Veistu að oxunarálag getur valdið nýrnaskaða?

Fyrir frekari upplýsingar:ali.ma@wecistanche.com

Hluti Ⅰ: Oxunarálag í kjölfar bráðs nýrnaskaða veldur truflun á lungnafrumum cilia og losun þeirra í berkju- og lungnaskolunarvökva og lungnaskaða, sem versna af Idh2 eyðingu

Yong Kwon Hana, Ji Su Kim, Gwan Beom Leea, Jae Hang Lim, Kwon Moo Park

1. Inngangur

Bráður nýrnaskaði(AKI) á sér stað í ýmsum klínískum aðstæðum, þar á meðal losti, blóðsýkingu, líffæraígræðslu og æðaskurðaðgerðum [1-3]. AKI (Bráður nýrnaskaði) veldur skemmdum á fjarlægum líffærum, þar með talið lungum, lifur, hjarta og heila [4-9]. Þessi fjarlæga líffæraskaði í kjölfar AKI (Bráður nýrnaskaði)er viðurkennt sem stór áhættuþáttur fyrir slæmar niðurstöður [5,9]; því er viðeigandi meðferð við áverka á fjarlægum líffærum mikilvæg til að bæta árangur sjúklinga með AKI (Bráður nýrnaskaði). Hins vegar eru nákvæmar aðferðir sem taka þátt í AKI (Bráður nýrnaskaði)-Tengd fjarlægum líffæraskaða á eftir að skilgreina.

Smelltu á Cistanche fyrir bráðan nýrnasjúkdóm og aukaverkanir af cistanche

Cilia eru centriole-afleidd útskot frá frumuyfirborði sem innihalda frumubeinagrind (axoneme) sem byggir á örpíplum, umkringd ciliary himnu. Cilia einkennast af uppbyggingu þeirra og hreyfigetu og eru skilgreind sem annað hvort óhreyfanleg cilia (aðal cilia) eða hreyfanleg cilia. Primary cilia eru einstæð, óhreyfanleg, örpípla-undirstaða 9 plús 0 axonemal loftnetslík frumulíffæri sem standa út úr frumuhimnunni og flytja utanfrumumerki inn í frumuna með samhæfingu nokkurra boðleiða [10-12 ]. Hreyfanlegur cilia, með margfalda, 9 plús 2 axonemal uppbyggingu, finnast aðallega í öndunarfærum og eggleiðara og virka til að flytja efni [10,13]. Sífellt fleiri vísbendingar hafa sýnt fram á að gallar í myndun og starfsemi cilia tengist fjölbreyttum sjúkdómum í mönnum, þ.m.t.fjölblöðru nýrnasjúkdómaog frumkvilla hreyfitruflanir [14-20]. Ennfremur hafa nýlegar rannsóknir sýnt fram á að truflun á cilia á sér stað undir áhrifum meinafræðilegra aðstæðna og að þessi truflun á þátt í að miðla frumuskaða og truflun á starfsemi [15-20].

