Áhrif glýkósíða af Cistanche á synaptic formfræðilega mýkt í öldrunarhröðun músum
Mar 11, 2022
Tengiliður: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Netfang:audrey.hu@wecistanche.com
LIAN Juanqi1, WANG Lu2, ZHAO Fujun3, LIN Shuai3, YAN Xusheng4, JIA Jianxin4, CAI Zhiping4
(1. Einkunn 2014 frá Graduate School of Baotou Medical College, Baotou 014060, Kína)
(2. 12. flokkur í klínískri læknisfræði 2015 í Baotou Medical College)
(3. 1. flokkur í réttarlækningum 2013 í Baotou Medical College)
(4. Líffærafræðideild Baotou Medical College)
ÁSTANDUR
Hlutlæg: Til að kanna áhrif afglýkósíð afcistanche (GCs) um synaptic plasticity hippocampal taugafrumna í öldrunarhröðuðu músum sem eru viðkvæmar 8 (SAMP8).Aðferðir: 40 músum var skipt af handahófi í samanburðarhóp, burðarefnishóp, lágskammtahóp (gefin GCs 2,5 mg/kg ·d), miðskammtahóp (gefin GCs 5.0 mg/kg d) og háskammtahóp (gefin GCs 10,0 mg / kg · d). Mýsnar í samanburðarhópnum fengu engin inngrip; þeir í hópum sem voru gefnir og burðarefnishópurinn gengu í gegnum kviðarholsgjöf (GCs / saltvatn) eða saltvatn í 30 d. Fjöldi eðlilegra pýramída taugafruma á hippocampal CA1 svæðinu var talinn með Nissl litun; fjöldi dendritic hryggjar í taugamótum var talinn með Golgi litun og prótein tjáning PSD-95 var magngreind með ónæmisvefjafræði.Niðurstöður: Samanborið við þá í samanburðarhópnum jók GC marktækt fjölda eðlilegra pýramída taugafrumna á hippocampal CA1 svæðinu (P<0.05) and="" increased="" the="" number="" of="" dendritic="" spines="" in="" synapses="" (p=""><0.05). the="" expression="" levels="" of="" psd-95="" in="" administered="" groups="" were="" significantly="" higher="" than="" that="" in="" the="" control="" group="" (p=""><0.05), and="" the="" effect="" in="" the="" middle="" dose="" group="" was="" the="" most="" significant.="">Niðurstaða: GCs geta bætt lifunartíðni hippocampal pýramídafrumna og bætt synaptic plasticity.
LYKILORÐ: Glycosides of cistanche (GCs); Öldrunarhraða mús; Dendritic hrygg; PSD - 95
Með því að öldrun þjóðfélagshópsins verður sífellt alvarlegri verður algengiAlzheimer-sjúkdómur(AD) hefur smám saman aukist, sem hefur lagt þunga byrði á fjölskyldur sjúklinga og samfélagið
[1]. Helstu klínísku einkenni AD eru vitsmunaleg skerðing og minnisskerðing, og helstu einkenni tilfella eru senile skellur sem myndast af utanfrumu amyloid útfellingum og innanfrumu taugatrefjaflækjum[2]. Meingerð AD er enn ófullnægjandi. Meinafræðilegar breytingar á taugamótum eru taldar vera taugalíffræðilegur grunnur AD minnis og vitræna truflun. Óeðlilegar breytingar á taugamótum geta verið kjarninn í meingerð AD. Senescence accelerated mouse (SAM) er innræktuð öldrunarmús. P8 undirlína þess hefur samræmda og stöðuga sjúklega öldrunareiginleika, sem kemur fram í stigvaxandi hnignun í námi og minni og viðurkenningu með fjölgun mánuðum. Þekkt vanstarfsemi og meinafræðileg einkenni eru svipuð og AD-sjúklingar, þannig að SAMP8 mýs eru tilvalið dýralíkan til að rannsaka hvernig öldrunartengd náms- og minnisskerðing fer fram.
Þessi grein ætlar að greina lifunartíðni frumna, mæla þéttleika tannhryggjar og greina samþjöppun eftir taugamótun til að kanna mögulegan gangverk GCs(glýkósíð afcistanche)hafa áhrif á synaptic formfræðilega mýkt hippocampus taugafrumna í hröðum aldri músum, með það fyrir augum að meðhöndla AD-tengdacistancheglýkósíð(GCs) Staðbundið nám og minnisskerðing gefur fræðilegan og tilraunagrundvöll.
