Andoxunarefni og segavarnarlyf áhrif fenýlprópanóíð glýkósíða
Mar 30, 2022
Tengiliður: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Netfang:audrey.hu@wecistanche.com
Bartosz Skalski a, Sylwia Pawelec b, Dariusz Jedrejek b, Agata Rolnik a, Rostyslav Pietukhov a, Renata Piwowarczyk c, Anna Stochmal b, Beata Olas a,
ÁSTANDUR
Holoparasitic plöntur af Orobanchaceae, þar á meðal Cistanche, Orobanche og Phelipanche spp, eru þekktar fyrir auðlegð þeirra af fenýlprópanóíð glýkósíðum (PPG). Mörg PPG efnasambönd hafa reynst hafa breitt svið virkni, svo sem örverueyðandi, bólgueyðandi, andoxunarefni og minnisbætandi. Til að kanna betur lífvirknimöguleika evrópskra kústberja (O Caryophyllaceae – OC, P Arenaria – PA, P Ramos – PR) og tíu stakra einangraðra fenýlprópanóíð innihaldsefna, rannsökuðum við róteindavirkni þeirra, verndandi áhrif gegn oxun í plasma in vitro kerfi og áhrif. um storkubreytur. Prófuðu útdrættirnir sýndu hreinsunarvirkni upp á 50–70 prósent af krafti Trolox. OC þykkni, ríkur af akteósíði, hafði yfir 20 prósent betri róttæka getu en PR þykkni sem var sá eini sem innihélt PPGs sem vantaði B-hring katekólhluta í asýleiningunni. Ennfremur kom í ljós að aðeins átta prófuð PPG sýndu andoxunarmöguleika í plasma manna sem var meðhöndlað með H2O2/Fe; Hins vegar voru þrjú prófuð PPG með segavarnarefni auk andoxunareiginleika. Svo virðist sem uppbygging PPG, sérstaklega tilvist asýl- og katekólhluta, sé aðallega tengd andoxunareiginleikum þeirra. Blóðþynningargeta þessara efnasambanda er einnig tengd efnafræðilegri uppbyggingu þeirra. Valin PPG sýna möguleika á að meðhöndla hjarta- og æðasjúkdóma sem tengjast oxunarálagi.
Fenýlprópanóíð glýkósíð frá Cistanche: andoxunarálag
1. Inngangur
Oxunarálag er víða þekkt fyrir neikvæð áhrif á heilsu lífvera, þar á meðal hraðari öldrun og sum krabbamein. Tilvik oxunarálags tengist truflun á jafnvægi milli oxunar- og andoxunarferla (þar á meðal ensím (katalasi, glútaþíon peroxidasi) og óensím (glútaþíon) varnar) í frumum líkamans [1]. Offramleiðsla hvarfgjarnra súrefnistegunda (ROS), þar á meðal oxandi stakeindir og tegunda með lokuðum skel, er einn helsti aðferðin á bak við myndun oxunarálags. Hins vegar eru líffræðileg áhrif af völdum ROS háð styrkleika, tíma útsetningar og staðsetningu. Við eðlilegar aðstæður (lágur styrkur) geta súrefnis-/köfnunarefnisrótarefni gegnt hlutverki aukaboðefna, en á hærra stigi geta þær byrjað að bregðast við líffræðilegum byggingum, eins og frumuhimnur [2]. Meðal allra ROS tegunda veldur hýdroxýlróteining (HO.) einum mesta skaðanum á líffjöldasameindum: próteinum, lípíðum og DNA. Vitað er að oxunarálag gegnir mikilvægu hlutverki í ýmsum sjúkdómum, þar á meðal hjarta- og æðasjúkdómum. Truflanir í blóðkerfinu hafa verið tengdir og/eða á undan breytingum á ýmsum breytum blóðmyndunar og lífmerkja í plasma [1,3].