Uppsöfnuð sönnunargögn hafa sýnt þaðnýrublóðþurrð-endurflæði (IR), orsök AKI (Bráður nýrnaskaði), veldur skaða á fjarlægum líffærum [6-8,21]. Fjarlæg líffæraskaði tengist bólguviðbrögðum, breytingum á boðleiðum sem tengjast frumudauða og lifun ogoxunarálag [8,22-24]. Oxunarálagtengist beint truflun á frumuþáttum, sem getur leitt til líffærasjúkdóma, og er viðurkennt sem ein helsta orsöknýruIR af völdum skaða á fjarlægum líffærum [21,25,26]. Við höfum áður sýnt þaðnýruAKI af völdum IR og cisplatíns (Bráður nýrnaskaði)breytir lengd aðal cilia ínýruþekjufrumur með samsetningu, sundrun og truflun (afgang, losun eða sundrun) á cilia [17-19]. Þessir ferlar eru tengdir viðbrögðum súrefnistegunda (ROS) ogoxunarálag. fer eftir styrk vetnisperoxíðs og stigioxandistreitu; Lágur H2O2 styrkur veldur lengingu aðallengdar cilia, en hár H, O, styrkur veldur truflun [17-20]. Að auki komumst við að því að truflaði aðal cilia slasaðranýrupípulaga þekjufrumur skiljast út í þvag og að hægt sé að koma í veg fyrir þessa truflun og útskilnað með andoxunarmeðferð [17-20]. Rodriguez-Ribera o.fl. einnig greint frá því að hvarfgjörn karbónýl efnasambönd eins og malondialdehýð, afurð afoxunarálag, framkalla tap á aðal cilia í mönnumnýrunærliggjandi píplufrumur [27]. Þess vegna gerðum við tilgátu um að AKI (Bráður nýrnaskaði)-bráð lungnaskemmdir (ALD) og frumuskaðar tengjast cilia og lungnafrumumoxandistreituog að koma í veg fyriroxandistreitudregur úr AKI (Bráður nýrnaskaði)-völdum lungnaskaða. Í þessari rannsókn könnuðum við hvortnýruIR-framkallað AKI (Bráður nýrnaskaði)veldur truflun á cilia og frumum í lungum, og ef svo er, hvort þessar truflanir tengistoxandiB. Í þessu skyni notuðum við lyfjafræðilegar og erfðafræðilegar aðferðir, þar á meðal notkun á músum sem hafa verið eytt ísósítrat dehýdrógenasa 2(Idh2). IDH2 er ensím staðsett í hvatberum [28]. Í hvatberum hvatar IDH2 oxandi afkarboxýleringu ísósítrats í -ketóglútarat, samfara lækkun NADP í NADPH, sem er mikilvægur þáttur í þíóredoxín og glútaþíon andoxunarkerfi [29-32]. Að auki könnuðum við hvort nærvera próteina og brota í berkju- og lungnaskolum (BALF) bendi til lungnaskaða. Við tilkynnum hér, í fyrsta skipti, að AKI (Bráður nýrnaskaði)veldur truflun á lungnafrumum cilia og losun þeirra í BALF auk lungnaskaða, sem versnar af IDH2 eyðingu.

oxunarálag veldur nýrnaskaða

2. Efni og aðferðir

Undirbúningur dýra.

Allar tilraunir voru gerðar með því að nota 8-10-vikugamlar karlkyns C57BL/6 mýs (Koatech, Pyeongtaek, Gyeonggi-do, Kóreu), kvenkyns Idh2 gen-eyddum (Idh2~/) músum og villigerð (dh2 plús / ) mýs [28]. Mýsnar fengu frjálsan aðgang að vatni og venjulegu músafæði. Dýrarannsóknin var samþykkt af dýraumönnunar- og notkunarnefndinni í Kyungpook National University, Lýðveldinu Kóreu. Til að framkalla tvíhliða nýrnablóðþurrð, ernýruvoru afhjúpaðir í gegnum skurð á hliðum undir svæfingu með pentobarbital natríum (60 mg/kg líkamsþyngdar) og síðannýruvoru algjörlega klemmdar í 35 mínútur með því að nota smáæðagúlpsklemma. Sama málsmeðferð, að undanskildumnýrupedicle klemma, var framkvæmd í sýndaraðgerð Líkamshita var haldið við 36,5 gráður -37 gráður C í gegnum skurðaðgerðir með því að nota hitastýrt hitatæki (FHC, Bowdoin, ME, USA). Sumar mýs voru gefnar {{4 }}(2,2,6,6-Tetrametýlpíperidín-1-oxýl-4-arýlamínó)-2-oxóetýl trífenýlfosfóníumklóríð (Mító--TEMPO,{{14 }},7 mg/kg líkamsþyngdar;Sigma, St.Louis, MO,USA) annað hvort 17 og 1 klst. fyrir aðgerð (formeðferð) eða 6 klst. eftir aðgerð (eftirmeðferð).

Í lok tilrauna, lunga ognýruvefir voru snöggfrystir í fljótandi köfnunarefni eða gegnflæði festur með PLP (4 prósent paraformaldehýð, 75 mM L-lýsín, 10 mM natríum periodat: Sigma) lausn fyrir lífefnafræðilegar og vefjafræðilegar rannsóknir, í sömu röð. Frosnar vefjur voru geymdar við -70 gráðu þar til þess var krafist.

Safn af BALF.

