Áhrif kúlubólusetningar á þroska og langlífi ónæmis 1. hluti

Ágrip:

Öndunarfærasjúkdómur fugla veldur verulegu efnahagslegu tjóni hjá alifuglum í atvinnuskyni. Vegna nauðsynjar til að vernda langlífa alifugla gegn öndunarfærasýkingum frá unga aldri, felur bólusetningaráætlun fyrir hænur yfirleitt í sér raðgjöf á ýmsum bóluefnum, þar á meðal smitandi berkjubólguveiru (IBV), Newcastle-sjúkdómsveiru (NDV) og smitandi. laryngotracheitis veira (ILTV). Oft er bilið á milli bólusetninga aðeins spurning um vikur, en samt er ekki vitað hvort þróun ónæmis og vörn gegn áskorun þegar bóluefni eru gefin í stuttri röð á sér stað hjá þessum fuglum, eitthvað sem kallast veiru-truflun. Markmið okkar var að ákvarða hvort raðgefin, veiklað lifandi bóluefni gegn IBV, NDV og ILTV hafi áhrif á þróun og langlífi ónæmis og vörn gegn áskorunum hjá langlífum fuglum.

Byggt á dæmigerðu bólusetningarprógrammi fyrir ungdýr, voru hvít legghorn laus við sértæka sjúkdómsvalda gefin mörg lifandi veikt bóluefni gegn IBV, NDV og ILTV þar til 16 vikna aldur (WOA), eftir það voru ákveðnir hópar ögraðir með IBV, NDV eða ILTV við 20, 24, 28, 32 og 36 WOA. Fimm dögum eftir áskorun var veirumagn, klínísk einkenni, frostþynning, vefjameinafræði í barka og mótefnatítrar í sermi og tárum metin. Við sýnum fram á að hönum sem voru gefin í röð lifandi veiklaðra bóluefna gegn IBV, NDV og ILTV voru vernduð gegn einsleitri áreiti með IBV, NDV eða ILTV í að minnsta kosti 36 vikur og komist að þeirri niðurstöðu að bilið á milli bólusetninga sem notaðar voru í þessari rannsókn (að minnsta kosti 2 vikur ) truflaði ekki vernd. Þessar upplýsingar eru mikilvægar vegna þess að þær sýna að dæmigert bólusetningarprógramm fyrir ungfugla sem samanstendur af raðgjöfum lifandi, veikluðum bóluefnum gegn mörgum öndunarfærasýklum getur leitt til þróunar verndarónæmis gegn hverjum sjúkdómsvaldi.

Talandi um ónæmi, mannslíkaminn hefur líka ýmislegt sem getur bætt friðhelgi eins og Cistanche sem er líka ríkt af líffræðilega virkum efnum eins og peptíðum, terpenum, fenólsýrum o.fl., sem getur örvað virkjun ónæmisfrumna og bæta ónæmisfrumurnar. virka og auka ónæmi líkamans. Þessi líffræðilega virku efni geta einnig stjórnað og virkjað sjálfsofnæmisstarfsemi líkamans og bætt ónæmi manna enn frekar.

Smelltu hvenær á að taka cistanche

Leitarorð:

Smitandi berkjubólguveira; Newcastle veira; smitandi barkabólguveira; bólusetningaráætlun; ónæmi; öndunarfærasjúkdómur; kryostasis; mótefnasvörun.

1. Inngangur

Bólusetning gegn veirusjúkdómum í öndunarfærum er staðalbúnaður í alifuglastarfsemi í atvinnuskyni. Bæði lifandi og drepin bóluefni eru gefin alifuglum og lifandi bóluefni eru almennt notuð við ýmsum sýkla vegna þess að þau eru áhrifarík þegar þau eru notuð í fjölda og eru tiltölulega hagkvæm [1]. Almennt séð framkalla lifandi bóluefni staðbundið og frumumiðlað ónæmi og veita víðtækari verndarsvörun en drepin bóluefni, en drepin bóluefni valda fyrst og fremst ónæmi í húmor og hafa tilhneigingu til að vera mótefnavaka-sértæk. Lengd ónæmis sem næst eftir gjöf lifandi bóluefnis fer eftir aldri og gerð fugls, magni ónæmis móður, sjúkdómi sem bóluefnið miðar að, ónæmingargetu bóluefnisins, aðferð við bólusetningu, fjölda og bil milli örvunarlyfja, meinvirkni og líkindi. á sviði ögrunarveiru, bilið milli bólusetningar og ögrunar og ónæmishæfni hýsilsins [1-3].