Á hinn bóginn hafa mörg náttúruleg efni, eins og pólýfenól og fjölómettaðar fitusýrur, verið skilgreind sem öflug andoxunarefni sem geta komið í veg fyrir myndun og/eða minnkað hvarfgjarnar súrefnistegundir. Efnasambönd með slíka eiginleika finnast í mörgum matvælum og lyfjablöndum úr jurtaríkinu. Mataræði auðgað með fersku grænmeti og ávöxtum og andoxunarmeðferðir sem byggjast á náttúrulegum andoxunarefnum eru því almennt ráðlögð þar sem þau geta dregið úr oxunarálagi og komið í veg fyrir ýmsa meinalífeðlisfræðilega ferla [4,5]. Plöntupólýfenól eru fjölbreyttur hópur afleiddra umbrotsefna, þar á meðal fenólsýrur skipa mikilvægan sess þar sem þau dreifast víða og hafa margvísleg líffræðileg áhrif, svo sem sýklalyf, andoxunarefni og bólgueyðandi. Fenýlprópanóíð glýkósíð (PPG) eru esterafleiður hýdroxýkanilsýru og eru aðal/eini flokkur afleiddra umbrotsefna sem eru til staðar í holoparasitic Orobanchaceae plöntum, þar á meðal Cistanche, Orobanche og Phelipanche spp. Nokkrar tegundir af þessari fjölskyldu eru alvarlegir skaðvaldar ræktunar sem bændur vilja losna við á ökrunum (dæmi um Phelipanche ramosa), fáar eru notaðar í lyfjafræði á meðan flestar skipta menn litlu máli. Herba Cistanche er mikið notað í asískri hefðbundinni læknisfræði við meðferð á nýrnaskorti og sem ónæmis- og minnisbætandi, öldrunar- og þreytueyðandi efni [6]. Plantefnafræðilegar greiningar á ýmsum rannsóknarhópum hafa sýnt fram á að fenýlprópanóíð glýkósíð, eins og acteoside, echinacoside og poliumoside, eru eitt af helstu virku innihaldsefnunum í Herba Cistanche [7]. Nýleg rannsókn á nokkrum kústberjategundum sem fundust í Póllandi af Jedrejek o.fl. [8] hefur sýnt að þetta plöntuefni hefur svipaða eigindlega samsetningu (yfirráð PPGs), þar að auki jafngildir það eða jafnvel meira en Cistanche spp. hvað varðar innihald virkra efna [8].
Þessi rannsókn miðar að því að meta möguleika á andoxunarefnum og andoxunarefnum, sem og áhrifum á blæðingarstærðir þriggja rófaþykkna (Orobanche caryophyllacea – OC, Phelipanche arenaria – PA og P. ramosa – PR) sem eru rík af ýmsum fenýlprópanóíðum, eins og auk einstakra PPG kjósenda þeirra. Andróteindageta var mæld með því að nota 2,2'-azínóbis-3-etýlbensþíasólín-6-súlfónsýru/Trolox jafngildi (ABTS/TE) og 2,2-dífenýl-1-píkrýlhýdrasýl (DPPH ) próf. Oxunarálagið í plasmaprófunarkerfinu var framkallað með því að nota hýdroxýlrót (H2O2/Fe), síðan lípíðperoxun (tíóbarbítúrsýruhvarfandi tegundir (TBARS) próf), og magn próteinkarbónýl- og þíólhópa var mælt. Meðal ákvörðuðra þátta fyrir blæðingu voru: virkjaður hluta tromboplastíntími (APTT), prótrombíntími (PT) og trombíntími (TT).
2. Efniviður og aðferðir
2.1. Efni
2,2-dífenýl-1-píkrýlhýdrasýlradikal (DPPH), 2,2'-asínóbís-3-etýlbensþíasólín-6-súlfónsýra (ABTS), kalíumpersúlfat, 6- keypt var hýdroxý-2,5,7,8-tetrametýlkróman-2-karboxýlsýra (Trolox), dímetýlsúlfoxíð (DMSO), þíóbarbítúrsýra (TBA), maurasýru (LCMS gæða) og H2O2 frá Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, Bandaríkjunum). Metanól (HPLC halli einkunn) og asetónítríl (LC-MS einkunn) voru keypt frá Merck (Darmstadt, Þýskalandi). Tíu fenýlprópanóíð efnasambönd sem voru prófuð í þessari vinnu, þar á meðal 2'-O-asetýlakteósíð (97 prósent), 2'-O-asetýlpólíumósíð (98 prósent), 3-O-metýlpólíumósíð (96 prósent), akteósíð (99 prósent), arenarioside (97 prósent), crenatoside (98 prósent), pheliposide (99 prósent), poliumoside (99 prósent), tubuloside A (96 prósent), og wiedemannioside D (96 prósent) voru áður einangruð af okkur frá neðangreindu plöntuefni [ 8]. Hreinleiki efnasambanda var metinn með UHPLC-PDA-MS greiningu. Ofurhreint vatn var útbúið innanhúss með því að nota Milli-Q vatnshreinsikerfi (Millipore Co.). Önnur hvarfefni voru af greiningargráðu og voru veitt af innlendum viðskiptabirgðum.
