Að ákveða hvað á að borða til að viðhalda unglegri og heilbrigðri húð eru erfið vandamál

Vinsamlegast hafðu samband fyrir frekari upplýsingar

Ágrip:Áhrif mataræðis á öldrun húðarinnar er orðið áhugavert rannsóknarefni. Fyrri rannsóknir hafa aðallega beinst að jákvæðum áhrifum kollagenpeptíða úr sjávarlífverum á öldrun húðar þegar þau eru gefin til inntöku, en sjaldan hefur verið greint frá jákvæðum áhrifum kollagenpeptíða úr alifuglum á öldrun húðar. Í þessari rannsókn voru kollagenpeptíð framleidd úr kjúklingabeini með ensímvatnsrofi, og áhrif og verkunarmáti kollagenpeptíða sem gefin eru til inntöku á að draga úr öldrun húðar af völdum UV ásamt D-galaktósa voru könnuð. Niðurstöðurnar sýndu að kjúklingabeinakollagenið hafði dæmigerð einkenni kollagens og kjúklingabeinakollagenpeptíðin (CP) voru aðallega lítil sameindapeptíð með mólþunga sem nemur<3000 da.="">cistanche líflengingIn vivo tilraunir sýndu að CPs höfðu veruleg léttandi áhrif á öldrunarhúð, tilgreind af breytingum á samsetningu og uppbyggingu öldrunar húðarinnar, bættu andoxunarmagni húðarinnar og hömlun á bólgu; léttandi áhrifin voru jákvæð fylgni við skammtinn af CPs. Frekari rannsókn sýndi að CPs draga fyrst úr magni húðoxunar, hamla tjáningu lykilumritunarþáttarins AP-1 (c-Jun og c-Fos), virkja síðan TGF-/Smad boðferilinn til að stuðla að kollagenmyndun , hindra tjáningu MMP-1/3 til að hindra niðurbrot kollagen og hindra húðbólgu til að draga úr öldrun húðar hjá músum. Ennfremur kom í ljós að lýsósóm sem virkjast eftir inntöku CPs geta verið mikilvæg leið fyrir CPs við öldrun húðarinnar og er verðugt frekari rannsókna. Þessar niðurstöður bentu til þess að hægt væri að nota CP sem virkan næringarþátt gegn öldrun.

Vinsamlegast smelltu hér til að vita meira

Leitarorð:kollagen peptíð; gegn öldrun; húðafrit; kollagen nýmyndun; lýsósóm

1. Inngangur

Heilsutímabilið, að fylgja heilbrigðu mataræði nákvæmlega, ákvarða hlutverk næringar í öldrun húðarinnar og ákveða hvað á að borða til að viðhalda unglegri og heilbrigðri húð eru erfið vandamál. Húð er stærsta líffæri líkamans, samsett úr húðþekju, húð og undirhúð. Það virkar sem hindrun til að vernda líkamann fyrir utanaðkomandi þáttum og gegnir einnig hlutverki í heilsu og fegurð[1]. Húðöldrun er flókið ferli, sem skiptist í tímaröð öldrun og ljósöldrun og hefur áhrif á bæði innri og ytri þætti. Helstu einkenni eru uppsöfnun stórsameindaskemmda í frumunni, samdráttur í starfsemi stofnfrumna (sem stuðlar að endurnýjun vefja) og smám saman tap á líkamlegri heilleika húðarinnar [2]. Helstu sameindaaðferðirnar sem valda öldrun húðar eru aðallega oxunarálag, stytting telómera, DNA skemmdir, erfðabreytingar, stjórnun ör-RNA, háþróuð uppsöfnun glúkósa á lokaafurðum og bólguöldrun [3]. Ljósöldrun er ofvöxtur húðþekju, þurrkun og niðurbrot utanfrumufylkis af völdum útfjólublárrar geislunar.cistanche nzHelsta orsök ljósöldrunar eru hvarfgjörn súrefnistegundir (ROS) sem myndast með útfjólubláum geislum sem miðla tjáningu matrix metalloproteinasa (MMPs) og type-I pro-kollagens í gegnum merkjaleiðir eins og mítógenvirkjaðan próteinkínasa (MAPK) merkja. leið, sem leiðir þannig til niðurbrots á utanfrumufylki (ECM) í húðinni og frumufrumu trefjafrumuefna [4]. Undanfarin ár hefur það orðið vinsælt að viðhalda heilbrigði húðar og seinka öldrun og að finna náttúruleg innihaldsefni eins og lífvirk peptíð og pólýfenól með andoxunar- og öldrunareiginleikum hefur orðið rannsóknarreitur [5].

Hins vegar hefur kollagen mikla mólþunga og er erfitt að frásogast og nýta það beint, en litlu sameinda kollagenpeptíðin eftir kollagen vatnsrof hafa sterkari líffræðilega virkni og háan frásogshraða [6]. Á sama tíma hefur víðtæk notkun kollagens í matvælum, lyfjum, vefjaverkfræði, snyrtivörum og öðrum sviðum gert kollagenpeptíð með lægri mólmassa, meiri frásogsvirkni og sterkari líffræðilega virkni að nýju uppáhaldi í hagnýtum matvælum og læknisfræðilegum rannsóknum[{{1 }}]. Kollagenpeptíð eru lítil, innihalda 2-20 amínósýruleifar sem fást eftir kollagen vatnsrof. Þau eru notuð sem fæðubótarefni til að meðhöndla öldrun húðar vegna hugsanlegrar bólgueyðandi og andoxunarvirkni þeirra og ónæmisstjórnunar og áhrifa andoxunar og fjölgunar á trefjafrumur í húð [10].

