Krufning á mótefnasvörum Gam-COVID-Vac bólusettra einstaklinga bendir til þátttöku epitópa utan RBD í SARS-CoV-2 hlutleysingu

Ágrip: Milljónir manna hafa verið bólusettar með Gam-COVID-Vac en fínar sérstöður mótefna af völdum mótefna hafa ekki verið rannsakaðar að fullu. Plasma úr 12 nýfæddum og 10 kórónavírussjúkdómi 2019 (COVID-19) einstaklingum sem voru til batnaðar fengust fyrir og eftir tvær bólusetningar með Gam-COVID-Vac. Mótefnahvarfsemi í plasmasýnunum (n=44) ​​var rannsökuð á spjaldi af örskipuðum raðbrigðum brotnum og óbrotnum alvarlegu bráðu öndunarfæraheilkenni coronavirus 2 (SARS-CoV-2) próteinum og 46 peptíðum sem spanna toppinn prótein (S) og með immúnóglóbúlíni G (IgG) undirflokks ensímtengd ónæmissogandi prófun (ELISA). Geta mótefna af völdum Gam-COVID-Vac til að hindra bindingu viðtakabindandi lénsins (RBD) við viðtaka angíótensín-umbreytandi ensím 2 (ACE2) þess var rannsökuð í sameindavíxlverkunarprófi (MIA). Veiruhlutleysandi getu mótefna var rannsökuð með gervigerða veiruhlutleysingarprófi (pVNT) fyrir Wuhan-Hu-1 og Omicron. Við komumst að því að Gam-COVID-Vac bólusetning olli marktækri aukningu á IgG1 en ekki á öðrum IgG undirflokkum gegn brotnu S, toppprótein undireiningu 1 (S1), toppprótein undireiningu 2 (S2) og RBD á sambærilegan hátt í barneignum og bata. viðfangsefni. Veiruhlutleysing var í mikilli fylgni við mótefni af völdum bólusetninga sem eru sértæk fyrir brotið RBD og nýtt peptíð (þ.e. peptíð 12). Peptíð 12 var staðsett nálægt RBD í N-endahluta S1 og gæti hugsanlega tekið þátt í umbreytingu á for- til eftirsamruna sköpulags topppróteins. Í stuttu máli, Gam-COVID-Vac bólusetning framkallaði S-sértæk IgG1 mótefni hjá ófæddum einstaklingum og einstaklingum á batavegi á sambærilegan hátt. Fyrir utan mótefnin sem eru sértæk fyrir RBD, voru mótefnin sem framkölluð voru gegn peptíði nálægt N-enda RBD einnig tengd veiruhlutleysingu.

Leitarorð: SARS-CoV-2; COVID-19; Gam-COVID-Vac; táknmynd; mótefni; vírushlutleysing; sameindavíxlverkunarpróf; Omicron

cistanche viðbót kostir-auka friðhelgi

Smelltu hér til að skoða Cistanche Enhance Immunity vörur

【Biðja um meira】 Netfang:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1. Inngangur

Eftir fyrstu tilfellin af sýkingu með alvarlegu bráða öndunarfæraheilkenninu Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) í lok árs 2019 í Wuhan í Kína dreifðist nýi kransæðasjúkdómurinn (COVID-19) fljótt út um allt. heiminn og óx í heimsfaraldur [1–4]. Hröð þróun COVID-19 bóluefna og innleiðing alþjóðlegra bólusetningaráætlana ásamt útliti minna sjúkdómsvaldandi SARS-CoV-2 afbrigða eru taldir mikilvægir þættir til að draga úr dauðsföllum tengdum COVID-19- og alvarleiki heimsfaraldursins [1,5]. Fyrstu bóluefnin sem urðu fáanleg voru erfðafræðileg bóluefni byggð á adenoveirumiðluðum flutningi á geninu sem kóðar fyrir SARS-CoV-2 yfirborðsprótein S [6–8]. SARS-CoV-2 S próteinið samanstendur af S1 undireiningunni sem inniheldur viðtakabindingarsvæðið (RBD) sem tengist viðtaka þess ACE2 á frumum úr mönnum og S2 undireiningunni sem tryggir vírustengingu við hýsilfrumuhimnuna með próteingreiningu klofnunar á samrunapeptíð (FP) við veirusýkingu [9]. Hægt er að breyta S geninu sem notað er til genaflutnings í ákveðnum bóluefnum sem byggjast á kirtilveiru (td COVID-19 bóluefni Janssen) til að koma á stöðugleika á próteininu og hafa áhrif á klofnun þess en það er ekki raunin fyrir hin [10]. Mannafrumur sem eru sýktar af adenóveirum sem innihalda S-kóða genið framleiða mismikið magn af S mótefnavakanum sem er losað og kynnt af Major histocompatibility complex (MHC) flokki II til T frumum sem leiðir til CD4+ T frumuhjálpar til framleiðslu á S-sértækum mótefnum. S prótein tjáð af transsýktum frumum er einnig kynnt af MHC flokki I á yfirborði sýktu frumunnar og kveikir á virkjun S-sértækra frumudrepandi CD8+ T frumna, sem geta þekkt frumur sem framleiða S mótefnavaka og eyðilagt þær. Meginreglan um bólusetningu, þ.e. innleiðing á S-kóða erfðafræðilegum upplýsingum inn í hýsilfrumur og síðari framleiðsla S-mótefnavaka af sýktum frumum, er svipuð bóluefni fyrir boðbera ríbókjarnasýru (mRNA), þó að tæknin við genaflutning sé frábrugðin adenoveiru -byggð bóluefni. Þannig líkja „erfðafræðileg bóluefni“ að einhverju leyti eftir náttúrulegri SARS-CoV-2 sýkingu. Að bera kennsl á frumeindir sem þekkjast af mótefnum frá bólusettum einstaklingum sem taka þátt í hlutleysingu vírusa skiptir ekki aðeins máli til að skilja verkunarhátt núverandi bóluefna heldur einnig fyrir þróun fágaðrar virkra bólusetninga og óvirkrar ónæmisaðgerða gegn COVID-19 [11 ,12]. Flest núverandi bóluefni eru lögð áhersla á að fá S-sértæk mótefnasvörun með sérstakri athygli á RBD-sértæk mótefnasvörun vegna þess að það hefur verið séð að RBD-sértæk mótefni eru í tengslum við mikla hlutleysandi virkni gegn SARS-CoV-2 [ 13–15]. Hins vegar, fjöldi stökkbreytinga sem aflað er af hverju nýju afbrigði af áhyggjum (VOC), gefur til kynna mikilvægi þess að bera kennsl á epitopur sem varðveittar eru meðal VOCs sem miða á hlutleysandi mótefni sem eru staðsett ekki aðeins í RBD heldur einnig utan RBD [16]. Reyndar eru rannsóknir sem benda til tilvistar hlutleysandi epitopes utan RBD, sem eru viðurkennd af mótefnum eftir ónæmisaðgerð [17-20]. Árið 2020 varð bóluefnið Gam-COVID-Vac, einnig nefnt Sputnik-V, fáanlegt til notkunar í klínískri starfsemi og hefur nú verið samþykkt til notkunar í meira en 70 löndum (https://sputnikvaccine.com/about-vaccine) / (sótt 17. janúar 2023)). Samkvæmt heimildinni Our World In Data (OWID) fengu 79 milljónir manna í Rússlandi að minnsta kosti eitt skot af bóluefninu og 72 milljónir eru að fullu bólusettar (https://ourworldindata.org/ covid-vaccinations?country= RUS (sótt 22. mars 2022)). Gam-COVID-Vac samanstendur af tveimur bóluefnagerðum, sem eru byggðar á tveimur mismunandi kirtilveiruferjurum úr mönnum (hAd26 og hAd5) sem bera upprunalegt form S-próteinsins af Wuhan-Hu-1 stofninum SARS-CoV{{ 73}}. Spútnik-V samanstendur af tveimur inndælingum, annarri með hAd26 og annarri með hAd5 og spútnikljósi, með aðeins hAd26. Tveir mismunandi kirtilveirur eru notaðir fyrir fyrstu og aðra bólusetninguna til að draga úr möguleikanum á að bólusettir einstaklingar framkalli ónæmi fyrir S próteinónæminu gegn kirtilveirunni. Reyndar myndu adenoveirusértæk mótefni takmarka virkni örvunarbólusetninga með hlutleysingu á arfleifðarferjunni. Þess vegna, á 21. degi eftir fyrsta skammtinn af bóluefni með rAd26, er endurtekin mótefnavakagjöf framkvæmd með rAd5 ferjunni [8,21]. Fáar rannsóknir hafa rannsakað að einhverju marki S- og RBD-sértæk mótefnasvörun og veiruhlutleysingarvirkni í sermi frá Gam-COVID-Vac bólusettum [10,22,23]. Tilkynnt hefur verið um aukningu á RBD-sértækum IgG mótefnum þremur mánuðum eftir gjöf Gam-COVID-Vac og sýnt hefur verið fram á að mótefni krossbrigðast við Alfa, Beta, Delta og Omicron afbrigði sem valda áhyggjum [24-26]. Gam-COVID-Vac hefur einnig verið borið saman við nokkur önnur leyfisskyld bóluefni gegn SARS-CoV-2, sem sýndu mikla vírushlutleysingu og mikla virkni gegn COVID-19-tengdum dánartíðni fyrir Spútnik-V, þó að það væri lítilsháttar minnimáttarkennd við sum mRNA bóluefni varðandi vírushlutleysingu fannst [24]. Að lokum hefur verið sýnt fram á að ónæmisaðgerðir á ónæmisbrestveiru-jákvæðum (HIV+) andretróveirumeðferð (ART-meðhöndluðum) sjúklingum með Gam-COVID-Vac sýnir faraldsfræðilega virkni gegn upprunalegu villigerðinni og Delta afbrigði SARS-CoV{{ 113}} [27]. Hins vegar hefur enn sem komið er engin ítarleg greining á frumeindirgreiningu mótefna hjá Gam-COVID-Vac bólusettum einstaklingum verið framkvæmd og gögn eru nauðsynleg til að skilja ímmúnóglóbúlínsamsætu og IgG undirflokkssvörun hjá Gam-COVID-Vac-bólusettum einstaklingum. Hér könnuðum við tvo hópa einstaklinga sem höfðu verið bólusettir með Gam-COVID-Vac, einn sem hafði áður fengið SARS-CoV-2 sýkingu og annar hópur einstaklinga sem ekki höfðu áður fengið SARS-CoV-2. Við gerðum nákvæma greiningu á sérhæfni myndefnis af völdum mótefna með því að nota ör-arrayed SARS-CoV-2-afleidd brotin og óbrotin prótein og peptíð sem spanna allt S próteinið, þar á meðal RBD. Ennfremur voru IgG undirflokkssvörun greind. Rannsókn okkar leiðir í ljós að Gam-COVID-vaccinated einstaklingar setja RBD-sértæk mótefni sem geta hindrað RBD-ACE2 milliverkunina. Athyglisvert er að við komumst að því að hlutleysing vírusa var einnig tengd mótefnum sem beindust gegn peptíði utan RBD, sem gæti tekið þátt í umbreytingu á fyrir-eftir-samruna myndun toppprótínsins.

