Ákvörðun um hlutverk næringar í öldrun húðar

Vinsamlegast hafðu sambandoscar.xiao@wecistanche.comfyrir meiri upplýsingar

Ágrip:Áhrif mataræðis á öldrun húðarinnar er orðið áhugavert rannsóknarefni. Fyrri rannsóknir hafa aðallega beinst að jákvæðum áhrifum kollagenpeptíða úr sjávarlífverum á öldrunarhúð þegar þau eru gefin til inntöku, en sjaldan hefur verið greint frá jákvæðum áhrifum kollagenpeptíða úr alifuglum á öldrun húðar. Í þessari rannsókn voru kollagenpeptíð framleidd úr kjúklingabeini með ensímvatnsrofi, og áhrif og verkunarmáti kollagenpeptíða sem gefin eru til inntöku á að draga úr öldrun húðar af völdum UV ásamt D-galaktósa voru könnuð. Niðurstöðurnar sýndu að kjúklingabeinkollagenið hafði dæmigerð einkenni kollagens og kjúklingabeinakollagenpeptíðin (CPs) voru aðallega lítil sameindapeptíð með mólþunga af<3000 da.="" in="" vivo="" experiments="" showed="" that="" cps="" had="" a="" significant="" relieving="" effect="" on="" aging="" skin,="" indicated="" by="" the="" changes="" in="" the="" compostion="" and="" structure="" of="" the="" aging="" skin,="" improvement="" of="" skin="" antioxidant="" level,="" and="" inhibition="" of="" inflammation;="" the="" relieving="" effect="" was="" positively="" correlated="" with="" the="" dose="" of="" cps.="" further="" investigation="" showed="" that="" cps="" first="" reduce="" the="" level="" of="" skin="" oxidation,inhibit="" the="" expression="" of="" the="" key="" transcription="" factor="" ap-1(c-jun="" and="" c-fos),="" then="" activate="" the="" tgf-β/smad="" signaling="" pathway="" to="" promote="" collagen="" synthesis,="" inhibit="" the="" expression="" of="" mmp-1/3="" to="" inhibit="" collagen="" degradation,and="" inhibit="" skin="" inflammation="" to="" alleviate="" skin="" aging="" in="" mice.="" moreover,="" the="" skin="" transcriptome="" found="" that="" lysosomes="" activated="" after="" oral="" administration="" of="" cps="" may="" be="" an="" important="" pathway="" for="" cps="" in="" anti-skin="" aging,="" and="" is="" worthy="" of="" further="" research.="" these="" results="" suggested="" that="" cps="" might="" be="" used="" as="" a="" functional="" anti-aging="" nutritional="">

Vinsamlegast smelltu hér til að vita meira

Leitarorð:kollagen peptíð; gegn öldrun; húðafrit;kollagen nýmyndun;lýsósóm

1. Inngangur

Heilsutímabilið, að fylgja heilbrigðu mataræði nákvæmlega, ákvarða hlutverk næringar í öldrun húðarinnar og ákveða hvað á að borða til að viðhalda unglegri og heilbrigðri húð eru erfið vandamál. Húð er stærsta líffæri líkamans, samsett úr húðþekju, húð og undirhúðlagi. Það virkar sem hindrun til að vernda líkamann fyrir utanaðkomandi þáttum og gegnir einnig hlutverki í heilsu og fegurð[1. Húðöldrun er flókið ferli, sem skiptist í tímaröð öldrun og ljósöldrun og hefur áhrif á bæði innri og ytri þætti.cistanche stilkurHelstu einkenni eru uppsöfnun stórsameindaskemmda í frumunni, samdráttur í starfsemi stofnfrumna (sem stuðlar að endurnýjun vefja) og smám saman tap á líkamlegri heilleika húðarinnar [2]. Helstu sameindaaðferðir sem valda öldrun húðar eru aðallega oxunarálag, stytting telómera, DNA skemmdir, erfðabreytingar, stjórnun ör-RNA, háþróuð uppsöfnun glúkósa á lokaafurðum og bólguöldrun 3]. Ljósöldrun er ofvöxtur húðþekju, þurrkun og niðurbrot utanfrumu fylkis af völdum útfjólublárrar geislunar. Helsta orsök ljósöldrunar eru hvarfgjörn súrefnistegundir (ROS) sem myndast með útfjólublári geislun sem miðla tjáningu matrix metalloproteinasa (MMPs) og type-I pro-kollagens í gegnum merkjaleiðir eins og mítógenvirkjaðan próteinkínasa (MAPK) merkja. leið, sem leiðir þannig til niðurbrots á utanfrumufylki (ECM) í húðinni og frumufrumu trefjafrumuefna [4]. Undanfarin ár hefur það orðið vinsælt að viðhalda heilbrigði húðar og seinka öldrun og að finna náttúruleg innihaldsefni eins og lífvirk peptíð og pólýfenól með andoxunar- og öldrunareiginleikum hefur orðið rannsóknarreitur [5].

Cistanche getur gegn öldrun

Hins vegar hefur kollagen mikla mólþunga og er erfitt að frásogast og nýta það beint, en litlu sameinda kollagenpeptíðin eftir kollagen vatnsrof hafa sterkari líffræðilega virkni og háan frásogshraða [6]. Á sama tíma hefur víðtæk notkun kollagens í matvælum, lyfjum, vefjaverkfræði, snyrtivörum og öðrum sviðum gert kollagenpeptíð með lægri mólmassa, meiri frásogsvirkni og sterkari líffræðilega virkni að nýju uppáhaldi í hagnýtum matvælum og læknisfræðilegum rannsóknum [{{1 }}]. Kollagenpeptíð eru lítil, innihalda 2-20 amínósýruleifar sem fást eftir kollagen vatnsrof. Þau eru notuð sem fæðubótarefni til að meðhöndla öldrun húðar vegna hugsanlegrar bólgueyðandi og andoxunarvirkni þeirra og ónæmisstjórnunar og áhrifa andoxunar og fjölgunar á trefjafrumur í húð [10].