Cistanche getur gegn öldrun

Eftir inntöku frásogast kollagenpeptíð í formi lítilla peptíða og eru fljótt flutt í blóðið og að lokum til nýru, húðar, liða og annarra vefja sem á að geyma og nota. Eftir 14 daga hélst geislavirknimagnið hátt í húð músa sem höfðu verið látin gefa með C14-merktum kollagenpeptíðum. Kollagenpeptíðin geta nánast alveg frásogast og nýtt af líkamanum, en frásogs- og nýtingarhraði kollagens er aðeins 50-60 prósent [6,11-13]. Á undanförnum árum hefur víða verið greint frá því að kollagen vatnsrof úr fiskroði, fiskahreiði, kúbeinum, kúaskinni og svínaskinni hafi jákvæð áhrif til að draga úr öldrun húðar og hafa hlotið töluverða athygli vísindamanna. Til dæmis, kollagenpeptíð einangruð úr silfurkarpahúð stuðla að nýmyndun pro-kollagens og hamla AP-1, MMP-1 og MMP-3 prótein tjáningu með því að virkja TGF- /Smad ferlið til að koma í veg fyrir kollagen niðurbrot og gera við ljósaldraða húðfrumur [14]. Inntaka á kollagenpeptíðum úr nautgripum getur bætt slökun húðarinnar, aukið kollageninnihald og andoxunarensímvirkni, lagað kollagen trefjar og staðlað kollagenhlutfall húðarinnar í öldruðum músum [15]. Hins vegar hafa kollagenpeptíð frá mismunandi uppruna mismunandi áhrif. Magn og uppbygging mjög virkra peptíða í blóði eftir inntöku kollagenpeptíða fer eftir uppruna kollagensins[10]. Verndaráhrif kollagenpeptíðs sem unnið er úr húð hænsna gegn trefjakímskaða af völdum UVA voru betri en kollagenpeptíðsins sem unnið var úr húð svína, kúa eða tilapia, og áhrif þess jafngilda kollagenafleiddu þrípeptíði (Gly-Pro). -Hyp)[16]. Trúarskoðanir og áhyggjur af sjúkdómum (eins og kúabrjálæði) hafa leitt til þess að fólk hefur smám saman breytt stefnu þróunar kollagens og afurða þess frá landspendýrum yfir í alifugla og sjávarlífverur [17]. Sem aðal aukaafurð alifuglavinnslu er kjúklingabein efnileg uppspretta kollagenafurða. Það dregur ekki aðeins úr sóun á auðlindum og umhverfismengun heldur gerir það einnig kleift að nýta aukaafurðir á skilvirkan hátt. Þess vegna, í þessari rannsókn, notuðum við kjúklingabeinakollagenpeptíð sem hráefni, með naktum músum sem voru meðhöndlaðar með D-galaktósa og UV til að örva öldrun húðar, sem líkan til að meta áhrif inntöku kollagenpeptíðs til að draga úr öldrun húðar í músum og ákvarða viðeigandi vélbúnað.

2. Efni og aðferðir

2.1. Efni, efni og dýr

Kjúklingabúin í Yunnan landbúnaðarháskólanum (Kunming, Kína) útveguðu eyddu hænurnar, sem voru aðskildar, þurrkaðar og muldar til að fá kjúklingabeinamjölið. Su-peroxíð dismutasa (SOD), katalasa (CAT) og glútaþíon peroxidasa (GSH-PX) sett voru keypt frá Soleibao Biotechnology Co., Ltd. (Beijing, Kína). Hýdroxýprólín (HYP), interleukin-1 (IL-1), fylkismetalópróteinasa-1/3 (MMP-1/3), pro-kollagen af ​​tegund I og hýalúrónsýra( HA) ensímtengd ónæmisgreining (ELISA) sett voru keypt frá Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (Nanjing, Kína). Heilbrigðar BALB/C hárlausar kvenmýs (18± 2g, sex vikna gamlar) voru keyptar frá Nanjing Junke Bioengineering Corporation, Ltd.(Nanjing, Kína) með leyfisnúmer: SCXK(SU)2016-0010. Pepsín og papain voru keypt frá Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd. (Shanghai, Kína) og önnur efni voru af greiningargráðu. Allar mýs voru meðhöndlaðar í samræmi við reglugerðir rannsóknardýraumönnunar í Yunnan-héraði og samþykktar af dýraumhirðu- og notkunarnefnd Yunnan landbúnaðarháskólans (samþykkisauðkenni: YAUACUC01).

2.2. Kollagenundirbúningur og amínósýrusamsetning

Útdráttur og amínósýrusamsetning kjúklingabeinakollagens fylgdi aðferðinni sem lýst er af Lieut al. [18] með smávægilegum breytingum. Kjúklingabeinduftið var hrært og bleytið í 0.05 M NaOH, 10 prósent n-hexani og 0.25 MEDTA lausn (pH 7,5) við hlutfallið 1/10(m/o). Í hverju skrefi var sýnið meðhöndlað í 36 klst og skipt um bleytilausnina á 6 klst fresti til að bólga beinduftið og fjarlægja prótein sem ekki eru kollagen, fitu og steinefni úr beinduftinu. Sýnið var þvegið með hreinu vatni til hlutleysis eftir hvert skref. Formeðhöndlaða kjúklingabeinamjölið var blandað saman við 0,5 M ísediksýru sem innihélt 0,1 prósent (w/v) pepsín í hlutfalli föstu og vökva 1:10 (wo/v) og stöðugt hrært í og ​​dregið út við 4 gráður í 48 klst. Það var síðan síað og síuvökvinn var skilinn í skilvindu við 15,000×g í 15 mínútur við 4 gráður.cistanche typpastærðFljótandi vökvinn var stilltur á 7.5-7.8 með NaOH lausn og NaCl var bætt við í lokastyrk 1,5 M. Eftir að blöndunni var haldið ótrufluð í 12 klst við 4C til að salta út var kollagenbotnfallið skilið í skilvindu. við 15,000×g í 15 mínútur við 4 gráður, síðan leyst upp með 0.5 M ediksýru, skilað í hreinu vatni, frostþurrkað og fullunnin vara var kjúklingabeinakollagen.