Avian coronavirus smitandi berkjubólguveira (IBV) er veirusýkingur í efri öndunarvegi alifugla og leiðir til minni þyngdaraukningu og fóðurnýtni, minnkandi eggjaframleiðslu og egggæða, vaxtarskerðingar og afleiddra bakteríusýkingar sem leiðir til loftsóttarbólgu [4]. Veiran fjölgar sér upphaflega í efri öndunarvegi, síðan kemur kerfisbundin eftirmyndun í æxlunarfærum, og sumir stofnar geta valdið sárum í nýrum [4]. Sýktir fuglar geta sýnt nefrennsli, hósta, hnerra og barkaköst [4]. Komið er í veg fyrir sjúkdóminn með bólusetningu og lifandi bóluefni eru almennt notuð til að framkalla staðbundið ónæmi og vernd. Lifandi bóluefni eru almennt gefin ungum fuglum til að ná snemma vernd, og lög og ræktendur eru einnig auknir með annaðhvort lifandi eða óvirkum bóluefnum, sem eru mismunandi eftir líkingu þeirra við vírusveirurnar í blóðrásinni [2].

Newcastle-sjúkdómur (ND) stafar af illvígum stofnum fugla paramyxoveiru af tegund 1, sem nýlega hefur verið endurflokkuð sem fuglaavulaveira 1 (AAvV-1) [5]. Það fer eftir stofni veirunnar, klínísk merki um ND-sýkingu geta verið engin eða geta falið í sér þunglyndi, lystarleysi, öndunarfæraeinkenni (neflos, hnerra, hósta), minni eggframleiðslu og egggæði, og taugafræðileg einkenni (torticollis, hringing, lömun) ) [3]. Stofnar af Newcastle-sjúkdómsveiru (NDV) eru einkenndir sem lentogenic, mesogenic og velogenic, samkvæmt meðaldánartíma þeirra í fósturvísum [6]. Lentogenic stofnar eru með litla sjúkdómsvaldandi áhrif sem valda vægum öndunarfæra- eða garnasýkingum, fylgt eftir af mesogenic stofnum, en velogenic einangruð eru mjög sjúkdómsvaldandi og valda oft taugafræðilegum einkennum og dánartíðni [3]. Bólusetningaraðferðir gegn NDV eru breytilegar og geta notað blöndu af lifandi, óvirkjuð og veiru-vectored bóluefni [7]. Í Bandaríkjunum eru algengustu hefðbundnu bóluefnisstofnarnir sem innihalda lentogenic B1 (eða veiruklón af B1 stofninum) og LaSota stofnum [3].

Smitandi barkakýlisbólga (ILT) er öndunarfærasjúkdómur alifugla af völdum galled alphaherpesvirus I og er efnahagslega mikilvægur um allan heim [8]. Klínísk einkenni ILT eru aukin dánartíðni, minnkuð eggjaframleiðsla, minnkuð líkamsþyngdaraukning, tárubólga, barkabólga með uppblástur blóðugs slíms í alvarlegum tilvikum, þunglyndi, alvarleg mæði og næmi fyrir öðrum öndunarfærasjúkdómum. Lifandi bóluefni gegn ILT veirunni (ILTV) geta verið af kjúklingafósturvísum (CEO) eða vefjaræktunaruppruna (TCO), þar sem þau eru flutt margsinnis í eggjum eða vefjaræktun, í sömu röð. Þrátt fyrir að raðbrigða bóluefni fyrir ILT séu fáanleg í viðskiptum er CEO bóluefnið mest notaða bóluefnið gegn ILTV um allan heim.

Vegna nauðsynjar til að vernda hænur gegn mismunandi veirusýkingum frá unga aldri, innihalda bólusetningaráætlun venjulega mörg bóluefni gegn ýmsum sýkla. Dæmi um bólusetningarkerfi í mismunandi alifuglageirum eru skoðaðar í Merck Veterinary Manual, þar sem bilið á milli bólusetninga er oft aðeins vikur.

Hins vegar eru litlar upplýsingar sem sýna að bil á milli bólusetninga sé nægjanlegt til að fuglarnir geti þróað fullnægjandi ónæmisvörn gegn áskorunum hverrar veiru. Bókmenntir sýna að raðveirusýkingar geta leitt til veirusýkinga, þar sem ein veira hindrar síðari sýkingu og/eða afritun annarrar veiru í hýsilinn [9,10], en hingað til er ekki vitað hvort þetta fyrirbæri leiði til skertrar verndar. frá raðgefin veiklað lifandi bóluefni í kjúklingum. Athyglisvert hefur verið greint frá því að samtímis gjöf veira á hænur eða kalkúna leiði ekki til veirutruflana [11]. Í þessari rannsókn könnum við hvernig dæmigerð bólusetningaráætlun í atvinnuskyni sem samanstendur af blöndu af raðgjöfum, lifandi veikluðum veiru öndunarfærasjúkdómum bóluefnum hefur áhrif á þróun og langlífi ónæmis og vörn gegn einsleitum áskorunum.