2.2. Plöntuefni
Blómstrandi plöntur af þremur kústtegundum, þar á meðal Orobanche caryophyllacea Sm., Phelipanche arenaria Pomel og P. ramosa (L.) Pomel, var auðkennd af prof. Renata Piwowarczyk (Jan Kochanowski háskólinn, Kielce, Pólland) og safnað frá náttúrulegum uppruna í Póllandi. Skírteinissýni (O. caryophyllacea – Chomentowek ´ (50.3349◦N, 20.4000◦E), xerothermic graslendi, parasitize Galium boreale, maí 2014; P. arenaria – Zwierzyniec (50.3652◦N, 022◦N, 022◦N, 022 ◦N, 022 ◦N, 022◦N, 022 ◦N, 022 ◦N, 022◦N), Artemisia campestris, júní 2014; P. ramosa – Szewce (50.3553◦N, 22.3038◦E), akur, sníkjudýr Solanum lycopersicum, september 2014) er geymt í grasgarði Jan Kochanowski háskólans í Kielce (KTC). Plöntuefnið var frostþurrkað og fínmalað fyrir útdrátt.
cistanche þykkni duft
2.3. Undirbúningur útdráttar úr kústberjum
Plöntuefni í duftformi (O. caryophyllacea (OC) – 2 g, P. arenaria (PA) – 3 g og P. ramosa (PR) – 3 g) var dregið út með 80 prósent MeOH við 40 ◦C og 1500 psi (leysisþrýstingur ) með því að nota ASE 200 hraða leysisútdrátt (Dionex, Sunnyvale, CA, Bandaríkjunum). Útdrættirnir voru látnir gufa upp og frostþurrkaðir (Gamma 2–16 LSC frostþurrkari, Christ, Þýskaland). Útdráttarskilvirkni fyrir OC, PA og PR var 55 prósent, 37 prósent og 43 prósent miðað við þyngd plöntuefnisins, í sömu röð. Vegna mikils kolvetnainnihalds (gögn ekki sýnd) voru hráu útdrættirnir hreinsaðir frekar með fastfasaútdrætti (SPE) á Oasis HLB örsúlu (500 mg; Waters, Milford, MA, Bandaríkjunum). Sykurnar voru fjarlægðar með 1 prósent MeOH, síðan voru áhugaverð efnasambönd skoluð út með 80 prósent MeOH. Eftir að leysirinn hefur verið fjarlægður voru OC, PA og PR útdrættir frostþurrkaðir (Gamma 2–16 LSC frystiþurrkur) og afrakstur SPE hreinsunar var 53 prósent (OC), 67 prósent (PA) og 51 prósent (PR) .
2.4. Plöntuefnafræðilegir eiginleikar kústberjaseyðis
Eigindlegar og megindlegar greiningar á kústútdrætti voru gerðar með því að nota ACQUITY UPLC kerfi (Waters) sem var tengt við ljósdíóða fylkisskynjara (PDA) og fjórpóla tandem-massarófsmæli (TQD-MS/MS). Frostþurrkaðir OC, PA og PR útdrættir voru leystir upp í 50 prósent metanóli í styrknum 0.50 mg/ml og síðan litskiljaðir á BEH C18 súlu (1{ {21}}0 × 2,1 mm, 1,7 µm, vatn). Litskiljunarskilyrði voru sem hér segir: ofnhiti – 25 ◦C, línulegur halli 10→25 prósent af hreyfanlegum fasa B (0,1 prósent maurasýru í asetónítríl) í hreyfanlegum fasa A (0,1 prósent maurasýru í H2O) á 12 mínútum, flæðihraði – 0,4 mL/mín., inndælingarrúmmál – 2 μL, UV-svið – 190–490 nm (3,6 nm upplausn). MS-greiningin var gerð í neikvæðri jónaham með rafúðajónun (ESI), með eftirfarandi stillingum: skannasvið 100–1200 m/z; háræðaspenna 2,8 kV; keiluspenna 35 V; uppspretta hitastig 150 ◦C; upplausnarhitastig 450 ◦C; losunargasflæði 900 L/klst., og keilugasflæði 100 L/klst. Gagnaöflun og úrvinnsla var framkvæmd með Waters MassLynx 4.1 hugbúnaði.