Amínósýrusamsetning kjúklingabeinakollagens var ákvörðuð með Sykam S433D sjálfvirka amínósýrugreiningartækinu (München, Þýskalandi). Ákveðið magn af kollagensýni sem á að prófa var tekið í lokuðu glasi, bætt við 10mL6 M HCl og vatnsrofið við 110 gráður í 24 klst. Vatnsrofið var þétt með köfnunarefnisblástur og aftur leyst upp í 20 mL sítrónusýrujafnalausn. Eftir örsíun með 0,22 μm míkróporous himnu var 20 μL vatnsrofið tekið til amínósýrurófsgreiningar. Amínósýruinnihald sýnisins var gefið upp í prósentum.

2.3. Undirbúningur og mólþyngdardreifing kollagenpeptíða (CP)

Samkvæmt niðurstöðum fyrri hagræðingarferlis okkar voru CPs útbúin með því að nota papain í ensím-til-hvarfshlutfalli 1:4 0 (massahlutfall). Eftir að pH var stillt á 7 og ensímvatnsrof við 63 gráður í 5 klst, var ensímið óvirkt í sjóðandi vatnsbaði í 15 mínútur. Ensímvatnsrofið var afsaltað og frostþurrkað, aftur leyst upp í 0,1 prósent maurasýrulausn og skilið í skilvindu til að fá ofanvatnið. AQ Exactive HF Orbitrap High-Resolution Mass Spectrometer-OE-HF (Thermo Fisher, Waltham, MA, Bandaríkjunum), búinn rafúðajónun (ESI), var notaður til að greina kollagen vatnsrofið í fullri skannaham 350-1800 m/z, og niðurstöðurnar voru sóttar og greindar með Proteome Discoverer

2.1 hugbúnaður

2.4.Dýrapróf

Kvenkyns BALB/stóllausar mýs (n {{0}}) voru hafðar í herbergi við stýrðar aðstæður með hitastigi (24±1 gráðu), raka (60± 5 prósent) og 12 h dag-næturlotu í eina viku. Þeim var veittur að vild aðgangur að mat og vatni. Eftir eina viku af aðlögun var músunum skipt af handahófi í eftirfarandi fimm hópa (n =11 í hverjum hóp):(i). Venjulegur hópur (N): UV óljóst; inntöku 0,4 ml saltvatns daglega. (ii). Líkanhópur (M): UV-útsett auk D-galaktósa (0,2 ml); inntöku 0,4 ml saltvatns daglega. (i). Lágskammta kollagen peptíð hópur (LCP): UV útsett auk D-galaktósa (0,2 ml);

gjöf 0,4 ml CPs (skammtur: 200 mg kg-1 líkamsþyngdar) daglega. (iv). Meðalskammta kollagen peptíð hópur (MCP): UV útsett ásamt D-galaktósa; munnlega

gjöf 0,4 ml CPs (skammtur:500 mg:kg-1 líkamsþyngdar) daglega.

(v). Háskammta kollagen peptíð hópur (HCPs): UV útsett ásamt D-galaktósa; inntöku 0,4 ml CPs (skammtur: 1000 mg·kg-1 líkamsþyngdar) daglega.

Meðferð með D-galaktósa var framkvæmd með inndælingu undir húð á 0,2 ml af 10 prósenta D-galaktósalausn aftan á hálsi músarinnar (skammtur: 1,0g/ kg-1líkamsþyngd) daglega. UV geislun var framkvæmd með 40 W UVA-340 LAMPA (O-panel, Cleveland, Bandaríkjunum, hámarksbylgjulengd: 340 nm), fjarlægðin milli lampans og baks músanna var 30 cm (230 m J/) cm-), og geislunin stóð í 30 mínútur á hverjum degi í sjö vikur (49 dagar). Geislunarstyrkurinn var mældur með UVA365-geislamæli (Xinbao Keyi Electronic Technology Co., Ltd., Xi'an, Kína). Klukkutíma eftir D-galaktósa og UV meðferð fengu mýsnar 0,4 ml af CPs til inntöku á hverjum degi. Eftir síðustu geislunina voru mýsnar svæfðar, vigtaðar og tekin úr vefjum til síðari greiningar.

2.5.Húð raki, innyflum og aukning líkamsþyngdar

Raki húðarinnar var ákvarðaður með ISO 1442 og innyflum var reiknaður út með því að nota eftirfarandi jöfnu: innyflum (g/kg)=inyfjuþyngd/líkamsþyngd.

2.6.Oxidatioe Streita, HA og HYP innihald húðarinnar

Húðsýni voru gerð einsleit með níföldu magni af venjulegu saltvatni (w/w) í ísbaði með vefjajafnara (TGrinder OSE-Y30, Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd., Peking, Kína), og síðan skilið í skilvindu klukkan 2000 × g og 4 gráður í 10 mín. Virkni súperoxíð dismútasa (SOD), katalasa (CAT), glútaþíon peroxidasa (GSH-PX) og innihald hýalúrónsýru (HA) og hýdroxýprólíns (HYP) í flotanum sem safnað var var ákvarðað samkvæmt aðferðinni sem lýst er í leiðbeiningunum sem samsvarar viðkomandi settum.