2. Efni og aðferðir

2.1. Veirur

IBV bóluefni til sölu MILDVAC-GA-98® (Merck Animal Health, Summit, NJ, Bandaríkjunum) var notað í þessari rannsókn. Bóluefnið var þynnt í samræmi við ráðleggingar framleiðanda. Áskorunarveiran sem notuð var var IBV GA98/CWL0474/98 og var útbúin með miðgildi sýkingarskammts fósturvísa (EID50) 103,19. Veirutítrar voru reiknaðir út með Reed og Muench aðferðinni [12]. NDV bóluefni B1 til sölu (NEWHATCH-C2, Merck Animal Health, Summit, NJ, USA) var notað bæði fyrir bólusetningu og áskorun og var blandað eftir leiðbeiningum framleiðanda.

Þar sem mesogenic og velogenic stofnar NDV krefjast líföryggisstigs yfir BSL2, sem er ekki fáanlegt á rannsóknarstofunni okkar, felur tilraunalíkan okkar til verndar gegn NDV í sér verulega skerta veirutítra eða dauðhreinsað ónæmi gegn annarri útsetningu (áskorun) með bóluefnisveirunni. ILTV auglýsing forstjóra bóluefni (Trachivax® Merck Animal Health, Summit, NJ, Bandaríkjunum) og sjúkdómsvaldandi ILTV Georgia kjúklingastofn 63140 [13] voru notuð til bólusetningar og áreitis, í sömu röð. Stofni 63140 var fjölgað í nýrnafrumum kjúklinga sem fengust frá 3- í 4-vikugamla kjúklinga án sértækra sjúkdómsvalda (SPF) [14]. Forstjórabóluefnið var útbúið í samræmi við tilmæli framleiðanda. Eftir sáningu var miðgildi sýkingarskammts vefjaræktunar (TCID50) staðfest með títrun á báðum vírusum í nýrnafrumum kjúklinga eins og áður hefur verið lýst [14].

2.2. Tilraunahönnun

Egg án sérstakra sjúkdómsvalda voru fengin eftir 18 daga ræktun og klekjað út í alifuglagreiningar- og rannsóknarmiðstöðinni, Aþenu, GA. Kjúklingar voru settir á ferskt furuspæn í nýlenduhúsum og kvíum. Kjúklingar voru bólusettir með ráðlögðum skammti framleiðenda í 100 µL með augnleiðum samkvæmt eftirfarandi áætlun; IBV við 1 DOA, NDV við 2 vikna aldur (WOA), IBV við 4 WOA, ILTV við 8 WOA, NDV við 12 WOA, og ILTV við 16 WOA.

Auk þess var samanburðarhópur ekki bólusettur. Einsleitar áskoranir voru gerðar við 20, 24, 28, 32 og 36 WOA og krufningar voru framkvæmdar fimm dögum eftir áskorun (dpc). Í áskoruninni fengu fuglar eina af fjórum meðferðum: IBV GA98, NDV B1, ILTV 63140, eða engin áskorun. Meðferðarhóparnir fyrir hverja ögrunarveiru á hverjum tímapunkti voru sem hér segir: óbólusettir, ekki ögraðir (n=9–10); bólusett, ekki skorað (n=9–10); bólusettur, skorinn (n=17–19); óbólusettur, ögraður (n=9–10). Allir fuglar sem fengu IBV-áskorun fengu EID50 upp á 1 × 103,2 á hvern fugl í 100 µL í nef. Allir fuglar með NDV-sveiflu fengu NDV B1 bóluefnið í 100 µL í nef, uppleyst samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Allir fuglar sem fengu ILTV áskorun fengu 63140 sjúkdómsvaldandi stofninn í skammtinum 1 × 103,5 TCID50 á hvern fugl í 100 µL skipt jafnt á milli augndropa og í nef. Fyrir IBV og NDV áskoranir sáust fuglar við 5 dpc fyrir öndunarfærum, eins og áður hefur verið lýst [15]: 0=fjarverandi; 1=mildur; 2=meðallagi; 3=alvarlegt. Fyrir ILTV áskoranir sáust fuglar við 3 og 5 dpc fyrir mæði, tárubólga, þunglyndi og dánartíðni, eins og áður hefur verið lýst [16].