BALF var safnað eftir aflífun músanna með ofskömmtun af pentobarbital natríum. Lungnaleki var metinn með því að ákvarða próteinstyrk og frumufjölda í BALF. Til að safna BALF var berkju vinstra lunga alveg klemmt með því að nota smáæðagúlpsklemma. Nál var stungið í barkann og 0,8 ml af köldu fosfat-bufferuðu saltvatni (PBS) var sprautað hægt í hægra lungnablaða. BALF var safnað með því að draga stimpil sprautunnar inn einu sinni. Heildarfrumufjöldi og próteinstyrkur í BALF voru greind strax með því að nota blóðfrumnamæli og BCA greiningarsett (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, Bandaríkin), í sömu röð. BALF var haldið við -70 gráðu þar til þess var krafist fyrir Western blotting greiningu.

Nýravirka. Blóði var safnað úr músum með því að nota heparínblandaða sprautu. Styrkur þvagefnis köfnunarefnis í blóði (BUN) í plasma var ákvarðaður með því að nota Vitros 250 Chemistry Analyzer (Johnson & Johnson, New Brunswick, NJ, Bandaríkjunum).

Periodic acid-Schiff (PAS) og hematoxylin og eosin (H&E) litun.

PLP-fastnýruog lungnavefir voru innfelldir í paraffín, skornir í 3-μm þykka hluta með því að nota míkrótóm (Leica, Bensheim, Þýskalandi), og festir á glerskyggnur.Nýraog lungnaskurðir voru litaðir með PAS og H&E. Thenýruskemmdirstig var metið í blindni af rannsakendum eins og áður hefur verið lýst [3,19].

Western blot greining.

Western blotting var framkvæmd eins og áður hefur verið lýst [3]. Mótefnin sem notuð voru fyrir western blotting voru sem hér segir: and-4-hýdroxý nafnefni (4-HNE; Abcam, Cambridge, MA, USA), and- -túbúlín (Santa Cruz, CA, Bandaríkin) , andasetýlerað -túbúlín (ac- -túbúlín, Sigma), and-manganháð súperoxíð dismutasi (MnSOD; Calbiochem, San Diego, CA, Bandaríkjunum), and-katalasa (Fitzgerald, Concord, MA, Bandaríkjunum) , and-ADP-ríbósýleringarþáttarlíkt prótein 13B (Arl13B, Proteintech, Chicago, IL, Bandaríkjunum), and-ísósítrat dehýdrógenasa 2 (IDH2; Santa Cruz), sjónrýrnun 1 (Opal; BD Bioscience, San Diego, CA ), and-klofnun 1(Fis1; Sigma), and-dynamin tengt prótein 1 (Drpl; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, Bandaríkjunum), og and-glýseraldehýð 3-fosfat dehýdrógenasa (GAPDH; NOVUS, Littleton, CO, Bandaríkjunum).

Ónæmisflúrljómandi litun.

Eftir afparaffínhreinsun voru hlutar ræktaðir í PBS sem innihélt {{0}},2 prósent Triton X-100(Sigma) í 1 mín og síðan þvegin í PBS í 10 mínútur. Til að afhjúpa mótefnavaka-eitrunina voru hlutar soðnir í 10 mm natríumsítratbuffi (pH 6,0) í 10 mínútur, kældir í 20 mínútur og síðan þvegnir þrisvar sinnum með PBS í 5 mínútur á hverjum þvotti. Hlutarnir voru lokaðir með 3 prósenta sermi albúmíni úr nautgripum í PBS (blokkandi biðminni) í 30 mínútur og síðan ræktaðir með and-Arll3b mótefni við 4 gráður yfir nótt. Eftir þvott voru hlutar ræktaðir með FITC-tengdu geita-anti-kanínu IgG (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) í 60 mínútur og síðan þvegið 3 sinnum með PBS í 5 mínútur hver. Frumukjarnar voru litaðir með 4'-6-diamidino-2-fenýlindóli (DAPI; Sigma).

Mæling á súperoxíði í lungnavef.

Magn ofuroxíðs var mælt með því að nota díhýdróetídíum (DHE; Sigma) eins og áður hefur verið lýst 【33,34】. Í stuttu máli var 10 μM DHE í 1 ml af forhituðu (37 gráður) PBS bætt við 96-brunnsplötu sem innihélt 20 ul af lungnavefslýsi. Platan var lesin á 10 mínútna fresti í samtals 30 mínútur við örvun/losunarsíur upp á 530 nm/620 nm.