cistanche tubulosa-bæta ónæmiskerfið

2. Úrslit

2.1. Gam-COVID-Vac-bólusettir einstaklingar eru meðal annars COVID-19 einstaklingar sem hafa verið barnlausir og á batavegi

Einstaklingar á batavegi voru sýktir af Wuhan-Hu-1 stofninum í samræmi við algengi hans og raðgreiningargögn sem fengust við sýkingu í Moskvu svæðinu. Ófáir einstaklingar höfðu engin einkenni COVID-19 og skorti SARS-CoV-2-sértæk mótefni við ráðningu. Í rannsókninni voru 15 konur og 7 karlar með meðalaldur 60 (þ.e. 25–70 ára) (tafla 1).

Tafla 1. Lýðfræðileg, klínísk og sermifræðileg einkenni einstaklinga.

Plasmasýni var tekið úr hverjum einstaklingum á tímapunkti 0 (þ.e. grunnlínu) (mynd 1A), síðan var hver einstaklingur bólusettur með spútnik-V með um það bil 21 dags millibili á milli fyrsta og annars. inndælingu (tímapunktar 1 og 2). Á tímapunkti 3 var öðru plasmasýni safnað til að ákvarða mótefnasvörun af völdum bóluefnis (Mynd 1A). Fylgst var með einstaklingum í 120 daga til viðbótar. Á degi 110 eftir lokabólusetningu var einn einstaklingur (þ.e. einstaklingur 22) með COVID-19 en hinir höfðu ekki fengið nein einkenni COVID-19 (tafla 1).

Mynd 1. Rannsóknarhönnun og SARS-CoV-2-sértæk mótefnasvörun fyrir og eftir bólusetningu með spútnik-V. (A) Hönnun náms. Plasmasýni voru fengin úr COVID-19-barnalausum (n=12) og einstaklingum á batavegi (n=10) á tímapunkti 0 (grunnlínu), síðan fengu einstaklingar tvö spútnik-V bólusetningar á tímapunktum 1 og 2, í sömu röð, og plasmasýni var tekið á tímapunkti 3 (þ.e. dag 80–85 eftir fyrstu bólusetningu). (B) Núkleocapsíð-sértæk IgG mótefnamagn (y-ás: ISU) hjá einstaklingum sem ekki eru á barnsaldri og á batavegi (x-ás) við grunnlínu. Lárétt lína gefur til kynna afmörkun fyrir jákvæðni. (C) IgG mótefnamagn (y-ásar: ISU) sértækt fyrir RBD, S, S1 og S2 hjá einstaklingum á tímapunkti 0 og 3 (x-ásar). (D) Frá vinstri til hægri IgG1 , IgG2 , IgG3 , og IgG4 mótefnamagn (y-ásar: ljósþéttni OD gildi) í S (efri hluti) og RBD (neðri hluti) á tímapunktum 0 og 3 ( x-ásar). Marktækur munur á milli hópa eins og hann er ákvarðaður með Wilcoxon prófi er sýndur: ** p < 0.01, *** p < 0,001, **** p < 0,0001, ns—ekki marktækur.

