Ofnæmis- og bólgueyðandi áhrif Neferíns á RBL-2H3 frumur

Vinsamlegast hafðu sambandoscar.xiao@wecistanche.comfyrir meiri upplýsingar

Ágrip:Mastfrumur gegna mjög mikilvægu hlutverki í húðofnæmi og bólgum, þar með talið ofnæmishúðbólgu og psoriasis. Áður fyrr kom í ljós að tilvísun hefur bólgueyðandi og öldrunareyðandi áhrif á húðina, en áhrif hennar á mastfrumur hafa ekki enn verið rannsökuð ítarlega. Í þessari rannsókn notuðum við mastfrumur (RBL-2H3 frumur) og músalíkön til að rannsaka ofnæmis- og bólguáhrif tilvísunar. Í fyrsta lagi komumst við að því að tilvísun hindrar afkornun mastfrumna og tjáningu cýtókína. Að auki sáum við að þegar mastfrumur voru örvaðar með A23187/phorbol 12-myristat-13- asetati (PMA), var hækkun á kalsíum innanfrumu hamlað með tilvísun. Fosfórun MAPK/NF-KB ferilsins minnkar einnig með formeðferð tilvísunar. Niðurstöður in vivo rannsókna sýna að tilvísun getur bætt útlit húðbólgu og mastfrumuíferð af völdum dínítróklórbensen (DNCB). Þar að auki er tjáning hindrunarpróteina í húðinni einnig endurheimt.cistanchAð lokum kom í ljós að tilvísun getur dregið úr klórahegðun af völdum efnasambands 48/80. Samanlagt benda niðurstöður okkar til þess að tilvísun sé mjög góð ofnæmis- og bólgueyðandi náttúruvara. Áhrif þess á mastfrumur stuðla að lyfjafræðilegu kerfi þess.

Leitarorð:tilvísun; náttúruleg vara; mastfruma; húðbólga; kláði

Vinsamlegast smelltu hér til að vita meira

1. Inngangur

Margar rannsóknir hafa staðfest að ofnæmissjúkdómar eru ekki aðeins afleiðing af meðfæddri ónæmisvirkjun heldur einnig aðlögunarvirkjun. Þar á meðal gegna mastfrumur mjög mikilvægu hlutverki í ýmsum ofnæmissjúkdómum eins og ofnæmiskvef, astma og ofnæmishúðbólgu. Mastfrumur tjá IgE viðtaka (FceRI) á frumuhimnum sínum og FceRI viðtakar hafa mikla sækni í IgE mótefni [1,2]. Þegar mótefnavaka-sértækt IgE binst FceRI verður milliverkun og ofnæmisviðbrögð. Samsöfnun FceRI getur virkjað týrósínkínasa viðtaka, komið af stað niðurstreymisviðbrögðum og stuðlað að fosfórýleringu ýmissa lykilpróteina (svo sem mítógenvirkjaðan próteinkínasa; MAPK), sem að lokum leiðir til innstreymis kalsíumjóna (Ca2 plús ), sem er a. lykilatburður í afkornun mastfrumna [3].cistanche ÁstralíuVirkjuðar mastfrumurnar afkorna og losa efnamiðlara. Þessir efnamiðlar sem notaðir eru í ofnæmisviðbrögðum geta valdið bólgu [4], þannig að meðferð á ofnæmiseinkennum felur í sér mastfrumueyðingarhemla. Þess vegna er hömlun á IgE-miðluðum mastfrumuhreinsun oft notuð til að bera kennsl á ný efnasambönd til að koma í veg fyrir og meðhöndla ofnæmissjúkdóma. Það hefur verið sýnt fram á að and-dinitrophenyl (DNP) IgE mótefni og mótefnavakar geta framkallað óvirka húð ofnæmisviðbrögð (PCA) sem dæmigert in vivo líkan af tafarlausu ofnæmi og sem rannsóknarlyf fyrir hugsanlega mótefnavakaofnæmi [5,6 ]. Að auki getur afkornun mastfrumna einnig stafað af örvandi efnum sem ekki eru ónæmir, eins og efnasambönd 48/80 og A23187. A23187 kalsíumjónófór, hefur lengi verið þekkt fyrir að örva seytingu mastfrumna með losun formyndaðra miðla, svo sem histamíns úr kyrnum þeirra, sem þjónar sem dæmi [4]Efnasamband 48/80 er blönduð fjölliða p-metoxý-N-metýlfenetýlamíns krosstengd með formaldehýði, sem er mikið notað til óháðrar örvunar mastfrumna [7,8]Þess vegna hefur viðeigandi magn af efnasambandi 48/80 og A23187 verið almennt notað sem hvarfefni til að rannsaka gangverk ofnæmisviðbragða. Samkvæmt tölfræðilegu mati þjáist um 15-20 prósent íbúa af ofnæmishúðbólgu. Hvort sem það eru börn eða fullorðnir sem þjást af þessum sjúkdómi, án viðeigandi meðferðar, getur ofnæmishúðbólga valdið sálrænum vanlíðan hjá sjúklingum og íþyngt fjölskyldu þeirra og félagslegum heilsukostnaði [9]. Því miður er engin hentug meðferðaraðferð til að lækna ofnæmishúðbólgu. Núverandi meðferðarmöguleikar forðast enn ofnæmisvalda sem valda sjúkdómum og stöðug notkun stera er gulls ígildi meðferðar. Óumflýjanlegir ofnæmisvaldar og aukaverkanir lyfja hafa leitt til brýnnar þróunar nýrra lækningalyfja. Náttúruleg efnasambönd einangruð úr lækningajurtum og plöntum eru hugsanlegar uppsprettur lækninga til að koma í veg fyrir og meðhöndla bólgusjúkdóma og bæta lífsgæði sjúklinga með ofnæmissjúkdóma.

