Aðferðir við gæðaeftirlit með Cistanche deserticola

fyrir frekari upplýsingar:ali.ma@wecistanche.com

Shi Ziyi, Wu Yun, Zhu Yuemei og o.fl.

Hin hefðbundna kínverska læknisfræðiCistancheer safaríkur stofninn afCistanche deserticolaYC Ma eða Cisanche tubulosa (Schenk) Wight með þurrum hreisturblöðum. Það hefur það hlutverk að styrkja nýrna-yang, næra kjarna og blóð, raka þarma og hægðalyf, osfrv. Það er aðallega notað við skort á nýrna-yang, skort á kjarna og blóði, getuleysi og ófrjósemi, eymsli og máttleysi í mitti og hné, máttleysi. vöðva og beina, þurrkur í þörmum og hægðatregða. Nútíma lyfjafræðilegar rannsóknir sýna þaðCistanchehefur margar aðgerðir eins og að bæta kynlíf, standast Alzheimerssjúkdóm og Parkinsonsveiki, bæta náms- og minnisgetu, gegn öldrun, gegn þreytu, vernda lifur og hægðalyf [4]. Mikill fjöldi rannsókna hefur staðfest að fenýletanóíð glýkósíða íCistanche deserticolahafa augljós áhrif á að bæta náms- og minnisgetu, standast Alzheimerssjúkdóm og Parkinsonsveiki (4, fásykrur og pólýól hafa áhrif hægðalyfs og hægðalyfs 64 ). "Lyfjaskrá Alþýðulýðveldisins Kína" mælir aðeins innihald fenýletanóíð glýkósíða echinacoside og verbascoside íCistanchedeserticola, en mælir ekki virku þætti hægðalosandi áhrifa þess, þannig að það er erfitt að ná yfirgripsmikilli greiningu á lyfjaefnum íCistanchedeserticola. Gæðaeftirlit. Til þess að yfirstíga þessa takmörkun og koma á fót gæðamatskerfi með mörgum vísitölum sem tengist helstu hlutverkum og vísbendingum umCistanchedeserticola, þessi rannsókn notaði HPLCELSDP4 til að koma á megindlegri greiningaraðferð fyrir betaín, mannitól, frúktósa, glúkósa og súkrósa í lyfjaefnumCistanchedeserticola. Auk þess eru 58 lotur afCistanchedeserticolalyfjaefni af mismunandi uppruna og 10 lotur af lyfjaefnum afCistancheá Hotan svæðinu í Xinjiang voru prófuð, sem getur veitt tilvísun fyrir alhliða gæðaeftirlit og mat á lyfjaefnumCistanchedeserticolaí framtíðinni.

Smelltu til að cistanche extract gagnast vörur

1 Tæki og hvarfefni

1.1 Hljóðfæri

Sartorius rafeindavog BT25 S, BS 124 S (Beijing Sartorius Balance Co., Ltd.); Agilent 1100 hágæða vökvaskiljun; ALLTECH 2000ES uppgufunarljósdreifingarskynjari (EISD); Ultrasonic Cleaner KQ 250 (Kunshan Ultrasonic Instrument Ltd). 1.2 Hvarfefni

Samanburðarefni: betaín (lota: {{0}}, hreinleiki: 99,2 prósent), mannitól (lota: 10053-201304, hreinleiki: 99,0 prósent), D-frúktósi (lota: 111504-201703 , hreinleiki: 99,8 prósent ), D - Vatnsfrír glúkósa (lotunúmer: 110833-201506, hreinleiki: 99,9 prósent ), súkrósa (lotunúmer: 111507-201303, hreinleiki: 99,8 prósent ), allt keypt frá China National Institute fyrir matvæla- og lyfjaeftirlit.

Lyfjaefni fráCistanchedeserticolavar safnað í Innri Mongólíu, Xinjiang, Gansu og fleiri stöðum, alls 58 lotur. Prófessor Tu Pengfei við lyfjafræði háskólans í Peking greindi þær sem þurrkaðir holdugir stilkar afCistanchedeserticolaYCMa af Lidangaceae plöntunni, eins og sýnt er í töflu 3.

Lyfjaefni fráCistanchedeserticolavar safnað á Hotan svæðinu, Xinjiang, í alls 10 lotum. Prófessor Tu Pengfei frá lyfjafræðideild háskólans í Peking greindi þau sem þurrkaðir holdugir stilkar með hreisturblöðum af Cistanche tubulosa (Schenk) Wight af Liedangaceae plöntunni, eins og sýnt er í töflu 4.

