellulósa og próteasa (1:1:1) var notuð í ensímútdráttarferlinu. Fitusýrusamsetning olíunna var ákvörðuð með því að nota fitusýrumetýlester/gasskiljunarmassagreiningu. Andoxunarvirkni mælingar voru mældar með því að nota stöðugt sindurefna tvífenýlpíkrýlhýdrasýl, stakeindakatjón 2,20 -azínóbis-(3- etýlbensóþíasólín-6-súlfónat, járnsafoxandi/andoxunarstyrk og járnþíósýanatpróf. ensím sem fela í sér öldrun húðar og hvítunarferli voru rannsökuð. Línólsýra var aðalþáttur allra graskersfræolíu. Auk þess fannst einnig umtalsvert magn af olíusýru, palmitínsýru og sterínsýru. PSO2 hafði mesta andoxunarvirkni samanborið við PSO1 og graskersfræolíur í verslunum (COM1 og COM2). Bæði PSO1 og PSO2 sýndu meiri hamlandi áhrif á hýalúrónídasa, kollagenasa og týrósínasa en auglýsingarnar. Þess vegna gæti vatnskennd ensímútdráttur gefið graskersfræolíur með hærra andoxunarefni, öldrun og Hvítunaraðgerðir Þetta er gagnlegt fyrir frekari lyfjafræðilegar rannsóknir og er hægt að nota sem hagnýtan mat fyrir húðina.

Samkvæmt viðeigandi rannsóknum,cistancheer algeng jurt sem er þekkt sem "kraftaverkajurtin sem lengir lífið". Aðalþáttur þess ercistanoside, sem hefur ýmis áhrif eins ogandoxunarefni, bólgueyðandi, ogefling ónæmisvirkni. Meginreglan milli cistanche oghúð hvítunliggur í andoxunaráhrifum cistancheglýkósíð. Melanín í húð manna er framleitt með oxun týrósíns sem hvatar aftýrósínasa, og oxunarviðbrögðin krefjast þátttöku súrefnis, þannig að súrefnislausu stakeindir í líkamanum verða mikilvægur þáttur sem hefur áhrif á melanínframleiðslu. Cistanche inniheldur cistanoside, sem er andoxunarefni og getur dregið úr myndun sindurefna í líkamanum, þannig aðhamlar framleiðslu melaníns.

cistanche para que serve

Smelltu á Cistanche Tubulosa viðbót

Fyrir frekari upplýsingar:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Leitarorð:Cucurbita moschata; Japanskt grasker; graskersfræolía; vatnskennd ensímútdráttur; fitusýrur; andoxunarefni; gegn öldrun

1. Inngangur

Grasker er af ættkvíslinni Cucurbita og fjölskyldunni Cucurbitaceae, algeng og fræg planta sem var ræktuð í norðurhluta Mexíkó og hefur breiðst út til Evrópu, Vestur-Ameríku og Asíu [1]. Grasker er talið hagnýtur matur sem inniheldur mikið af næringarefnum eins og próteini, kolvetni, lípíðum, trefjum o.s.frv., ásamt jurtaefnafræðilegum efnasamböndum eins og tókóferólum, karótenóíðum og -sítósteróli [2]. Í ljós hefur komið að plöntunæringarefnin frá ýmsum hlutum graskersins hafa lyfjafræðilega virkni [2]. Grasker afhýðaþykkni sýndi jákvæð brunasáráhrif í dýralíkönum [3]. Graskerkvoða sýndi andoxunar-, bólgueyðandi og æðamyndunarvirkni [2], sem og þreytuvirkni í músum [4]. Að auki eru graskersfræ góð náttúruleg uppspretta nauðsynlegra fitusýra og plöntusteróla sem lækka hættuna á hjarta- og æðadauða [5,6]. Graskerfræolía er aukaafurð vinnslu graskersfræja, sem eru rík af ýmsum fitusýrum og lífvirkum efnasamböndum eins og -karótínum, -tókóferóli, B-vítamíni, lútíni, plöntusterólum og öðrum steinefnum [7,8]. Olían hefur andoxunarefni, bólgueyðandi, bakteríudrepandi og sáragræðandi áhrif [1,9]. Þar að auki hefur það ýmsa heilsufarslegan ávinning gegn sjúkdómum, svo sem háþrýstingi, sykursýki og krabbameini [8,10].