Cistanche getur gegn öldrun

Tilvísunin kemur frá lótuskjarna (fósturvísi fræsins) plöntunnar Nelumbo nucifera og er aðal bisbenzýlísókínólín alkalóíð. Það eru vísbendingar um að tilvísun hafi margvíslega lyfjafræðilega eiginleika, eins og krabbameinslyf, andoxunarefni, bólgueyðandi og taugaverndandi áhrif, í mörgum sjúkdómum [10-15].cistanche bæturKhan o.fl. komist að því að tilvísun hefur áhrif gegn ljósöldrun með því að hindra UV-miðlaða aukningu á ROS og malondialdehýð(MDA) styrkum í glærufrumum og trefjakímfrumum úr mönnum[16,17]Nýlega komumst við að því að tilvísun hefur möguleika sem annað lyf til að meðhöndla ofnæmislyf. húðbólga eða aðrir húðtengdir bólgusjúkdómar[18]. Hins vegar er enn óvíst hvort tilvísun gegnir húðofnæmisáhrifum í mastfrumum. Í þessari rannsókn var stefnt að því að kanna áhrif tilvísunar á ofnæmissjúkdóma af völdum mastfrumna, með því að nota mastfrumulínur úr mönnum (RBL-2H3 frumur) og efnasamband 48/80-og bráðaofnæmi af völdum DNCB mús fyrirmynd.

Referencia proviene del núcleo de loto (el embrión de la semilla) de la planta Nelumbo nucifera y es un importante alcaloide de bisbencilisoquinolina. Það eru til vísbendingar um vísbendingar um ræktun, sem eru krabbameinslyf, andoxunarefni, bólgueyðandi og taugavarnarefni, og mikið af enfermedades [10-15]. Beneficios de la cistanche Khan o.fl. encontró que la referencia framleiða áhrif anti-fotoenvejecimiento al inhibir el aumento de los niveles de ROS y malondialdehído (MDA) mediado por UV en queratinocitos y fibroblastos humanos [16,17] de atópica dermatitis u otras enfermedades inflamatorias relacionadas con la piel[18]. Sin viðskiptabanni, sigue siendo incierto si la referencia tiene un efecto contra la alergia cutánea en los mastocitos. En este estudio, núestro objetivo fue investigar los efectos de referencia en las enfermedades alérgicas mediadas por mastocitos, utilizando lines de mastocitos humanos (células RBL-2H3) y un modelo de ratones con anafilaxia induce anafilaxia in DN8/8/8 .

2. Úrslit

2.1. Neferín frumueiturhrifapróf á rottumastfrumum (RBL-2H3)

Þar sem basophilic hvítblæði rotta (RBL)-2H3 frumur, histamín-losandi mastfrumu hliðstæða, eru hentugar frumur til að kanna áhrif mastfrumumiðlaðrar bólgu [19], notuðum við þessar frumur til að rannsaka ofnæmislyfið. áhrif tilvísunar. Í fyrsta lagi prófuðum við hvort tilvísunin geti framkallað frumueiturhrif í mastfrumum. Þegar frumurnar eru formeðhöndlaðar með tilvísun frá 1 til 30 μM í 24 klst, verður frumulífvænleiki frumna ekki fyrir áhrifum af viðmiðunarmeðferðinni (mynd 1).