Klofningurinn (IBV- og NDV-sveiflur og viðmiðunarfuglar við 5 dpc) eða barka (ILTV-áskoranir og viðmiðunarfuglar við 3 og 5 dpc) voru strokaðir til að greina veirur og þurrkur voru geymdar í PBS við -80 ◦C. Við 28, 32 og 36 WOA var 50 µL af tárum safnað með því að bæta kornuðu NaCl við augað. Blóði var safnað með væng- eða hjartastungum og bætt í örskilvindu rör til að safna sermi til mótefnagreiningar. Fuglum var aflífað á mannúðlegan hátt og augnloki, harðarkirtill (HG), hóstarkirtill, lifur, milta, hálshálshálskirtlar og bursa af Fabricius var safnað saman og geymt við -80 ◦C til að greina veirur og í 10 prósent hlutlausu jafnaðarformalíni. Barkinn var fjarlægður, einn hluti var settur í 10 prósent hlutlaust jafnaða formalín og afgangurinn af barkanum var sökkt í vefjaræktunarmiðla fyrir táknmyndaprófið sem lýst er hér að neðan. Verklagsreglurnar voru samþykktar af háskólanum í Georgia Institutional Animal Care and Use Committee (AUP #: A2015 05-001-R2).

2.3. Ciliostasis próf

Táknmyndaprófið var gert á uppskertum barka sem safnað var í frumuræktunarmiðla (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) við 37 ◦C. Fyrir hvern barka voru skornir fimm barkahringir sem mældust um það bil 1 mm á þykkt og táknuðu nær-, mið- og fjarhluta [17,18]. Cilia virkni sást með því að nota öfuga smásjá (Olympus, Center Valley, PA, Bandaríkjunum). Stigakerfið fylgir 0=öllum cilia slá; 1=75 prósent af cilia slá; 2=50 prósent af cilia slá; 3=25 prósent af cilia slá; 4=engin cilia slá eins og áður hefur verið lýst [17]. Hámarks möguleg skor fyrir hvern barka er 20. Hver barkahringur var skoraður af þremur einstaklingum og meðaltal heildarskor fyrir hvern barka var reiknað út. Verndarstig táknmyndastöðu fyrir hvern hóp var ákvarðað með eftirfarandi formúlu: 100 − [(heildarstig einstakra stiga fyrir hópinn)/(fjöldi einstaklinga í hópnum × 20) × 100], og stig Stærra en eða jafnt til 50 var talið friðlýst.

2.4. Vefjameinafræði í barka

Hluti af hverjum barka var festur í 10 prósent hlutlausu jafnaðarformalíni, unninn og felldur inn í paraffín, og 5-µm hlutar voru skornir fyrir hematoxýlín og eósín litun. Fyrir IBV-skemmdir voru þekjustækkun, eitilfrumuíferð og þekjuafgangur skorinn fyrir hvern barka. Stig voru ákvörðuð sem hér segir: 1=eðlileg, 2=brennivídd, 3=fjölfókal og 4=dreifð, eins og áður hefur verið lýst [19]. Fyrir NDV sár var gerð lýsandi greining. Fyrir ILTV sár voru smásjárskemmdir skornar á kvarðanum 0-5 (eðlilegt til mjög alvarlegt), eins og áður hefur verið lýst [20].

2.5. RNA útdráttur og magn bakrita pólýmerasa keðjuverkun (qRT-PCR)

Fyrir greiningu IBV og NDV var veiru-RNA útdráttur úr 50 µL af PBS úr hverri þurrku framkvæmt með því að nota 5× MagMAX-96 veirueinangrunarsett (Thermo Fisher, Waltham, MA, USA) á MagMAX™ Express{{ 3}} Deep Well Magnetic Particle Processor (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA), samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Megindleg öfug umritun pólýmerasa keðjuverkun (qRT-PCR) var framkvæmd með AgPath-IDTM One-Step RT-PCR settinu (Thermo Fisher, Waltham, MA, Bandaríkjunum), í samræmi við samskiptareglur framleiðanda. Hver 25-µL hvarfblanda innihélt 12,5 µL af 2× RT-PCR jafnalausn, 10 µM af hverjum grunni, 4 µM af rannsakanum, 1 µL af 25× RT-PCR ensímblöndu og 5 µL af veiru-RNA. qRT-PCR viðbrögðin voru keyrð á Applied Biosystems® 7500 Fast Realtime PCR kerfinu (Life Technologies Ltd., Carlsbad, CA, USA) við eftirfarandi aðstæður: ein lota með 50 ◦C í 30 mínútur og 95 ◦C í 15 mínútur , fylgt eftir með 40 lotum með 94 ◦C í 1 sekúndu og 60 ◦C í 60 sek. Grunnur og rannsaka fyrir IBV qRT-PCR voru áður birt [21] og samanstanda af framvirkum grunni IBV50GU391 (50 -GCT TTT GAG CCT AGC GTT-30), öfugum grunni IBV50GL533 (50 -GCT TTT GAG CCT AGC GTT-30). {38}}GCC ATG TTG TCA CTG TCT ATT G-30), og Taqman® tvímerkt rannsaka IBV50G rannsaka (50 -FAM-CAC CAC CAG AAC CTG TCA CCT C-BHQ{{45 }} ). Grunnur og rannsaka fyrir NDV qRT-PCR var áður lýst [22] og samanstanda af framvirkum grunni NDV M plús 4100 (5'-AGT GAT GTG CTC GGA CCT TC-3'), öfugum grunni NDV M -4220 (5'-CCT GAG GAG AGG CAT TTG CTA-3'), og Taqman® tvímerkt rannsaka NDV M plús 4169 (5'-FAM-TTC TCT AGC AGT GGG ACA GCC TGC -BHQ1-3').