Eftir inntöku frásogast kollagenpeptíð í formi lítilla peptíða og eru fljótt flutt í blóðið og að lokum til nýrna, húðar, liða og annarra vefja sem á að geyma og nota. Eftir 14 daga hélst geislavirknimagnið hátt í húð músa sem höfðu verið látin gefa með C14-merktum kollagenpeptíðum.cistanche tubulosa kostir og aukaverkanirKollagenpeptíðin geta nánast alveg frásogast og nýtt af líkamanum, en frásogs- og nýtingarhraði kollagens er aðeins 50-60 prósent [6,11-13]. Á undanförnum árum hefur víða verið greint frá því að kollagen vatnsrof úr fiskroði, fiskahreiði, kúbeinum, kúaskinni og svínaskinni hafi jákvæð áhrif á að draga úr öldrun húðar og hafa hlotið töluverða athygli vísindamanna. Til dæmis, kollagenpeptíð einangruð úr silfurkarpahúð stuðla að nýmyndun pro-kollagens og hamla AP-1, MMP-1 og MMP-3 prótein tjáningu með því að virkja TGF- /Smad ferlið til að koma í veg fyrir niðurbrot kollagen og gera við ljósaldnar húðfrumur [14]. Inntöku kollagenpeptíða úr nautgripum getur bætt slökun húðar, aukið kollageninnihald og andoxunarensímvirkni, lagað kollagen trefjar og staðlað kollagenhlutfall húðarinnar í öldruðum músum [15]. Hins vegar hafa kollagenpeptíð frá mismunandi uppruna mismunandi áhrif. Magn og uppbygging mjög virkra peptíða í blóði eftir inntöku kollagenpeptíða fer eftir uppruna kollagensins [10]. Verndaráhrif kollagenpeptíðs sem er dregin úr húð hænsna gegn trefjakímskaða af völdum UVA voru betri en kollagenpeptíðsins sem dregin er út úr húð svína, kúa eða tilapia, og áhrif þess jafngilda kollagenafleiddu þrípeptíði (Gly-Pro) -Hyp)[16].

Trúarskoðanir og áhyggjur af sjúkdómum (eins og kúabrjálæði) hafa leitt til þess að fólk hefur smám saman fært stefnu þróunar kollagens og afurða þess frá landspendýrum yfir í alifugla og sjávarlífverur|17I.Sem aðal aukaafurð alifuglavinnslu, kjúklingur bein er efnileg uppspretta kollagenafurða. Það dregur ekki aðeins úr sóun á auðlindum og umhverfismengun heldur gerir það einnig kleift að nýta aukaafurðir á skilvirkan hátt. Þess vegna, í þessari rannsókn, notuðum við kjúklingabeinakollagenpeptíð sem hráefni, með naktum músum sem voru meðhöndlaðar með D-galaktósa og UV til að örva öldrun húðar, sem líkan til að meta áhrif inntöku kollagenpeptíðs til að draga úr öldrun húðar í músum og ákvarða viðeigandi vélbúnað.

2. Efni og aðferðir

2.1.Efni, efni og dýr

Kjúklingabúin í Yunnan landbúnaðarháskólanum (Kunming, Kína) útveguðu eyddu hænurnar, sem voru aðskildar, þurrkaðar og muldar til að fá kjúklingabeinamjölið. Sú-peroxíð dismutasa (SOD), katalasa (CAT) og glútaþíon peroxidasa (GSH-PX) sett voru keypt frá Soleibao Biotechnology Co., Ltd. (Beijing, Kína). Hýdroxýprólín (HYP), interleukín-1 (IL-1x), fylkismetalópróteinasi-1/3 (MMP-1/3), prókollagen af ​​tegund I og hýalúrónsýra (HA) ensímtengd ónæmisgreining (ELISA) sett voru keypt frá Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (Nanjing, Kína). Heilbrigðar BALB/C hárlausar kvenmýs (18±2g, sex vikna gamlar) voru keyptar frá Nanijing Junke Bioengineering Corporation, Ltd.(Nanjing, Kína) með leyfisnúmer: SCXK(SU)2016-0010.cistanche tubulosa þykkniPepsín og papain voru keypt frá Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd. (Shanghai, Kína) og önnur efni voru af greiningargráðu. Allar mýsnar voru meðhöndlaðar í samræmi við reglugerðir rannsóknardýraverndar í Yunnan-héraði og samþykktar af dýraumönnunar- og notkunarnefnd Yunnan landbúnaðarháskólans (samþykki ID:YAUACUC01).

2.2. Collgen undirbúningur og amínósýrusamsetning

Útdráttur og amínósýrusamsetning kjúklingabeinakollagens fylgdi aðferðinni sem lýst er af Liuet al. [18]með smávægilegum breytingum. Kjúklingabeinduftið var hrært og bleytið í 0.05 M NaOH, 10 prósent n-hexani og 0.25 M EDTA lausn (pH7,5 ) í hlutfallinu 1/10 (m/o). Í hverju skrefi var sýnið meðhöndlað í 36 klst og skipt um bleytilausnina á 6 klst fresti til að bólga upp beinduftið, fjarlægja prótein sem ekki eru kollagen, fitu og steinefni úr beinduftinu. Sýnið var þvegið með hreinu vatni til hlutleysis eftir hvert skref. Formeðhöndlaða kjúklingabeinamjölið var blandað saman við 0,5 M ísediksýru sem innihélt 0,1 prósent (w/v) pepsín í hlutfalli föstu og vökva 1:10 (w/v) og stöðugt hrært í og ​​dregið út við 4 gráður í 48 klst. Það var síðan síað og síuvökvinn skilinn í skilvindu við 15,000×g í 15 mínútur við 4 gráður. pH-gildi flotans var stillt á 7.5-7.8 með NaOH-lausn og NaCl var bætt við í lokastyrk 1,5 M. Eftir að blöndunni var haldið ótrufluð í 12 klst við 4 gráður til að salta út, var kollagenið botnfallið var skilið í skilvindu við 15,000×g í 15 mínútur við 4 gráður, síðan leyst upp með 0,5 M ediksýru, skilað í hreinu vatni, frostþurrkað og fullunnin vara var kjúklingabeinakollagen.