2.2. Gam-COVID-Vac bólusetning veldur víðtækri IgG svörun við S, þar með talið S1, RBD og S2

cistanche viðbót kostir-auka friðhelgi

Við gerðum ítarlega greiningu á mótefnasvörun gegn stórum hópi af örfættum samanbrotnum og óbrotnum SARS-CoV-2 próteinum og peptíðum sem spanna S-próteinið í plasmasýnum frá SARS-CoV-2-náfnum einstaklingum og einstaklingum á batavegi. eftir fullt námskeið af bólusetningum með Gam-COVID-Vac (Mynd 1A,B; Tafla 1). Þegar borin voru saman plasmasýni frá tímapunkti 0 og tímapunkti 3 eftir bólusetningu, fannst marktæk örvun IgG svörunar gegn brotnu en ekki útbrotnu RBD, S, S1 og S2 (Mynd 1C). Þremur mánuðum eftir bólusetningu sýndu einstaklingar 21-föld aukningu á RBD-sértækum IgG mótefnum (p < 0.{{20}}001) og {{ 18}}föld aukning á S-sértækum IgG mótefnum (þ.e. tímapunktur 0: miðgildi 0,291, tímapunktur 3: miðgildi 5,778) (p < 0,0001), í sömu röð. IgG mótefni gegn S1 jukust 3.7-falt (p=0.0023) og IgG mótefni gegn S2 jukust 2.8-falt (p=0}.0094) (Mynd 1C ). Bólusetning með Gam-COVID-Vac framkallaði aðallega IgG svörun við samanbrotnu S, S1 og RBD, sambærilegt hjá einstaklingum sem hafa ekki verið barnlausir og á batavegi (myndir 1C, S2 og S3), sem gefur til kynna að hægt sé að nota það til að auka SARS-CoV-2- sértæk mótefnasvörun einnig hjá einstaklingum á batavegi. Veruleg aukning á IgG mótefnum gegn RBD, S og S1 sást hjá einstaklingum sem ekki höfðu náð sér og náðu bata (Mynd S2) og enginn marktækur munur var á IgG-gildum gegn RBD, S, S1 og S2 hjá einstaklingum sem ekki höfðu náð bata og á tímapunkti 3. (Mynd S3).

2.3. Gam-COVID-Vac bólusetning veldur aðallega IgG1 undirflokkssvörun við S og RBD

Greint hefur verið frá því að ofnæmissértæk ónæmismeðferð (AIT) framkallar aðallega ofnæmissértæk IgG1 og IgG4 svör sem eru ekki aðeins mismunandi varðandi áhrifavirkni þeirra (IgG1 getur miðlað mótefnaháðum frumueitrun (ADCC) og komplement virkjun á meðan IgG4 hefur ekki þessar áhrifavirkni) en einnig varðandi hreyfihvörf þeirra (IgG1: hröð byrjun og snemma hnignun: IgG4: hægt upphaf en viðvarandi gildi) [28-30]. Við könnuðum því IgG undirflokkinn (þ.e. IgG1–IgG4) svörun við S og RBD hjá spútnik-V bólusettum einstaklingum. Mynd 1D sýnir að bólusetning framkallaði nær eingöngu IgG1 undirflokkssvörun við S og RBD. Marktæk hækkun á IgG1 gildum sem eru sértæk fyrir S og RBD (p=0.0002 og p=0.0071, í sömu röð) fundust eftir bólusetningu. Hins vegar var ekki hægt að greina nein viðeigandi IgG2, IgG3 eða IgG4 undirflokkssvörun sértæk fyrir S og RBD (Mynd 1D).

2.4. Örvun vírushlutleysandi mótefna og mótefna sem hindra RBD-ACE2 víxlverkun með Gam-COVID-Vac bólusetningu

Til að greina veiruhlutleysandi mótefni notuðum við pVNT próf, þar sem víruslíkar agnir voru gervigerðaðar með S-próteini frá upprunalega Wuhan-Hu-1 stofninum og nýlega lýst VOC Omicron. Mótefni með hlutleysandi virkni fyrir Wuhan Hu-1 stofn fundust í öllum nema einum (þ.e. einstaklingi 22) af 22 einstaklingum (Mynd 2A, Tafla 2) en hlutleysandi mótefnatítrar fyrir Omicron voru marktækt lægri (Mynd 2B) og fannst aðeins í 17 af 20 einstaklingum (Mynd 2A, Tafla 2). Engin viðeigandi hlutleysing fannst fyrir einstaklinga 6, 7, 10, 11, 15 (Mynd 2A, Tafla 2). Veiruhlutleysingartítrar fyrir Omicron voru 25 sinnum lægri en fyrir WT (miðgildi 141,9 og 5,7 fyrir Wuhan-Hu-1 og Omicron, í sömu röð) (Mynd 2B).

Mynd 2. Veiruhlutleysandi virkni í plasma 3 mánuðum eftir spútnik-V bólusetningu og tengsl við IgG mótefnasvörun við RBD og S-afleidd peptíð. (A) Veiruhlutleysing (ID50) (y-ás) gegn Wuhan-hu-1 stofni (grænn) og Omicron (appelsínugulur) var fengin með plasma frá naive (blár) og bata (rauður) viðfangsefni (x-ásar). (B) Samanburður á hlutleysingu vírusa (y-ás: ID50 fengin fyrir plasma frá prófuðum einstaklingum, súlur tákna miðgildi með millifjórðungssvið (IQR) Wuhan Hu-1 (grænt) og Omicron (appelsínugult) Lárétta línan táknar niðurstöður sem fengust með blóðvökva frá heilbrigðu, ósýktu viðmiðunarefni (heilbrigður samanburðarhópur, HC) Marktækur munur á milli stofna var ákvarðaður með Mann–Whitney prófinu: **** p < 0. {{30}}001. (C) Staðsetning RBD og peptíða í tengslum við veiruhlutleysingu í kerfi S (S1, S2). (D) Fylgni milli veiruhlutleysingartítra fyrir Wuhan-Hu{{19 }} (WT) eða Omicron (y-ásar) og IgG gildi sem eru sértæk fyrir RBD og peptíð 12, 32 og 46A (x-ásar: ISU) (x-ásar: ISU). gefa til kynna marktæka fylgni samkvæmt óparametra Spearman prófinu, * p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,001 **** p < 0,0001, ns=ekki marktækt.

Tafla 2. Samanburður á IgG-gildum sem eru sértæk fyrir S, S1, S2 og RBD mæld með örfylki með hömlum á RBD-bindingu við ACE2 og veiruhlutleysingartítra (Wuhan-Hu-1, Omicron) ákvarðaðar fyrir plasma úr rannsökuð efni. Hitakortlagning var gerð fyrir hverja færibreytu fyrir sig með því að nota Excel. Hæsta stigið var talið dökkrautt og það lægsta var hvítt.