Fenýlprópanóíð glýkósíð (PPG) toppar voru auðkenndir með samanburði á LC-MS gögnum sem fengust við þær sem áður voru einangruð efnasambönd [8]. Magngreining á PPG í kústrýtisútdrætti var byggð á UPLC-UV aðferðinni með greiningu við 330 nm og ytri staðalkvörðun með akteósíði (Sigma-Aldrich, meira en eða jafnt og 99 prósent, HPLC) sem hópstaðall . Línuleg kvörðunarferill var útbúinn í sex styrkjum á bilinu 1–200 ug/mL og sýndi góða línuleika (R2 Stærri en eða jafnt og 0,999). Megindlegar niðurstöður tákna meðaltal ± SD gildi þriggja inndælinga og voru gefnar upp sem milligrömm akteósíðjafngilda (ígildi) á hvert gramm af útdrætti (mg akteósíðjafngildi/g).
2.5. Antiradical virkni in vitro
2.5.1. ABTS radical scavenging próf
ABTS and-radical prófið var framkvæmt með aðferð sem lýst er af Kontek o.fl. [9], með smávægilegum breytingum sem hér segir: 20 prósent MeOH var notað til að útbúa hvarfefni (7 mM ABTS og 4,9 mM kalíumpersúlfat); lausnirnar af OC, PA og PR útdrætti, í fjórum styrkleikastigum á bilinu 100– 400 ug/mL, og Trolox lausnum, við sex styrkleikastig á bilinu 10– 250 ug/ml, voru unnar með 50 prósentum MeOH. Hlutfall sýnis af ABTS plús vinnulausn var 1:25 (v/v). Gleypið við 734 nm var mælt eftir 30 mínútna ræktun í myrkri með UV-vis litrófsmæli (Evolution 260 Bio, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, Bandaríkjunum).
Frásogshömlun (prósent) var reiknuð út sem hér segir: [(Abscontrol–Abssample)/abscontrol] ×100.
Trolox-jafngildi (TE) útdrætti kústberja voru reiknuð út með formúlunni TE {{0}} Msample/Mstandard, þar sem m er halli beinlínuferilanna (gleypnihömlun vs styrkur). TE gildi úrtaksins lýsir staðlaðri virkni þess gegn Trolox (TEstandard =1.0). IC50 gildin fyrir OC, PA og PR útdrætti og Trolox náðust í tilraunaskyni, síðan voru þau reiknuð út frá beinlínu ferlum þeirra (gleypnihömlun á móti styrkleika) og eru gefin upp í ug/mL.
Greiningin var gerð í þríriti og niðurstöðurnar eru settar fram sem meðaltal ± staðalfrávik (SD).
Mynd 1. Efnafræðileg uppbygging fenýlprópanóíð glýkósíða sem finnast í rannsökuðum kústberjategundum. Merktu fenólin (*) voru notuð við líffræðilegar prófanir í plasmakerfinu.
2.5.2. DPPH radical scavenging próf
DPPH and-radical prófið var framkvæmt með aðferð sem lýst er af Jedrejek o.fl. [8] og Brand-Williams o.fl. [10], með smávægilegum breytingum sem hér segir: lausnirnar af OC, PA og PR útdrætti, í fjórum styrkleikastigum á bilinu 50−250 ug/mL, og Trolox lausnum, við sex styrkleikastig á bilinu 10− 250 ug/mL, voru útbúin með 50 prósent MeOH. Hlutfall sýna af DPPH var 1:19 (v/v). Gleypið við 517 nm var mælt eftir 30 mínútna ræktun í myrkri með UV-vis litrófsmæli (Evolution 260 Bio).
Frásogshömlun (prósent) var reiknuð út sem hér segir: [(Abscontrol–Abssample)/abscontrol] ×100.
Trolox Equivalent (TE) og IC50 gildi prófsýna voru reiknuð út á sama hátt og í ABTS prófinu (kafli 2.5.1). Greiningin var gerð í þríriti og niðurstöðurnar eru sýndar sem meðaltal ± SD.
2.6. Stofnlausnir prófaðra plöntuefnasambanda og útdrætti fyrir tilraunir með plasma manna
Stofnlausnir af prófuðu efnasamböndunum og plöntuútdrætti voru unnar í 50 prósent DMSO. Lokastyrkur DMSO í prófuðu sýnunum var lægri en 0,05 prósent og áhrif þess voru ákvörðuð í öllum tilraunum.
Mynd 2. UPLC-PDA litskiljun af útdrætti kústberja, Orobanche caryophyllacea, Phelipanche arenaria og P. ramosa.