Amínósýrusamsetning kjúklingabeinakollagens var ákvörðuð með Sykam S433D sjálfvirka amínósýrugreiningartækinu (München, Þýskalandi). Ákveðið magn af kollagensýni sem á að prófa var tekið í lokuðu glasi, bætt við 10 mL6 M HCl og vatnslosað við 110C í 24 klst. Vatnsrofið var þétt með köfnunarefnisblástur og aftur leyst upp í 20 mL sítrónusýrujafnalausn. Eftir örsíun með 0,22 um microporous himnu voru 20 μL vatnsrofsefni tekin til amínósýrurófsgreiningar. Amínósýruinnihald sýnisins var gefið upp í prósentum.

2.3. Undirbúningur og mólþyngdardreifing kollagenpeptíða (CP)

Samkvæmt niðurstöðum fyrri hagræðingarferlis okkar voru CPs útbúin með því að nota papain í ensím-til-hvarfshlutfallinu 1:4 0 (massahlutfall). Eftir að pH var stillt í 7 og ensímvatnsrof við 63 gráður í 5 klst, var ensímið óvirkt í sjóðandi vatnsbaði í 15 mín. Ensímvatnsrofið var afsaltað og frostþurrkað, aftur leyst upp í 0,1 prósent maurasýrulausn og skilið í skilvindu til að fá ofanvatnið. AQ Exactive HF Orbitrap High-Resolution Mass Spectrometer-QE-HF (Thermo Fisher, Waltham, MA, Bandaríkjunum), búinn rafúðajónun (ESI, var notaður til að greina kollagen vatnsrofið í fullri skannaham upp á 350-1800 m /z, og niðurstöðurnar voru sóttar og greindar með Proteome Discoverer 2.1 hugbúnaðinum.

2.4.Dýrapróf

Kvenkyns BALB/C hárlausar mýs (n{{0}}) voru hafðar í herbergi við stjórnað hitastig (24±1 gráðu), rakastig (60 ±5 prósent) og 12 klst dag-næturlota í eina viku. Þeim var veittur aðgangur að mat og vatni eftir frjálsum vilja. Eftir eina viku af aðlögun var músunum skipt af handahófi í eftirfarandi fimm hópa (n=11 í hverjum hóp):(i). Venjulegur hópur (N): UV óljóst; inntöku 0,4 ml saltvatns daglega. (ii). Líkanflokkur (M): UV-útsett auk D-galaktósa (0,2 ml); inntöku 0,4 ml saltvatns daglega.

(i). Lágskammta kollagen peptíð hópur (LCP): UV útsett auk D-galaktósa (0,2 ml); munnlega

gjöf 0,4 ml CPs (skammtur: 200mg:kg-1 líkamsþyngdar) daglega.

(iv). Meðalskammta kollagen peptíð hópur (MCP): UV útsett ásamt D-galaktósa; inntöku

gjöf 0,4 ml CPs (skammtur: 500 mg·kg-1 líkamsþyngdar) daglega.

(v). Háskammta kollagen peptíð hópur (HCP): UV-útsett auk D-galaktósa; munnleg stjórnun-

meðferð á 0,4 ml CPs (skammtur: 1000 mg kg-1 líkamsþyngdar) daglega.

Meðferð með D-galaktósa var framkvæmd með inndælingu undir húð á 0,2 ml af 10 prósenta D-galaktósa lausn aftan á hálsi músarinnar (skammtur: 1.0g/ kg-1líkamsþyngd) daglega. UV-geislun var framkvæmd með 40 W UVA-340 LAMIP (O-panel, Cleveland, Bandaríkjunum, hámarksbylgjulengd: 340 nm), fjarlægðin milli lampans og baks músanna var 30 cm (230 m J/cm) -), og geislunin stóð í 30 mínútur á hverjum degi í sjö vikur (49 dagar). Geislunarstyrkur var mældur með UVA365-geislamæli (Xinbao Keyi Electronic Technology Co., Ltd., Xi'an, Kína). Klukkutíma eftir D-galaktósa og UV meðferð fengu mýsnar 0,4 ml af CPs til inntöku á hverjum degi. Eftir síðustu geislunina voru mýsnar svæfðar, vigtaðar og tekin úr vefjum til síðari greiningar.

2.5. Raki í húð, innyflum og aukning líkamsþyngdar

Raki húðarinnar var ákvarðaður með ISO 1442 og innyflum var reiknaður út með því að nota eftirfarandi jöfnu: innyflum (g/kg)= innyflum/líkamsþyngd.

2.6. Oxidatioe streita, HA og HYP innihald húðarinnar

Húðsýni voru gerð einsleit með níföldu magni af venjulegu saltvatni (w/w) í ísbaði með vefjajafnara (TGrinder OSE-Y30, Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd., Peking, Kína), og síðan skilið í skilvindu við 2000 ×g og 4 gráður í 10 mín. Virkni súperoxíð dismútasa (SOD), katalasa (CAT) og glútaþíon peroxidasa (GSH-PX), og innihald hýalúrónsýru (HA) og hýdroxýprólíns (HYP) í söfnuðu flotinu var ákvarðað samkvæmt aðferðinni sem lýst er í leiðbeiningar sem samsvara viðkomandi settum.