Sú staðreynd að hjá öllum nema einum einstaklingi (þ.e. einstaklingi 22) fjölgaði veiruhlutleysandi mótefnum eftir bólusetningu gefur til kynna að þau hafi verið framkölluð með bólusetningu (tafla 2). Viðfangsefni 21 sýndi þegar mikla blokkun á RBD-ACE2 milliverkun í MIA og mikla vírushlutleysingu við grunnlínu (tafla 2). Athyglisvert er að plasmasýni úr Gam-COVID-Vac bólusettum einstaklingum á batastigi sem voru með miðlungsmikinn sjúkdóm (#1, 2, 17, 18, 21) höfðu hærri vírushlutleysingartítra en þeir frá einstaklingum á batastigi sem höfðu vægan sjúkdóm (#22) eða engin einkenni (#4, 5, 7, 9) (Tafla 1 og 2). Hins vegar var lykilniðurstaðan sú að hömlun á bindingu RBD við ACE2 og veiruhlutleysingu tengdust ekki alltaf. Meira en 25% hömlun á bindingu RBD Wuhan Hu-1 við ACE2 kom aðeins fram hjá 6 einstaklingum sem höfðu einnig sýnt hömlun í veiruhlutleysunarprófinu vegna bólusetningar (þ.e. einstaklingum 1, 2, 3, 17, 18 , og 19) (tafla 2). Athyglisvert er að veiruhlutleysandi virkni (50% smitskammtur (ID50) > 100) sást hjá 6 einstaklingum þó að þeir sýndu enga eða litla hömlun á bindingu RBD við ACE2 (Tafla 2: Viðfangsefni 6, 10, 12, 13, 16, 20) .

2.5. Veiruhlutleysing hjá Gam-COVID-vaccinated einstaklingum er í sterkri fylgni við IgG svörun við RBD og S-afleiddu peptíð 12

Eins og áður hefur komið fram sýndi plasma frá nokkrum Gam-COVID-Vac-bólusettum einstaklingum (td hjá einstaklingum 6, 10, 12, 13, 16, 20; Tafla 2) veiruhlutleysandi virkni en hamlaði ekki RBD-ACE2 milliverkuninni. Við greindum því IgG mótefnaviðbrögð við peptíðunum sem spanna S-próteinið með örfylkingu-byggðri flísagreiningu [13] (Mynd S4 og mynd 2C) og tengdum peptíðsértæk IgG svörun við veiruhlutleysingu Wuhan-Hu{{19} } stofn og Omicron (mynd 2D). IgG svörun við þremur peptíðum (þ.e. peptíðum 12, 32, 46A) eins og IgG svörun við brotnu RBD voru í marktækri fylgni við hlutleysingu Wuhan-Hu-1 stofnsins (Mynd 2C, D). Peptíð 12 skar sig úr vegna þess að mótefnasvörun við óbrotnu peptíði 12 (Mynd S1), en ekki við óbrotnu peptíðum 32 og 46A, var marktækt aukið af Gam-COVID Vac hjá barnalegum einstaklingum (Mynd 3A) og einnig marktæk fylgni við hlutleysingu Omicron (Mynd 2D ). Engin marktæk örvun sást hjá einstaklingum á batavegi fyrir peptíðum 12, 32 eða 46A (mynd 3A). Röð peptíðs 12 er mjög varðveitt meðal SARS-CoV-2 stofna (Mynd 4) og er í S1 nálægt N-enda RBD og táknar þar af leiðandi svæði sem gæti skipt máli fyrir umskipti á for- að samruna S próteins eftir samruna (Mynd 3B).

Mynd 3. Miðgildi IgG mótefnamagns (y-ásar: ISU) gegn S-afleiddum peptíðum (P12, P32, P46A) hjá bólusettum einstaklingum sem hafa ekki verið bólusettir og hafa náð bata á tímapunktum 0 og 3 (x-ásar) (A) . Marktækur munur á milli hópa eins og hann er ákvarðaður með Wilcoxon prófi er sýndur: * p < 0.05, ns=ekki marktækur. (F) (B) Mynd 3. Miðgildi IgG mótefnamagns (y-ásar: ISU) gegn S-afleiddum peptíðum (P12, P32, P46A) hjá bólusettum einstaklingum sem hafa ekki verið bólusettir og hafa náð bata á tímapunktum 0 og 3 (x) -ásar) (A). Marktækur munur á milli hópa eins og hann er ákvarðaður með Wilcoxon prófi er sýndur: * p < 0,05, ns=ekki marktækur. (B) Sjónmynd af peptíðum 12, 32 og 46A í yfirborðsmynd SARS-CoV-2 gaddapróteintrimers (hliðarsýn, forsamrunabygging) sem myndast með PyMOL. Peptíð 12 er auðkennt í S-trimer líkaninu í rauðu, peptíð 32 í bláu og 46A í appelsínugult. Kolvetni eru sýnd með ljósgráu.

Mynd 4. Próteinröð röðun Wuhan-Hu-1 (efst) og Omicron (fyrir neðan) SARS-CoV-2 S-próteins. RBD er litað ljósgult og peptíð 12, 22, 25, 32, 33, 46A og 47 eru undirstrikuð. Wuhan S-prótein röð samsvarar WA1 einangrun (GeneBank accession Nr.: BCN86353.1), Omicron S-prótein röð Omicron er klædd GRA, ætt B.1.1.529 BA.1 byggt á GISAID gagnagrunninum ( https://www.gisaid.org/ (sótt 15. mars 2022)). Amínósýruskipti eru litakóðuð í samræmi við vatnskvilla og hleðslueiginleika þeirra (bleikur=vatnsfælin, grænn=hlutlaus, ljósblár=grunn vatnssækin og ljós rauður=súr vatnssækið).