Grunnarnir voru fengnir frá Integrated DNA Technologies (Coralville, IA, Bandaríkjunum) og Taqman rannsakarinn var smíðaður af BioSearch Technologies (Novato, CA, Bandaríkjunum). Rauntíma RT-PCR íhlutum og hitahringrásarbreytum var áður lýst [21]. Gögnin eru gefin upp sem meðalgildi hringrásarþröskulds (CT) fyrir öll sýni í hverjum hópi, með jákvæðum CT gildi byggt á greiningarmörkum fyrir þetta próf sem tengist veirugreiningu í eggjum [23].

Hver qRT-PCR hvarfplata innihélt staðlaða feril sem RNA útdráttarviðmiðun og sem jákvæðan samanburð. GA98 IBV einangrað úr allantoisvökva var notað sem sniðmát fyrir staðlaða ferilinn. Neikvæð viðmið voru einnig innifalin í hverri plötu og samanstóð af PCR hvarfefnum án RNA.

2.6. DNA útdráttur

Fyrir ILTV var heildar DNA dregið úr barkaþurrku með því að nota MegaZorb® DNA útdráttar miniprep 96-brunnsettið (Promega, Madison, WI, USA), eins og áður hefur verið lýst [24].

2.7. qPCR

Tvíhliða rauntíma PCR prófun sem magnar upp brot af UL44 veiru geninu í ILTV og brot af kjúklinga alfa 2- kollagen geninu var framkvæmd, eins og áður hefur verið lýst [25].

2.8. Serum smitandi berkjubólguveira (IBV)-sérstök IgG mótefnatítur

IBV-sértækir IgG títrar voru greindir með því að nota IgG ensímtengd ónæmissogandi prófun (ELISA) IBV mótefnaprófunarsett (IDEXX, Westbrook, ME, USA). Í stuttu máli voru sermissýni (geymd við -20 ◦C) þynnt 1:500 og aðferðin var framkvæmd í samræmi við siðareglur framleiðanda.

2.9. Tár-secret IBV-Specific IgA mótefnatítrar

Tár IBV-sértækt IgA var greint með því að nota IgG ELISA IBV mótefnaprófunarsett (IDEXX, Westbrook, ME, USA). Í stuttu máli voru tár raðþynnt tvöfalt í PBS og ræktuð í tvíteknum brunnum yfir nótt við 4 ◦C. Öll þvottaskref voru framkvæmd með því að nota PBS-Tween 20 (0,05 prósent Tween 20). Plöturnar voru ræktaðar við 23 ◦C í 2 klst í einstofna músa-anti-kjúklinga-IgA-BIOT (1:1000, klón A-1, Southern Biotech, Birmingham, AL, Bandaríkjunum), fylgt eftir með 1 klst. í Streptavidin-HRP ( 1:4000, Southern Biotech, Birmingham, AL, Bandaríkjunum). Lokamótefnagreiningarskrefum var lokið samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Lokatítrar voru ákvarðaðir með því að tilkynna um lægstu þynningu þar sem ljósþéttni (OD), skráður við 650 nm bylgjulengd, var að minnsta kosti þremur staðalfrávikum yfir meðaltali 12 samanburðarhola sem voru ræktaðir án társýni. Gögn úr holum með nákvæmri litabreytingu vegna afgangs hvarfefnis eða loftbólur voru útilokuð frá greiningu og niðurstöður voru tilkynntar sem log2 af endapunktstíternum.

2.10. Tölfræðigreining

Gögnin voru greind með Prism v.6.0 hugbúnaði (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, Bandaríkjunum). Fyrir gögn um veiruálag var notuð einhliða dreifnigreining (ANOVA) með Dunnet's posttest til að bera saman meðferðarhópa innan hvers söfnunartímabils. Öll önnur gögn voru greind með Kruskal-Wallis prófi með Dunn's posttest til að bera saman meðferðarhópa innan hvers söfnunartímabils. Marktækur munur var ákvarðaður við p < 0.05.