1.3 Hvarfefni

Asetónítríl er hreint í litskiljun (Tianjin Boshiqi Technology Development Co., Ltd.), metanól er litskiljun (Tianjin Saifu Century Technology Development Co., Ltd.) og vatn er ofurhreint vatn.

2 Aðferðir og niðurstöður

2.1 Litskiljunarskilyrði

Litskiljunarsúlan var ShodexAshaipak NH2P-50 4E fjölliða hlaupsúla (250 mm × 4,6 mm, 5 μm); hreyfanlegur fasinn var asetónítríl-vatn (77∶23); flæðihraði var 0,7 ml·mín-1; súluhitinn var 25 gráður; Ljósdreifingarskynjari (ELSD): Hitastig rekrörsins var 100 gráður og flæðihraði burðargassins var 3 L·mín-1.

2.2 Undirbúningur viðmiðunarlausnar

Taktu hæfilegt magn af betaíni, mannitóli, frúktósa, glúkósa og súkrósa viðmiðunarefni, vegið það nákvæmlega, bætið við vatni til að búa til blandaða lausn sem inniheldur 0.25 mg af betaíni, mannitóli, frúktósa, glúkósa og súkrósa pr. 1 ml, hristið vel og náð í.

2.3 Undirbúningur próflausnarinnar

Taktu um 1.0 g afCistanchelyfjaduft (farið í gegnum sigti nr. 4), vigtið það nákvæmlega, setjið það í 100 ml brúna mæliflösku, bætið 50 ml af 50% metanóli nákvæmlega út í, stingið því vel í, hristið það upp, vegið það, leggið það í bleyti í 30 mínútur og síðan með ómhljóði (afl 250 W, tíðni 35 kHz) í 40 mínútur, takið það út, látið það kólna, vegið það aftur, bætið við 50 prósent metanóli til að minnka massann, hristið vel og látið það stendur. Sogðu nákvæmlega upp 5 ml af floti, settu það í 25 ml mæliflösku, þynntu að markinu með 50% metanóli, hristu vel og síaðu í gegnum 0,2 μm örgjúpa himnu.

2.4 Ákvörðunaraðferð

Dragðu nákvæmlega 5 og 10 μL af viðmiðunarlausninni og 5 μL af prófunarlausninni í sömu röð, sprautaðu þeim í vökvaskiljunina, skráðu toppflatarmálið og reiknaðu út samkvæmt lógaritmísku jöfnunni ytri staðlaða tveggja punkta aðferðarinnar.

2.5 Kerfishæfispróf

Dragið nákvæmlega 5 μ af viðmiðunarlausninni og prófunarlausninni, í samræmi við skilmálaskilyrðin undir lið 2.1, í sömu röð, og sprautið þeim inn í hágæða vökvaskiljunina, mælið og skráið litskiljuna, eins og sýnt er á mynd 1. Skiljunartopparnir prófunarsýnisins sýndi sama varðveislutíma og viðmiðunarefnisskiljunartoppar, upplausnin var góð og litskiljunarskilyrðin voru framkvæmanleg.

Athugið: A. Viðmiðunarefni; B.Cistanchesýnishorn nr 49; 1. betaime ; 2. fnuckese ; 3. mannibol ; 4. glúkósa ; 5. sucreve

Mynd 1 HPLC snið af viðmiðunarefninu og sýninu af Cistanche nr. 49

2.6 Athugun á línulegum tengslum

Taktu viðeigandi magn af betaíni, mannitóli, frúktósa, glúkósa og súkrósa sem viðmiðunarefni, vigtaðu þau nákvæmlega og bættu við vatni til að hver 1 ml inniheldur betaín 0.496 0 mg, mannitól {{3} }.994 0 mg, ávextir 1.0126 mg, glúkósa 1.0882 mg og súkrósa 0.9922 mg. 0.0992, 0.2480, 0.4960, 0.9920, 1.9840, 2.9760 μ, mannitól 0.1988, 0.4970 , 0,9940, 1,9880, 3,9760, 5,9640 μ, frúktósi 0,5063, 1.012 6. 2.025 2. 4.050 4. 5.063 0. Skiljunaraðstæður voru sprautaðar og greindar og toppsvæðið skráð; síðan var logaritmagildið X (ug) hvers inndælingarmagns viðmiðunarefnis notað sem abscissa og logaritmagildið Y toppsvæðisins var ordinatan og staðalferillinn teiknaður. Niðurstöðurnar eru sýndar í töflu 1.