2.7.Húðvefjafræðileg

Húðsýni úr músum voru fest í 4 prósent paraformaldehýðlausn í 24 klst, þurrkuð, felld inn í paraffín og skorin í sneiðar. Húðhlutarnir voru litaðir með hematoxýlíni og eósíni (HE) og skoðaðir með ECLIPSE CI-E framflúrljómunarsmásjá (Nikon, Japan). Þykkt húðþekju og húðhúðar var metin með Halcon 13.0.1.1 hugbúnaðinum (MVTec, Munchen, Þýskalandi).

2.8. Skin Transcriptome Sequencing

2.8.1. RNA útdráttur, bókasafnsbygging og umritsröðun

Heildar-RNA var dregið úr húð músa með því að nota RNeasy Mini Kit (Tiangen Bio-chemical Technology Co., Ltd., Peking, Kína) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Hreinleiki og styrkur RNA var athugað með kaiaoK5500 Spectrophoto-meter (Kaiao, Peking, Kína); Heilleiki RNA var metinn með því að nota RNA Nano 6000 prófunarbúnaðinn og Bioanalyzer 2100 kerfið (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, Bandaríkjunum). Uppskriftarröðunargreining hvers sýnis var framkvæmd af Biolinker Technology Company Limited (Kunming, Kína). Í stuttu máli var þyrping vísitölukóðuðu sýnanna framkvæmd á cBot klasaframleiðslukerfi með því að nota HiSeq PE Cluster Kit v4-cBot-HS(llu-mina) í samræmi við leiðbeiningar framleiðanda. Eftir klasamyndun voru söfnin raðgreind á Ilumina vettvang og 150 bp pöruð enda les voru mynduð.

2.8.2. Lífupplýsingafræði greiningar á RNA-raðgreiningargögnum

Gene Ontology(GO) og Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) auðgunargreining á mismunandi tjáðum genum (DEGs) var framkvæmd með því að nota R tungumálaklasagreiningarpakkann. Þegar p-gildið var minna en 0.05 voru atriðin og leiðirnar sem GO og KEGG auðguðu taldar vera marktækar.

2.8.3. Öfug transkriptasa-pólýmerasa keðjuverkun (qRT-PCR)

QRT-PCR var framkvæmt eins og áður hefur verið lýst [19].

2.9. Wester Blot

Samkvæmt aðferð sem lýst er af Park o.fl. [20], Western blot (WB) greining var gerð til að mæla tjáningu öldrunartengdra próteina í músum. Próteinstyrkur húðlýsis í hverjum meðferðarhópi var magnmældur með því að nota BCA settið, aðskilið með SDS-PAGE (10 prósent akrýlamíð hlaupi), flutt yfir á PVDF himnu, stíflað með 5 prósent undanrennu og ræktað með viðeigandi magni af frummjólk. mótefni (TGF-b1, c-Fos,c-Jun, Samd2/3 og -aktín) við 4 gráður yfir nótt. Eftir þvott með TBST var sýnunum blandað við auka mótefni og ræktuð við stofuhita í 1 klst.cistanche tubulosa umsagnirChemiDoc XRS plus chemiluminescence hlaupmyndavélin (BioRAD, Hercules, CA, USA) var notað til að greina ákveðin prótein. Image] hugbúnaður var notaður til að magnmæla tjáningu markpróteins í hverjum meðferðarhópi og niðurstöðurnar voru táknaðar með þéttleikagildum sem staðlað voru að -aktínpróteini.

2.10.ELISA

Tjáningarmagn MMP-1, MMP-3, Type I pro-kollagens og IL-1& í húðlýsuvökva var ákvarðað með ensímtengdri ónæmisgreiningu. Greiningin var framkvæmd í samræmi við leiðbeiningarnar sem fylgdu settinu.

2.11.Tölfræðigreiningar

Allar niðurstöður voru greindar með SPSS 21 (IBM Inc., Armonk, NY, Bandaríkjunum) hugbúnaði með einhliða dreifigreiningu (ANOVA) og Duncan's multiple range test, með marktektarstiginu stillt á p<0.05. originpro="" 2017(originlab,="" northampton,="" ma,="" usa)was="" used="" to="" plot="" the="" data.="" all="" data="" were="" expressed="" as="" the="" mean="" ±="" standard="" deviation="">

3. Niðurstöður og umræður

3.1.Amínósýrusamsetning kollagens

Amínósýrusamsetning kjúklingabeinakollagens er sýnd í töflu 1. Gly var aðal amínósýran í sýnunum, nærri þriðjungur (27,86 prósent) af heildar amínósýrum, og Hyp var sérstök amínósýra í kollageni, sem nemur 9,83 prósentum. Helstu eiginleikar kollagensameinda voru endurteknar Gly-XY raðir og einstök þrefaldur þyrillaga uppbygging sem samanstendur af þremur keðjum. Gly var um það bil þriðjungur af heildar amínósýrum, X og Y voru oft prólín og hýdroxýprólín, eða gætu verið hvaða leifar sem er [21]. Amínósýrusamsetning sýnisins var svipuð og kjúklingabeinakollagens sem greint var frá í fyrri rannsóknum og hafði dæmigerð einkenni kollagens [22].