3. Úrslit

3.1. Smitandi berkjubólguveira

5 dögum eftir áskorun með IBV GA98 höfðu bólusettir/skornir fuglar marktækt lægra RNA-hleðslu samanborið við jákvæð viðmið á öllum söfnunartímum og í öllum vefjasýnum, nema hálshálshálskirtli við 24 WOA (tafla 1). Í bólusettum viðmiðunarhópum hefur ekkert IBV RNA greinst á öllum söfnunartímum nema í hálshálskirtlum við 20 og 24 WOA og hálsklofa við 20 WOA. IBV álag í neikvæðum samanburði í öllum vefjum var undir greiningarmörkum með því að nota CT-gildið Stærra en eða jafnt og 36,17 eins og áður hefur verið greint frá [23], á öllum söfnunartímum nema 24 WOA HG neikvæðu viðmiðunum.

Klínísk merki um IBV sýkingu mæld 5 dögum eftir áskorun voru marktækt minni hjá bólusettum/skornum fuglum samanborið við jákvæða viðmiðunarhópa í allar vikur nema 28 WOA, en þróun klínískra einkenna var tölulega lægri meðal bólusettra/skorna fugla (tafla 2) . Klínísk einkenni voru ekki til staðar hjá neikvæðum og bólusettum viðmiðunarfuglum sem ekki var skorað á, og einkennin hjá bólusettum/skornum fuglum voru ekki marktækt frábrugðin einkennum hjá viðmiðunarhópi sem ekki var skorað á.

Tafla 1. Meðaltalsmagn öfug umritunar fjölliða keðjuverkunar (qRT-PCR) hringrás þröskulds (CT) gildi fyrir smitandi berkjubólguveiru (IBV) RNA safnað úr choanal klofinu, Harderian gland, táru og hálshálshálskirtli 5 dögum eftir áskorun með IBV GA98 við 20, 24, 28, 32 og 36 vikna aldur. Bókstafir (a–d) gefa til kynna marktækan mun milli bóluefnis- og áskorunarhópa fyrir hverja viku (p < 0,05).

Tafla 2. Klínísk einkenni og smásjárskemmdir voru mældar 5 dögum eftir IBV GA98 áskorun. Bókstafir (a–b) gefa til kynna marktækan mun á bóluefnis- og áskorunarhópum fyrir hverja viku (p < 0.05).

Vefjameinafræðileg skoðun á barka úr öllum hópum var á bilinu innan eðlilegra marka yfir í brennivídd til fjölhreiðra lágmarks til í meðallagi eitilfrumubarkabólgu; þó sást í meðallagi mikil eitilfrumuíferð oftar hjá jákvæðum samanburðarhópum. Í allar vikur minnkaði hlutfall bólusettra/áskorunar fugla með deciliation eða bráða barkadrep marktækt miðað við jákvæð viðmið og var ekki frábrugðið neikvæðum og bólusettum viðmiðum (tafla 2).

Ciliostasis, defined as the cessation of tracheal ciliary movement, was measured at 5 DPC, and the number of birds positive for cryostasis and cryostasis protection scores was calculated for each group (Figure 1). At all collection times, vaccinated/challenged birds were protected from cryostasis (scores were >50), og jákvæð viðmið voru ekki vernduð (stig voru<50). The non-challenged negative controls and vaccinated controls were protected (scores were >50) á öllum söfnunartímum.

Figure 1. Ciliostasis protection scores among tracheas were collected 5 days post-challenge with IBV GA98 for different groups of birds challenged at 20, 24, 28, 32, and 36 weeks of age (WOA). Groups with a protection score >50 (lárétt lína) eru vernduð og hópar með verndarstig<50 are not protected. Fractions above each bar represent the proportion of birds positive for cryostasis for the respective group. −/− = non-vaccinated/non-challenged, +/− = vaccinated/non-challenged, +/+ = vaccinated/challenged, −/+ = non-vaccinated/challenged.

IBV-sértækir IgG títrar voru mældir í sermi sem safnað var við 5 DPC. Á öllum tímum nema við 32 WOA, sýndu bólusettir fuglar bæði úr hópum sem ekki voru ögraðir og ögraðir hópar marktækt hærri títra samanborið við óbólusetta fugla bæði úr hópum sem ekki voru ögraðir og ögruðu (Mynd 2). Við 32 WOA voru títrar í bólusettum fuglum, óháð ögrunarstöðu, marktækt hærri samanborið við jákvæða samanburð. Títrar í bólusettum/skornum fuglum voru ekki marktækur frábrugðnir títrum í bólusettum samanburðarhópum fyrr en 36 WOA, þegar bólusettir/skornir fuglar höfðu marktækt hærri títra. Í samanburði við neikvæðar samanburðarhópar höfðu bólusettir/skornir fuglar marktækt hærri títra allan tímann.

