Sameina örbólu skuggaefni með púls-laser geislun fyrir lyfjagjöf um húð Part1

Ágrip: Optodynamic ferli leysir-framkallaðs örbólu (MB) kavitation í vökva er notað í ýmsum læknisfræðilegum forritum. Hins vegar er sjaldan metið hvernig innfallandi leysigeislun hefur samskipti við MB sem ómskoðun skuggaefni þegar vökvinn inniheldur þegar stöðug MBs. Þessi rannsókn rannsakaði skilvirkni leysimiðlaðrar kavitation albúmínskelja MBs til að auka lyfjagjöf um húð. Mismunandi gerðir og aðstæður leysimiðlaðrar tregðukavitation MBs voru fyrst metnar. CO2 brotinn púlsleysir var valinn til að sameinast MBs í in vitro og in vivo tilraunum. In vitro húðgengnin af -arbútíni eftir 2 klst. var 2 sinnum meiri í hópnum sem sameinaði leysir með MBs en í samanburðarhópnum. Í tilraunum með smádýr jukust hvítandi áhrif á húð C57BL/6J músa í hópnum sem sameina leysir með MB á húðinni ásamt penetrating -arbutin (verulega) um 48,0 prósent á 11. og 5. degi 0,0 prósent á 14. degi, og hafði síðan tilhneigingu til að ná jafnvægi það sem eftir var af 20-daga tilraunatímabilinu. Núverandi niðurstöður benda til þess að sameining CO2 leysir með albúmínhúðuðu MBs geti aukið gegndræpi húðar til að auka afhendingu -arbútíns til að hindra sortumyndun í músum án þess að skemma húðina.

Samkvæmt viðeigandi rannsóknum,cistancheer algeng jurt sem kallast "kraftaverkajurtin sem lengir lífið". Aðalþáttur þess erCistanósíð, sem hefur ýmis áhrif eins ogandoxunarefni, bólgueyðandi, ogefling ónæmisvirkni. Meginreglan milli cistanche oghúðhvíttunliggur í andoxunaráhrifumcistanche glýkósíð. Melanín í húð manna er framleitt með oxun týrósíns sem hvatar aftýrósínasa. Oxunarviðbrögðin krefjast þátttöku súrefnis, þannig að súrefnislausu stakeindir í líkamanum verða mikilvægur þáttur sem hefur áhrif á melanínframleiðslu. Cistanche inniheldur cistanoside, sem er andoxunarefni og getur dregið úr myndun sindurefna í líkamanum, þannig aðhamlar framleiðslu melaníns.

Smelltu á Cistanches Herba For Whitening

fyrir frekari upplýsingar:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

1. Inngangur

Kavitation vísar til myndunar hola í vökva og á sér venjulega stað þegar vökvinn verður fyrir hröðum þrýstingsbreytingum. Hægt er að framkalla slíkar þrýstingsbreytingar með því að nota margar mismunandi aðferðir, þar sem hljóðkavitation er hafin þegar amplitude beitts hljóðþrýstings fer yfir ákveðinn þröskuld [1]. Hljóðkavitation felur í sér myndun, vöxt, pulsation og hrun á örbólum (MBs) í vökva við hljóðgjöf með háum styrkleika ómskoðun (US) bylgjum. Talið er að þessi fyrirbæri séu ábyrg fyrir blöndun, sundrun, veðrun, bleytu, hljóðhræðslu og öðrum áhrifum sem hafa ýmis hagnýt iðnaðarnotkun [1].

BNA-framkallað kavitation MB skuggaefna gegnir einnig mikilvægu hlutverki bæði í sjúkdómsgreiningu og lækningafræðilegri notkun. Bandarísk skuggaefni eru stöðug og húðuð MB sem er sprautað í æðar til að auka upplausn bandarískrar myndgreiningar [2]. Það eru vísbendingar frá fjölmörgum rannsóknum um að tilvist MB skuggaefna í blóði geti lækkað þröskuldinn fyrir ýmis líffræðileg áhrif af völdum Bandaríkjanna bæði in vitro og in vivo, svo sem blóðlýsu, háræðarof og sónareyðingu [3]. Sumar rannsóknir hafa gefið til kynna að tilvist MB skuggaefna í blóði dregur verulega úr þröskuldi fyrir ótímabæra hjartasamdrætti af völdum Bandaríkjanna [4,5]. Ómun MBs (stöðug kavitation) leiðir til ólínulegrar harmónískrar losunar sem hægt er að nýta í MB-sértækri skuggamynd. Tregðukavitation og eyðilegging MBs geta framkallað sterka vélræna streitu sem eykur gegndræpi frumuhimna og blóð-heilaþröskuldar til að bæta afhendingu lækningaefna. Í fyrri rannsóknum okkar höfum við beitt tregðukavitation MBs framkallað af Bandaríkjunum til að auka lyfjagjöf um húð (TDD), þar sem í ljós kom að tregðukavitation leiddi til mun meiri gegndræpisauka hornlagsins samanborið við stöðuga hola [6-8] .