2.7. Vefjafræðilegur húð

Húðsýni úr músum voru fest í 4 prósent paraformaldehýðlausn í 24 klst, þurrkuð, felld inn í paraffín og skorin í sneiðar. Húðhlutarnir voru litaðir með hematoxýlíni og eósíni (HE) og skoðaðir með ECLIPSE CI-E framflúrljómunarsmásjá (Nikon, Japan). Þykkt húðþekju og húðhúðar var metin með Halcon 13.0.1.1 hugbúnaðinum (MVTec, Munchen, Þýskalandi).

2.8.Skin Transcriptome Röð

2.8.1. RNA útdráttur, bókasafnsbygging og umritunarröðun

Heildar-RNA var dregið úr húð músa með því að nota RNeasy Mini Kit (Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd., Peking, Kína) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Hreinleiki og styrkur RNA var athugað með kaiaoK5500 Spectrophoto-mælinum (Kaiao, Peking, Kína); Heilleiki RNA var metinn með því að nota RNA Nano 6000 prófunarbúnaðinn og Bioanalyzer 2100 kerfið (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, Bandaríkjunum). Uppskriftarröðunargreining hvers sýnis var framkvæmd af Biolinker Technology Company Limited (Kunming, Kína).cistanche duftÍ stuttu máli var þyrping vísitölukóðuðu sýnanna framkvæmd á cBot klasaframleiðslukerfi með því að nota HiSeq PE Cluster Kit v4-cBot-HS (Illumina) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Eftir klasamyndun voru söfnin raðgreind á Illumina vettvang og 150 bp pöruð enda les voru mynduð.

2.8.2. Lífupplýsingafræði greiningar á RNA-raðgreiningargögnum

Gene Ontology(GO) og Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG) auðgunargreining á mismunandi tjáðum genum (DEGs) var framkvæmd með því að nota R tungumálaklasagreiningarpakkann. Þegar p-gildið var minna en 0.05 voru atriðin og leiðirnar sem GO og KEGG auðguðu taldar vera marktækar.

2.8.3. Öfug transkriptasa-pólýmerasa keðjuverkun (qRT-PCR)

QRT-PCR var framkvæmt eins og áður hefur verið lýst [19].

2.9.Wester1 Blot

Samkvæmt aðferð sem lýst er af Park o.fl. [20], Western blot (WB) greining var gerð til að mæla tjáningu öldrunartengdra próteina í músum. Próteinstyrkur húðlýsis í hverjum meðferðarhópi var magnmældur með því að nota BCA settið, aðskilið með SDS-PAGE (10 prósent akrýlamíð hlaupi), flutt yfir á PVDF himnu, stíflað með 5 prósent undanrennu og ræktað með viðeigandi magni af frummjólk. mótefni (TGF-b1,c-Fos, c-Jun, Samd2/3 og -aktín) við 4 gráður yfir nótt. Eftir þvott með TBST var sýnunum blandað við auka mótefni og ræktuð við stofuhita í 1 klst. ChemiDoc XRS plus chemiluminescence hlaupmyndavélin (BioRAD, Hercules, CA, USA) var notað til að greina ákveðin prótein. Mynd ]hugbúnaður var notaður til að mæla tjáningu markpróteins í hverjum meðferðarhópi og niðurstöðurnar voru sýndar með þéttleikagildum sem voru staðlaðar í -aktínprótein.

2.10.ELISA

Tjáningarmagn MMP-1, MMP-3, Type I pro-kollagens og IL-1 í húðlýsuvökva var ákvarðað með ensímtengdri ónæmisgreiningu. Greiningin var framkvæmd í samræmi við leiðbeiningarnar sem fylgdu settinu.

2.11. Tölfræðigreiningar

Allar niðurstöður voru greindar með SPSS 21 (IBM Inc., Armonk, NY, Bandaríkjunum) hugbúnaði með einhliða dreifnigreiningu (ANOVA) og Duncan's multiple range test, með marktektarstigið stillt á p<0.05. originpro="" 2017="" (originlab,="" northampton,="" ma,="" usa)was="" used="" to="" plot="" the="" data.="" all="" data="" were="" expressed="" as="" the="" mean="" ±standard="" deviation="">

3. Niðurstöður og umræður

3.1.Amínósýrusamsetning kollagens

Amínósýrusamsetning kjúklingabeinakollagens er sýnd í töflu 1. Gly var aðal amínósýran í sýnunum, nærri þriðjungur (27,86 prósent) af heildar amínósýrum, og Hyp var sérstök amínósýra í kollageni, sem er 9,83 prósent. Helstu eiginleikar kollagensameinda voru endurteknar Gly-XY raðir og einstök þrískipa uppbygging sem samanstendur af þremur c keðjum. Gly var um það bil þriðjungur af heildar amínósýrum, X og Y voru oft prólín og hýdroxýprólín, eða gætu verið hvaða leifar sem er [21]. Amínósýrusamsetning sýnisins var svipuð og kjúklingabeinakollagens sem greint var frá í fyrri rannsóknum og hafði dæmigerð einkenni kollagens [22].

3.2. Mólþyngdardreifing CPs

Molecular weight distribution reflects the degree of collagen hydrolysis. The molecular weight of the CPs was mainly below 3000 Da(Figure 1), accounting for about 87.61%of all collagen hydrolysates, indicating that almost all of the CPs were small peptides. Many studies claim that collagen peptides with a lower molecular weight have better biological activity [23]. For example, Song et al. [24]. reported that lower molecular weight (200-1000 Da,65%)silver carp skin collagen peptides repaired UV-induced aging skin in mice more effectively than similar peptides with a higher molecular weight(>1000 Da,72 prósent). Hins vegar sýndi þýska Gelita fyrirtækið með nokkrum klínískum rannsóknum að áhrif kollagenpeptíða ráðast aðallega af samsvörun þess við eiginleika kollagenpeptíðanna eftir niðurbrot á kollageni úr mönnum, frekar en mólmassa kollagenpeptíðanna. Þeir komust að því að varan VERISOL⑧ með meðalmólþunga upp á 2000 Da hefur mest örvandi áhrif á trefjafrumur í húð, en varan FortigelTM með meðalmólmassa 3000 Da hefur sérstök áhrif á brjóskviðgerð [25-27].