3.2. Mólþyngdardreifing CPs

Molecular weight distribution reflects the degree of collagen hydrolysis. The molecular weight of the CPs was mainly below 3000 Da (Figure 1), accounting for about 87.61%of all collagen hydrolysates, indicating that almost all of the CPs were small peptides. Many studies claim that collagen peptides with a lower molecular weight have better biological activity [23]. For example, Song et al. [24]. reported that lower molecular weight (200-1000 Da, 65%)silver carp skin collagen peptides repaired UV-induced aging skin in mice more effectively than similar peptides with a higher molecular weight(>1000 Da, 72 prósent). Hins vegar sýndi þýska Gelita fyrirtækið með nokkrum klínískum rannsóknum að áhrif kollagenpeptíða ráðast aðallega af samsvörun þess við eiginleika kollagenpeptíðanna eftir niðurbrot á kollageni úr mönnum, frekar en mólmassa kollagenpeptíðanna. Þeir komust að því að varan VERISOL③ með meðalmólþunga upp á 2000 Da hefur mest örvandi áhrif á trefjafrumur í húð, en varan FortigelTM með meðalmólmassa 3000 Da hefur sérstök áhrif á brjóskviðgerð [25-27].

3.3. Áhrif CP til inntöku á að draga úr öldrun húðarinnar

3.3.1.Líkamsþyngd og líffæravísitala

Líkamsþyngdarstuðull og líffærastuðull eru mikilvægir og endurspegla heilsufar músa. Þyngd músa í hverjum hópi jókst eðlilega á prófunartímabilinu (tafla 2). Meðalþyngdaraukning M hópsins var minni en N hópsins og CP meðferðarhópanna var meiri en M hópsins, sem bendir til þess að CPs hafi engar aukaverkanir á mýs. Í fyrri skýrslum var skammtur af kollagenpeptíðmeðhöndluðum músum að mestu á bilinu 100-1000 mg/kg.bw·d og öruggur skammtur af tilapia kollagenpeptíðum náði 4,07 g/kg.bw·d [{{6} }]. Á sama hátt var vöxtur húðaldraðra músa eftir magaslöngu með tilapia-skala kollagenpeptíðum (skammtur: 500 og 1000 mg/kg·bw·d) einnig svipaður niðurstöðum okkar [29]. Miltan gegnir mikilvægu hlutverki í húmors- og frumuónæmi, þannig að miltavísitalan er oft notaður til að meta virkni ónæmiskerfisins.cistanche BretlandiThe liver index was used to evaluate the toxicity of the tested sample. In these tests, the liver and spleen indices in the M group were lower than those in the N group, and both recovered after treatment with CPs, but there was no significant difference across the treatment groups (p >0.05). Niðurstöðurnar voru svipaðar og í fyrri rannsóknum [30], sem gefur til kynna að CPs séu öruggar og gætu bætt ónæmi músa lítillega.

3.3.2.Húðsamsetning

UV og D-galaktósa meðferðin (M hópur) dró verulega úr raka, HA og Hyp innihaldi húðarinnar, samanborið við N hópinn, um 13,36 prósent, 24,08 prósent og 15,83 prósent, í sömu röð (p.<0.05)(table 2).="" the="" contents="" of="" moisture,="" ha,="" and="" hyp="" in="" the="" skin="" were="" significantly="" higher="" in="" mice="" after="" the="" oral="" administration="" of="" cps="" compared="" to="" the="" contents="" of="" those="" in="" the="" mice="" of="" the="" m="" group=""><0.05). among="" the="" dose="" groups,="" the="" contents="" of="" the="" three="" skin="" components="" were="" significantly="" different="" between="" the="" lcp="" and="" hcp="" groups="" and="" were="" dependent="" on="" the="" dose="" of="" intake="" of="" cps.="" the="" hcp="" group="" had="" even="" higher="" contents="" than="" the="" n="" group,="" and="" ha="" and="" hyp="" were="" significantly="" different="" between="" the="" two="" groups="" (p=""><>

Breytingar á rakainnihaldi í húð valda hrukkum og lafandi húð og verða fyrir áhrifum af matrixhlutum eins og kollageni í húð og HA[31]. Hýdroxýprólín er stöðug, rík og sérstök amínósýra í kollageni og innihald hennar getur óbeint endurspeglað innihald kollagens í húðinni, sem og öldrun húðarinnar. Auk þess gegnir HA, sem er mjög tjáð í húð ECM, mikilvægu hlutverki við að stjórna vatnsjafnvægi húðarinnar, osmótískum þrýstingi, rakasöfnun og mýkt sem vatnsgeymslukerfi og byggingarhluti húðarinnar [32]. Í þessari rannsókn jókst innihald raka, HYP og HA í húðinni verulega eftir inntöku CP, sem gæti tengst eflingu kollagens og HA nýmyndunar með CPs. Auk þess jók aukningin á HYP og HA rakainnihaldinu.