Lasergeislun er önnur aðferð til að auka gegndræpi lyfja og þar með auðvelda lyfjagjöf inn í eða yfir húðina. Þegar leysir púls með styrkleika yfir ákveðnum þröskuldi er einbeittur að vökva, getur sprengiefni uppgufun vökvans einnig framkallað MB kavitation [9,10]. Árásargjarn eðli kavitation af völdum leysis hefur leitt til þess að hún hefur verið notuð í fjölmörgum aðgerðum, þar á meðal frumugreiningu, frumuhimnuskiptingu og augnskurðaðgerðum [11]. Nýlega hefur verið sýnt fram á aðferðir til að bæta útlit örs eftir aðgerð, rýrnun og unglingabólur með því að nota brotalausnar og óþynnandi leysigeisla [12]. Ablative laser húðendurnýjun gefur mestu klínískar framfarir, en bati eftir aðgerð tekur nokkrar vikur [13]. Laseraðgerðir sem ekki eru fléttaðar gætu hentað betur sjúklingum sem geta ekki eða vilja ekki þola lengri lækningu eftir aðgerð. Hins vegar getur fyrri herpes simplex sýking endurvirkjað eftir endurgerð leysirhúðar sem ekki er þvinguð vegna mikils hita sem leysirinn eða annar ljósgjafi framleiðir [13].

Sumar aðferðir hafa verið þróaðar til að draga úr hita sem myndast við leysigeislun, svo sem notkun snertikælihandfanga eða kraftmikilla kælibúnaðar sem geta gefið út kæliúða með breytilegri lengd [14]. Hins vegar er enn ekki samstaða um hvaða kæliaðferð er áhrifaríkust meðan á meðferð stendur. Þar að auki, ólíkt Bandaríkjunum, er vélbúnaðurinn sem liggur að baki áhrifum kavitation af völdum leysis með stöðugum húðuðum MB í vökva óljós.

2. Efni og aðferðir

2.1. Framleiðsla á albúmínhúðuðum MBs

MBs með albúmínskel voru útbúin samkvæmt aðferðinni sem notuð var í fyrri rannsóknum okkar [7,15]. Í stuttu máli, albúmínskeljar MB voru mynduð með hljóðgjöf í 10 ml af lausn sem innihélt 140 mg af albúmíni (Octapharma, Vín, Austurríki) og perflúorkolefnisgasi í lífeðlisfræðilegu saltvatni (pH 7,4, { {21}},9 prósent natríumklóríð) með því að nota hljóðtæki (Branson Ultrasonics, Danbury, CT, Bandaríkjunum) í 2 mín. Fjöldi perflflúorkolefnisfylltra albúmíns MB í lausninni var mældur með MultiSizer III tækinu (Beckman Coulter, Fullerton, CA, USA) með 30-µm ljósopsnema og mælimörk 0,6–20 µm. Stærðardreifingin í sviflausninni var mæld út frá kraftmikilli ljósdreifingu (Zetasizer Nano, ZS90, Malvern, Bretlandi), sem leiddi í ljós að albúmín-skeljar MB voru 1,02 ± 0,11 µm í þvermál (meðaltal ± SD) og styrkur 1,40 × 108 MB/mL.

2.2. Laser-framkölluð MB truflun 

Fyrri rannsóknir hafa bent til þess að US-miðluð MB truflun (þ.e. tregðukavitation) sé nauðsynleg fyrir árangursríka TDD [8,16,17]. Þessi rannsókn mældi skilvirkni MB truflunar þegar mismunandi gerðir leysis eru notaðar við mismunandi aðstæður. Styrkur MBs var stilltur á 2,8 × 107 MBs/mL (fimmfalda þynningu) og 1,4 × 107 MBs/mL (tífalda þynningu) í Eppendorf röri og geislun var veitt með fjórum gerðum leysis: Loftkældur argonjón leysir (515 nm, samfelld bylgja), supercontinuum trefjaleysir (1064 nm, púlsbylgja), Nd: YAG leysir (532 nm, púlsbylgja) og CO2 brotaleysir (10.600 nm, púlsbylgja). Ítarlegar aðstæður fyrir hinar ýmsu gerðir leysis eru taldar upp í töflu 1.