Tafla 1 Niðurstöður línulegs sambandsrannsóknar

2.7 Nákvæmni próf

Dragðu prófunarlausnina nákvæmlega (sýni nr. 49), við ofangreindar litskiljunarskilyrði, sprautaðu stöðugt 6 sinnum, mældu toppflatarmál hvers litskiljunartopps og reiknaðu út RSD gildi hans. Niðurstöður RSD á toppsvæðum betaíns, mannitóls, frúktósa, glúkósa og súkrósa voru 0,84 prósent, 2,56 prósent, 1,27 prósent, 2,62 prósent og 1,52 prósent, í sömu röð, sem gefur til kynna að nákvæmni tækisins sem notað er í þetta nám var gott. 2.8 Endurtekningarpróf

Taktu 6 sýnishorn afCistanchedeserticola(sýni nr. 49), undirbúið prófunarlausnina samkvæmt aðferðinni í lið 2.3, mælið toppflatarmál hvers litskiljunartopps og reiknað út samsvarandi innihald. Niðurstöður Meðalinnihald betaíns, mannitóls, frúktósa, glúkósa og súkrósa (n=6) var 7,93 prósent , 7,27 prósent , 8,74 prósent , 2,75 prósent og 4,81 prósent og RSD-gildin voru 2,83 prósent , {=6 prósent , 1,94 prósent . 18}},97 prósent og 2,60, í sömu röð. prósent , 1,40 prósent , sem gefur til kynna að aðferðin hafi góða endurtekningarhæfni. 2.9 Stöðugleikapróf

Taktu prófunarlausnina (sýni nr. 49), sprautaðu henni við 0, 4, 8, 12, 16 og 24 klst. eftir undirbúning fyrir mælingu og reiknaðu út RSD-gildi hvers litskiljunartopps. Niðurstöður RSD fyrir betaín, mannitól, frúktósa, glúkósa og súkrósa voru 0,61 prósent, 1,92 prósent, 1,34 prósent, 2,83 prósent og 0,69 prósent, í sömu röð, sem gefur til kynna að próflausnin hafi verið góð stöðugleika innan 24 klst. 2.10 Batapróf

Taktu 6 sýnishorn afCistanchedeserticolameð þekktu innihaldi (sýnishorn nr. 49), vegið 0.25g nákvæmlega, setjið þau í 50ml brúna mæliflösku og dragið nákvæmlega 25ml af blönduðu viðmiðunarlausninni í styrkleikanum 1: 1 (sem inniheldur {{10}}.7900 mg af betaíni). ml-, frúktósa 0,7236 mg"mL-1, mannitóli 0,8812 mg·mL-1, glúkósa 0,2708 mg·mL-1, súkrósi 0,4883 mg'mL-') var bætt við sýnið, og prófunarlausnin var útbúin samkvæmt aðferðinni undir 2.3. Grein eftir ofangreindum litskiljunarskilyrðum, reiknað út endurheimt hennar, niðurstöðurnar eru sýndar í töflu 2, sem gefur til kynna að aðferðin hafi góða nákvæmni.

Tafla 2: Niðurstöður mælinga á endurheimtarhraða sýna af 5 íhlutum sem á að prófa (n=6)

3 Umræður

3.1 Val á vísitöluþáttum

Heildar fásykrur afCistancheeru áhrifaríkir hlutarCistanchefyrir hægðalyf. Höfundur greindi efnasamsetningu þessa hluta með LC-MS og viðmiðunarefninu og komst að þeirri niðurstöðu að þessi hluti væri aðallega samsettur úr betaíni, mannitóli, frúktósa, glúkósa og súkrósa. Þess vegna voru þessir 5 þættir valdir sem vísitöluþættirCistanchedeserticola, og innihaldsákvörðunaraðferðinni var komið á.

3.2 Val á litskiljunarsúlum

Þættirnir fimm sem á að prófa, betaín, mannitól, frúktósi, glúkósa og súkrósa, eru tiltölulega skautaðir og ekki er hægt að halda þeim í öfugfasa Cn súlunni. Yfirleitt birtast toppar innan 1-2 mínútna og ekki er hægt að aðskilja íhlutina. Amínósúlur Waters Bonoapar NH, (300 mm × 4,6 mm, 10 μm) og Phenomenex Bondclone 10 NH, (300 mm × 3,9 mm, 10 μm) fyrir sykur og pólýól aðskilnað og amínósúlur sem eru byggðar á fjölliðum Prevail Carbohydrate ES (250 mm) ×4,6 mm, 5 μm), ShodexAshaipak NH2P-50 4E (250 mm×4,6 mm, 5 μm). Niðurstöðurnar sýna að fjölliða fylkis amínósúlan getur í raun aðskilið þessa fimm þætti.