Mismunandi aðferðir til að vinna fræolíu hafa verið þróaðar, þar á meðal vélrænar aðferðir eins og kaldpressun [11] og háþrýstingsútdráttur [12]. Leysiútdráttur á fræolíu með lífrænum leysum eins og hexan, etýlasetati, asetoni og metanóli hefur einnig verið skjalfest [13,14]. Ensímaðstoð útdráttur er önnur aðferð fyrir plöntuolíuiðnaðinn vegna þess að það er umhverfisvæn og örugg tækni. Helsti aðferðin við vatnskenndan ensímútdrátt er vatnsrof og brjóta frumuveggi plöntuefnis, sem leiðir til meira gegndræpis og losar lífvirka þætti, þar á meðal olíufasinn [15]. Ýmsar ensímblöndur sem notaðar eru í þessari útdrætti eru samsettar úr pektínasa, sellulósa, hemicellulasa, arabínósa, -glúkanasa og xýlanasa [16,17]. Bestu aðstæður ensímblöndu, til dæmis hitastig, pH, hvarftími, kornastærð og ensímstyrkur, jók einnig ensímvirkni [16]. Nú á dögum hefur þessi aðferð verið mikið notuð til að vinna olíu úr mörgum ávöxtum og plöntufræjum [18,19]. Sumar fyrri rannsóknir sýndu fram á hámarksástand graskersfræolíu til að fá mikla ávöxtun og árangursríka lyfjafræðilega virkni [20,21].

Eins og er neytir fólk graskersfræolíu í eftirrétti eða salatsósur og það er líka vinsælt innihaldsefni í snyrtivörum. Húðöldrun er flókið líffræðilegt ferli sem einkennist af hrukkum, tapi á mýkt, tapi á raka og grófri áferð sem stafar af oxunarálagi, DNA skemmdum og háþróaðri uppsöfnun glúkósa á lokaafurðum [22]. Hýalúrónsýra, kollagen og elastín, sem eru mikilvægir þættir húðarinnar, geta brotnað niður með hýalúrónidasa, kollagenasa og elastasasímum, í sömu röð, sem leiðir til öldrunar húðarinnar. Nokkrar jurtaolíur, eins og ólífuolía, sólblómafræolía, vínberjaolía og jojobaolía, hafa verið notaðar til að viðhalda raka, bæta húðhindranir og koma í veg fyrir öldrun húðar [23]. Að auki er litarefni húðar breytileg og áberandi svipgerð hjá mönnum sem felur í sér sortumyndun og er stjórnað af tyrosinasa ensíminu [24]. Sem stendur hafa ýmis plöntuþykkni verið prófuð fyrir snyrtivörur og lyf til að draga úr melanínframleiðslu, sem virkar sem hvítandi efni [25,26].

cistanche tubulosa supplement

Nýlega, C. moschata Duch. Ex Poir er ein graskerafbrigði sem er almennt ræktuð og vinsæl í Tælandi, en það eru fáar rannsóknir sem taka til virknigilda þess og lyfjafræðilegra eiginleika. Ennfremur er vatnskennd ensímútdráttur áhugaverð aðferð til að vinna olíu úr graskersfræjum til að fá mikla ávöxtun og skilvirkni. Þess vegna beindi þessi rannsókn að því að ákvarða helstu innihaldsefni, andoxunarefni og lyfjafræðilega virkni graskersfræolíu frá C. moschata Duch. Fyrrverandi Poir. (Tællensk yrki) og C. moschata (japanskt grasker) með vatnskenndri ensímútdráttaraðferð.

2. Efni og aðferðir

2.1. Plöntuefni

Ferskir ávextir C. moschata Duch. Ex Poir og C. moschata (japanskt grasker) voru keypt af staðbundnum markaði í Chiang Mai í Taílandi í desember 2020. Fræunum var safnað og allir trefjaþræðir fjarlægðir. Eftir að fræhúðin var fjarlægð voru afhýdd graskersfræ þvegin og þurrkuð við umhverfishita. Fræin voru geymd í lokuðum plastpoka þar til frekari tilraunir voru gerðar. Að auki voru tvö sýnishorn af graskersfræolíu til sölu (COM1 og COM2) keypt frá matvörubúð í Chiang Mai, Taílandi. Allar tilraunir voru gerðar innan dagsetningarinnar sem hentaði til neyslu á viðskiptaolíunum.