IBV-sértækir IgA títrar voru mældir í tárum sem safnað var við 5 DPC við 28, 32 og 36 WOA. Við 28 WOA voru títrar í bólusettum/skornum fuglum marktækt hærri samanborið við títra í neikvæðum samanburðarhópum sem ekki var skorað á (mynd 3). Við 32 WOA sýndu bólusettir/skornir fuglar marktækt lægri títra samanborið við jákvæð viðmið. Að auki höfðu bólusettu/áskorunu fuglarnir marktækt hærri títra en hópurinn sem var bólusettur/óskorinn við 28 WOA. Enginn annar marktækur munur fannst. Veirur 2019.

Mynd 2. IBV-sértækum IgG títrum í sermi var safnað 5 dögum eftir ögrun með IBV GA98 fyrir mismunandi hópa fugla sem fengu 20, 24, 28, 32 og 36 WOA. Bókstafir (a–c) gefa til kynna marktækan mun milli bóluefnis- og áskorunarhópa fyrir hverja viku (p < 0,05). −/−=óbólusett/ekki skorað, plús /−=bólusett/ekki skorað, plús / plús=bólusett/áskorun, −/ plús=óbólusett/áskorun.

Mynd 3. Rífa IBV-sérstakur IgA títra í tárum sem safnað var 5 dögum eftir ögrun með IBV GA98 fyrir mismunandi hópa fugla sem fengu 20, 24, 28, 32 og 36 WOA. Bókstafir (a–c) gefa til kynna marktækan mun milli bóluefnis- og áskorunarhópa fyrir hverja viku (p < 0,05). −/−=óbólusett/ekki skorað, plús /−=bólusett/ekki skorað, plús / plús=bólusett/áskorun, −/ plús=óbólusett/áskorun.

3.2. Newcastle sjúkdómsveiran (NDV)

Við 5 dpc með NDV B1 höfðu bólusettir/skornir fuglar annað hvort ógreinanlegt RNA-hleðslu eða marktækt lægra álag samanborið við jákvæða samanburðartítra á öllum söfnunartímum og í öllum vefjum sem teknir voru sýni (tafla 3). Neikvætt viðmið sem ekki var skorað á og bólusett viðmið voru neikvæð fyrir RNA veiru með því að nota CT gildið Stærra en eða jafnt og 35.0 eins og áður hefur verið greint frá [22].

Tafla 3. Meðaltal qRT-PCR CT gildi fyrir NDV RNA safnað úr hálsklofa, Harderian kirtli og táru 5 dögum eftir áskorun með NDV B1 bóluefni. Bókstafir (a–c) gefa til kynna marktækan mun milli bóluefnis- og áskorunarhópa fyrir hverja viku (p < 0.05).

Klínísk einkenni mæld við 5 dpc voru marktæk við 20 WOA í jákvæðum samanburðarhópum, eftir það voru klínísk einkenni í jákvæðum samanburðarhópum ekki frábrugðin öðrum meðferðarhópum (tafla 4). Enginn marktækur munur var á klínískum einkennum á milli bólusettra/skorna fugla og samanburðarhóps sem ekki var skorað á. Í allar vikur var vefjameinafræðileg rannsókn á barka innan eðlilegra marka eða leiddi í ljós brennivídd til fjölhreiðra lágmarks til vægrar eitilfrumubarkabólgu og enginn hóptengdur munur var.

Barkar voru einnig metnir með tilliti til frystingar og engir hópar sýndu frystingu.

NDV-sértækir IgG-títrar í sermi í bólusettum/skornum fuglum og bólusettum samanburðarhópum voru marktækt hærri en títrar í bæði jákvæðum og neikvæðum samanburðartímum á öllum söfnunartímum (Mynd 4). Enginn marktækur munur var á títrum á milli bólusettra/skorna fugla og bólusettra viðmiðunarhópa á hverjum tíma. Að sama skapi greindist enginn marktækur munur á títrum á milli óbólusettra/áskorunar og neikvæðra viðmiðunarhópa, nema við 28 WOA þar sem títrar frá óbólusettum/áskorinni viðmiðunarhópi voru marktækt hærri.

Tafla 4. Klínísk einkenni voru mæld 5 dögum eftir NDV B1 áskorun. Bókstafir (a–b) gefa til kynna marktækan mun á bóluefnis- og áskorunarhópum fyrir hverja viku (p < 0.05).