3. Umræður

Bóluefnið Gam-COVID-Vac sem byggir á ferjunni, einnig nefnt Sputnik-V, var eitt af fyrstu SARS-CoV-2 bóluefninu sem varð fáanlegt til notkunar í klínískri starfsemi. Hins vegar eru tiltölulega litlar upplýsingar tiltækar um fína sérstöðu mótefnasvörunar hjá einstaklingum sem hafa verið bólusettir með COVID-19. Í þessari rannsókn gerðum við ítarlega greiningu á mótefnasvörun gegn örfættum samanbrotnum og óbrotnum SARS-CoV-2 próteinum og peptíðum sem spanna S-próteinið í plasmasýnum frá SARS CoV-2-nívum einstaklingum og einstaklingum á batavegi eftir fullt námskeið af bólusetningum með Gam COVID-Vac. Gam-COVID-Vac framkallaði aðallega IgG1 en engin önnur IgG undirflokkssvörun við samanbrotnu S, S1, S2 og RBD á sambærilegan hátt hjá einstaklingum sem ekki eru barnlausir og á batavegi, sem gefur til kynna að það sé hægt að nota það til að auka SARS-CoV-2- sértæk mótefnasvörun einnig hjá einstaklingum á batavegi. Eins og önnur erfðafræðileg bóluefni, var mótefnasvörun af völdum Gam-COVID-Vac aðallega í IgG1 undirflokknum sem hefur styttri helmingunartíma samanborið við IgG4 undirflokkssvörun sem er sjálfbærari. Til dæmis eru sértæk IgG4 undirflokkssvörun tengd langtímavörn meðan á ofnæmissértækri ónæmismeðferð stendur á meðan sértæk IgG1 viðbrögð byggjast upp hratt en hverfa eftir nokkra mánuði [28-30]. Til samræmis við það þarf tíðar örvunarsprautur með Gam-COVID-Vac og öðrum erfðafræðilegum bóluefnum til að halda hlutleysandi mótefnasvörun á háu stigi. Bólusetning með Gam-COVID-Vac framkallar mótefnasvörun sem líkir að miklu leyti eftir því sem finnst eftir náttúrulega sýkingu með SARS-CoV-2 [13]. Að auki tilheyra mótefnasvörun eftir náttúrulega sýkingu aðallega IgG1 undirflokknum og er beint gegn brotnu S, S1, S2 og RBD [13]. Hin nýja og áhugaverða niðurstaða rannsóknarinnar okkar var að plasma frá nokkrum Gam-COVID-Vac-bólusettum einstaklingum (td hjá einstaklingum 6, 10, 12, 13, 16, 20; Tafla 2) sýndi veiruhlutleysandi virkni en hamlaði ekki RBD-ACE2 samskipti. Við greindum því IgG mótefnaviðbrögð við peptíðunum sem spanna allt S-próteinið með örfylkingu byggðri flísgreiningu [13] (Mynd 2D og S4) og tengdum peptíðsértæk IgG svörun við veiruhlutleysingu Wuhan-Hu{{62} } stofn og Omicron BA.1 (Mynd 2D). IgG svörun við þremur peptíðum (þ.e. peptíðum 12, 32, 46A) eins og IgG svörun við RBD voru í marktækri fylgni við hlutleysingu Wuhan-Hu-1 stofnsins (Mynd 2C, D). Hins vegar var peptíð 12 einstakt vegna þess að mótefnasvörun aðeins við peptíði 12, en ekki við peptíðum 32 og 46A, var verulega aukið með bólusetningu (Mynd 3A) og einnig marktæk fylgni við hlutleysingu Omicron (Mynd 2D). Umfang bóluefnisörvunar á IgG svörun við peptíði 12 var hófleg en marktæk hjá einstaklingum sem ekki höfðu verið áður óþekktir og nokkuð sambærileg við eflingu IgG mótefna sem beint er að S og S1. Hins vegar geta IgG mótefni gegn einangraða óbrotnu peptíðinu (Mynd S1) aðeins táknað hluta mótefna sem beint er gegn peptíði 12 í brotnu próteini. Ennfremur er ekki aðeins magn mótefnanna mikilvægt heldur einnig ágirni mótefnanna. Röð peptíða 12 er mjög varðveitt meðal Wuhan-Hu-1 stofnsins og BA.1 Omicron VOC (Mynd 4) og er fengin frá svæði sem gæti skipt máli fyrir umskipti á for- til eftirsamruna sköpulag S próteins (Mynd 3B). Ennfremur sýnir samanburður á nýjum stökkbreyttum afbrigðum af Omicron (BA.1, BA.2, BA.4/5, BA.2.12.1, BA.2.75, BQ.1), að peptíð 12 (284–313 aa. ) helst óbreytt hvað varðar amínósýruröð, öfugt við til dæmis peptíð 32 (https://covariants.org/shared-mutations, (sótt 28. nóvember 2022)). Einstofna mótefni með veiruhlutleysandi getu sem miða á N-terminal domain (NTD) svæðið sem peptíð 12 er hluti af hefur verið lýst [31], og greint var frá því að einnig önnur bóluefni geti framkallað mótefnasvörun sem beinist gegn þessu svæði [18–20,32], sem gefur til kynna að svæðið sem skilgreint er af peptíð 12 getur verið mikilvægt til að framkalla hlutleysandi mótefni. Því má gera ráð fyrir að mótefni af völdum Gam-COVID-Vac bólusetningar geti hlutleyst SARS-CoV-2 með tveimur leiðum, annars vegar einfaldlega með því að hindra RBD–ACE2 milliverkunina og hins vegar með því að miða á svæðið sem inniheldur peptíð 12 í S- prótein sem getur tekið þátt í byggingarbreytingum (þ.e. umskipti forsamrunans yfir í samrunabyggingu S). Rannsóknin okkar hefur takmarkanir. Til dæmis notuðum við hlutleysunarpróf byggt á gervigerðum lentiveirum en þessar prófanir eru víða notaðar og áreiðanlegar [33]. Það er líka takmörkun á rannsókninni okkar að peptíð á örfylki okkar voru óbrotin og gætu því hafa greint aðeins brot af hlutleysandi mótefnum sem þekktu óbrotnu peptíðin á meðan enn stærra brot af mótefnum gæti hafa verið bundið við sköpulagðar epitopes í auðkenndum svæði. Ennfremur er það takmörkun á rannsókn okkar að við greindum aðeins fáa viðfangsefni. Hins vegar gefur rannsókn okkar greinilega til kynna að mótefni með mismunandi epitope sérhæfni geta stuðlað að verndandi áhrifum Gam COVID-Vac bólusetningar. Að auki sýnir rannsóknin svörun við hugsanlega varðveitt peptíð sem hægt er að nota til að búa til almennt hlutleysandi mótefni.

Kostir cistanche viðbót - hvernig á að styrkja ónæmiskerfið

4. Efni og aðferðir

4.1. Rannsóknir íbúafjölda og siðferðisyfirlýsing

Heilbrigt einstaklingar með (n {{0}}) eða án (n=12) fyrri SARS-CoV-2 sýkingar voru skráðir í rannsóknina í desember 2020 hjá National Research Center Institute of Ónæmisfræði Federal Medical Biological Agency of Russia (Siðfræðinúmer: #12-1, 29. desember 2020). Allir þátttakendur veittu skriflegt upplýst samþykki. Fyrri SARS-CoV-2 sýking var annaðhvort staðfest með fyrrum jákvæðu PCR prófi og einkennum COVID-19 eða með tilvist SARS-CoV-2-sértækra mótefna sem beindust gegn nucleocapsíð mótefnavaka og/eða RBD og/eða S mótefnavaka eins og lýst er [13]. Allir einstaklingar voru bólusettir í vöðva með tveimur skömmtum af Spútnik-V (Gam-COVID-Vac, Biocard, Moskvu, Rússlandi) með þriggja vikna millibili. Blóðsýni voru tekin einum degi fyrir fyrstu bólusetningu (T0, mynd 1A) og 80 til 85 dögum eftir fyrstu bólusetningu (T3, mynd 1A).