2.2. Efni og hvarfefni 

Kollagenasi frá Clostridium histolyticum (ChC—EC.3.4.23.3), elastasi úr brisi úr svínum (PE—EC 3.4.21.36), N-succinyl-Ala-Ala-p-nítróanilid, járnsúlfat (FeSO4), hýalúrónsýrunatríumsalt frá Streptococcus equi, hýalúrónídasi úr nautgripaprófum, pektínasi frá Aspergillus niger (EC 3.2.1.15, meira en eða jafnt og 5 einingar/mg prótein, kjör pH=4.{{20}}, kjörhiti=61 ◦C), sellulasi frá Aspergillus niger (EC 3.2.1.4, Stærra en eða jafnt og 0,3 einingar/mg fast efni, kjör pH=6,5, kjörhiti {{ 30}}–55 ◦C), próteasi frá Aspergillus Saito (EC 3.4.21.112, meira en eða jafnt og 0,6 einingar/mg fast efni, kjör pH=5.1, kjörhiti=57.2 ◦ C), 2,20 -asínóbis 3-etýlbensóþíasólín-6-súlfónat (ABTS), 2,2-dífenýl-1-píkrýlhýdrasýlhýdrat (DPPH), 2,4,6 tripyridyl-s-triazine (TPTZ), 6-hýdroxý-2,5,7,8-tetrametýlchroman-2-karboxýlsýra (Trolox), sermi albúmín úr nautgripum, kojínsýra, L -týrósín, L-DOPA, línólsýra, einbasískt natríumfosfat (NaH2PO4·2H2O), tvíbasískt natríumfosfat og tyrósínasi úr sveppum voru keyptir frá Sigma-Aldrrich (St. Louis, MO, Bandaríkjunum). Að auki voru 37 prósent saltsýra, 95 prósent etanól, eimað (DI) vatn, dímetýlsúlfoxíð (DMSO) og metanól keypt frá RCI Labscan Co., Ltd. (Bangkok, Taílandi). Ammóníumþíósýanat (NH4SCN) og járnklóríð (FeCl2) voru keypt frá Loba Chemie Pvt. Ltd. (Mumbai, Indlandi). Tris (hýdroxýmetýl) amínómetan var keypt frá Merck (Darmstadt, Þýskalandi).

2.3. Vatnskennd ensímútdráttur

Graskerfræolíur frá bæði C. moschata Duch. Ex Poir og C. moschata (japanskt grasker) voru dregin út með vatnskenndri ensímútdráttaraðferð með því að nota ensímvatnsrofsbreytur úr fyrri rannsókn Kanopka o.fl. (2016), þar á meðal ensímstyrkur, hlutfall ensíms og hvarfefnis, hvarfhitastig, pH og hvarftími [21]. Þrjár mismunandi gerðir af ensímum, þar á meðal pektínasa, sellulósa og próteasa, voru sameinaðar í þyngdarhlutfalli 1:1:1 til að mynda einbeittan kokteil af ensímum. Eftir það var þykkni kokteillinn sem myndast var þynntur í DI vatni til að mynda 2% w/w vatnskennda ensímblöndu. Skrokklausu graskersfræjunum var síðan bætt við vatnskennda ensímblönduna sem myndaðist í þyngdarhlutfallinu 1:1. Blandan var síðan fínmöluð með Moulinex DB81 blandara við stofuhita þar til hún var einsleit. Sýrustig gruggleysunnar sem myndaðist var síðan stillt á 4,7 með því að nota 0,1 M HCl og ræktað við 54 ◦C í 15 klst. Eftir að grugglausnin var kæld niður í stofuhita var hún skilin í skilvindu við 11.500 x g í 10 mín. Efri lagið af flotefnum, sem var olíufasinn, var safnað saman. Kremið sem framleitt var í útdráttarferlinu var ekki fleytt heldur fjarlægt með því að sýkja það með örpípettu. Leifar af graskersfræi var fjarlægt með síun í gegnum Whatman No.1 síupappír undir lofttæmi [21]. Graskerfræolía frá C. moschata Duch. Ex Poir (PSO1) og C. moschata (japanskt grasker) (PSO2) voru geymd í vel lokuðum ljósþolnum ílátum við stofuhita þar til frekari tilraunir voru gerðar.

2.4. Ákvörðun á efnasamsetningu graskersfræolíu með því að nota fitusýrumetýlester/gasskiljunar-massa litrófsmælingu (FAME/GC/MS) aðferð

Graskerfræolía var ákvörðuð fyrir fitusýrusamsetningu með því að nota fitusýrumetýlester/gasskiljunar-massagreiningaraðferðina (FAME/GC/MS). FAME er tegund fitusýruestera sem er unnin með sýruhvataðri umesterun fitu með metanóli. Í þessari rannsókn voru graskersfræolíur (PSO1, PSO2, COM1 og COM2) sápaðar með því að bæta við 0.5 M NaOH lausn í metanóli við 100 ◦C í 15 mín. . Eftir kælingu voru olíusýnin afleidd með bórtríflúoríði (BF3) í metanóllausn við 100 ◦C í 1 mín. til að mynda FAME vörur. Eftir kælingu og viðbættu mettuðu NaCl og hexani var FAME skipt í hexanfasa og þeim safnað í hettuglös til inndælingar. FAME útdrættirnir voru greindir með því að nota GC/MS tækni við eftirfarandi aðstæður: háræðasúluvídd (TR-FAME, stærð 60 m × 0,25 mm, 0.25-µm kornastærð), hitastigsáætlun 50 ◦C ; haltu 2 mín með hraða 1 10 ◦C/mín. upp í 180 ◦C, haltu í 15 mín; rampur 2 hraði 4 ◦C/mín., lokahiti 230 ◦C, haldið 22,50 mín. Helíum var notað sem burðargas með flæðihraða 1,0 ml/mín. Olíusýnunum var sprautað í klofningslausan hátt (skiptihlutfall 1:20 og klofningshlutfall 20 ml/mín.) við 235 ◦C af sjálfvirkum sýnatakara. MS-skynjari með rafúðajónunargjafa (ESI) sem starfar við 70 eV með hitastig jónagjafans og flutningslínunnar stillt á 200 ◦C og 220 ◦C, í sömu röð, skráð massaróf á m/z bilinu 38–600. Greindum efnasamböndum var úthlutað með því að bera massaróf þeirra saman við birt gögn (National Institute of Standards and Technology, 2008). Prósentasamsetning var reiknuð út með því að samþætta toppa í heildarjónaskiljum (TIC). Allar mælingar voru framkvæmdar af rannsóknar- og þjónusturannsóknarstofunni, Halal vísindamiðstöðinni, Chulalongkorn háskólanum, Bangkok, Tælandi undir Halal GMP/HACCP og Halal-QHS/ISO 22000.