3.3. Áhrif CP til inntöku á að draga úr öldrun húðarinnar

3.3.1. Líkamsþyngd og líffæravísitala

Líkamsþyngdarstuðull og líffæravísitala eru mikilvæg og endurspegla heilsufar músa. Þyngd músa í hverjum hópi jókst eðlilega á prófunartímabilinu (tafla 2). Meðalþyngdaraukning M hópsins var minni en N hópsins og CP meðferðarhópanna var meiri en M hópsins, sem bendir til þess að CPs hafi engar aukaverkanir á mýs. Í fyrri skýrslum var skammtur af kollagenpeptíðmeðhöndluðum músum að mestu á bilinu 100-1000 mg/kg.bw·d og öruggur skammtur af tilapia kollagenpeptíðum náði 4,07 g/kg.bw·d [{{6} }].cistanche salsa þykkni Similarly, the growth of skin-aged mice after gavage with tilapia scale collagen peptides (dose: 500 and 1000 mg/kg.bw·d)was also similar to our results [29]. The spleen plays an important role in humoral and cellular immunity, thus, the spleen index is often used to evaluate immune system function. The liver index was used to evaluate the toxicity of the tested sample. In these tests, the liver and spleen indices in the M group were lower than those in the N group, and both recovered after treatment with CPs, but there was no significant difference across the treatment groups(p>0.05). Niðurstöðurnar voru svipaðar og fyrri rannsóknir [30], sem gefa til kynna að CPs séu öruggar og gætu bætt ónæmi músa lítillega.

3.3.2. Húðsamsetning

UV og D-galaktósa meðferðin (M hópur) dró verulega úr raka, HA og Hyp innihaldi húðarinnar, samanborið við hópinn, um 13,36 prósent, 24,08 prósent og 15,83 prósent, í sömu röð (p<0.05)(table 2).the="" contents="" of="" moisture,="" ha,="" and="" hyp="" in="" the="" skin="" were="" significantly="" higher="" in="" mice="" after="" the="" oral="" administration="" of="" cps="" compared="" to="" the="" contents="" of="" those="" in="" the="" mice="" of="" the="" m="" group=""><0.05). among="" the="" dose="" groups,="" the="" contents="" of="" the="" three="" skin="" components="" were="" significantly="" different="" between="" the="" lcp="" and="" hcp="" groups="" and="" were="" dependent="" on="" the="" dose="" of="" intake="" of="" cps.="" the="" hcp="" group="" had="" even="" higher="" contents="" than="" the="" n="" group,="" and="" ha="" and="" hyp="" were="" significantly="" different="" between="" the="" two="" groups="" (p=""><>

Breytingar á rakainnihaldi í húð valda hrukkum og lafandi húð og verða fyrir áhrifum af fylkishlutum eins og kollageni í húð og HA[31]. Hýdroxýprólín er stöðug, rík og sérstök amínósýra í kollageni og getur innihald hennar óbeint endurspeglað kollageninnihald í húðinni sem og öldrun húðarinnar. Að auki gegnir HA, sem er mjög tjáð í ECM húð, mikilvægu hlutverki við að stjórna vatnsjafnvægi húðar, osmótískum þrýstingi, rakasöfnun og mýkt sem vatnsgeymslukerfi og byggingarhluti húðarinnar [32]. Í þessari rannsókn jókst innihald raka, HYP og HA í húðinni verulega eftir inntöku CP, sem gæti tengst eflingu kollagen- og HA nýmyndunar með CPs. Auk þess jók aukningin á HYP og HA rakainnihaldinu.

3.3.3. Vefjafræðilegar breytingar á húð

Vefjafræðilegar breytingar á bakhúð músa eftir sjö vikna samfellda meðferð eru sýndar á mynd 2. Öldrunarhúð M-hópsins sýndi einkenni gróft yfirborð, þykknað húðþekju, þynnt húðhúð og dreifðar frumur, samanborið við húð N-hópsins. Hins vegar batnaði ástand öldrunar húðar hjá músum eftir inntöku CPs, og hélt sléttri, skipulegri og fullkominni uppbyggingu svipað og hjá músum úr N hópnum. Þannig var húðhúðin marktækt þynnri og húðþekjan marktækt þykkari í M hópnum en í N hópnum (p.<0.05). the="" change="" in="" skin="" dermis="" and="" epidermal="" thickness="" was="" significantly="" better="" after="" treatment="" with=""><0.05), and="" the="" effect="" was="" more="" obvious="" with="" the="" increase="" in="" the="" dose="" of="" cps="" (figure="" 2).="" the="" effect="" of="" oral="" cps="" on="" the="" histological="" structure="" of="" aging="" skin="" was="" similar="" to="" that="" reported="" previously[4,28,31].="" the="" increase="" in="" the="" thickness="" of="" the="" epidermis="" might="" be="" an="" adaptive="" change="" to="" protect="" the="" skin="" from="" external="" stimuli,="" loss="" of="" skin="" moisture,="" and="" uv="" damage,="" possibly="" due="" to="" the="" increase="" in="" uv-activated="" epidermal="" growth="" factor="" receptor="" (egfr)="" that="" induces="" keratinocyte="" proliferation="" and="" epidermal="" hyperplasia[4].="" however,="" the="" mechanism="" by="" which="" oral="" cps="" alleviate="" the="" increase="" in="" epidermal="" thickness="" remains="" unclear.="" the="" dermis="" imparts="" elasticity="" and="" strength="" to="" the="" skin,="" and="" the="" degradation="" of="" ecm="" and="" the="" reduction="" in="" the="" ability="" to="" repair="" fibroblasts="" are="" the="" main="" causes="" of="" dermal="" thinning="" in="" aging="" skin.="" dermal="" thickness="" increased="" after="" the="" treatment="" with="" cps,="" which="" might="" be="" due="" to="" the="" removal="" of="" ros="" from="" the="" skin="" and="" inhibition="" of="" the="" increase="" of="" mmps="" by="" cps.="" this,="" in="" turn,="" inhibited="" the="" degradation="" of="" skin="" collagen="" and="" elastin="" (figure="" 3),="" the="" entry="" of="" cps="" into="" the="" skin,="" and="" their="" participation="" in="" the="" synthesis="" of="" collagen="" and="" ha="" [6],="" which="" was="" confirmed="" by="" the="" increase="" in="" the="" content="" of="" hyp="" and="" ha="" in="" the="" skin="" (table="">