2.7. Einangrun manna í plasma
Blóð úr mönnum, eða blóðvökvi, var fengið frá sex venjulegum gjöfum (reykingalausum körlum og konum) til blóðbanka (Lodz, Pólland) og læknastöðvar (Lodz, Pólland). Blóði var safnað sem CPD lausn (sítrat/fosfat/dextrósi; 9:1; v/v blóð/CPD) eða CPDA lausn (sítrat/fosfat/dextrósi/adenín; 8,5:1; rúmmál; blóð/CPDA). Gefarnir höfðu ekki tekið nein lyf eða ávanabindandi efni (þar á meðal tóbak, áfengi og andoxunarefni) í að minnsta kosti tvær vikur fyrir gjöf. Greining okkar á blóðsýnunum var framkvæmd samkvæmt leiðbeiningum Helsinki-yfirlýsingarinnar um mannrannsóknir og samþykkt af nefndinni um siðareglur rannsókna í tilraunum á mönnum við háskólann í Lodz. Plasma var útbúið með skilvindu á fersku mannsblóði við 4500x g í 25 mínútur við stofuhita. Próteinstyrkurinn var reiknaður út með því að mæla gleypni prófuðu sýnanna við 280 nm, samkvæmt aðferð Whitaker og Granum [11].
2.8. Merki um oxunarálag í plasma manna
2.8.1. Fituperoxunarmæling
Lípíðperoxun í plasma var magngreind með því að mæla styrk þíóbarbítúrsýru hvarfefna (TBARS). TBARS styrkur var reiknaður út með mólútrýmingarstuðlinum (ε =156,000 M− 1cm− 1). Aðferðinni er lýst nánar annars staðar [12,13].
2.8.2. Mæling á karbónýlhópum
Magn karbónýlhópa var reiknað út með mólútrýmingarstuðlinum (ε=22,000 M− 1 cm− 1) og var gefið upp sem nmól karbónýlhópar/mg af plasmapróteini, samkvæmt Bartosz [13 ] og Levine o.fl. [14].
2.8.3. Ákvörðun þíólhóps
Innihald tíólhópa í plasmapróteinum var mælt með litrófsmælingu með SPECTROstar Nano Microplate Reader (BMG LABTECH, Þýskalandi) með gleypni við 412 nm með 5,5'-dítíó-bis-(2- nítróbensósýru). Aðferðinni er lýst nánar á öðrum stað [15–17].
2.9. Færibreytur blæðingar
2.9.1. Mæling á prótrombíntímae (PT)
PT var ákvörðuð með storkumælingu með því að nota Optic Coagulation Analyzer (líkan K-3002, Kselmed, Grudziadz, Pólland) samkvæmt Malinowska o.fl. [18].
Tafla 1 Innihald fenýlprópanóíð glýkósíða í þremur rannsökuðum kústaseyði, Orobanche caryophyllacea (OC), Phelipanche arenaria (PA) og P. ramosa (PR).
2.9.2. Mæling á trombíntíma (TT)
TT var ákvarðað með storkumælingum með því að nota ljósstorkugreiningartæki (líkan K-3002, Kselmed, Grudziadz, Pólland), samkvæmt aðferð sem lýst er af Malinowska o.fl. [18].
2.9.3. Mæling á virkum hluta tromboplastíntíma (APTT)
APTT var ákvörðuð með storkumælingu með því að nota K-3002 ljósstorkugreiningartæki (Kselmed, Grudziadz, Pólland) samkvæmt Malinowska o.fl. [18].
2.10. Gagnagreining
Q-Dixon prófið var gert til að eyða óvissum gögnum. Gögnin voru prófuð með tilliti til eðlilegrar dreifingar með Shapiro-Wilk prófinu og dreifnijafnrétti við Levene prófið. Tölfræðilega marktækur munur var auðkenndur með því að nota ANOVA, fylgt eftir með Tukey's margfeldi samanburðarprófi eða Kruskal-Wallis prófi. Samanburður var talinn marktækur við p < 0.05.="" gildin="" eru="" sett="" fram="" sem="" meðaltal="">
Desertliving cistanche: Andoxun
3. Niðurstöður og umræður
Tíu áður einangruð af okkur fenýlprópanóíð glýkósíð [8], þar á meðal 2'-O-asetýlakteósíð, 2'-O-asetýl-podium hlið, 3-O-metýl-podium hlið, acteoside, vettvangur inni, crenatoside, stolt, podium side, tubuloside A og teniposide D, ásamt þremur broomrape útdrætti (Orobanche Caryophyllaceae (OC), Phelipanche Arenaria (PA) og P. Ramos (PR)) voru nú rannsökuð til að draga úr oxunarálagi og segavarnareiginleika í plasma manna kerfi. Efnafræðileg uppbygging fenýlprópanóíðanna sem prófuð eru eru sýnd á mynd 1, og eins og sjá má eru þau öll byggð eftir svipuðu mynstri, með sömu/svipuðum undireiningum: hýdroxýtýrósóli, einsykrum (glúkósa, rhamnósa og/eða xýlósa) og hýdroxýkanilsýru. Flest skoðuð PPG efnasambönd eru skipt út fyrir koffínsýru, en í staðinn má skipta út fyrir annað hvort kúmarsýru eða ferúlsýru.