Mynd 4. NDV-sértækum IgG títrum í sermi var safnað 5 dögum eftir ögrun með NDV B1 bóluefni fyrir mismunandi hópa fugla sem fengu 20, 24, 28, 32 og 36 WOA. Bókstafir (a–c) gefa til kynna marktækan mun milli bóluefnis- og áskorunarhópa fyrir hverja viku (p < 0,05). −/−=óbólusett/ekki skorað, plús /−=bólusett/ekki skorað, plús / plús=bólusett/áskorun, −/ plús=óbólusett/áskorun.

3.3. Smitandi laryngotracheitis veira (ILTV)

Við 5 dpc með ILTV stofni 63140 höfðu bólusettir/skornir fuglar marktækt lægra DNA veiruálag en jákvæð viðmið á öllum söfnunartímum og í öllum vefjum (tafla 5). DNA álagið í barka og HG var ógreinanlegt eða lítið og var ekki marktækt frábrugðið DNA álagi í óáskornum neikvæðum og bólusettum samanburðarhópum, sem voru neikvæðir með CT gildi Stærra en eða jafnt og 38,0 eins og áður hefur verið greint [26]. Í táru var DNA-magn í bólusettum/skornum fuglum marktækt hærra en DNA-hleðsla bæði frá óáskornum neikvæðum og bólusettum samanburðarhópum, nema við 28 WOA þar sem enginn marktækur munur fannst á bólusettum/skornum fuglum og bólusettum samanburðarhópum.

Tafla 5. Meðaltal qPCR CT gildi fyrir ILTV DNA safnað úr barka, Harderian kirtli og táru 5 dögum eftir áskorun með sjúkdómsvaldandi ILTV stofni 63140. Bókstafir (a–c) gefa til kynna marktækan mun milli bóluefnis- og áskorunarhópa fyrir hverja viku (p < 0,05).

Klínísk merki og veiru-DNA greindust hjá fuglum sem voru smitaðir við 3 DPC, en merki í jákvæðum samanburði höfðu orðið alvarlegri um 5 dpc eftir því sem veirumagn barka jókst (tafla 6). Klínísk einkenni mæld við 5 dpc lækkuðu marktækt hjá bólusettum/skornum fuglum samanborið við jákvæða viðmiðunarhópa, á öllum söfnunarstöðum nema 36 WOA þegar klínísk einkenni voru tölulega lækkuð. Allir neikvæðir samanburðarhópar og bólusettir viðmiðunarhópar höfðu engin klínísk einkenni og klínísk einkenni hjá bólusettum/skornum fuglum voru ekki marktækt frábrugðin þessum viðmiðunarhópum, nema við 36 WOA þegar klínísk einkenni voru marktækt hærri.

Tafla 6. Klínísk einkenni voru mæld 5 dögum eftir ILTV 63140 áskorun. Bókstafir (a–b) gefa til kynna marktækan mun á bóluefnis- og áskorunarhópum fyrir hverja viku (p < 0,05).

Vefjarannsókn í barka var innan eðlilegra marka eða leiddi í ljós brennivídd til að dreifa lágmarks til vægri eitilfrumubarkabólgu í barka úr öllum hópum. Fyrir jákvæðu viðmiðin, 3/9 og 1/10 í viku 20 og 28, í sömu röð, voru með bráða brennisteinsdrepandi barkabólgu með syncytia og innankjarna innifalið (mynd 5).

Mynd 5. Smásjár í barka eru í samræmi við smitandi barkakýlisbólgu við 20 vikna aldur. (A) Fjölmargar syncytia með innankjarna innifalið (ör). (B) Annar barki úr sama hópi sýndi syncytia með innankjarna innifalið (ör).

Engin táknmynd varð vart í barka fugla úr neinum hópum.

ILTV-sértækir IgG títrar í sermi sem safnað var 5 dögum eftir ögrun voru marktækt hærri hjá bólusettum fuglum úr bæði ögruðu og ekki ögruðu hópum, samanborið við jákvæða og neikvæða viðmiðunarhópinn (mynd 6).

Mynd 6. ILTV-sértækum IgG títrum í sermi var safnað 5 dögum eftir áskorun með ILTV stofni 63140 fyrir mismunandi hópa fugla sem fengu 20, 24, 28, 32 og 36 WOA. Bókstafir (a–b) gefa til kynna marktækan mun á bóluefnis- og áskorunarhópum fyrir hverja viku (p < 0,05). −/−=óbólusett/ekki skorað, plús /−=bólusett/ekki skorað, plús / plús=bólusett/áskorun, −/ plús=óbólusett/áskorun.

For more information:1950477648nn@gmail.com