1 Efniviður og aðferðir
1.1 Tilraunadýr og hópur 40 karlkyns 10-mánaða gamlar SAMP8 mýs (keyptar frá Tianjin University of Traditional Chinese Medicine), alin í hreinu umhverfi, umhverfishita (24.0 ± 1.0) gráðu, raki (50,0 ± 5,0) prósent, ókeypis matur og vatn. Dýrin voru alin upp í 11 mánaða aldur til að hefja tilraunina. Dýrunum var skipt af handahófi í 5 hópa (8 dýr/hópur): blindviðmiðunarhópur (viðmiðunarhópur), samanburðarhópur með leysi (burðarefni),cistanche heildarglýkósíð(GCs) lágskammtahópur [2,5 mg / (kg ·d)], hópur meðalstórskammta [5. 0 mg/(kg · d)], stórskammtahópur [10.0 mg/(kg · d)]. Dýr í samanburðarhópnum fengu engin inngrip. Dýrunum í lágskammtahópnum voru gefin GCs 2,5 mg / (kg ·d), dýrin í miðskammtahópnum fengu GCs 5.0 mg / (kg ·d) og dýrin í háskammtahópurinn fékk GCs. 0 mg/(kg ·d), dýrum í burðarefnishópnum var gefið sama magn af venjulegu saltvatni. Stöðug inndæling lyfja eða lífeðlisfræðilegs saltvatns í kviðarhol í 30 daga, 0,5 ml/d.
1.2 Sýnaundirbúningur og vinnsla Dýrunum var fórnað 24 klukkustundum eftir síðustu gjöf, svæfð og hálsinum fórnað. Skerið brjóstholið til að afhjúpa hjartað, skerið hægra gáttarviðhengið til að hleypa blóðinu út og stingið gegnflæðisnálinni í vinstri slegil. Eftir að 100 ml af venjulegu saltvatni var gefið inn var haldið áfram að gefa 4 prósent paraformaldehýð þar til útlimir músanna voru stífir. Taktu heilann og settu hann í 4 prósent paraformaldehýð í meira en 24 klukkustundir.
1.3 Lyf og hvarfefni GCs(glýkósíð afcistanche) voru keyptir frá China Academy of Traditional Chinese Medicine, postsynaptic density －95, PSD －95 voru keyptir frá Epitomic, Coomassie Brilliant Blue CBBG 250 Kit var keypt frá Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd. Engineering Institute, DAB immunohistochemistry Kit var keypt frá Beijing Zhongshan Jinqiao líftæknifyrirtækið.
1.4 Nissl litun og frumufjöldi 4 prósent paraformaldehýð festing heilavefs í meira en 24 klukkustundir, klipping og þurrkun með hallandi alkóhóli, gagnsæju xýleni, vaxídýfingu, hefðbundinni paraffíninnfellingu, 5 μm þykkt raðhluti. Skerið sneiðar og afvaxið í vatn, litið með 1 prósent tólúidínbláu við 37 gráður í 60 mínútur, þvoið í 5 mínútur × 3 sinnum, aðgreint með 95 prósent alkóhóli, 100 prósent alkóhóli. smásjá. CA1 svæði sama hippocampal hluta hvers hóps var valið af handahófi úr 3 athugunarreitum (×100), fjöldi eðlilegra pýramídafrumna innan 1 mm var talinn og meðaltalið tekið til greiningar.
1.5 Breytt Golgi-litun Settu viðgerða heilavefinn í Golgi-Cox litunarlausn, verndaðu gegn ljósi í 14 daga og skiptu um lausnina á 2 daga fresti; settu heilavefinn í 30 prósent súkrósa og settu hann í kæliskáp við 4 gráður. Hægt er að skera vefinn í sneiðar eftir að hafa sokkið til botns; titrandi míkrótóm til að skera og lita; fixer lausn fyrir þróun; þurrkun uppsetningarplötunnar, athugun og talning undir smásjá. Fylgstu með breytingum á dendritic hrygg í taugafrumum toppi hippocampus CA1 og CA3 í hverjum hópi músa, og reiknaðu þéttleika dendritic hrygg.