Mæling á IL-6.

IL-6 gildi í plasma og BALF voru ákvörðuð með ELISA prófi með því að nota ELISA prófunarbúnað samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda (BD Bioscience).

Tölfræði.

Öll gögn voru greind með GraphPad Prism 7 hugbúnaði (San Diego, CA, Bandaríkjunum). Niðurstöðurnar eru gefnar upp sem meðaltal±staðalvillu meðaltalsins (SEM). Tölfræðileg greining var gerð með því að nota t-próf ​​Student og einhliða dreifnigreiningu með Tukey's post hoc aðferð. Mismunur var talinn tölfræðilega marktækur þegar p-gildi voru<>

3. Úrslit

1. Nýra IR veldur lungnaskaða.

Eins og búist var við verulegum formfræðilegum skemmdum ánýru(Mynd 1A og B) og aukning á BUN í plasma (Mynd 1C) sást 4 og 24 klst. eftir 35 mínútur af tvíhliðanýrublóðþurrð. Í lungum sást aukning á daufkyrningum og þykknun lungnablöðruveggsins 4 og 24 klst.nýrublóðþurrð (mynd 1D). Auk þess sást aukning á tjáningu eitilfrumumótefnavaka 6 flókins staðsetningar G6D (Ly6G, merki fyrir einfrumur, kyrninga og daufkyrninga) í lungnavef á tímaháðan hátt sem er háð endurflæði (mynd 1E og F). Interleukin-6 (IL-6) styrkur í plasma jókst eftirnýruIR, nær hámarki 4 klst eftir blóðþurrð (mynd 1G). Styrkur I-6 og próteina sem og heildarfrumufjöldi í BALF jókst smám saman 4 og 24 klst. eftir nýrnablóðþurrð (Mynd 1H-J). Lifun eftir 24 klst eftir 35 mín afnýruIR var um það bil 92 prósent (gögn ekki sýnd).

HvenærnýruBlóðþurrðartími var lengdur í 45 mínútur, aukning á BUN styrk í plasma og heildarpróteinþéttni og frumufjölda í BALF eftir blóðþurrð var meiri en eftir 35 mínútur af blóðþurrð (Mynd 1K-M). Þessar upplýsingar benda til þess að lungnaskaðar af völdumnýruIR meiðsli byggir á gráðunýrumeiðsli.

Mynd 1. Vefjafræðilegar og starfrænar skemmdir á lungum eftir IR í nýrum. C57BL/6 karlkyns mýs fóru í 35 (A–M) og 45 (K–M) mín af tvíhliða nýrnablóðþurrð eða sýndaraðgerð. Nýra, lungum, blóði og BALF var safnað 4 og 24 klst. eftir aðgerð. BALF var safnað eins og lýst er í Efni og aðferðum. (A-J) Músum var fórnað annað hvort 4 eða 24 klst eftir 35 mín blóðþurrð. (A, B)Nýrahlutar (3 μm) voru litaðir með PAS, ognýrupípulaga skaði var skorað. (C, K) Styrkur BUN var mældur í plasma. (D) Lungnahlutir (3 μm) voru litaðir með H&E. (E, F) Ly6G tjáning í lungnavef var greind með Western blotting. GAPDH var notað sem hleðslustýring. Þéttleiki böndanna var mældur með ImageJ hugbúnaðinum. (G, H) Styrkur IL-6 var mældur í plasma og BALF. (I, J, L, M) Próteinstyrkur og heildarfrumufjöldi var mældur í BALF. (K-M) Músum var fórnað 4 klst eftir annað hvort 35 eða 45 mín af blóðþurrð. Niðurstöður eru gefnar upp sem meðaltal ± SEM (n=3–6). *p < 0.05="" á="" móti="" sýndarmennsku.="" †p="">< 0,05="" á="" móti="" 4="" klst.="" eftir="" blóðþurrð="" eða="" blóðþurrð="" í="" 35="">