cistanches herba

2.5. Ákvörðun andoxunarvirkni

2.5.1. 2,2-Diphenyl-1-Picrylhydrazyl (DPPH) Radical Scavenging Assay

DPPH radical (DPPH•) hreinsunarvirkni var ákvörðuð með því að nota aðferðina sem sett var fram af Chaiyana et al. (2017) [27]. Í stuttu máli var 20 µL af olíusýnum (PSO1, PSO2, COM1, COM2) og línólsýru uppleyst í DMSO blandað saman við 180 µL af 167 µM DPPH etanóllausn í 96-brunnsplötu og síðan ræktað í 30 mínútur við kl. stofuhita í myrkri. Askorbínsýra (1 mg/ml) var notuð sem jákvæð viðmiðun. Ljósþéttleiki (OD) var mældur við 520 nm með því að nota örplötulesara (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, Englandi). Tilraunirnar voru gerðar í þríriti og framkvæmdar í þremur sjálfstæðum einstaklingum. Hlutfall DPPH hömlunar var reiknað út með jöfnu (1):

DPPH hömlun ( prósent )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (1)

þar sem ODA er OD blöndu sem inniheldur DI vatn og DPPH• lausn; B er ODB blöndu sem inniheldur DI vatn og DMSO; C er ODC blöndu sem inniheldur olíusýni og DPPH• lausn; og ODD er OD blöndu sem inniheldur olíusýni og DMSO.

2.5.2. 2,20 -azínó-bis-3-etýlbensþíasólín-6-súlfónsýra (ABTS) próf

ABTS katjónísk radical (ABTS• plus ) hreinsandi virkni var mæld með litamælingaraðferðinni samkvæmt Chaiyana et al. (2017) og Paradee o.fl. (2019) [27,28] með smávægilegum breytingum. ABTS• plus var myndað með því að bæta 2 mL af 7 mM ABTS við 3 mL af 2,45 mM kalíumpersúlfati og ræktað í 16–24 klst við stofuhita í myrkri. ABTS• plus sem myndast var síðan þynnt með etanóli til að fá OD upp á 0,7 ± 0,1 við 750 nm. Í stuttu máli var 20 µL af olíusýnum (PSO1, PSO2, COM1, COM2) og línólsýru leyst í DMSO blandað saman við 180 µL af ABTS• ásamt etanóllausn í 96-brunnsplötu og ræktað í 5 mínútur við stofuhita . OD var mæld við 750 nm með því að nota örplötulesara (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, Englandi). Askorbínsýra (1 mg/ml) var notuð sem jákvæð viðmiðun. Staðalferillinn var framleiddur með því að plotta gleypni við 750 nm á móti mismunandi styrk Trolox á bilinu 2,5–30 µg/ml. ABTS• plús hreinsivirkni var reiknuð út frá Trolox staðalferli (R2=0.9922) og gefin upp sem Trolox jafngild andoxunargeta (TEAC). Tilraunirnar voru gerðar í þríriti og framkvæmdar í þremur sjálfstæðum einstaklingum.

2.5.3. Ferric Reducing Andoxidant Power (FRAP) próf

Járnafoxandi andoxunarkraftur (FRAP) hvers sýna var ákvarðaður með því að nota FRAP próf eins og lýst er í fyrri rannsókn Chaiyana o.fl. (2017) sem hafði verið breytt lítillega frá Saeio o.fl. (2011) [27,29]. FRAP hvarfefni var nýbúið til með því að blanda 300 mM asetatbuffi (pH 3,6), 10 mM 2,4,6 tripyridyl-s-triazine (TPTZ) í 40 mM HCl og 20 mM FeCl3 í hlutfallinu 10:1:1. Í þessari rannsókn var 20 µL af olíusýnum (PSO1, PSO2, COM1, COM2) og línólsýru blandað saman við 180 µL af FRAP hvarfefni í 96-brunnsplötu og ræktað í 5 mínútur við stofuhita í myrkri. OD var mæld við 595 nm með því að nota örplötulesara (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, Englandi). Askorbínsýra (1 mg/ml) var notuð sem jákvæð viðmiðun. Staðalferillinn var framleiddur með því að plotta gleypni við 595 nm á móti mismunandi styrk járnsúlfats (FeSO4) á bilinu 0,003–0,5 mM. FRAP gildi var reiknað út frá FeSO4 staðalferli (R2=0.9965) og gefið upp sem samsvarandi getu (EC1). Tilraunirnar voru gerðar í þríriti og framkvæmdar í þremur sjálfstæðum einstaklingum.