4.2. Greining á SARS-CoV-2-sértæk mótefnasvörun

Ónæmisglóbúlínsvörun barna sem ekki hafa verið meðvitaðir um og COVID{{0}} einstaklingar á batavegi voru metin í plasmasýnum fyrir og eftir bólusetningu með spútnik-V (mynd 1A). Sértækt IgG fyrir alhliða hóp SARS-CoV-2 próteina og 46 peptíða (25–30 mers) sem spanna S próteinið var mæld í 1:50 þynntum plasmasýnum með örfylkisflögutækni eins og áður. lýst [13]. Amínósýruröð, fjöldi amínósýra og mólþungi allra tilbúinna peptíða á örflögunni eru sýndar í töflu 3. Fyrir peptíð 12 og 32 og RBD tjáð í Escherichia coli (E. coli) (óbrotið) og í Human Embryonic Nyra 293 (HEK293) frumur (brotnar) hringlaga tvíhyrningur (CD) litróf eru veittar (Mynd S1). Peptíð 12 og 32 sýndu enga sérstaka efri uppbyggingu eins og ákvarðað var með hringlaga tvíhyggju (CD) eins og sýnt er á mynd S1. Í smáatriðum voru glerskyggnur sem innihéldu örfylki umkringdar Epoxý ramma (Paul Marienfeld GmbH & Co. KG, Lauda-Königshofen, Þýskalandi) virkjaðar með amínhvarfandi flókinni lífrænni fjölliðu, MCP-2 (Lucidant Polymers, Sunnyvale, CA) , USA) til að auðvelda bindingu próteina og peptíða. SARS-CoV-2 mótefnavakar/peptíð sáust með styrkleika 0,5–1 mg/ml í (75 mM Na2HPO4, pH=8.4) í þrígangi með því að nota SciFlexArrayer S12 (Scienion AG, Berlín, Þýskaland) [13]. Tjáningu og hreinsun próteina og peptíðmyndun er lýst í [13]. Hvarfgirni IgG mótefna fyrir mótefnavaka með örfylkingu var mæld með því að þvo fyrst örflokkana í 5 mínútur með fosfat-buffuðum saltvatni með 0,5% Tween 20 (PBST) og þurrka þá með skilvindu með Sigma 2–7 skilvindu og MTP-11113 númer (bæði Sigma Laborzentrifugen GmbH, Osterode am Harz, Þýskalandi). Síðan var 35 µL skammtar af 1:50 þynntum plasmasýnum (sýniþynningarefni, Thermofisher, Waltham, MA, Bandaríkjunum) bætt við og ræktað í 2 klst við 22 ◦C. Eftir annað þvottaskref var 30 µL af aukamótefnum (DyLight 550 (Pierce, Rockford, IL, USA) merkt and-manneskju IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA, USA)) sett á og ræktað í 30 mínútur við 22 ◦ C RT. Flís voru síðan þvegin, þurrkuð og í kjölfarið skannaðar með confocal leysiskanni (Tecan, Männedorf, Sviss). Myndgreining var framkvæmd með MAPIX örfylkismyndatöku- og greiningarhugbúnaði (Innopsys, Carbonne, Frakklandi) og umbreyting á mældum flúrljómunareiningum í ISAC staðlaðar einingar (ISU) var framkvæmd eins og lýst er [13]. Sértæk mótefnamagn er gefið upp í ISAC staðlaðum einingum (ISU). S- og RBD-sértæk IgG1-4 mótefnasvörun var mæld í plasmasýnum (1:50 þynnt) í tvíteknum með ELISA eins og áður hefur verið lýst [13] með breytingum á<5% for their average values.

Tafla 3. Tilbúið SARS-CoV-2 toppprótein unnin peptíð §.

4.3. Far UV Circular Dichroism (CD) Spectra

Fyrir peptíð, P12 og P32 sem og RBD tjáð í E. coli og HEK293 frumum CD greining var gerð með Jasco J-180 litrófsmæli (Japan Spectroscopic Co., Tokyo, Japan) sem áður var lýst [34]. CD litróf peptíða og próteina (Mynd S1) voru mæld í styrknum 0.1 mg/mL í 10 mM NaH2PO4 (pH 8.0), sem var notað til að koma auga á mótefnavakana.

4.4. Gervi-vírus-undirstaða veiruhlutleysunarpróf (PVT)

Veiruhlutleysandi virkni í plasmasýnum var ákvörðuð með gerviveiru-undirstaða veiruhlutleysingarprófi eins og áður hefur verið lýst [35]. Til að framleiða SARS-CoV-2 broddveirulíkar agnir (VLPs), voru HEK293T frumur samsmitaðar með 3 plasmíðum: lentiveiru umbúðaplasmíði pCMV∆8.2R (Addgene, Teddington, Bretlandi), pUCHR-GFP og a pCAGGS-S∆19 plasmíð sem kóðar villigerð SARS-CoV-2 gaddapróteinsins (sams konar tilvísunar Wuhan-Hu-1 og WA1 einangrunum) eða pCAGGS-S∆19-Om plasmíði sem kóðar SARS-CoV-2 Omicron spike próteinið (vinsamleg gjöf frá Andrey Gorchakov, Laboratory of Immunogenetics, Institute of Molecular and Cellular Biology, Siberian Branch of Russian Academy of Sciences, Novosibirsk, Rússlandi). Fyrir notkun í pVNT voru VLPs títruð með takmarkandi þynningu og ræktuð í 4 daga með hACE2-transsýktum HEK293T frumum. Skammtur af veiruögnum sem gaf 50% grænt flúrljómandi prótein (GFP) jákvæðar frumur var valinn til notkunar í prófinu. Fyrir pVNT voru öll plasmasýni hitaóvirkjuð í 30 mínútur við 56 ◦C fyrir notkun. Á 4. degi voru frumur eftir sýkingu stöðvaðar aftur og hlutfall GFP-jákvæðra frumna mæld með frumuflæðismælingu. ID50 gildi voru reiknuð út með því að nota sigmoidal feril (GraphPad Prism 9.2.0 hugbúnaður, Sigmoidal, 4PL), endurbyggður með hlutleysunarprósentu við mismunandi tilgreinda plasmaþéttni.

4.5. Sameindavíxlverkunargreining (MIA)

Til að greina getu plasmasýna af COVID{0}} einstaklingum sem eru á batavegi eða barnlausir einstaklingar (tafla 1), fyrir og eftir spútnik-V bólusetningu, til að hindra bindingu 50 ng/ml af RBD-hu-1 til ACE2 viðtaka var sameindavíxlverkunarpróf (MIA) framkvæmd eins og lýst er [13,36-39]. Þessi prófun getur mælt hömlun á merktu RBD við ELISA plötubundið ACE2 með mótefnum eða öðrum efnasambandshömlum á RBD-ACE2 milliverkuninni [38]. Í stuttu máli, raðbrigða ACE-2 (GenScript, Piscataway, NJ, Bandaríkjunum) var húðað (2 µg/mL) yfir nótt á NUNC Maxisorb 96 brunna plötur (Thermofisher). Eftir það voru þrjár þvottalotur framkvæmdar með þvottajafna og síðan voru plötur stíflaðar í 3 klst við RT með blokkandi jafnalausn. Sermissýni voru þynnt 1:2 í PBS, 0,05% Tween 20, 1% BSA og forræktuð í 2 klst með 50 ng His-merktu raðbrigða RBD (GenScript). Síðan var forræktuðu sermisýnunum bætt við plöturnar sem innihéldu ACE-2 í 3 klst og plöturnar voru þvegnar og ræktaðar yfir nótt með 1:1000 þynntu músa einstofna and-His merki mótefni (Dianova, Hamborg, Þýskalandi) . Eftir 3 þvottaþrep var 1:1000 þynntu HRP-tengdu IgG1 mótefni gegn músum (GE Healthcare, Chicago, IL, Bandaríkjunum) bætt við í 2 klst og greining var framkvæmd með ABTS. Meðalgildi ljósþéttleika (OD) sem samsvara bundnu RBD voru mæld við 405 nm og 492 nm (viðmiðun) í TECAN Infinite F5 ELISA lesanda með samþætta hugbúnaðinum i-control 2.0 (Tecan Group Ltd., Männedorf, Sviss). Biðminnisstýringin (yfirlag án RBD) var dregin frá hverri niðurstöðu. Ákvarðanir voru gerðar í tvítekningu og niðurstöður sýndar sem meðalgildi með breytileika á<5%.

Kostir cistanche viðbót - hvernig á að styrkja ónæmiskerfið

4.6. Sýning á peptíðum í spike prótein uppbyggingu

Yfirborðsmynd SARS-CoV-2 topppróteins var mynduð í PyMOL (PyMOL Molecular Graphics System, Version 2.5.0a0, Schrödinger, LLC, New York, NY, Bandaríkjunum) byggt á PDB færslunni 6XR8.