3.3.3. Vefjafræðilegar breytingar á húð

Vefjafræðilegar breytingar á bakhúð músa eftir sjö vikna samfellda meðferð eru sýndar á mynd 2. Öldrunarhúð M hópsins sýndi einkenni gróft yfirborðs, þykknað húðþekju, þynntrar húðar og fárra frumna, samanborið við húð á N hópurinn. Hins vegar batnaði ástand öldrunar húðar hjá músum eftir inntöku CPs, og hélt sléttri, skipulegri og fullkominni uppbyggingu svipað og hjá músum úr N hópnum. Þannig var húðhúðin marktækt þynnri og húðþekjan marktækt þykkari í M hópnum en í N hópnum (p.<0.05). the="" change="" in="" skin="" dermis="" and="" epidermal="" thickness="" was="" significantly="" better="" after="" treatment="" with=""><0.05), and="" the="" effect="" was="" more="" obvious="" with="" the="" increase="" in="" the="" dose="" of="" cps="" (figure="" 2).the="" effect="" of="" oral="" cps="" on="" the="" histological="" structure="" of="" aging="" skin="" was="" similar="" to="" that="" reported="" previously="" [4,28,31].="" the="" increase="" in="" the="" thickness="" of="" the="" epidermis="" might="" be="" an="" adaptive="" change="" to="" protect="" the="" skin="" from="" external="" stimuli,loss="" of="" skin="" moisture,="" and="" uv="" damage,="" possibly="" due="" to="" the="" increase="" in="" uv-activated="" epidermal="" growth="" factor="" receptor="" (egfr)="" that="" induces="" keratinocyte="" proliferation="" and="" epidermal="" hyperplasia[4].="" however,="" the="" mechanism="" by="" which="" oral="" cps="" alleviate="" the="" increase="" in="" epidermal="" thickness="" remains="" unclear.="" the="" dermis="" imparts="" elasticity="" and="" strength="" to="" the="" skin,="" and="" the="" degradation="" of="" ecm="" and="" the="" reduction="" in="" the="" ability="" to="" repair="" fibroblasts="" are="" the="" main="" causes="" of="" dermal="" thinning="" in="" aging="" skin.="" dermal="" thickness="" increased="" after="" the="" treatment="" with="" cps,="" which="" might="" be="" due="" to="" the="" removal="" of="" ros="" from="" the="" skin="" and="" inhibition="" of="" the="" increase="" of="" mmps="" by="" cps.="" this,="" in="" turn,="" inhibited="" the="" degradation="" of="" skin="" collagen="" and="" elastin="" (figure="" 3),="" the="" entry="" of="" cps="" in="" the="" skin,="" and="" their="" participation="" in="" the="" synthesis="" of="" collagen="" and="" ha="" [6],="" which="" was="" confirmed="" by="" the="" increase="" in="" the="" content="" of="" hyp="" and="" ha="" in="" the="" skin="" (table="">

3.3.4. Andoxunarefni í húð og bólgustig

Að ákvarða virkni andoxunarensíma er algengasta aðferðin til að meta andoxunarmagn í líkamanum [28]. Eins og sýnt er á mynd 3 var virkni CAT, SOD, GSH-Px og MDA innihalds í M hópnum marktækt minni en í N hópnum (p.<0.05). administering="" cps="" effectively="" inhibited="" the="" decrease="" of="" cat,="" sod,="" gsh-pxactivities,and="" the="" mda="" content="" in="" the="" skin="" of="" mice,="" compared="" to="" those="" in="" the="" mice="" skin="" of="" the="" m="" group,="" and="" was="" positively="" correlated="" with="" the="" dose="" of="" cps;="" there="" were="" significant="" differences="" among="" the="" different="" dose="" groups=""><0.05). when="" ros,="" accumulated="" by="" skin="" oxidative="" stress,="" exceed="" the="" antioxidant="" defense="" ability="" of="" the="" body,="" they="" destroy="" the="" ecm,="" which="" is="" the="" key="" cause="" of="" skin="" aging.="" ros="" can="" cause="" the="" oxidation="" of="" lipids="" and="" proteins="" in="" the="" skin,="" resulting="" in="" fibroblast="" degeneration="" and="" changes="" in="" the="" skin.="" ros="" activate="" the="" mapk="" signaling="" pathway="" and="" the="" ap-1="" protein="" to="" upregulate="" the="" expression="" of="" mmps="" and="" promote="" the="" degradation="" of="" matrixcollagen="" [21].="" although="" the="" antioxidant="" enzymes="" and="" antioxidants="" in="" the="" body="" can="" remove="" ros="" to="" protect="" the="" skin="" from="" damage,="" when="" the="" content="" of="" rosexceeds="" the="" defense="" (antioxidant)="" ability="" of="" the="" body="" or="" the="" body's="" defense="" ability="" declines,="" it="" causes="" oxidative="" stress="" and="" skin="">

Að auki stuðlar bólgusvörun frumu af völdum ROS einnig til öldrunar húðar. Eftir UV og D-galaktósa meðferð (Mgroup) jókst innihald IL-lo í húð músanna verulega samanborið við það í N hópnum (Mynd 3D ), sem gefur til kynna að húðin hafi sýnt verulega bólgusvörun (bls<0.05). the="" cps="" significantly="" reduced="" the="" content="" of="" il-1α="" in="" the="" skin="" in="" a="" dose-dependent="" manner,="" compared="" to="" that="" in="" the="" skin="" of="" mice="" in="" the="" m="" group.="" there="" was="" a="" significant="" difference="" between="" hcps="" and="" lcps=""><0.05),indicating that="" cps="" alleviated="" skin="" inflammation.="" the'o,="" produced="" by="" ultraviolet="" irradiation="" stimulated="" the="" expression="" of="" mmp-1="" in="" dermal="" fibroblasts="" through="" the="" secretion="" of="" il-1α="" and="" il-6,="" thereby="" disrupting="" the="" ecm="" [33].="" therefore,="" this="" study="" suggested="" that="" cps="" significantly="" increased="" the="" activity="" of="" skin="" antioxidant="" enzymes="" and="" inhibited="" inflammatory="" responses,="" which="" might="" be="" important="" in="" delaying="" skin="" aging="" in="">