2.5.4. Ferric Thiocyanate (FTC) próf

Hömlun lípíðperoxunar var rannsökuð með járnþíósýanati (FTC) aðferð. Þessi aðferð var framkvæmd í samræmi við skrefin sem Osawa o.fl. (1981) [30] með smávægilegum breytingum. Blandan var samsett úr 50 µL af olíusýnum (PSO1, PSO2, COM1, COM2) og línólsýru, 50 µL af 50 prósenta línólsýru í DMSO, 50 µL af 10 prósenta ammoníumþíósýanati (NH4SCN) vatnslausn og 50 µL af 2 mM járnklóríði (FeCl2). Í kjölfarið var blandan ræktuð við 37 ± 2 ◦C í 1 klst og OD mæld við 500 nm með því að nota örplötulesara (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, Englandi). -Tókóferól (0,025–0,1 mg/ml) var notað sem jákvæður samanburður. Tilraunirnar voru gerðar í þríriti og framkvæmdar í þremur sjálfstæðum einstaklingum. Hömlunarvirkni lípíðperoxunar var reiknuð út með jöfnu (2):
Fituperoxunarhömlun ( prósent )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA−ODB)} × 100, (2)
þar sem ODA er OD blöndunnar sem inniheldur línólsýru, NH4SCN og FeCl2; ODB er OD DMSO; ODC er OD blöndunnar sem inniheldur olíusýni, línólsýru, NH4SCN og FeCl2; og ODD er OD blöndunnar sem inniheldur olíusýni og DMSO.

2.6. Ákvörðun á virkni gegn öldrun

2.6.1. Virkni gegn hýalúrónídasa

Mæling á virkni andhýalúrónídasa var framkvæmd eins og áður hefur verið lýst af Chaiyana o.fl. (2020) [31]. Fyrst var 20 µL af olíusýnum (PSO1, PSO2, COM1, COM2) blandað saman við 100 µL af 15 U/mL hýalúrónídasalausn og ræktað við 37 ◦C í 10 mínútur. Eftir ræktunina var 100 µL af 0,03% w/v hýalúrónsýru sem var leyst upp í 20 mM fosfatbuffi (pH 5,35) bætt við, síðan ræktað við 37 ◦C í 45 mínútur. Eftir það var 1 ml af 0,1 prósenta sermi albúmíni úr nautgripum bætt við og ræktað við stofuhita í 10 mín. OD var ákvarðað við 600 nm með því að nota multimode skynjari (Beckman Coulter DTX880, Fullerton, CA, Bandaríkjunum). Óleanólsýra (0,25 prósent w/v) var notuð sem jákvæður samanburður. Tilraunirnar voru gerðar í þríriti og framkvæmdar í þremur sjálfstæðum einstaklingum. Hlutfall hýalúrónídasa hömlunar var reiknað út með jöfnu (3):

Hýalúrónídasa hömlun ( prósent )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (3)
þar sem ODA er OD blöndunnar sem inniheldur DI vatn, hýalúrónídasalausn og hýalúrónsýru; ODB er OD blöndunnar sem inniheldur DI vatn og fosfatjafnalausn (pH 5,35); ODC er OD blöndunnar sem inniheldur olíusýni, hýalúrónídasalausn og hýalúrónsýru; og ODD er OD blöndunnar sem inniheldur olíusýni og fosfatjafna (pH 5,35).

2.6.2. And-kollagenasa virkni

Mæling á and-kollagenasavirkni var framkvæmd samkvæmt ferlinu sem Chaiyana o.fl. (2019) og Thring o.fl. (2009) með smávægilegum breytingum [32,33]. Í stuttu máli var 20 µL af olíusýnum (PSO1, PSO2, COM1, COM2) blandað saman við 20 µL af 0,1 U/mL kollagenasalausn frá Clostridium histolyticum og ræktað við 37 ◦C í 15 mínútur. Eftir ræktun, 80 µL af 50 mM tricine jafnalausn (400 mM NaCl og 10 mM CaCl2, pH 7,5) og 40 µL af N-[3-(2-fúrýl) akrýlóýl]-Leu-Gly- Pro-Ala (FALGPA) hvarfefnislausn var bætt við. OD var strax greint við 340 nm og síðan mældur stöðugt í 20 mínútur með því að nota örplötulesara (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, Englandi). Óleanólsýra (1 prósent w/v) var notuð sem jákvæður samanburður. Tilraunirnar voru gerðar í þríriti og framkvæmdar í þremur sjálfstæðum einstaklingum. Hlutfall kollagenasahömlunar var reiknað út með jöfnu (4):

Kollagenasa hömlun ( prósent )=[(ODA − ODB)/ODA] × 100, (4)
þar sem ODA er OD blöndunnar sem inniheldur olíusýni, kollagenasalausn, tricine buffer og FALGPA hvarfefni; og ODB er OD blöndunnar sem inniheldur DMSO, kollagenasa lausn, tricine jafnalausn og FALGPA hvarfefni.