1.6 Ónæmisvefjaefnahlutarnir voru afparaffínaðir í vatn, ræktaðir með 3 prósent H2O2 í 10 mínútur til að útrýma innrænni peroxidasavirkni, þvegnir með eimuðu vatni í 5 mínútur × 3 sinnum, lagaðir með háþrýstiörbylgjuofni, þvegnir með PBS í 5 mínútur × 3 sinnum, geitasermi var stíflað í 30 mínútur við stofuhita, kanínu-and-músa PSD-95 aðal mótefni var bætt í dropatali, yfir nótt við 4 gráður, þvegið með PBS í 5 mínútur × 3 sinnum var bíótínmerktu aukamótefni bætt við í dropatali, ræktað við 37 gráður í 2 klst, þvegið með PBS í 5 mín × 3 sinnum, sleppt piparrótarperoxídasa merktu streptavídíni, þvegið með PBS í 5 mínútur × 3 sinnum, þvegið með DAB í 2 mínútur, mótlitun með hematoxýlíni, þurrkuð með hallandi alkóhóli, gagnsæ með xýleni og festu. 1.7 Myndvinnsla og tölfræðigreining. Sami þverskurður hippocampus af hverjum hópi var valinn til athugunar. Þrjú sjónsvið (×100) voru valin af handahófi á CA1 svæðinu til að telja fjölda eðlilegra pýramídafrumna innan 1 mm og meðaltalið var greint. Niðurstöður ónæmisvefjafræðinnar voru mældar með IPP 7.0 myndgreiningarhugbúnaði. Tilraunagögnin voru greind með SPSS 17.0 hugbúnaði og einhliða ANOVA var notuð til að bera saman fjölsýna meðaltal. P<0.05 was="" considered="" statistically="">
Anti-Alzheimer sjúkdómur
2 úrslit
2.1 Áhrif heildarglýkósíða afcistancheum talningu eðlilegra pýramídafrumna í hippocampus SAMP8 músa Nissl litun Nissl litun Nissl litun sýndi að taugafrumum á CA1 svæði viðmiðunarhóps fækkaði, fyrirkomulagið var röskað og flestar frumurnar voru óeðlilegar í formgerð og lýsi og drep. Formgerð frumna í GCs(glýkósíð afcistanche)hópurinn var tiltölulega skýr og heill, með mikill fjöldi útskota sýnilegur, Nissl líkaminn var fjólublár, kjarnarnir voru djúpt litaðir, skýrir og miðlægir og kjarnarnir voru ekki litaðir. Frumugerð burðarefnahópsins er svipuð og samanburðarhópsins. Frumutalan sýndi að fjöldi eðlilegra pýramída taugafrumna á CA1 svæði lyfjagjafarhópsins jókst (P<0.05); the="" difference="" between="" the="" medium="" and="" high="" dose="" groups="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05), the number of normal pyramidal neurons To a certain extent, it shows an upward trend with increasing dose. There was no significant difference in the number of normal pyramidal cells between the vehicle group and the control group (P>0.05). Sjá töflu 1.
Tafla 1 Áhrif Cistanche glýkósíða á SAMP8 músa Hippocampal Nis litun, eðlilega pýramídafrumufjölda og dendritic spines number (stk)
a er borið saman við samanburðarhópinn t=0.193, P=0.582; b er borið saman við samanburðarhópinn t=13.621, P=0.008; c er borið saman við samanburðarhópinn t=21.798 , P=0.005; d er borið saman við samanburðarhóp t=18.326, P=0.006; e er borið saman við samanburðarhóp t=0.244, P=0.463; f er borið saman við samanburðarhóp Samanborið við t=10.903, P=0.010; g er borið saman við samanburðarhópinn t=21.817, P=0.005; h er borið saman við samanburðarhópinn t=15.572, P=0. 007.
2.2 Theáhrif heildar glýkósíða afcistanche á þéttleika tannhryggja í SAMP8 músum Golgi litun sýndi að fjöldi tannhryggja í samanburðarhópnum minnkaði og þéttleikinn minnkaði. Eftir að dýrum var gefið GCs jókst fjöldi og þéttleiki tannhryggja og mikill fjöldi útskota sást (P=0.048). Enginn tölfræðilega marktækur munur var á hópnum sem fékk meðalskammta og hópinn sem fékk háskammta (P=0.853). Fjöldi og þéttleiki dendritic hryggsins. Stigið sýnir upp á við með aukningu skammta. ökutækjahópur og eftirlit
Fjöldi og þéttleiki dendritic hryggjar í hópnum hefur enga tölfræðilega þýðingu (P=0.764). Sjá töflu 1.
2.3 Áhrif afCistancheglýkósíð á tjáningu PSD-95 í SAMP8 músum. Ónæmisvefjaefnafræðileg eigindleg uppgötvun PSD-95 sýndi að samanburðarhópurinn hafði minni tjáningu á PSD-95, litun frumunnar var léttari og jákvæð tjáningartíðni var lægri. Eftir viðbót við GCs in vitro litaðist frumulíkaminn dýpra og tjáning og jákvætt hlutfall PSD-95 jókst (t=5.751, P<0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" the="" middle-dose="" group="" and="" the="" high-dose="" group="" (t="1.077," p="">0.05). Að vissu marki sýndi tjáning PSD-95 upp á við með vaxandi skömmtum. farartæki
There was no statistically significant difference in PSD-95 expression between the control group and the control group (t = 0.585, P>0.05).