3.4. Verkunarháttur CPs í mataræði til að draga úr öldrun húðar

3.4.1. Greining og staðfesting á RNA-Seq gögnum

Analysis techniques, such as PCA, HCA, gene GOenrichment, and KEGG pathway enrichment were used to analyze the transcriptome data. Based on the PCA analysis (Figure 4A) and hierarchical clustering analysis (heat map)of 4303 differential genes with average channel strength greater than 100, the relative expression levels of total DEGs between the two treatment groups are shown to provide an overview of the changes in gene expression(Figure 4B). The M group and the HCP group were significantly separated, and the expression patterns of most DEGs in the M and HCP groups were opposite, indicating that there were significant differences between the mouse skin after HCP treatment and the M group (Figure 4A,B). Pairwise comparisons showed that after feeding HCPs,4303 genes were significantly expressed in the mice skin, including 1790 upregulated genes and 2513 downregulated genes(Foldchange>2,p<0.05)(figure 4c).among="" the="" sixgenes="" associated="" with="" skin="" aging="" quantified="" by="" qrt-pcr,="" five="" genes="" (including="" fos,="" jun,="" cxcll,and="" egr1)were="" downregulated,="" and="" one="" gene="" was="" upregulated="" (figure="" 4d),="" which="" was="" consistent="" with="" the="" overall="" trend="" of="" transcriptomic="" data.="" the="" rna="" expression="" levels="" of="" fos,="" jun,="" and="" cxcll="" were="" significantly="" upregulated="" in="" damaged="" skin="" compared="" to="" that="" in="" intact="" skin="" [34],="" and="" inhibition="" of="" egr1="" expression="" alleviated="" skin="" inflammation="" [35].="" these="" results="" reflected="" the="" reliability="" of="" transcriptome="" sequencing="" data,="" and="" oral="" cps="" effectively="" alleviated="" skin="">

GOenrichment greining og KEGG gagnagrunnsauðgunargreining veittu stuðning við frekari rannsókn á líffræðilegri virkni DEGs. GO greining sýndi að DEGs auðguðust verulega í líffræðilegum ferlum eins og DNA eftirmyndun, stjórnun blóðmyndunar, stjórnun á hýdrólasavirkni og frumumyndun; í frumuþáttum, sem innihéldu lytic vacuole og lysosome, voru kollagen-innihaldandi og önnur skyld gen verulega auðguð; með tilliti til sameindavirkni, viðtaka-bindilvirkni, frumuvirkni og önnur skyld gen auðguðust verulega (Mynd 5). KEGG auðgunargreiningin á fyrstu 20 merkjaleiðunum sem breyttust verulega með DEG er sýnd á mynd 5. Cytókín-viðtaka víxlverkun, leysisóm, taugavirkur bindill-viðtaka víxlverkun, frumuhringur, rauðir úlfar og TGF-ferill (p.<05) were="" closely="" related="" to="" aging,="" especially="" cytokine-receptor="" interactions,="" lysosomes,="" and="" tgf-βsignaling.="" an="" important="" feature="" of="" cellular="" senescence="" is="" the="" accumulation="" of="" damaged="" or-ganelles="" and="" protein="" aggregates.="" lysosomes="" play="" an="" important="" role="" in="" degrading="" damaged="" organelles="" and="" protein="" aggregates="" in="" senescent="" cells="" [36].="" cytokine-receptor="" interaction="" is="" the="" main="" pathway="" of="" enrichment="" in="" the="" skin="" after="" being="" affected="" by="" various="" factors="" such="" as="" inflammation="" [37],="" sulfur="" mustard="" exposure="" [38],="" and="" terahertz="" pulse="" [39].="" cytokines,="" as="" small="" molecular="" proteins="" synthesized="" and="" secreted="" by="" various="" tissue="" cells,="" maintain="" skin="" homeostasis="" by="" controlling="" the="" balance="" between="" keratinocyte="" proliferation,="" diferentiation,="" and="" apoptosis="" through="" complex="" interactions="" with="" growth="" factors[40].="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" is="" also="" important="" for="" regulating="" skin="" aging[14].="" gene="" functional="" enrichment="" anal-ysis="" showed="" that="" tgf-β="" was="" highly="" expressed="" during="" cytokine-receptor="" interaction="" and="" in="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway.="" tgf-β="" is="" a="" major="" pro-fibrotic="" cytokine="" that="" regulates="" cell="" differentiation="" and="" proliferation="" while="" inducing="" extracellular="" matrix="" protein="" synthesis="" [41].="" therefore,="" we="" verified="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" and="" some="">

3.4.2. Sannprófun á verkunarmáta CPs til að draga úr öldrun húðar

Til að sannreyna hlutverk TGF-boðaleiðar og frumuefnaviðtaka víxlverkunar við að draga úr öldrun húðar með CPs til inntöku, var WB greining gerð til að sannreyna TGF- og umritunarþáttinn Smad2/3 í TGF-boðaleiðinni, sem og lykillinn. umritunarstuðull AP-1 (c-Fos og c-Jun) sem stjórnar cýtókínum. Innihald MMP-1, MMP-3, Type I pro-kollagens og IL-1 var ákvarðað með ELISA. Niðurstöður WB greiningarinnar sýndu að tjáning TGF-, Smad2 og Smad3 í hópi M var marktækt minni en í hópi N(p)<0.05). the="" expression="" levels="" of="" tgf-β="" and="" smad3="" were="" significantly="" higher="" in="" mice="" after="" the="" oral="" administration="" of="" cps="" compared="" to="" their="" levels="" in="" group="" m="" mice;="" additionally,="" smad2="" also="" increased=""><0.05), except="" for="" in="" the="" lcps="" in="" a="" dose-dependent="" manner(figure="" 6).="" on="" the="" contrary,="" the="" expression="" of="" c-fos="" and="" c-jun="" in="" the="" mgroup="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" in="" the="" n="" group.="" the="" expression="" of="" c-fos="" and="" c-jun="" in="" the="" cp="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" m="" group,="" except="" for="" the="" expression="" of="" c-jun="" in="" the="" lcp="" group=""><0.05), and="" the="" change="" was="" dose-dependent.="" these="" results="" indicated="" that="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" was="" activated="" and="" ap-1="" was="" inhibited="" after="" feeding="">

AP-1 próteinið er tvískiptur flókinn af próteinum úr Jun og Fos fjölskyldunni og er mikilvægur stjórnandi á húðbólgu og tjáningu frumuefna. Almennt sýnir flókið sem samanstendur af c-Jun og c-Fos hæstu umritunarvirkni í húðinni [41,A42]. ROS framleitt í öldruðum húðfrumum virkjar fyrst AP-1 prótein og stjórnar síðan cýtókínum (eins og IL-1 ), MMPs og TGF-boðaleiðinni í gegnum umritun og þýðingu, og auðveldar þannig öldrun húðar[43 ,44]. TGF-/Smad merkjahvarfið er klassísk kollagenmyndunarferill og Smad umritunarþátturinn er kjarninn í þessari merkjaflutningsleið. TGF- kveikir á fosfórýleringu og virkjun Smad2 og Smad3 niðurstreymis með því að bindast viðtakanum og eykur þar með myndun COLI [14].