4.7. Tölfræðigreining

Tölfræðileg greining var gerð með því að nota GraphPad Prism (útgáfa 9.2.0 GraphPad Software, La Jolla California). Wilcoxon prófið (myndir 1C, D og 3A), Mann-Whitney prófið (myndir 2B og S3) og Friedman prófið (Mynd S2) voru notaðar til að bera saman tvo eða marga hópa. p < 0.05 var talið tölfræðilega marktækt. Fylgnin milli hópanna tveggja var ákvörðuð með Spearman ranking prófinu (Mynd 2D). Stöðluð ólínuleg aðhvarf var framkvæmd með GraphPad Prism hugbúnaði (Sigmoidal 4PL). Gögn eru sett fram sem miðgildi ± IQR. Stjörnumerki gefa til kynna marktækan mun á milli hópa, * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001, **** p < 0.0001, ns—ekki marktækt.

5. Ályktanir

Í stuttu máli er rannsóknin okkar sú fyrsta sem rannsakar ítarlega frumgerð og IgG undirflokkssérhæfni mótefna af völdum Gam-COVID-Vac og leiðir í ljós mismunandi aðferðir við Gam-COVID-Vac-framkallaða veiruhlutleysingu með mótefnum. Sérstaklega fengum við vísbendingar um að mótefni sem beint er að peptíði (þ.e. peptíð 12) staðsett nálægt en utan RBD í N-endahluta S1 tengist veiruhlutleysingu. Hugsanleg veiruhlutleysandi virkni peptíðsértækra 12-mótefna gæti stafað af hæfni þeirra til að trufla umskipti á for- til eftirsamruna sköpulags topppróteins. Við leggjum til að íhugað sé að taka inn svæðið sem skilgreint er af peptíð 12 á ónæmisvaldandi formi í bóluefnum til að framkalla mótefni gegn þessu epitope svæði og til að prófa mótefni framkölluð af slíkum bóluefnum fyrir hlutleysingu vírusa. Ef hægt er að auka vírushlutleysingu bóluefna getur innlimun ónæmisvaldandi peptíðs 12 epitopa bætt virkni COVID-19 bóluefna. Að auki gæti maður íhugað að mynda mótefni gegn peptíðinu 12-skilgreindu epitopunni fyrir óvirka ónæmisaðgerð. Vegna þess að peptíðið 12-skilgreinda epitope er varðveitt í núverandi þekktum SARS-CoV-2 afbrigðum, geta bóluefni og mótefni sem beint er gegn peptíð 12 víxlverndað gegn SARS-CoV-2 afbrigðum. Við útvegum því nýja þekkingu sem gæti verið gagnleg við þróun nýrra virkra og óvirkrar bólusetningaraðferða við COVID-19.

Heimildir

1. Rodriguez-Coira, J.; Sokolowska, M. SARS-CoV-2 bóluefni – Samsetning, verkunarháttur og stig klínískrar þróunar. Ofnæmi 2021, 76, 1922–1924. [CrossRef] [PubMed]

2. Sharma, A.; Ahmad, FI; Lal, SK COVID-19: Yfirlit um nýja þróun kransæðaveirusjúkdómsins, smit, uppgötvun, eftirlit og forvarnir. Veirur 2021, 13, 202. [CrossRef] [PubMed]

3. Arshad, B.; Iqbal, T.; Bhatti, KP Review-Insights into Off-Label lækningaaðferðir gegn vægri og alvarlegri COVID-19 sýkingu. Pak. J. Pharm. Sci. 2021, 34, 1469–1484. [CrossRef] [PubMed]

4. Zaman, W.; Saqib, S.; Ullah, F. COVID-19: Sýklafræðilegar aðferðir geta hjálpað til við að finna úrræði fyrir náttúrulega lækningu. Phytother. Res. 2020, 34, 2783–2785. [Krossvísun]

5. Rubio-Casillas, A.; Redwan, EM; Uversky, VN SARS-CoV-2 Tímabundin meinvirkni sem afleiðing af náttúruvali. COVID 2022, 2, 1089–1101. [Krossvísun]

6. Logunov, DY; Dolzhikova, IV; Zubkova, OV Öryggi og ónæmingargeta rAd26 og rAd5 vektor-bundið misleitt prime-boost COVID-19 bóluefni í tveimur samsetningum: Tvær opnar, óslembivalsaðar fasa 1/2 rannsóknir frá Rússlandi. Lancet 2020, 396, 887–897, Leiðrétting í Lancet 2021, 397, 98. [CrossRef]

7. Folegatti, PM; Ewer, KJ; Aley, PK Öryggi og ónæmingargeta ChAdOx1 nCoV-19 bóluefnisins gegn SARS-CoV-2: Bráðabirgðaskýrsla um 1/2 fasa, einblindri, slembiraðaðri samanburðarrannsókn. Lancet 2020, 396, 467–478, Leiðrétting í Lancet 2020, 396, 1884. [CrossRef]

8. Logunov, DY; Dolzhikova, IV; Shcheblyakov, DV Öryggi og verkun rAd26 og rAd5 vektor-undirstaða heterologous prime-boost COVID-19 bóluefnis: Bráðabirgðagreining á slembiraðaðri, stýrðri fasa 3 rannsókn í Rússlandi. Lancet 2021, 397, 671–681, Leiðrétting í Lancet 2021, 397, 670. [CrossRef]

9. Jackson, CB; Farzan, M.; Chen, B.; Choe, H. Mechanisms of SARS-CoV-2 innganga inn í frumur. Nat. Séra Mol. Cell Biol. 2022, 23, 3–20. [Krossvísun]

10. Heinz, FX; Stiasny, K. Sérkenni núverandi COVID-19 bóluefna: Þekktir og óþekktir um kynningu mótefnavaka og verkunarmáta. NPJ Vaccines 2021, 6, 104. [CrossRef]

11. Lim, HX; Masomian, M.; Khalid, K.; Kumar, AU; MacAry, PA; Poh, CL Auðkenning á B-frumu epitópum til að kalla fram hlutleysandi mótefni gegn SARS-CoV-2 topppróteininu með lífupplýsingafræði og einstofna mótefnamiðun. Alþj. J. Mol. Sci. 2022, 23, 4341. [Krossvísun]

12. Moroy, G.; Tuffery, P. Peptide-Based Strategies Against SARS-CoV-2 Attack: An Updated In Silico Perspective. Framan. Fíkniefni. Uppgötvaðu 2022, 2, 899477. [Krossvísun]

13. Gattinger, P.; Niespodziana, K.; Stiasny, K. Hlutleysing SARS-CoV-2 krefst mótefna gegn sköpulagðri viðtakabindandi léni. Ofnæmi 2022, 77, 230–242. [Krossvísun]

14. Niu, L.; Wittrock, KN; Clabaugh, GC A Structural Landscape of neutralizing antibodies Against SARS-CoV-2 Receptor Binding Domain. Framan. Immunol. 2021, 12, 647934. [Krossvísun]

15. Shan, S.; Mok, CK; Zhang, S. Öflugt og verndandi hlutleysandi mótefni gegn SARS-CoV-2 afbrigðum. Framan. Immunol. 2021, 12, 766821. [Krossvísun]

16. Bajpai, P.; Singh, V.; Chandele, A. Hlutleysandi mótefni gegn SARS-CoV í stórum dráttum-2 veita nýja innsýn í hlutleysingu afbrigða og annarra kórónuveirra manna. Framan. Cell. Smitast. Örverur. 2022, 12, 928279. [Krossvísun]