3 Umræður
PSD-95 er aðalþátturinn eftir taugamótun og tengist margs konar taugamótunaraðgerðum, sem felur í sér jónagöngur, taugamótavirkni, innanfrumu merkjaflutningsferla osfrv. [3]. PSD-95 klasar skyld prótein í NMDA viðtakaboðaleiðinni til að mynda viðtakamerkjasameind-stýrandi sameindarmiðaða sameindarsamstæðu [4], sem gegnir lykilhlutverki í merkjaflutningsferlinu. NMDA viðtakar taka þátt í framkalli langtímastyrkingar (LTP) á CA1 svæðinu í hippocampus og ferli náms og minnis [5]. PSD-95 gegnir lykilstjórnarhlutverki í þessu ferli og hægt er að nota próteininnihald þess sem Annað sameindamerki til að mæla synaptic mýkt. Í fyrri rannsóknum okkar höfum við sannað að GCs(glýkósíð afcistanche)getur bætt nám og vitræna skerðingu hjá SAMP8 músum, en við höfum ekki skýrt mögulega frumuformgerð þess. Þessi tilraun miðar að því að rannsaka mögulega frumuformgerð þess.
Í þessari tilraun var bætt lifunartíðni pýramídafrumna og mýkt í taugamótum í GCs(glýkósíð afcistanche)hópurinn var betri en ökutækjahópurinn og samanburðarhópurinn. Það má sjá að GCs bættu formgerð pýramídafrumna verulega. Tilraunaniðurstöðurnar sýna að stærri skammtar af GC geta haft betri áhrif. Af samanburði á milliskammtahópnum og háskammtahópnum má sjá að áhrifin breytast ekki marktækt þegar skammturinn nær ákveðnum styrk. Þess vegna, til að forðast sóun og aukaverkanir af GCs þegar GCs eru notaðar, ætti að velja viðeigandi styrk [6].
Fyrri rannsóknir hafa sýnt að GCs(glýkósíð afcistanche)getur bætt náms- og vitrænaskerðingu SAMP8 músa með því að bæta lifun pýramídafrumna [7]. Það eru líka gögn sem benda til þess að GCs geti bætt taugahrörnunarsjúkdóma með því að stuðla að útbreiðslu og sérhæfingu taugastofnfrumna [8-10]. Höfundur telur að hægt sé að ná fram kerfi fyrir GCs til að bæta AD með því að bæta mýktleika taugamótunarformgerðar og viðhalda fjölda pýramídafrumna, sem leggur grunninn að fullkominni notkun GCs í forvörnum og meðhöndlun klínísks AD.
Heimildir
[1] Chen Juluo, Chen Xingui, Hu Panpan, o.fl. Alzheimer-sjúkdómssjúklingar nota aðgerðir Forrannsóknir [J]. Chinese Journal of Behavioral Medicine and Brain Science, 2013, 22 (10): 889-891.
[2] Jin Chunhui, Liu Xiaowei, Yuan Jianmin, o.fl. Flokkunarviðtaka 1 gena stakt núkleósíð Fylgni milli sýrufjölbreytni og einstaka Alzheimerssjúkdóms［J］. Chinese Journal of Behavioral Medicine and Brain Science, 2014, 23 (5): 427-429.
[3] Schliebs R, Arendt T. Mikilvægi kólínvirka kerfisins í heilanum við öldrun og við Alzheimerssjúkdóm［J］. Neural Transm, 2006, 113 (11): 1625-1644.
[4] Soriano FX. Sérstök miðun á NMDA viðtakamerkja sem stuðla að dauða með mismunandi trausti á NR2B PDZ bindilinn［J］． J Neurosci, 2008, 28 (42): 10696-10710.
[5] Selkoe DJ. Leysanlegar fáliður amyloid beta-próteins skerða synaptic mýkt og hegðun ［J］． Behav Brain Res, 2008, 192 (1): 106 -113.
[6] Huang Zonghui, Chen Guanmin, Zhao Kangtao, o.fl. Rannsókn á eiturverkunum Cistanche ［J］. China Journal of Hygiene Inspection, 2014, 24 (8): 1098 -1100.
[7] Jia Jianxin, Song Wei, Yan Xusheng, o.fl. Heildarglýkósíð í cistanche hafa áhrif á SAMP8 mýs. Áhrif og vélbúnaður innbyrðis náms og minnis［J］. Journal of Baotou Medical College, 2014, 30 (6): 6-8.
[8] Xiao Q, Yan P, Ma X, o.fl. Efling astrocytic lysosome biogenesis auðveldar A úthreinsun og dregur úr amyloid plaque meingerð［J］． J Neurosci, 2014, 34 (29): 9607-9620.
[9] Li QJ, Tang YM, Liu J, o.fl. Meðferð við Parkinsonsveiki með C172 taugastofnfrumum sem oftjáa NURR1 með endursamsettri lýðveldis-deficit adenovirus sem inniheldur NURR1 genið［J］. Synapse, 2007, 61 (12): 971-977.
[10] Qin Wei, Wei Wei, Xu Qian, o.fl. Cistanche á útbreiðslu C172 taugastofnfrumna Áhrif [J]. Strait Pharmacy, 2015, 27 (12): 263-265.