Að auki sýndu ELISA niðurstöðurnar að innihald MP-1,MMP-3 og IL-1a í húð M hópsins var marktækt hærra en í N hópnum og innihald Typel pro-kollagens var marktækt lægra (bls<0.05). however,="" the="" contents="" of="" mmp-1,mmp-3,and="" il-1α(figure="" 3d)in="" the="" skin="" after="" oral="" administration="" of="" cps="" were="" significantly="" lower="" than="" those="" in="" the="" m="" group=""><0.05); type="" i="" pro-collagen="" increased="" significantly,="" and="" all="" the="" changes="" were="" dose-dependent="" with="" cps="" (figure="" 7).="" mps="" are="" involved="" in="" the="" decomposition="" of="" skin="" collagen,="" il-1o="" shows="" the="" level="" of="" inflammation="" of="" the="" skin,="" and="" type="" i="" pro-collagen="" reflects="" the="" synthesis="" of="" skin="" collagen.="" accumulating="" evidence="" suggests="" that="" the="" role="" of="" the="" jun/ap-1="" protein="" pathway="" has="" also="" been="" proposed="" to="" regulate="" skin="" inflammation="" [40].="" the="" elisa="" results="" showed="" that="" the="" combined="" treatment="" of="" uv="" and="" d-galactose="" caused="" skin="" collagen="" degradation,="" decreased="" collagen="" synthesis,="" and="" caused="" skin="" inflammation,="" leading="" to="" skin="" aging.="" however,="" these="" changes="" were="" reversed="" after="" the="" oral="" administration="" of="">

Til viðbótar við ofangreindar leiðir, í þessari rannsókn, voru uppstýrðu genin eftir CP-meðferð marktækt auðguð inn í lýsósómferilinn, sem gefur til kynna að CP-meðferð hafi virkjað leysisóm í húð (Mynd 5). Fyrri rannsóknir benda til þess að virkjuð lýsósóm hreinsar sameindir og hækki virkjun öldruðu taugastofnfrumna við öldrun [45]. Til viðbótar við þetta getur aukning virkni lýsósóma dregið úr styrk innanfrumu ROS til að koma í veg fyrir dvala frumna. Að sama skapi getur hvers kyns lækkun á lýsósómavirkni aukið innanfrumu ROS styrk sem á endanum stuðlar að dvala frumna [46] Þó að við höfum ekki kerfisbundið sannreynt það í þessari grein, gefa þessar niðurstöður og fyrri skýrslur í skyn að virkjun lýsósómavirkni gæti verið aðalleiðin fyrir CPs til að draga úr öldrun húðarinnar og við munum halda áfram að stefna að því að sannreyna það.

Þess vegna sýndi þessi rannsókn að mataræði CP gæti dregið úr öldrun húðar af völdum UV og D-galaktósa á skammtaháðan hátt. CPs draga úr öldrun húðar með því að lækka oxunarstig húðarinnar, hamla tjáningu á key umritunarþáttum AP-1(c-Jun og c-Fos), virkja TGF-/Smad boðleiðina til að stuðla að kollagenmyndun, hindra tjáningu á MMP-1 og MMP-3 (sem hindra niðurbrot kollagen) og hindra húðbólgu til að draga úr öldrun húðar (Mynd 8). Þar að auki benda niðurstöður okkar í núverandi rannsókn einnig til þess að virkjaða lýsósómið geti verið mikilvæg leið fyrir CPs til að stjórna öldrun húðar, sem á skilið sérstaka athygli.

4. Niðurstöður

Í stuttu máli, þessi rannsókn staðfesti að fæðubótarefni með kjúklingabeini kollagen peptíðum gæti dregið verulega úr öldrun húðar af völdum útfjólublárrar geislunar og D-galaktósa í gegnum margar leiðir, sem fela í sér að stuðla að nýmyndun pro-kollagens, hindra niðurbrot kollagen, bæta andoxunarefni húðarinnar, og hindra bólgu; léttingin var skammtaháð með CPs. Ítarleg rannsókn sýndi að CPs draga fyrst úr magni húðoxunar, hamla tjáningu lykilumritunarþáttarins AP-1(c-Jun og c-Fos), og virkja síðan TGF-/Smad boðferilinn til að stuðla að kollagenmyndun, hamla tjáningu MMP-1 og MMP-3 til að hindra niðurbrot kollagen og hindra húðbólgu til að draga úr öldrun húðar hjá músum. Að auki getur virkjun lysósóma einnig verið aðalleiðin fyrir CPs til að draga úr öldrun húðar, sem er verðugt eftirfylgnirannsókna og sannprófunar. Þessar niðurstöður veita fræðilegan grunn fyrir innleiðingu kollagenpeptíða til að draga úr öldrun húðar og víkka svigrúmið fyrir alhliða nýtingu aukaafurða úr dýrum í hagnýt matvæli.

Þessi grein er dregin út úr Nutrients 2022, 14, 1622. https://doi.org/10.3390/nu14081622 https://www.mdpi.com/journal/nutrients