Dæmi um sjónuppsetninguna er sýnt á mynd 1. Hitabreytingin við leysigeislun var mæld með hitamæli (Optris LS, Optris, Berlín, Þýskalandi). Síðan, eftir útsetningu fyrir leysinum, var 100 µL af MB lausninni bætt við smásjárglas til að skoða. Fjöldi MB í ljóssmásjármyndum fyrir og eftir leysigeislun var breytt í 8-bita grátónamyndir með því að nota MATLAB (The MathWorks, Natick, MA, USA) til að auðvelda athuganir á MB truflunum. Eyðingarhraði MB var magnmældur í samræmi við skemmdu svæðin með því að nota eftirfarandi jöfnu:

2.3. Skurðdýpt í svínaskinni

2.4. In Vitro Skin Penetration by -arbutin Solution

{{0}}mm þykkt sýnishorn af svínaskinni var safnað með Humby hníf, vandlega hreinsað með PBS og skorið í ferninga bita (2 cm × 2 cm). Hringlaga svæði á húðsýnunum með 1,5 cm radíus og 5 mm hæð voru umkringd hlaupi til að koma í veg fyrir leka þegar sýnið var hlaðið 5{{30}}0 µL af MBs. Eftir að hafa geislað sýnið sjö sinnum (aðstæðurnar eru taldar upp í töflu 1) með CO2 brotaleysi, var húðgengnin prófuð með því að nota kyrrstæðar Franz dreifingarfrumur á svæði sem er 2,14 cm2 samkvæmt tilraunahönnuninni sem við höfum lýst áður [7]. Hitastigi dreifingarsamstæðunnar var haldið við 37 ◦C. -arbútín (30 mg/ml, 500 µL, 4-hýdroxýfenýl- -D-glúkópýranósíð, mólmassi=272.25 Da; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Bandaríkjunum) var borið á húðþekjuhlið húðarinnar og lokað með parafilmu (Pechiney Laboratory Safety Products and Apparel, Chicago, IL, Bandaríkjunum). Viðtakadreifingarhólfið sem snýr að húðhliðinni var fyllt með 12 ml af PBS (pH 7,4), sem hrært var með segulstöng sem snérist við 600 rpm. Prófunarlausnir sem innihéldu ekki MB voru síaðar í gegnum 0.2-µm míkrópora síu (Nalgene, Rochester, NY, USA) eða 0.22-µm míkrópore síu (Millex, Darmstadt, Þýskalandi). Skammtar (200 µL) af viðtakalausninni voru teknir við 0, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12 og 24 klst. og skipt út fyrir sama rúmmál af ferskri viðtakalausn.

2.5. HPLC greining á -arbútíni

Inspire™ C18 súla (250 mm × 4,6 mm, 5 µm kornastærð; Dikma Technologies, Lake Forest, CA, Bandaríkjunum) var notuð til að mæla styrk -arbútíns. HPLC kerfið var búið tvíundardælu (PU-2089, Jasco, Tókýó, Japan), og bylgjulengd útfjólubláa (UV) skynjarans (UV-2075, Jasco) var stillt á 280 nm. Hreyfanlegur fasi samanstóð af metanóli: eimuðu vatni (pH 5,5, 70:30 v/v) [18] á sama hraða 0,6 ml/mín. Öll sýni sem á að greina voru sprautuð með 20 µL rúmmáli. Viðhaldstími -arbútíns var um 4,3 mín.

2.6. Dýrameðferðir

Melaníninnihald lífrænna efna var rannsakað í C57BL/6J músarlíkani [19]. Fimm vikna gamlar mýs sem vógu 20-25 g voru fengnar frá Bio Lasco (Taipei, Taívan). Tilraunareglurnar voru samþykktar af dýraumönnunar- og notkunarnefndinni í National Defense Medical Center, Taipei, Taívan. Verklagsreglur um umönnun dýra voru í samræmi við leiðbeiningar og reglugerðir stofnana (samþykki nr. IACUC-17-092). Í gegnum tilraunirnar voru dýrin geymd í búrum úr ryðfríu stáli í loftkældu herbergi með hitastigi haldið við 25–28 ◦C og með ljósum og myrkri lotum til skiptis í 12 klst.