3.3 Skynjaraval

Þættirnir fimm sem á að prófa hafa ekkert augljóst UV frásog og ekki er hægt að ákvarða innihald UV skynjarans beint. Þess vegna kom þessi grein á megindlega greiningaraðferð fyrir sykuralkóhólhlutiCistanchedeserticolameð því að nota HPLC-EISD. Niðurstöðurnar sýna að aðferðin hefur mikið næmni, góða endurtekningarnákvæmni og mikla nákvæmni og er hægt að nota til gæðaeftirlits meðCistanchedeserticolaog önnur lyfjaefni sem innihalda betaín og sykuralkóhól.

3.4 Rannsókn á undirbúningsaðferð próflausnarinnar

Mismunandi útdráttarleysir, þar á meðal vatn, 30 prósent metanól, 50 prósent metanól, 70 prósent metanól, metanól, o.s.frv., voru bornir saman í sömu röð. Niðurstöðurnar sýndu að fyrir utan aðeins lægri útdráttarhraða 70 prósenta metanóls og metanólleysis var enginn marktækur munur á öðrum leysiefnum og því var beint valið. 50 prósent metanól var notað sem leysir undir liðnum "Ákvörðun innihalds" afCistancheí Lyfjaskrá Alþýðulýðveldisins Kína, og það var útbúið í samræmi við undirbúningsaðferð viðkomandi prófunarlausnar og síðan þynnt 5 sinnum til að ákvarða sykuralkóhólhluti.

3.5 Greining og greining sýna með mismunandi basa

Í þessari rannsókn er innihald 5 íhluta í 58 lotum afCistanchedeserticolaog 10 lotur afCistanchedeserticolalyfjaefni voru ákvörðuð. Massahluti betaíns, mannitóls, frúktósa, glúkósa og súkrósa í 58 lotum afCistanchedeserticolaúrtak voru 2,73 prósent -17,65 prósent, 2,46 prósent -16,34 prósent, 2,52 prósent {{10}},74 prósent, 0,97 prósent -14,06 prósent , 3,15 prósent -27,16 prósent ; Mannitól, frúktósi og glúkósa voru 1,00 prósent -13,04 prósent, 2,98 prósent -8,85 prósent, 1,09 prósent -5,33 prósent í 10 lotunum afCistanchesýni, hvort um sig, og betaín og súkrósa fundust ekki. Innihald lyfjaefna er mjög mismunandi eftir framleiðslulotum og það er engin regla sem þarf að fylgja sem bendir til þess að nauðsynlegt sé að setja staðalinn fyrir innihaldsákvörðun til að stjórna gæðum lyfjaefna. Að auki getur þessi aðferð í raun greint tvenns konarCistanchegrunnplöntur, þ.e.Cistancheinniheldur ekki betaín og súkrósa, en innihald þessara tveggja þátta er hærra íCistanche deserticola. Þetta gefur einnig grunn til að greina muninn á áferð og búsvæði tveggja lyfjaefnaCistanche deserticola. Samanborið við lyfið úrCistanche deserticola, áferðin er mýkri og hún er á staðnum þekkt sem "Soft Dayun", á meðanCistancheer kallað "Chai Dayun" vegna þess að það inniheldur súkrósa (3,15 prósent ~27,16 prósent). ).Cistanche deserticolaer aðallega dreift í Alxa í Innri Mongólíu, á meðanCistancheer aðallega dreift á Hotan svæðinu í Xinjiang, þar sem hitastigið er hærra en á Alxa svæðinu, og dreypiáveita er oft notuð á svæðinu, en þegar hitastigið lækkar,Cistancheverða fyrir alvarlegu tjóni. Frostskemmdir hafa annars vegar ákveðið samband við hátt vatnsinnihald og hins vegar eitthvað með innihaldsefnin í þeim að gera. Betaine 243 er mikilvægt osmósuaðlögunarefni, sem gegnir mikilvægu hlutverki við að auka streituþol plantna, svo sem viðnám gegn seltu, þurrka, lágum hita og sterku ljósi. Það er einmitt vegna mikils innihalds betaíns sem er íCistanche deserticolaað það hafi betra viðnám gegn salt-basa, þurrka og frostskemmdum enCistanche, og hefur tiltölulega mikla útbreiðslu.