Burtséð frá einstökum PPG efnasamböndum, voru þrír kústþykkni - OC, PA og PR, sem eru blöndur af nokkrum PPG og þjónuðu áður sem upphafsefni fyrir einangrun efnasambanda, einnig með í líffræðilegu rannsókninni. Önnur ástæða fyrir því að velja þrjár mismunandi tegundir var mikill munur á plöntuefnafræðilegu sniði meðal þeirra, eins og sjá má á mynd 2. Nánari samanburður á OC, PA og PR útdrættinum, þar á meðal magngögnin, er sýndur í töflunni. 1. Akteósíð var aðalefnisþátturinn í O. caryophyllacea útdrættinum (690 mg/g), phelipósíð og arenariosíð ríkjandi í P. arenaria (samanlagt 550 mg/g), en poliumósíð og asetýleruð afleiða þess voru mikilvægustu umbrotsefnin í P. Ramosa þykkni (samanlagt 640 mg/g). Skoðuðu útdrættirnir voru einnig mismunandi í heildarinnihaldi fenýlprópanóíða, hæsta magnið fannst í OC (810 mg/g), aðeins lægra í PR (795 mg/g) og lægra í PA (685 mg/g). Ennfremur er vert að hafa í huga að tilvist PPGs með öðrum en koffeoylhlutum, eins og kúmaróýli eða ferúlóýli, fannst aðeins í P. ramosa þykkni, þar sem þessi efnasambönd voru um það bil sjötti af heildarfjölda PPG (um 120 mg/ g) (Tafla 1).
Fyrri rannsóknir á róteindavirkni phenylpropanoid glýkósíða af Heilmann o.fl. [19] og Jedrejek o.fl. [8], þar á meðal um það bil 30 mismunandi PPGs eins og acteoside, isoacteoside og crenatoside, hafa leitt í ljós sterk tengsl þess við uppbyggingu asýlhluta (fenólsýru og tyrosol). Almennt leiddi breyting eða skipting á katekólhluta asýleiningar til marktækrar minnkunar á hreinsunarvirkni gegn hvarfgefnum súrefnistegundum (ROS) og DPPH stakeind. Í núverandi rannsókn var róttæka in vitro möguleiki þriggja kústþykkni (OC, PA og PR) kannaður með ABTS og DPPH greiningum og niðurstöður bornar saman bæði innbyrðis sem og við virkni einstakra fenýlprópanóíðþátta sem mældir voru í fyrri rannsókn okkar [8]. Niðurstöðurnar voru gefnar upp sem Trolox-jafngildi (TE) og IC50 gildi (tafla 2). Almennt séð voru allir þrír útdrættirnir góðir til að hreinsa bæði ABTS og DPPH stakeindir en einnig sást munur á sýnunum sem prófuð voru (áætlað TE var á bilinu 0.5–0.7; 1.0 jafngilti Trolox). Andróteindahreinsandi virkni sýna var í eftirfarandi röð: Trolox > OC > PA > PR. Útdrátturinn af Orobanche caryophyllacea (IC50=155–275 µg/mL) hafði yfir 20 prósent meiri virkni en Phelipanche ramosa þykkni (IC50=200–320 µg/mL).