Dýrin voru aðlöguð í 7 daga fyrir tilraunina. Eftir að hár þeirra hafði verið fjarlægt af 2 cm × 2 cm svæði var húðliturinn mældur með litamæli (CR-400, Konica Minolta Sensing, Tokyo, Japan). Dýrin voru síðan útsett fyrir útfjólublári B (UVB) geislun (G8T5E, Sankyo, Tókýó, Japan) til að framkalla oflitarefni (heildarorkuskammtur á hverja útsetningu=1 J/cm2, bylgjulengd=306 nm, þrisvar sinnum á viku í 2 vikur), og síðan var húðliturinn mældur aftur.

Dýrunum var skipt í eftirfarandi fimm hópa (n {{0}} í hverjum hópi, meðferð beitt einu sinni á 3 daga fresti í 20 daga): (1) engin meðferð (hópur C); (2) notkun á penetrating -arbutin einu sér (300 µg/mL, 0,2 ml/cm2) (hópur A); (3) leysigeisla húðina beint með því að nota penetrating -arbutin (300 µg/mL, 0,2 mL/cm2) (hópur L plús A); (4) leysigeisla húðina sem er þakin saltvatni og með því að nota penetrating -arbutin (300 µg/mL, 0,2 mL/cm2) (hópur L plús S plús A); og (5) leysigeisla húðina ásamt MBs á húðinni og með því að nota penetrating -arbutin (300 µg/mL, 0,2 ml/cm2) (hópur L plús MBs plús A). Breytingin á húðlit af völdum hverrar meðferðar var metin á fyrirfram ákveðnum tímum með því að nota litamælirinn. Ljósstyrkstuðull, L [20], var reiknaður út á hverjum mælidegi fyrir og eftir meðferð.

2.7. Vefjafræðileg rannsókn

Húðvefssýni (u.þ.b. 8 mm × 8 mm) voru tekin af meðferðarsvæðinu strax eftir tilraunir og geymd í 10 prósenta formalínlausn. Hematoxylin og eosin (HE; Sigma-Aldrich) litun var sett á og sýnin voru greind af sérfræðingur í húðsjúkdómafræðingi (HWG). Sum önnur sýni voru lituð með Fontana-Masson silfurnítrati (Kojima Chemical, Kashiwabara, Japan) í 30 mínútur við 60 ◦C og síðan þvegin með eimuðu vatni og fest í 5 prósent natríumþíósúlfatlausn (Duksan, Seúl, Kóreu) í 2 mín., áður en það er þvegið aftur með eimuðu vatni. Sýnin voru síðan lituð með kjarnarauðri lausn (Fluka, Buchs, Sviss) í 5 mín og þvegin tvisvar með eimuðu vatni. Að lokum voru sýnin þurrkuð í 95 prósent fylgt eftir af 100 prósent etanóli og síðan þvegin tvisvar með xýleni (Duksan) [21].

2.8. Tölfræðigreining

Gögnin sem fengust voru greind tölfræðilega með t-prófi nemenda. Líkindagildi p < 0.05 var talið gefa til kynna marktækan mun.

3. Úrslit

3.1. Laser-framkölluð MB truflun

Smásjármyndir af fimmfalt þynntum MB án og með geislun með 10,8 mW samfelldum (loftkældum argon-jón) leysi og 10,8 mW púlsuðum (supercontinuum fiber) leysi í 60, 120 og 180 sekúndur eru sýndar á mynd 2. eyðileggingartíðni púlsleysisins jókst um 17,66 prósent, 20,52 prósent og 39,05 prósent samanborið við samfellda leysirinn á 60, 120 og 180 sekúndum, í sömu röð. Mynd 3 sýnir eyðileggingarvirkni fimm- og tífalt þynntra MBs þegar notaður er Nd: YAG púlsleysir við 60, 120 og 180 s. Eyðingartíðni fimm- og tífalt þynntra MB var 72,46 prósent og 78,59 prósent, í sömu röð, á 60 sek., 88,06 prósent, 96,10 prósent á 120 sek., 85,22 prósent og 98,80 prósent á 180 sek. Mynd 4 sýnir eyðileggingarvirkni tífaldaðs þynntra MB-efna fyrir að vera geislað einu sinni, þrisvar og sjö sinnum með klínískum CO2-hlutfalli púlsleysis. Eyðingarhraði jókst með geislunartímanum, var nálægt 100 prósent fyrir sjöfalda geislun, og því var þetta ástand notað í síðari in vitro og in vivo tilraunum.

fyrir frekari upplýsingar: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501