2. Nýru IRveldur truflun á cilia lungnaþekjufrumna og þessi brot losna út í BALF.

Lungnavefssneiðar og BALF-hlaðnar glærur voru ónæmislitaðar með and-ADP-ríbósýlerunarþáttarlíku próteini 13B(Arl13B, merki um cilia) mótefni. Arll3B jákvæð merki sáust á luminal hluta lungnablöðranna og endanlegum berkjum lungna (Mynd 2A). Tap á Arl13B jákvætt merki sást í lungumnýruIR-háðar mýs (Mynd 2A). Þetta tap á Arll13B-jákvæðu merki jókst smám saman eftirnýrublóðþurrð með tímanum (mynd 2A). Í BALF sáust mismunandi lengdar Arl13B-jákvæðra agna eftir nýrnablóðþurrð og fjöldi Arl13B-jákvæðra agna í BALF jókst smám saman með tímanum eftir blóðþurrð (Mynd 2B og C). Tjáning Arl13B, asetýleraðs -túbúlíns (ac- -túbúlíns, kyrninga og daufkyrninga) í lungnavef sást á tímaháðan hátt sem er háð endurflæði (Mynd 1E og F). Interleukin-6 (IL-6)styrkur í plasma jókst eftirnýruIR, nær hámarki 4 klst eftir blóðþurrð (mynd 1G). Styrkur I-6 og próteina sem og heildarfrumufjöldi í BALF jókst smám saman 4 og 24 klst. eftir nýrnablóðþurrð (Mynd 1H-J). Lifun eftir 24 klst. eftir 35 mínútur af IR nýrna var um það bil 92 prósent (gögn ekki sýnd).

HvenærnýruBlóðþurrðartími var lengdur í 45 mínútur, aukning á BUN styrk í plasma og heildarpróteinþéttni og frumufjölda í BALF eftir blóðþurrð var meiri en eftir 35 mínútur af blóðþurrð (Mynd 1K-M). Þessar upplýsingar benda til þess að lungnaskaðar af völdumnýruIR meiðsli byggir á gráðunýrumeiðsli.

Mynd 2. Truflun á lungnafrumum cilia og brotum þeirra og próteinum sem losna í BALF eftir nýrna IR.C57BL/6 karlkyns mýs fóru í annað hvort 35 mínútur af tvíhliða nýrnablóðþurrð eða sýndaraðgerð Lungnvef og BALF var safnað 4 og 24 klst. eftir aðgerðina eins og lýst er í Efni og aðferðum. (A) Lungnahlutir (5 μm) voru settir í ónæmisflúrljómandi litun með því að nota and-Arl13B mótefni; grænt gefur til kynna Arl13B-jákvætt. DAPI litur (4′,6-diamidino-2-fenýlindól; blár) var notaður til að sjá frumukjarna. Örvar gefa til kynna cilia. (B) BALF (10 ul) var sett á glerglas sem var ónæmisflúrljómandi litað með því að nota and-Arl13B mótefni; grænt gefur til kynna Arl13B-jákvætt (n=3). (C) Fjöldi Arl13B-jákvæðra agna var talinn undir flúrljómunarsmásjá (n=3). (D–G) Arl13B, asetýleruð- -túbúlín (ac- -baðkar) og -túbúlín (-tub) tjáning í BALF voru greind með Western blotting. Þéttleiki böndanna var mældur með ImageJ hugbúnaðinum. Niðurstöður eru gefnar upp sem meðaltal ± SEM (n=3). *p < 0.05="" á="" móti="" sýndarmennsku.="" †p="">< 0,05="" á="" móti="" 4="" klst.="" eftir="" blóðþurrð.="" a:="" alveoli,="" tb:="">