Tafla 2 Antiradical virkni in vitro þriggja rannsakaðra broomrape útdrátta (Orobanche caryophyllacea (OC), Phelipanche arenaria (PA) og P. ramosa (PR)) með ABTS og DPPH radical prófum
Hæstu róttæku hreinsunarvirkni OC útdráttarins sem tilkynnt er um má skýra með hæsta PPG innihaldi í þessu sýni, sem og inntak akteósíðs, ríkjandi innihaldsefnis þess, sem samkvæmt fyrri rannsóknum [8,19] er eitt af sterkustu sindurefnahreinsiefnin meðal umbrotsefna úr þessum hópi (TEDPPH=0.87; [4]). Hins vegar, með hliðsjón af gagnkvæmu sambandi andróteindavirkni og innihalds fenýlprópanóíða í OC, PA og PR útdrættinum, fannst engin einföld fylgni á milli þessara tveggja þátta (r < 0.5),="" sem="" gefur="" til="" kynna="" marktækt="" inntak="" af="" eigindlegum="" prófíl.="" þetta="" er="" aðallega="" tengt="" p.="" ramosa="" útdrættinum,="" sem="" þrátt="" fyrir="" mikið="" magn="" ppgs="" (0,8="" g/g)="" einkenndist="" af="" minnstu="" líffræðilegu="" virkni="" meðal="" prófaðra="" sýna="" (te="" ~="" 0).="" 5).="" pr="" útdrátturinn,="" eins="" og="" getið="" er="" hér="" að="" ofan,="" var="" eina="" sýnið="" sem="" hafði="" fenýlprópanóíð="" með="" kúmarsýru="" eða="" ferúlsýru,="" efni="" sem="" skorti="" b-hring="" katekólið,="" sem="" hefur="" verið="" tilkynnt="" að="" hafi="" minnkað="" andoxunargetu.="" fjögur="" ppg="" efnasambönd="" með="" breyttri="" koffínsýru,="" þar="" á="" meðal="" 3-o-metýlpólíumósíð,="" ramósíð="" a="" og="" wiedemanniósíð="" d,="" prófuð="" af="" okkur="" áður="" höfðu="" tedpph="" um="" 0.3="" [8].="" þannig="" eru="" núverandi="" niðurstöður="" í="" samræmi="" og="" staðfesta="" niðurstöður="" fyrri="" róttæku="" in="" vitro="" tilrauna="" á="">
Eins og Chen o.fl. [20] sem lýst er, tengist það meiri H-gjafagetu eða stöðugleika róttæksins með ýmsum virkum hópum blöndu efnasambanda. Nokkrir byggingarþættir hafa verið auðkenndir sem auka beina andoxunarvirkni pólýfenóla, sérstaklega þau sem tengjast fjölda og stöðu hýdroxýlhópa. Talið er að virkni til að hreinsa sindurefna aukist með auknum fjölda –OH hópa. Hins vegar hefur staða þessara hópa, í sameind, enn meiri áhrif á þá virkni sem beitt er. Tiltölulega stöðug öflug efnasambönd eru þau sem hafa 3,4-díhýdroxýhluta í byggingu þeirra, sem og þau sem hafa fleiri en tvo hýdroxýlhópa [21]. Efnafræðileg uppbygging andoxunarefnisins gerir kleift að skilja hvernig andoxunarefnahvarfið er. Lopez-Munguía ´ o.fl. [22] Byggt á þéttleika virknikenningum (DFT) útreikningum kom í ljós að PPGs andoxunarefnabúnaðurinn gengur í gegnum raðbundinn róteindatap einn rafeindaflutning (SPLET). Hins vegar, Li o.fl. [23] tilraun til að kanna aðferð fenólísk fenýlprópanóíð andoxunarefna, komst að þeirri niðurstöðu að PPGs (akteósíð, forsýtósíð B og poliumósíð) gætu tekið þátt í mörgum leiðum til að beita andoxunarvirkni, aukið hlutverk sykurleifa.
Rannsóknir hafa sýnt að andoxunarefni sem eru unnin úr plöntum eru áhrifarík stjórnun á blæðingum í hjarta- og æðasjúkdómum [24-26]. Ýmsar plöntur sem notaðar eru í hefðbundinni læknisfræði innihalda umtalsvert magn af PPG [27,28]. Að auki er vitað að PPGs hafa margvíslega líffræðilega virkni, þar á meðal bólgueyðandi, nýrnaeyðandi og lifrareyðandi eiginleika [29-33].
Í nýlegri rannsókn þeirra, Jedrejek o.fl. [8] lýsti einangrun PPG úr þremur pólskum kústberjum og metur andoxunarvirkni þeirra með DPPH prófinu. Byggt á því, metur þessi rannsókn hvort tíu valda PPGs einangruð úr þessum plöntum gætu dregið úr oxunarálagi í plasma manna sem meðhöndlað er með sterku líffræðilegu oxunarefni, þ.e. hýdroxýlróteindagjafanum H2O2/Fe, og stýrt storkueiginleikum plasma in vitro. Andoxunareiginleikar tíu einangraðra PPGs voru ákvörðuð í samræmi við völdum breytum oxunarálags: TBARS-stig sem merki um lípíðperoxun, ásamt magni karbónýlhóps og þíólhópa, sem merki um oxandi próteinskemmdir.