2.6.3. Virkni gegn Elastasa

Mæling á and-elastasavirkni var framkvæmd samkvæmt ferlinu sem Chaiyana o.fl. (2019) og Thring o.fl. (2009) með smávægilegum breytingum [32,33]. Í stuttu máli var 10 µL af olíusýnum (PSO1, PSO2, COM1, COM2) blandað saman við 40 µL af 0,03 U/mL elastasalausn úr brisi úr svínum, síðan 50 µL af 200 mM Tris-HCL jafnalausn (pH 8,0) og 1 µL af 00 0,8 mM N-súkkínýl-Ala-Ala-Ala-p-nítróanílíð (AAAPVN) hvarfefnislausn var bætt við. OD var strax greint við 410 nm og síðan mældur stöðugt í 20 mínútur með því að nota örplötulesara (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, Englandi). Óleanólsýra (1 prósent w/v) var notuð sem jákvæður samanburður. Tilraunirnar voru gerðar í þríriti og framkvæmdar í þremur sjálfstæðum einstaklingum. Hlutfall elastasahömlunar var reiknað út með jöfnu (5):

Elastasa hömlun ( prósent )=[(ODA − ODB)/ODA] × 100, (5)
þar sem ODA er OD blöndunnar sem inniheldur olíusýni, elastasalausn, Tris-HCl jafnalausn og AAAPVN hvarfefni; og ODB er OD blöndunnar sem inniheldur DMSO, elastasalausn, Tris-HCl jafnalausn og AAAPVN hvarfefni.

2.7. Ákvörðun á and-tyrosinasavirkni

Hvítandi áhrif náttúrulegs útdráttar voru staðfest með and-tyrosinasa virkni mælingu sem var framkvæmd samkvæmt Saeio o.fl. (2011) og Laosirisathian o.fl. (2020) [29,34]. L-týrósín og L-DOPA voru hvarfefni týrósínasa ensímsins í þessari rannsókn. Í stuttu máli var 10 µL af olíusýnum (PSO1, PSO2, COM1, COM2) blandað saman við 30 µL af tyrosinasa í 96-brunnsplötu, síðan ræktað við stofuhita í 10 mínútur. Eftir ræktun var 100 µL af hvarfefninu, sem er 2,5 mM af L-týrósíni eða L-DOPA, bætt við og ræktað í 30 mín. OD var ákvarðað við 450 nm með því að nota örplötulesara (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, Englandi). Kojínsýra (20 µg/ml) var notuð sem jákvæð viðmiðun. Tilraunirnar voru gerðar í þríriti og framkvæmdar í þremur sjálfstæðum einstaklingum. Hlutfall týrósínasa hömlunar var reiknað út með jöfnu (6):

Týrósínasa hömlun ( prósent )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (6)
þar sem ODA er OD blöndunnar sem inniheldur DMSO, týrósínasa ensím og L-týrósín; ODB er OD blöndunnar sem inniheldur tyrosinasa ensím og PBS með pH 6,8; ODC er OD blöndunnar sem inniheldur olíusýni, týrósínasa ensím og L-týrósín; og ODD er OD blöndunnar sem inniheldur olíusýni, tyrosinasa ensím og PBS með pH 6,8.

2.8. Tölfræðigreining

Sýnt var fram á öll gögn sem meðaltal ± staðalfrávik (SD). Tölfræðileg marktekt var greind með einhliða dreifnigreiningu (ANOVA) og fylgt eftir með Tukey's post-hoc prófi með GraphPad Prism (útgáfa 8.0, GraphPad Software), og p < 0.05 var talið. tölfræðilega marktækt.