3. Nýra IR eykur magn ofuroxíðs og oxunarálags í bæði lungnavef og BALF.

NýraIR jók ofuroxíðmagnið í lungnavef (Mynd 3A), en það minnkaði tjáningu IDH2 (Mynd 3B og C), en ekki MnSOD og katalasa (Mynd, 3B.DE). Þessar niðurstöður benda til þess að lungnaskaðar af völdum IR af nýrum tengist aukningu á ROS-gildum ogoxunarálagí lungum. Þessu til stuðnings jókst magn 4-hýdroxý nominal (4-HNE), afurð lípíðperoxunar, í lungnavef marktækt 4 og 24 klst.nýrublóðþurrð(Mynd 3F-D). 4-HNE sást á næstum öllum svæðum í lungnavef, þar með talið lungnablöðrum og berkjum (mynd 3H og D. Ennfremur, tjáning á 8-hýdroxý-2'-deoxýgúanósíni ({{ 7}}OhdG), vel þekkt merki um DNA oxun sem oxaða afleiðu deoxý-gúanósíns, jókst bæði í frumu og kjarna í lungnaþekjufrumum eftirnýrublóðþurrð (Mynd 3J og K. Í BALF jókst 4-HNE tjáning einnig eftirnýrublóðþurrðá endurflæðistímaháðan hátt (mynd 3L, M). Ennfremur, þegar blóðþurrðartími í nýrum var lengdur í 45 mínútur, var aukning á 4-HNE-tjáningu í lungum eftir blóðþurrð meiri en eftir 35 mín.nýrublóðþurrð (mynd 3N, O). Þessar niðurstöður benda til þess að bæði hvatbera-DNA og kjarna-DNA séu skadduð með oxun vegna aukinnar ROS-myndunar og skerðingar á fjarlægingarkerfum, sem bendir til þess að skemmdir á lungnaþekjufrumum tengistoxunarálag.

Mynd 3. Oxunarálag í lungnavef eftir IR nýra. C57BL/6 karlkyns mýs fóru í 35 (A–O) og 45 (N, O) mín af tvíhliða nýrnablóðþurrð eða sýndaraðgerð.Lungna ognýruvoru safnað 4 og 24 klst. eftir annað hvort 35 mín eða 45 mín blóðþurrð. (A-M) Músum var fórnað annað hvort 4 eða 24 klst eftir 35 mín blóðþurrð. (A) Ofuroxíðmagn í lungnavef var mælt eins og lýst er í Efni og aðferðum (n=3–5). (B–E) IDH2, katalasa og MnSOD tjáning í lungnavef voru greind með Western blotting (n {{10}}). GAPDH var notað sem hleðslustýring. (C-E) Þéttleiki böndanna var mældur með ImageJ hugbúnaði. (F, G) 4-HNE tjáning í lungum var greind með Western blotting og bandþéttleiki var mældur með ImageJ (n=4). (H–K) Lungnahlutir (3 μm) voru litaðir með ónæmisvefjaefnafræðilega litun með því að nota and-4-HNE og 8-OHdG mótefni og mótlitað með hematoxýlíni; brúnt táknar 4-HNE- og 8-OHdG-jákvætt (n {{20}}). (I, K) Styrkur 4-HNE- og 8-OHdG-jákvæðra merkja var mældur með i-Solution forritinu (n=3). (L, M) 4-HNE tjáning í BALF var greind með Western blotting og bandþéttleiki var mældur með ImageJ (n=3). (N, O) Músum var fórnað 4 klst eftir annað hvort 35 mín eða 45 mín af blóðþurrð. 4-HNE tjáning í lungum var greind með Western blotting og bandþéttleiki var mældur með ImageJ (n=3). Niðurstöður eru gefnar upp sem meðaltal ± SEM (n =3–5). *p < 0,05="" á="" móti="" sýndarmennsku.="" †p="">< 0,05="" á="" móti="" 4="" klst.="" eftir="" blóðþurrð="" eða="" 35="" mín="" af="" blóðþurrð.="" (til="" að="" túlka="" tilvísanir="" í="" lit="" í="" þessari="" myndsögu="" er="" lesandanum="" vísað="" á="" vefútgáfu="" þessarar="">

Í frumum, hvatbera. stórt ROS-framleiðandi innanfrumulíffæri gengur venjulega undir samruna og klofnun til að laga sig að lífeðlisfræðilegum og sjúklegum aðstæðum. Skerðing á þessum samruna- og klofningsferlum getur valdið truflun á starfsemi frumna og skemmdum [36]. Fyrri rannsóknir hafa sýnt þaðoxandistreitudregur úr eðlilegu gangverki hvatberasamruna og klofnings, sem leiðir til truflunar á starfsemi hvatbera og frumuskaða [32,36-38]. Við leituðumst við að meta gangverki hvatbera með því að ákvarða klofnunar- og samrunastýrandi prótein tjáningu hvatbera. Tjáning Fis1 og Drp1, sem stjórna hvatberaklofi, jókst verulega í lungum músa meðnýrublóðþurrð(Mynd 4A-C). Hins vegar var tjáning OPA1, sem stjórnar samruna hvatbera, ekki marktækt breytt vegna IR í nýrum (Mynd 4A, D). Þessi gögn benda til þess að jafnvægi hvatberasamruna og klofnunar í lungnafrumum raskist vegna AKI (Bráður nýrnaskaði).