Bæði blóðfituperoxun og próteinkarbónýleringargildi í blóðvökva af völdum H2O2/Fe minnkaði verulega í viðurvist átta prófaðra efnasambanda, þ.e. akteósíð, krenatósíð, 2'-O-asetýlakteósíð, phelipósíð, arenariosíð, túbúlósíð A, poliumósíð og 3- O-metýlpólímúósíð, í öllum prófuðum styrkjum (1, 5 og 50 µg/ml); hins vegar sáust hvorug áhrifin fyrir tvö af prófuðu efnasamböndunum, þ.e. 2′-O-asetýlpólíumósíð og wiedemanniósíð D, eða hvaða útdrætti sem var prófað í hvaða styrk sem er (1, 5 og 50 µg/ml). Að auki reyndist ekkert af prófuðu efnasamböndunum eða prófuðu útdrættinum vernda blóðvökvann gegn H2O2/Fe - völdum tíólhópaoxun í próteinum (myndir 3-5). Hins vegar geta prófuðu útdrættirnir verið uppspretta efnasambanda með ýmsa líffræðilega eiginleika.
cistanche stilkur
Í fyrsta skipti gefa niðurstöður þessarar rannsóknar til kynna að átta af prófuðu PPGs sýna andoxunarmöguleika í plasma manna í nærveru utanaðkomandi hvarfgjarnra súrefnistegunda með því að hindra lípíðperoxun og próteinkarbónýleringu í plasma sem er meðhöndlað með H2O2/Fe. Að auki höfðu 2'-O-asetýlpólíumósíð og wiedemanniósíð D engin slík áhrif. Almennt séð eru niðurstöður okkar í samræmi við fyrri in vitro tilraunir á PPG. Heilmann o.fl. [19] og Jedrejek o.fl. [8] greina frá fylgni á milli efnafræðilegrar uppbyggingar PPG og starfsemi þeirra. Andoxunareiginleikar PPGs virðast fyrst og fremst tengjast uppbyggingu asýlhluta þeirra, þ.e. fenólsýru og fenýlprópanóíð einingarinnar, þar með talið nærveru og/eða breytingu á katekólhluta. Til dæmis reyndist wiedemanniosíð D missa andoxunargetu sína gagnvart plasma sem var meðhöndlað með H2O2/Fe eftir að koffóýlhluta þess var skipt út fyrir ferúlóýlhluta.
Breytingar á storknunarferlinu stafa oft af oxunarálagi; þessar breytingar geta stýrt starfsemi hjarta- og æðakerfisins og geta leitt til þróunar hjarta- og æðasjúkdóma [1]. Af tíu plöntusamböndum og þremur plöntuþykkni sem prófuð voru í þessari rannsókn sýndu tubuloside, poliumoside og 3-O-methylpoliumoside og allir prófaðir útdrættir að lengja þrombíntíma verulega við alla prófaða styrk, þ.e. 1, 5 og 50 µg/ml (mynd 6B). Hins vegar breytti enginn af þessum útdrætti, né neitt af prófuðu efnasamböndunum, PT eða APTT (mynd 6A og C).
Tafla 3 ber saman áhrif PPGs (5 µg/mL) á lífmerki um oxunarálag í plasma sem er meðhöndlað með H2O2/Fe og áhrif þeirra á storknun. Átta af prófuðum PPG sýndu aðeins andoxunargetu í meðhöndluðu plasma manna; Hins vegar reyndust þrjú prófuð PPG hafa bæði andoxunareiginleika og segavarnarlyf. Athyglisvert er að niðurstöður DPPH prófsins féllu ekki saman við þær sem fengust í líffræðilegu líkaninu með því að nota plasma manna sem var meðhöndlað með H2O2/Fe: andoxunargeta prófuðu útdráttanna getur verið læst af tilteknum efnasamböndum sem eru til staðar í plasma.
Að lokum varpa núverandi niðurstöður okkar nýju ljósi á andoxunarmöguleika og segavarnareiginleika PPGs. Svo virðist sem uppbygging PPG, sérstaklega tilvist asýl- og katekólhluta, sé aðallega tengd andoxunar- og segavarnareiginleikum þeirra. Valin PPG getur vel haft möguleika á að meðhöndla hjarta- og æðasjúkdóma sem tengjast oxunarálagi. Hins vegar er þörf á frekari tilraunum til að ákvarða styrk þessara efnasambanda sem þarf fyrir in vivo líkan.