cistanche herb

3. Niðurstöður og umræður

3.1. Graskerfræolíupersóna

Í þessari rannsókn notuðum við vatnskenndan ensímútdrátt í stað lífræns leysisútdráttar til að vinna graskersfræolíu úr C. moschata Duch. Ex Poir (PSO1) og C. moschata (PSO2) vegna þess að það er einfalt, áhrifaríkt og afkastamikið ferli [15,21]. PSO1 var dökkbrúnn vökvi með lága seigju, en PSO2 var grænbrúnn vökvi með lága seigju. Báðar graskersfræolíur höfðu sína einkennandi lykt. Afrakstur PSO1 og PSO2 var 17,7% v/w og 15,6% v/w, í sömu röð. Fyrir utan olíuna hefur verið greint frá því að graskersfræ innihaldi margs konar næringarefnasambönd. Nálægar samsetningar C. moschata voru aðallega kolvetni (39,51 prósent), síðan fita (28,49 prósent), prótein (19,23 prósent), vatn (7,67 prósent) og aska (5,18 prósent), í sömu röð [35]. Hins vegar, samanborið við fyrri rannsóknir með leysi og vélrænni pressun, sýndi núverandi rannsókn minni uppskeru af C. moschata olíu. Þrátt fyrir að leysiútdráttur hafi verið lýst sem áhrifaríkustu olíuútdráttaraðferðinni, þar sem allt að 98 prósent af olíum er dregið úr fræjum, eru nokkur atriði varðandi leifar leysiefna og hreinleika framleiddu olíunnar [36]. Að auki hafði leysirinn sem notaður var í útdráttarferlinu áhrif á afrakstur olíunnar sem myndast. Útdráttur með hexani, jarðolíueter, jarðolíubenseni, sýklóhexani, ísóprópýleter, etýlasetati, tetrahýdrófúrani, própan-2-óli og asetoni gaf 43,4–64,4 prósent [37,38]. Þar af leiðandi var kaldpressa æskilegri en leysiefnisútdráttur. Hins vegar getur kaldpressa valdið nokkrum flækjum á upphafsstigi notkunar skrúfupressu [39]. Þess vegna gæti vatnskennd ensímútdráttur verið önnur útdráttaraðferð þar sem hún gaf hærra graskersfræolíuinnihald (36,0 prósent) samanborið við kaldpressaða olíu (33,5 prósent) [21]. Þó ferlið við vatnskennda ensímútdrátt hafi verið flóknara en kaldpressan, felur það í sér tiltölulega ódýrari fjárfestingarkostnað, áframhaldandi lækkun á kostnaði við ensímblöndur í atvinnuskyni, möguleika á að einangra einstaka og verðmæta plöntuefnafræðilega íhluti samtímis, auk þess að takast á við útbreidd löngun til að innleiða græna tækni [21]. Bráðabirgðarannsóknir lýstu því að nokkur ensím eins og frumu, pektínasa, hemisellulasa og próteasa hafa oft verið notuð til að eyðileggja byggingu frumuveggja plantna til að auka lífvirkan útdrátt úr plöntum [16,17]. Þess vegna hönnuðum við þessa rannsókn til að vinna út fræolíu með því að nota ensímblöndu sem inniheldur pektínasa, sellulósa og próteasa (1:1:1) eins og áður var lýst af Kanopka o.fl. (2016), sem fínstillti ensímvatnsrofsskilyrði til að fá sem mesta uppskeru af graskersfræolíu [21]. Ennfremur sýnir þessi aðferð öruggari og umhverfislega sjálfbærari valkosti við útdrátt leysiefna, hér nefnd "græn útdráttur".

3.2. Efnafræðileg samsetning graskersfræolíu

Til greiningar á fitusýrusamsetningu var graskersfræolía með vatnskenndri ensímútdrætti (PSO1 og PSO2) borin saman og greind ásamt graskersfræolíu (COM1 og COM2) sem framleidd er með kaldpressuútdrætti. Fitusýrusamsetning PSO1, PSO2, COM1 og COM2 er sýnd í töflu 1. Öll graskersfræolíusýni samanstóð af fjölómettuðum (PUFA), einómettuðum (MUFA) og mettuðum fitusýrum. Cis-línólsýra (C18:2) var aðalþátturinn í öllum olíusýnum. COM2 innihélt mesta fitusýruinnihaldið (51,74 prósent), þar á eftir COM1 (48.00 prósent), PSO1 (39.09 prósent) og PSO2 (37.63 prósent), í sömu röð. Á sama hátt var cis-olíusýra (C18:1) til staðar í háu hlutfalli, sérstaklega í PSO2 (37,45 prósent), þar á eftir COM1 (33,39 prósent), PSO1 (31,22 prósent) og COM2 (28,64 prósent). Mettaðar fitusýrur eins og palmitínsýra (C16:0) og sterínsýra (C18:0) fundust aðeins í litlu magni í hverju olíusýni. Snefilmagn af öðrum PUFA, MUFA og mettuðum fitusýrum sást einnig og greindist.