3.6 Greining áCistanchedeserticolasýni af mismunandi uppruna

Meðal 58 lota eyðimerkurcistanchelyfjasýni, 45 lotur voru framleiddar frá Alxa League, Inner Mongolia, 3 lotur voru frá Wangyedi (Dengkou County), Inner Mongolia, og 1 lota var óþekkt. Allar 49 loturnar af lyfjaefnum höfðu mismunandi innihald af 5 íhlutum. Hins vegar er enginn marktækur munur. Ástæða greiningarinnar getur verið sú að lyfin eru öll framleidd á sama eyðimerkursvæðinu, vistfræði og landfræðilegt umhverfi eru svipað og vörugæði eru tiltölulega jöfn og stöðug. Það eru 3 lotur framleiddar í Minqin County, Gansu, og 6 lotur frá Xinjiang. Samkvæmt greiningunni á mynd 2, samanborið við lyfjaefnin sem framleidd eru í Innri Mongólíu, endurspeglast aðalmunurinn í innihaldi frúktósa og súkrósa. Súkrósainnihald lyfjaefnanna var hlutfallslega hæst, en miðað við lítið magn sýna frá þessum tveimur uppruna þarf að sannreyna þessa niðurstöðu með því að safna fleiri sýnum. 3.7 Samantekt

Í þessari rannsókn var HPLC Wang ISD komið á fót til að ákvarða samtímis 5 virk innihaldsefni hægðalyfja, sem veitti þægilegri, skilvirkari og nákvæmari aðferð til að gæðaeftirlit meðCistanche deserticola, og skapaði grundvöll til að bæta gæðastaðal og frekari þróun áCistanchedeserticola. þýðingarmikil tilvísun.

Heimildir

【1】 Lyfjaskrárnefnd ríkisins. Lyfjaskrá Alþýðulýðveldisins Kína: A 【M】. Peking: China Pharmaceutical Science and Technology Press, 2015;135.

【2】 Song Zhihong, Lei Li, Tu Pengfei. Rannsóknarframfarir á lyfjafræðilegri virkniCistancheSýning. Kínversk jurtalækning, 2003, 34(9); 113415.

【3】 Xue Haiyan. Jiao Danyuan, Yao Jun. Rannsóknarstaða lyfjafræðilegra áhrifa heildarglúkósíða í Cilantro [J]. Chinese Journal of Clinical Pharmacology, 2018, 34(4): 486-488.

【4】 An Chunna, Zhang Hongning, Pu Xiaoping. Rannsóknarframfarir taugalyfjafræði afCistanche deserticolaSýning [J]. Chinese Journal of Pharmacy, 2011, 46(12): 887-890.

【5】 Gao Yuhong, Ke Zunji. Rannsóknarframfarir á lyfjafræðilegum áhrifumCistanche deserticolavið meðferð á Alzheimerssjúkdómi []. Shanghai Journal of Traditional Chinese Medicine, 2018, 52(1): 109-112.

【6】 Zhang Baishun, Zhao Xuewen, Chen Shuanghou, o.fl. Hægðalosandi áhrif einangraðra hluta afCistanche deserticolaTilraunarannsóknir □. China Journal of Traditional Chinese Medicine, 2003, 10(1I1): 31-32.

【7】 Zhang Baishun, Chen Shuanghou, Zhao Xuewen, o.fl.Cistanche deserticolaextract galactitol Skammta-svörunarrannsókn á verkun hægða [J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine, 2003, 10 (12): 28-29.

【8】 Gao Yunjia, Jiang Yong, Dai Fang, o.fl. Rannsóknir á lyfjum íCistanche deserticolafyrir hægðalyf Rannsóknir [J]. Nútíma kínversk læknisfræði í Kína, 2015, 17(4): 307-311.

【9】 Bao Zhong, Cai Hong, Jiang Yong, o.fl. Þrjár starfsemi afCistanche deserticolaundir mismunandi áhrifaþáttum Magngreining á íhlutum J. Chinese Herbal Medicine, 2013, 44 (22): 32233230.

【10】 Bao Zhong, Cai Hong, Jiang Yong, o.fl. Ákvörðun umCistanche deserticolaeftir HPLCEISD Content of Galactitol.Journal of Pharmaceutical Analysis, 2007, 27(7): 1004-1006.

【11】 Zhao Kuijun, Liang Lijuan, Bi Dan, o.fl. HPLCELSD ákvörðun áCistancheog rör Innihald galaktitóls íCistanche[J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine, 2012, 19(8): 52-54.

【12】 Wang Guiping, Xue Xiaomin, Lu Chao, o.fl. Áhrif betaíns á að bæta streituþol plantna og verkunarmáta þess.Jiangxi Agricultural Journal, 2014, 26(8): 2226.

【13】 Wang Qingjie, Wang Li. Endurskoðun á kuldaþolsgenarannsóknum á plöntum. Hagkerfi og tækni á landsbyggðinni, 2018, 29(8): 23-25.