ABSTＲACT

Markmið: Að skýra hvort almenntcistanosíður(GCs) bætirvitræna truflunmýs sem eldast hratt (SAMP8) með því að miðla sértækum andrógenviðtökum (AＲ) ístjórnun á tjáningu taugamótapróteins． 

Aðferðir: Alls 76 7-mánaðargamlar karlkyns SAMP8 músum var skipt af handahófi í líkanhópinn, GCs hópinn, GCs + flútamíð (F) hópinn, GCs + fulvestrant (ICI) hópinn, F hópinn og ICI hópinn. Náms- og minnisvirkni músa í hverjum hópi var prófuð með Morris vatnsvölundarhúsinu. Western blotting og RT-PCR voru notuð til að prófatjáningarstig synaptófýsíns(SYN), postsynaptic density - 95 (PSD - 95), og heila-afleiddur taugakerfisþáttur (BDNF) músa í hverjum hópi.

Niðurstöður: GCs bættu verulega nám og vitræna virkni SAMP8 músa.

Í samanburði við GCs hópinn var nám og minnisvirkni músa í GCs + F hópnum og GCs + ICI hópnum verulega lækkuð. Western blotting og RT-PCR niðurstöður sýndu að tjáningarstig BDNF, SYN og PSD－ 95 var marktækt aukið á próteinstigi og genastigi í GCs hópnum samanborið við Model hópnum (P ＜ 0． {{ 11}}5) ． SYN tjáningarstig jókst í GCs + F og GCs + ICI hópnum og tjáningarmagn BDNF og PSD － 95 var marktækt lækkað í GCs + F og GCs + ICI hópnum samanborið við GCs hópnum (P ＜ 0． 05) ．

Ályktun: GCs geta sérstaklega miðlað AＲ til að auka synapticplasticity í SAMP8 músum, sem aftur bætir nám og vitræna virkni.

LYKILORÐ:Almennar cistanosíður; Andrógenviðtaki; Synaptic plasticity; SAMP8 mýs

Cistanche viðbót Vitsmunaleg virkni bætt Fæðubótarefni PhGs75% Ech 30% Act 12%

Alzheimer-sjúkdómur(AD) er algengttaugafræðilegur hrörnunarsjúkdómur, sem einkennist klínískt af versnandi skerðingu á vitrænni starfsemi og breytingum á andlegri og sálrænni stöðu [1]. Rannsóknir hafa leitt í ljós að testósterónmagn hjá karlkyns AD sjúklingum er marktækt lægra en hjá venjulegum körlum.

Hiðvitræna starfsemi sjúklingahefur verið endurbætt í mismiklum mæli eftirketónuppbótarmeðferð[2], sem gefur til kynna að aldurstengd lækkun á andrógenmagni gæti verið áhættuþáttur fyrir AD hjá eldri körlum.

Cistanche deserticola heildarglýkósíð (almennar cistanosíður, GCs) eru einn helsti útdráttur Cistanche deserticola, sem getur bætt AD-tengt nám ogvitræna truflun[3]. Að auki jók gjöf GCs með magaslöngu marktækt testósterónmagn hjá dýrum [4]. GCs hafa einnig það hlutverk að stuðla að yang og geta beitt

Andrógenlík lyfhrif. Fyrri rannsóknir hafa greint frá því að testósterón geti bætt nám og vitræna virkni AD líkandýra og þetta ferli byggir á sérstökum andrógenviðtaka (andrógenviðtaka, AR) miðluðum [5].

Það er vel þekkt að vitræna truflun hjá AD sjúklingum er nátengd synaptic plasticity. Hins vegar er sérstakur vélbúnaðurinn sem GCs stjórna synaptic plasticity og bæta þar með nám og vitræna virkni enn óljóst. Þessi rannsókn miðar að því að kanna hvort GCs miðla sértækum ARＲ til að hafa áhrif á synaptic plasticity og þar með bæta nám og vitræna virkni í AD.

1 Efni og aðferðir

1. 1 Tilraunadýr og tæki

Karlkyns 3-mánaðargamlar SAMP8 mýs voru keyptar frá Peking University School of Medicine (SCXK [Beijing] 2016-0010) og voru aldar upp þar til þær voru 7 mánaða gamlar. Dýrum var haldið í hreinu umhverfi við (24 ± 1) gráðu og

Dýrin fengu náttúrulega lýsingu og ókeypis aðgang að mat og vatni og mannúðaraðstoð var veitt í samræmi við 3R meginreglur um notkun tilraunadýra. Þessi tilraunarannsókn hefur verið samþykkt af siðanefnd tilraunadýra í Baotou Medical College (Baotou Medical College nr. 20201102).