3.3.4.Húð andoxunarefni og bólgustig

Að ákvarða virkni andoxunarensíma er algengasta aðferðin til að meta andoxunarmagn í líkamanum [28]. Eins og sýnt er á mynd 3 var virkni CAT, SOD, GSH-Px og MDA innihalds í M hópnum marktækt minni en í N hópnum (p.<0.05). administering="" cps="" effectively="" inhibited="" the="" decrease="" of="" cat,="" sod,="" gsh-px="" activities,="" and="" the="" mda="" content="" in="" the="" skin="" of="" mice,="" compared="" to="" those="" in="" the="" mice="" skin="" of="" the="" m="" group,and="" was="" positively="" correlated="" with="" the="" dose="" of="" cps;="" there="" were="" significant="" differences="" among="" the="" different="" dose="" groups=""><0.05). when="" ros,="" accumulated="" by="" skin="" oxidative="" stress,="" exceed="" the="" antioxidant="" defense="" ability="" of="" the="" body,="" they="" destroy="" the="" ecm,="" which="" is="" the="" key="" cause="" of="" skin="" aging.="" ros="" can="" cause="" the="" oxidation="" of="" lipids="" and="" proteins="" in="" the="" skin,="" resulting="" in="" fibroblast="" degeneration="" and="" changes="" in="" the="" skin.="" ros="" activates="" the="" mapk="" signaling="" pathway="" and="" the="" ap-1="" protein="" to="" upregulate="" the="" expression="" of="" mmps="" and="" promote="" the="" degradation="" of="" matrix="" collagen="" [21].="" although="" the="" antioxidant="" enzymes="" and="" antioxidants="" in="" the="" body="" can="" remove="" ros="" to="" protect="" the="" skin="" from="" damage,="" when="" the="" content="" of="" rosexceeds="" the="" defense="" (antioxidant)="" ability="" of="" the="" body="" or="" the="" body's="" defense="" ability="" declines,="" it="" causes="" oxidative="" stress="" and="" skin="">

Að auki stuðlar bólgusvörun frumu af völdum ROS einnig til öldrunar húðar. Eftir UV og D-galaktósa meðferð (M hópur) jókst innihald IL-1 í húð músanna marktækt samanborið við það í N hópnum (Mynd 3D), sem bendir til þess að húðin hafi sýnt marktæka bólgusvörun (bls<0.05). the="" cps="" significantly="" reduced="" the="" content="" of="" il-1α="" in="" the="" skin="" in="" a="" dose-dependent="" manner,="" compared="" to="" that="" in="" the="" skin="" of="" mice="" in="" the="" m="" group.="" there="" was="" a="" significant="" difference="" between="" hcps="" and="" lcps=""><0.05), indicating="" that="" cps="" alleviated="" skin="" inflammation.="" the="" o2="" produced="" by="" ultraviolet="" irradiation="" stimulated="" the="" expression="" of="" mmp-1="" in="" dermal="" fibroblasts="" through="" the="" secretion="" of="" il-1α="" and="" il-6,="" thereby="" disrupting="" the="" ecm="" [33].="" therefore,="" this="" study="" suggested="" that="" cps="" significantly="" increased="" the="" activity="" of="" skin="" antioxidant="" enzymes="" and="" inhibited="" inflammatory="" responses,="" which="" might="" be="" important="" in="" delaying="" skin="" aging="" in="">

3.4. Verkunarháttur CPs í mataræði til að draga úr öldrun húðar

3.4.1. Greining og staðfesting á RNA-Seq gögnum

Analysis techniques, such as PCA, HCA, gene GO enrichment, and KEGG pathway enrichment were used to analyze the transcriptome data. Based on the PCA analysis (Figure 4A)and hierarchical clustering analysis (heat map)of 4303 differential genes with average channel strength greater than 100, the relative expression levels of total DEGs between the two treatment groups are shown to provide an overview of the changes in gene expression(Figure 4B).The M group and the HCP group were significantly separated, and the expression patterns of most DEGs in the M and HCP groups were opposite, indicating that there were significant differences between the mouse skin after HCP treatment and the M group(Figure 4A,B).Pairwise comparisons showed that after feeding HCPs, 4303 genes were significantly expressed in the mice's skin, including 1790 upregulated genes and 2513 downregulated genes(Foldchange>2,p<0.05)(figure 4c).among="" the="" six="" genes="" associated="" with="" skin="" aging="" quantified="" by="" qrt-pcr,="" five="" genes(including="" fos,="" jun,="" cxcl1,="" and="" egr1)were="" downregulated,="" and="" one="" gene="" was="" upregulated(figure="" 4d),="" which="" was="" consistent="" with="" the="" overall="" trend="" of="" transcriptomic="" data.="" the="" rna="" expression="" levels="" of="" fos,="" jun,="" and="" cxcll="" were="" significantly="" upregulated="" in="" damaged="" skin="" compared="" to="" that="" in="" intact="" skin="" [34],="" and="" inhibition="" of="" egr1="" expression="" alleviated="" skin="" inflammation="" [35].="" these="" results="" reflected="" the="" reliability="" of="" transcriptome="" sequencing="" data,="" and="" oral="" cps="" effectively="" alleviated="" skin="">