Mynd 4. Breyting á gangverki hvatbera í lungum eftir IR í nýrum. C57BL/6 karlkyns mýs fóru í annað hvort 35 mínútur af tvíhliða nýrnablóðþurrð eða sýndaraðgerð.Lungun voru tekin 4 og 24 klst. eftir blóðþurrð. (A-D) Drp1, Fis1 og OPA1 tjáning í lungnavef voru greind með Western blotting. GAPDH var notað sem hleðslustýring. Þéttleiki böndanna var mældur með ImageJ hugbúnaðinum. Niðurstöður eru gefnar upp sem meðaltal ± SEM (n=4). *p < 0.05="" á="" móti="" sýndarmennsku.="" †p="">< 0,05="" á="" móti="" 4="" klst.="" eftir="">

4. Hvatbera-sértæk andoxunarmeðferð dregur úr lungnaskaða af völdum IR af nýrum og truflun á cilia í lungum.

Til að staðfesta hlutverk hvatberaoxandistreituánýruIR af völdum lungnaskaða og truflun á lungnaþekjufrumum cilia, við prófuðum hvort formeðferð (Mynd.5A-D eða eftirmeðferð (Mynd. 5J-L) með Mito-TEMPO, hvatberasértæku andoxunarefni, hamlar nýrna IR framkallaðaoxandistreitu, I-6 framleiðsla og deciliation í lungum C57BL/6 karlkyns músa. Formeðferð (mynd 5A-D), en ekki eftirmeðferð (mynd 5J-L), með Mito-TEMPO, hamlaði verulega aukningu á BUN og IL-6 styrk í plasma (mynd 5A og B) sem sem og IL-6 styrkur, heildarpróteinstyrkur og heildarfrumufjöldi í BALF (mynd, 5C-E). Tjáning Arl13B, ac- -túbúlíns og -túbúlíns í BALF af Mito-TEMPO formeðhöndluðum músum var minni en í músum sem fengu burðarefni (Mynd 5F-I). Í þessari rannsókn, 6-klst. eftir meðferð verndaði ekki lungun gegnnýruIR(Mynd 5J-L). Þessar niðurstöður benda til þess að snemma ROS framleiðsla, uppsöfnun þess ogoxandistreitugæti stuðlað að mikilvægu hlutverki við AKI (Bráður nýrnaskaði)-völdum lungnaskaða. Magn ofuroxíðs og 4-HNE tjáning í lungnavef (Mynd 6A-C) og í BALF (Mynd 6D og E) var minna í Mító-TEMPO formeðhöndluðum músum en í músum sem fengu burðarefni. Þessar niðurstöður benda til þessnýruIR af völdum lungnaskaða og lungnaþekjufrumueyðing tengjast hvatberumoxandistreitu.

Mynd 5. Forvarnir gegn lungnaskaða af völdum IR af nýrum og truflun á cilia með Mito-TEMPO, andoxunarefni sem miðar á hvatbera. C57BL/6 karlkyns mýs fengu 35 mínútur af tvíhliða nýrnablóðþurrð.Sumum músum var gefið Mito-TEMPO (Mito-T, 0,7 mg/kg líkamsþyngdar, ip) annað hvort 17 og 1 klst. fyrir blóðþurrð, tvisvar, (A–I) eða 6 klst. eftir blóðþurrð (J– L). Lungum, BALF og blóði var safnað 24 klst. eftir blóðþurrð. (A, J) Styrkur BUN í plasma var mældur. (B, C) Styrkur IL-6 í plasma og BALF var mældur með því að nota ELISA prófunarbúnaðinn. (D, E, K, L) Próteinstyrkur og frumufjöldi í BALF var mældur. (F–I) Arl13B, asetýleruð{{10}}túbúlín (ac- -ker) og -túbúlín (-tub) tjáning í BALF voru greind með Western blotting. Þéttleiki böndanna var mældur með ImageJ hugbúnaðinum. Niðurstöður eru gefnar upp sem meðaltal ± SEM (n=4). *p < 0,05="" á="" móti="">

SMELLTU HÉR TIL AÐ HLUTA Ⅱ