Helstu hvarfefnin í tilrauninni eru:Cistanche deserticola heildarglýkósíð(GCs, Xi'an Ciyuan Biological Co., Ltd.); andrógenviðtakablokki-flútamíð (Sigma Company, Bandaríkjunum); estrógenviðtaka mótlyf-fulvestrant (ICI 182780, USA) Med Chem Express); BDNF mótefni gegn músum frá kanínu,

PSD-95 mótefni, SYN mótefni, -aktín mótefni (Proteintech Company of the United States); prótein rafdrættislausn, próteinflutningslausn, TEMED, akrýlamíðbuffi, ammoníumpersúlfat, Tris (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.); cDNA Synthesis Kit, Talent fluorescence quantitative detection

Hvarfefnissett (Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd.), osfrv. Helstu tilraunabúnaðurinn inniheldur rafdrættistank fyrir lóðrétta plötu, rafdrættibúnað, flutningstank, aflitunarhristara (Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.), próteingelmyndgreiningarkerfi (Shanghai Tanon Technology Co., Ltd.), rauntíma flúrljómun magn PCR tæki (USA Roche) o.fl.

1. 2 Flokkun og umsýsla

Tvær mýs dóu náttúrulega meðan á fóðrun stóð og hinum 78 músum sem eftir voru var skipt af handahófi í líkanhóp, GCs hóp, GCs + flútamíð (F) hóp, GCs + fulvestrant (ICI) hóp, F hóp, ICI

Hópar með 13 dýrum hver. Að fyrirmyndarhópnum, F hópnum og ICI hópnum voru hinir hóparnir stöðugt gefin GCs í 50 mg/(kg·d) skammti í 30 daga.

Frá 24. degi eftir gjöf GCs var GCs + flútamíð (F) hópnum og GCs + fulvestrant (ICI) hópnum gefið í kviðarhol með F (5 mg/kg/d) 3 0 mínútum eftir að GCs voru gefin. með magaslöngu. ), ICI (1 mg/kg/d), samfelld inndæling í 7 daga. Stilltu skammtastyrkinn til að tryggja að hámarks magarúmmál músanna sé 0,5 ml, 1 sinni/d.

1. 3 Morris vatn völundarhús próf

Mýsnar aðlagast vatnsumhverfinu með einum degi fyrirvara. Morris vatnsvölundarhúsið stóð í 6 daga. Fyrstu 5 dagarnir voru staðsetningar- og siglingapróf. Mýsnar voru þjálfaðar einu sinni á dag í hverjum fjórða fjórðungnum í 1 mínútu í hvert sinn. Hvert æfingatímabil var 15 mínútur og met voru skráð á sama tíma. Flýjatími á staðsetningar- og siglingaprófi dýra; á 6. degi, fjarlægðu pallinn úr vatninu og gerðu geimkönnunarpróf. Skráðu fjölda yfirferða palla og hlutfall tíma sem varið er í markfjórðungi músarinnar. markfjórðungurinn) og sundferill landkönnunar (Swimming trajectory of spatialprobe test) og aðrar vísbendingar.

1. 4 Western blot uppgötvun

Tjáning á SYN, PSD-95 og BDNF taugamótatengdum próteinum. Eftir Morris vatnsvölundarprófið voru allar mýs svæfðar reglulega, höfuðið afhöfðað, heilinn fjarlægður og hippocampi fjarlægður. Hippocampus vefurinn var próteinlýstur, rofinn með ómskoðun við 4 gráður, látinn liggja á ís í 30 mínútur og skilinn í skilvindu við 12, 000 s/mín í 15 mínútur við 4 gráður. Fljótandi vökvinn var tekinn og próteinstyrkurinn mældur með BCA aðferð. Eftir að próteinið hefur verið hlaðið, framkvæmið rafdrætti í stöflun við 80 V stöðuga spennu, aðskilnaðarhlaup við stöðuga 120 V spennu og blautflutning við stöðugt flæði 300 mA; Taktu PVDF himnuna út, stífðu hana með 5% undanrennu í 80 mínútur við stofuhita og þvoðu himnuna þrisvar sinnum með TBST. 15 mín/tíma, aðal mótefni var ræktað yfir nótt á hristingsborði við 4 gráður; daginn eftir var himnan þvegin þrisvar sinnum með TBST.

15 mín/tíma, aukamótefnið var ræktað við stofuhita í 2 klst, síðan var ECL litaþróun framkvæmd og myndgreining gerð með efnaljósmyndakerfi. -aktín var notað sem innri viðmiðun og ljósþéttnigildi bandsins var greint með Image J hugbúnaði.

1. 5ＲRT－PCRＲ Uppgötvun

mRNA tjáning SYN, PSD-95 og BDNF var dregin út úr heildar-RNA í hippocampus vefjum samkvæmt Trizol útdráttaraðferðinni og cDNA var myndað eftir öfuga umritun. Talent fluorescence quantitative detection Kit var notað til hlutfallslegrar flúrljómunar magngreiningar. Tilraunin var endurtekin þrisvar sinnum og niðurstöðunum var breytt í 2 - ΔΔCT var greind. Músa-aktín, SYN, PSD-95 og BDNF grunnur voru hönnuð af Shanghai Sangon Company og grunnröðin eru sýnd í töflu 1.

1. 6 Tölfræðigreining

Í gegnum SPSS 25. 0 tölfræðihugbúnaður til vinnslu, Graphpad Prism 8 hugbúnaður var notaður til að teikna tölfræðileg myndrit og einstefnu ANOVA var notuð til að bera saman meðaltal margra sýna í pörum. P < 0. 05 þýðir að munurinn er tölfræðilega marktækur.