auðgunargreining og auðgunargreining KEGG gagnagrunns veittu stuðning við frekari rannsókn á líffræðilegri virkni DEGs. GO greining sýndi að DEGs auðguðust verulega í líffræðilegum ferlum eins og DNA eftirmyndun, stjórnun blóðmyndunar, stjórnun á hýdrólasavirkni og frumumyndun; í frumuhlutum, sem innihéldu lytic vacuole og lysosome, voru kollagen-innihaldandi og önnur skyld gen verulega auðguð; hvað varðar sameindavirkni, virkni viðtaka-bindil, frumuvirkni og önnur skyld gen auðguðust verulega (mynd 5). KEGG auðgunargreiningin á fyrstu 20 merkjaleiðunum sem breyttust marktækt af DEG er sýnd á mynd 5. Cytokine-viðtaka víxlverkun, leysisóm, taugavirkur bindill-viðtaka víxlverkun, frumuhringur, rauðir úlfar og TGF-ferill (p.<0.05)were closely="" related="" to="" aging,="" especially="" cytokine-receptor="" interactions,="" lysosomes,="" and="" tgf-βsignaling.="" an="" important="" feature="" of="" cellular="" senescence="" is="" the="" accumulation="" of="" damaged="" organelles="" and="" protein="" aggregates.="" lysosomes="" play="" an="" important="" role="" in="" degrading="" damaged="" organelles="" and="" protein="" aggregates="" in="" senescent="" cells="" [36].="" cytokine-receptor="" interaction="" is="" the="" main="" pathway="" of="" enrichment="" in="" the="" skin="" after="" being="" affected="" by="" various="" factors="" such="" as="" inflammation="" [37],="" sulfur="" mustard="" exposure="" [38],="" and="" terahertz="" pulse="" [39].="" cytokines,="" as="" small="" molecular="" proteins="" synthesized="" and="" secreted="" by="" various="" tissue="" cells,="" maintain="" skin="" homeostasis="" by="" controlling="" the="" balance="" between="" keratinocyte="" proliferation,="" differentiation,="" and="" apoptosis="" through="" complex="" interactions="" with="" growth="" factors="" [40].="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" is="" also="" important="" for="" regulating="" skin="" aging="" [14].="" gene="" functional="" enrichment="" analysis="" showed="" that="" tgf-β="" was="" highly="" expressed="" during="" cytokine-receptor="" interaction="" and="" in="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway.="" tgf-β="" is="" a="" major="" pro-fibrotic="" cytokine="" that="" regulates="" cell="" differentiation="" and="" proliferation="" while="" inducing="" extracellular="" matrix="" protein="" synthesis="" [41.="" therefore,="" we="" verified="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" and="" some="">

3.4.2. Sannprófun á verkunarmáta CPs til að draga úr öldrun húðar

Til að sannreyna hlutverk TGF-boðaleiðar og frumuefnaviðtaka víxlverkunar við að draga úr öldrun húðar með CPs til inntöku, var WB greining gerð til að sannreyna TGF- og umritunarþáttinn Smad2/3 í TGF-boðaleiðinni, sem og lykillinn. umritunarstuðull AP-1(c-Fos og c-Jun) sem stjórnar cýtókínum. Innihald MMP-1, MMP-3, Type I pro-kollagens og I-1 var ákvarðað með ELISA. Niðurstöður WB greiningarinnar sýndu að tjáning TGF-, Smad2 og Smad3 í hópi M var marktækt minni en í hópi N(p)<0.05). the="" expression="" levels="" of="" tgf-β="" and="" smad3="" were="" significantly="" higher="" in="" mice="" after="" the="" oral="" administration="" of="" cps="" compared="" to="" their="" levels="" in="" group="" m="" mice;="" additionally,="" smad2="" also="" increased="" significantly=""><0.05), except="" for="" in="" the="" lcps="" in="" a="" dose-dependent="" manner="" (figure="" 6).="" on="" the="" contrary,="" the="" expression="" of="" c-fos="" and="" c-jun="" in="" the="" m="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" in="" the="" n="" group.="" the="" expression="" of="" c-fos="" and="" c-jun="" in="" the="" cp="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" m="" group,="" except="" for="" the="" expression="" of="" c-jun="" in="" the="" lcp=""><0.05), and="" the="" change="" was="" dose-dependent.="" these="" results="" indicated="" that="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" was="" activated="" and="" ap-1="" was="" inhibited="" after="" feeding="">

AP-1 próteinið er tvískiptur flókinn af próteinum úr Jun og Fos fjölskyldunni og er mikilvægur stjórnandi á húðbólgu og tjáningu frumuefna. Almennt séð sýnir flókið sem samanstendur af c-Jun og c-Fos hæstu umritunarvirkni í húðinni [41, A42]. ROS framleitt í öldruðum húðfrumum virkjar fyrst AP-1 prótein og stjórnar síðan cýtókínum (eins og IL-1), MMPs og TGF-boðaleiðinni í gegnum umritun og þýðingu, og auðveldar þannig öldrun húðar [43 ,44]. TGF-/Smad merkjahvarfið er klassísk kollagenmyndunarferill og Smad umritunarþátturinn er kjarninn í þessari merkjaflutningsleið. TGF- kveikir á fosfórýleringu og virkjun Smad2 og Smad3 niðurstreymis með því að bindast viðtakanum og eykur þar með myndun COLI [14].