17. Vishwakarma, P.; Yadav, N.; Rizvi, ZA Alvarlegt brátt öndunarfæraheilkenni Coronavirus 2 Spike Prótein byggðar nýjar epitopur framkalla öflug ónæmissvörun in vivo og hindra veiruafritunar in vitro. Framan. Immunol. 2021, 12, 613045. [Krossvísun]

18. Garrett, ME; Galloway, JG; Wolf, C. Alhliða lýsing á mótefnasvörunum við SARS-CoV-2 Spike próteini finnur fleiri bóluefnisframkallaðar epitopur umfram þær fyrir væga sýkingu. eLife 2022, 11, e73490. [Krossvísun]

19. Peng, M.; Dou, X.; Zhang, X. Hlífðar mótefnavakaeðlismyndir sem sýndar eru með ónæmissignum eftir þrjá skammta af óvirkjuð SARS-CoV-2 bóluefni. Framan. Immunol. 2022, 13, 938378. [Krossvísun]

20. Polvere, I.; Parrella, A.; Zerillo, L. Húmoral Immune Response Diversity to Different COVID-19 bólusetningar: Afleiðingar fyrir "Green Pass" stefnuna. Framan. Immunol. 2022, 13, 833085. [Krossvísun]

21. Tukhvatulin, AI; Dolzhikova, IV; Shcheblyakov, DV Opin, óslembivalsuð, 1/2 áfanga rannsókn á öryggi, þol og ónæmingargetu stakskammta bóluefnis „Sputnik Light“ til að koma í veg fyrir kransæðaveirusýkingu hjá heilbrigðum fullorðnum. Lancet Reg. Heilsa Eur. 2021, 11, 100241. [CrossRef] [PubMed]

22. Gonzalez, S.; Olszevicki, S.; Salazar, M. Skilvirkni fyrsta þáttarins í Gam-COVID-Vac (Sputnik V) við minnkun SARS-CoV-2 staðfestra sýkinga, sjúkrahúsinnlagna og dánartíðni hjá sjúklingum á aldrinum 60–79 ára: Afturskyggn hóprannsókn í Argentínu. EClinicalMedicine 2021, 40, 101126. [CrossRef] [PubMed]

23. Gushchin, VA; Dolzhikova, IV; Shchetinin, AM hlutleysandi virkni sera frá spútnik V-bólusettu fólki gegn áhyggjum (VOC: B.1.1.7, B.1.351, P.1, B.1.617.2, B.1.617.3) og Moscow Endemic SARS -CoV-2 afbrigði. Vaccines 2021, 9, 779. [CrossRef] [PubMed]

24. Voko, Z.; Kiss, Z.; Surjan, G. Á landsvísu skilvirkni fimm SARS-CoV-2 bóluefna í Ungverjalandi - HUN-VE rannsóknin. Clin. Örverur. Smitast. 2022, 28, 398–404. [CrossRef] [PubMed]

25. Jeewandara, C.; Fernando, S.; Pushpakumara, PD Ónæmissvörun eftir fyrsta skammtinn af Sputnik V (Gam-COVID-Vac). Sci. Rep. 2022, 12, 1727. [Krossvísun]

26. Ikegame, S.; Siddiquey, MNA; Hung, CT hlutleysandi virkni spútnik V bóluefnissera gegn SARS-CoV-2 afbrigðum. Nat. Commun. 2021, 12, 4598. [Krossvísun]

27. Gushchin, VA; Tsyganova, EV; Ogarkova, DA Spútnik V vernd gegn COVID-19 hjá fólki sem býr með HIV undir andretróveirumeðferð. EClinicalMedicine 2022, 46, 101360. [CrossRef]

28. Shamji, MH; Valenta, R.; Jardetzky, T. Hlutverk ofnæmissértæks IgE, IgG og IgA í ofnæmissjúkdómum. Ofnæmi 2021, 76, 3627–3641. [Krossvísun]

29. Eckl-Dorna, J.; Weber, M.; Stanek, V. Tveggja ára meðferð með raðbrigða grasfrjókornaofnæmisbóluefninu BM32 framkallar stöðugt vaxandi ofnæmissértæka IgG4 svörun. EBioMedicine 2019, 50, 421–432. [Krossvísun]

30. Shamji, MH; Kappen, JH; Akdis, M. Lífmerki til að fylgjast með klínískri virkni ofnæmismeðferðar fyrir ofnæmi fyrir nefslímubólgu og ofnæmisastma: An EAACI Position Paper. Ofnæmi 2017, 72, 1156–1173. [Krossvísun]

31. Tortorici, MA; Beltramello, M.; Lempp, FA Ofurvirk mannamótefni vernda gegn SARS-CoV-2 áskorun með mörgum aðferðum. Vísindi 2020, 370, 950–957. [Krossvísun]

32. Cia, G.; Pucci, F.; Rooman, M. Greining á hlutleysandi virkni mótefna sem miða á opna eða lokaða SARS-CoV-2 sköpulag próteina. Alþj. J. Mol. Sci. 2022, 23, 2078. [Krossvísun]

33. Meng, B.; Datir, R.; Choi, J. SARS-CoV-2 topp N-enda lén mótar TMPRSS2-háða veiruinngöngu og samrunavirkni. Cell Rep. 2022, 40, 111220. [CrossRef]

34. Resch, Y.; Weghofer, M.; Seiberler, S. Molecular characterization of Der p 10: A greiningarmerki fyrir víðtæka næmingu við húsrykmaurofnæmi. Clin. Exp. Ofnæmi 2011, 41, 1468–1477. [Krossvísun]

35. Byazrova, M.; Yusubalieva, G.; Spiridonova, A. Mynstur fyrir SARS-CoV -2-sértæk mótefnaseytingu og B-frumumyndun í minni hjá sjúklingum með bráða COVID-19. Clin. Þýðing. Immunol. 2021, 10, e1245. [Krossvísun]

36. Gattinger, P.; Borochova, K.; Dorofeeva, Y. Mótefni í sermi sjúklinga á batavegi eftir væga COVID-19 koma ekki alltaf í veg fyrir bindingu vírusviðtaka. Ofnæmi 2021, 76, 878–883. [Krossvísun]

37. Gattinger, P.; Tulaeva, I.; Borochova, K. Omicron: SARS-CoV-2 afbrigði af raunverulegum áhyggjum. Ofnæmi 2022, 77, 1616–1620. [Krossvísun]

38. Gattinger, P.; Ohradanova-Repic, A.; Valenta, R. Mikilvægi, notkun og eiginleikar greiningar sem mæla SARS-CoV-2 hlutleysandi mótefni. Alþj. J. Mol. Sci. 2023, 24, 5352. [Krossvísun]

39. Gattinger, P.; Kratzer, B.; Tulaeva, I.; Niespodziana, K.; Ohradanova-Repic, A.; Gebetsberger, L.; Borochova, K.; Garner-Spitzer, E.; Trapin, D.; Hofer, G.; o.fl. Bóluefni byggt á brotnu viðtakabindandi léni-PreS samrunapróteini með möguleika á að framkalla dauðhreinsandi ónæmi fyrir SARS-CoV-2 afbrigðum. Ofnæmi 2022, 77, 2431–2445. [Krossvísun]