Í bókmenntum er línólsýra einnig þekkt sem omega-6, ómissandi fitusýra sem mannslíkaminn getur ekki myndað, aðeins fengið með neyslu. Línólsýra er mikilvægt næringarefni fyrir heilsufar hjá mönnum, sem felur í sér forvera keramíðs sem er stór hluti frumuhimnunnar, D-vítamíns og margs konar hormóna [40,41]. Dýrarannsóknir hafa sýnt að skortur á línólsýru getur valdið hreistruð og kláða í húð [23]. Að auki hefur línólsýra úr jurtaolíu stutt við lækningu húðsára ásamt því að koma í veg fyrir húðbólgu og unglingabólur [23]. Þar að auki hefur olíusýra, eða omega-9, verið gagnleg til að koma í veg fyrir krabbamein, sjálfsofnæmis- og bólgusjúkdóma [42]. Reyndar dró olíusýra verulega úr framleiðslu nituroxíðs á sárstaðnum, sem leiddi til hraðari lokunar sárs [43]. Þessi gögn styðja að graskersfræolía, sem auðgar línólsýru (omega-6) ​​og olíusýru (omega-9), hefur hugsanlega heilsufarslegan ávinning.

cistanche tubulosa

Samkvæmt niðurstöðum okkar samanstóð graskersfræolía (PSO1, PSO2, COM1 og COM2) af mörgum fitusýrum, þar á meðal línólsýru (C18:2), olíusýru (C18:2), palmitínsýru (C16:0) og sterínsýra (C18:0) sem eru algengir þættir sem finnast í graskersfræolíu [44]. Línólsýra (omega-6) og olíusýrur (omega-9) voru ríkjandi í öllum olíusýnum. Mesta magn línólsýru var COM2, næst á eftir COM1, PSO1 og PSO2, í sömu röð. Einnig var mesta magn af olíusýru PSO2, þar á eftir COM1, PSO1 og COM2. Þessar niðurstöður útskýra að vatnskenndur ensímútdráttur úr graskersfræolíu hafði aðeins lægri línólsýru, en ekki olíusýru en kaldpressuútdrátt. Ástæðan fyrir lægra innihaldi línólsýru í graskersfræjum frá vatnskenndri ensímútdrætti en í olíusýnum í atvinnuskyni var vegna mismunar á útdráttarferlinu. Fyrri rannsóknir hafa fundið ósamræmi í magni ómettaðra fitusýra, sérstaklega olíusýru og línólsýru, í graskersfræolíu frá mismunandi útdrætti [39]. Innihald olíusýru var á bilinu 28,19 prósent í kaldpressaðri graskersfræolíu til 30,56 prósent í graskersfræolíu sem unnin er með pentani, en innihald línólsýru var á bilinu 43,86 prósent í graskersfræolíu sem dregin var út með pentani í 46,67 prósent í kaldpressaðri graskersfræolíu [39]. Fyrir utan mismunandi útdráttaraðferðir höfðu leysiefnin sem notuð voru í útdráttarferlinu og hitastigið við fræþroska einnig áhrif á línólsýruinnihald plöntufræanna. Fyrri rannsókn sýndi fram á að jarðolíueter gaf línolíu með lágu línólinnihaldi (26,2 prósent), en n-hexan gaf misvísandi niðurstöður með línólsýruinnihald upp á 46,5 prósent [45]. Að auki er línólsýra í öfugu hlutfalli við hitastig við þroska sólblómafræja [46].

Að auki uppgötvaði afstæð rannsókn að efnasamsetningin hvað varðar fitusýrusamsetningu leiddi í ljós að línólsýra og olíusýra voru til staðar í 47,45 prósentum og 35 prósentum, í sömu röð, í graskersfræolíu (C. maxima) sem var útdregin með díetýleter [47] . Samkvæmt Akin o.fl. (2018), var innihald línólsýru á bilinu 53,19 prósent til 53,27 prósent, fylgt eftir af olíusýru, sem einnig var til staðar í miklu magni á bilinu 27,52 prósent til 27,59 prósent í kaldpressaðri C. pepo L. fræolíuútdrátt [48 ]. Þess vegna fékk vatnskenndur ensímútdráttur í þessari rannsókn einnig lægri afrakstur fitusýra en útdráttur leysis og kaldpressuútdráttar sem nefnd eru í fyrri rannsóknum. Í ræktunarsamanburði komumst við að því að PSO1 (C. moschata Duch. Ex Poir) sýndi meira magn af línólsýru en PSO2 (C. moschata, eða japanskt grasker). Á ýmsan hátt sýndi PSO2 meira magn af olíusýru en PSO1. Mikilvægt er að breytileiki í fitusýrusniði og magni graskersfræolíu var háð uppruna tiltekinna yrkja, loftslagsskilyrðum og stjórnun eftir uppskeru [49]. Burtséð frá mismun á fitusýrusniði graskersfræolíu sem fengin eru með mismunandi útdráttaraðferðum, var greint frá því að olíurnar úr vatnskenndri ensímtækni væru ríkar af fytósteróli og tókóferóli [50]. Þess vegna er mælt með PSO1 og PSO2, sem voru framleidd með grænu útdráttaraðferðinni, sem aðrar graskersfræolíur til frekari notkunar.


Fyrir frekari upplýsingar: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Þér gæti einnig líkað