Að auki sýndu ELISA niðurstöðurnar að innihald MMP-1, MMP-3 og IL-l í húð M hópsins var marktækt hærra en í N hópnum og innihald Tegundar I pro-kollagen var marktækt lægra (bls<0.05). however,="" the="" contents="" of="" mmp-1,="" mmp-3,="" and="" il-1α(figure="" 3d)in="" the="" skin="" after="" oral="" administration="" of="" cps="" were="" significantly="" lower="" than="" those="" in="" the="" m="" group="" (p=""><0.05); type="" i="" pro-collagen="" increased="" significantly,="" and="" all="" the="" changes="" were="" dose-dependent="" with="" cps="" (figure="" 7).="" mmps="" are="" involved="" in="" the="" decomposition="" of="" skin="" collagen,="" il-1α="" shows="" the="" level="" of="" inflammation="" of="" the="" skin,="" and="" type="" i="" pro-collagen="" reflects="" the="" synthesis="" of="" skin="" collagen.="" accumulating="" evidence="" suggests="" that="" the="" role="" of="" the="" jun/ap-1="" protein="" pathway="" has="" also="" been="" proposed="" to="" regulate="" skin="" inflammation="" [40].="" the="" elisa="" results="" showed="" that="" the="" combined="" treatment="" of="" uv="" and="" d-galactose="" caused="" skin="" collagen="" degradation,="" decreased="" collagen="" synthesis,="" and="" caused="" skin="" inflammation,="" leading="" to="" skin="" aging.="" however,="" these="" changes="" were="" reversed="" after="" the="" oral="" administration="" of="">

Til viðbótar við ofangreindar leiðir, í þessari rannsókn, voru uppstýrðu genin eftir CP meðferð marktækt auðguð inn í lýsósómferilinn, sem gefur til kynna að CP meðferð hafi virkjað lýsósómið í húðinni (Mynd 5). Fyrri rannsóknir benda til þess að virkjuð lýsósóm hreinsar sameindir og hækki virkjun aldraðra taugastofnfrumna við öldrun [45]. Auk þess getur aukin virkni lýsósóma dregið úr styrk innanfrumu ROS til að koma í veg fyrir dvala frumna. Á sama hátt getur hvers kyns lækkun á lýsósómavirkni aukið innanfrumu ROS-styrk sem að lokum stuðlar að því að fruma dvali [46]. Þrátt fyrir að við höfum ekki kerfisbundið sannreynt það í þessari grein, gefa þessar niðurstöður og fyrri skýrslur í skyn að virkjun lysosomalvirkni gæti verið helsta leiðin fyrir CPs til að draga úr öldrun húðar og við munum halda áfram að stefna að því að sannreyna það.

Þess vegna sýndi þessi rannsókn að mataræði CP gæti dregið úr öldrun húðar af völdum UV og D-galaktósa á skammtaháðan hátt. CPs draga úr öldrun húðar með því að lækka oxunarstig húðarinnar, hindra tjáningu lykilumritunarþáttanna AP-1(c-Jun og c-Fos), virkja TGF-/Smad boðleiðina til að stuðla að kollagenmyndun, hindra tjáningu á MMP-1 og MMP-3(sem hindra niðurbrot kollagen) og hindra húðbólgu til að draga úr öldrun húðar (mynd 8). Þar að auki, niðurstöður okkar í núverandi

4. Niðurstöður

Í stuttu máli staðfesti þessi rannsókn að fæðubótarefni kjúklingabeinakollagenpeptíða gæti dregið verulega úr öldrun húðar af völdum útfjólublárrar geislunar og D-galaktósa í gegnum margar leiðir, sem fela í sér að stuðla að nýmyndun pro-kollagens, hindra niðurbrot kollagen, bæta andoxunarefni húðarinnar og hamla bólga; léttingin var skammtaháð með CPs. Ítarleg rannsókn sýndi að CPs draga fyrst úr oxunarstigi húðarinnar, hamla tjáningu lykilumritunarþáttarins AP-1(c-Jun og c-Fos) og virkja síðan TGF-/Smad boðleiðina til að stuðla að kollagenmyndun, hamla tjáningu MMP-1 og MMP-3 til að hindra niðurbrot kollagen og hindra húðbólgu til að draga úr öldrun húðar hjá músum. Að auki getur virkjun lysósóma einnig verið aðalleiðin fyrir CPs til að draga úr öldrun húðar, sem er verðugt eftirfylgnirannsókna og sannprófunar. Þessar niðurstöður veita fræðilegan grunn fyrir innleiðingu kollagenpeptíða til að draga úr öldrun húðar og víkka svigrúmið fyrir alhliða nýtingu aukaafurða úr dýrum í hagnýt matvæli.

Framlög höfundar: CC hannaði, mældi og skrifaði handritið; ZXand HT hannaði og endurskoðaði handritið; YL veitti aðferðafræðilega leiðbeiningar; CG og YW skoðuðu handritið. Allir höfundar hafa lesið og samþykkt útgáfu handritsins.

Þessi grein er dregin út úr Nutrients 2022, 14, 1622. https://doi.org/10.3390/nu14081622 https://www.mdpi.com/journal/nutrients