2.2.Neferine dregur úr afkornunaráhrifum RBL-2H3 örvað af mismunandi virkjunum

RBL-2H3 frumur eru almennt notaðar í in vitro rannsóknir á kyrningahreinsun [20-22]örvun á RBL-2H3 frumum með and-dinitrófenóli (DNP)IgE og DNP-tengdu mannasermi albúmíni (HSA) kallar á kyrningamyndun. Að auki er vitað að mastfrumur brotna úr kyrningi til að bregðast við tilbúnum efnasamböndum, eins og efnasambandi 48/80 og kalsíumjónófóri A23187, og þessi efnasambönd hafa verið notuð sem þægileg hvarfefni fyrir beinar rannsóknir á verkunarháttum in vitro ofnæmisviðbragða [23, 24]. Niðurstöðurnar sýndu að umfrymi RBL-2H3 sem var ekki virkjað af virkjanum innihélt takmörkuð seytikorn.cistanche kólesterólMeðferð við tilvísun (10μM) ein og sér hafði ekki áhrif á virkni RBL-2H3 (Mynd 2A, B). Hins vegar, að bæta við mismunandi virkjana, þar á meðal efnasambandi 48/80, A23187 og and-DNP/IgE auk DNP/HSA, fyllti greinilega umfrymið af seytikornum. Í rafeindasmásjánni má sjá að mikill fjöldi seytikorna er í umfryminu og sum seytakyrni renna jafnvel saman við frumuhimnuna sem leiðir til afkornunar (Mynd 2C-E). Eftir formeðferð með viðmiðun 10 uM, minnkaði seytikornin í umfrymið verulega (Mynd 2F-H). Þessar niðurstöður benda til þess að tilvísun geti á áhrifaríkan hátt hamlað virkjun og afkornun RBL-2H3 sem örvað er af virkjanum.

2.3.Neferine hamlar PMA/A23187-Valkað innanfrumu kalsíumhækkun í RBL-2H3

Kalsíumjónir gegna hlutverki efri boðbera í frumuvirkjun. A23187 er áhrifaríkasta leiðin til að auka skarpskyggni kalsíumjóna í gegnum frumuhimnur og örva virkjun mastfrumna. Phorbol myristat acetate (PMA) getur virkjað prótein kínasa Cand og aukið kalsíumjónir innanfrumu til að auka áhrif A23187. Aukning kalsíumjóna í mastfrumum hefur einnig verið talin mikilvægur þáttur í því að örva virkjun mastfrumna þannig að það hefur áhrif á afkornun mastfrumna og losar meira bólgueyðandi cýtókín og kemókín.cistanche deserticola aukaverkanir,Þess vegna reyndi þessi rannsókn að kanna hvort tilvísunin geti hamlað styrk kalsíumjóna í RBL-2H3 þegar hún hamlar bólgu. Tilraunahópnum var skipt í með eða án viðmiðunarformeðferðar í 20 mínútur og 1 mM CaClz og PMA/A23187 var bætt við til að örva og virkja RBL-2H3. Tilraunaniðurstöðurnar sýndu að meðferð á RBL-2H3 með mismunandi viðmiðunarstyrk einum og sér hafði ekki áhrif á aukningu á styrk kalsíumjóna innanfrumu. Hjá PMA/A23187-örvuðu Ca2t innflæðishópnum jókst styrkur kalsíumjóna innanfrumu verulega. RBL-2H3 frumur voru formeðhöndlaðar í 20 mínútur með viðmiðun (3 μM og 10 μM) og styrkur kalsíumjóna minnkaði verulega (Mynd 3).

2.4.Neferín minnkaði mRNA-tjáningu bólgueyðandi cýtókína í PMA/A23187 örvað af RBL-2H3

Ónæmissvörun húðarinnar mun fjölga mastfrumum í líkamanum og mastfrumurnar munu þá framleiða bólgueyðandi frumur og flýta fyrir framgangi sjúkdómsins. Bólgueyðandi frumudrep, sérstaklega TNF-a, IL-6, IL-1 og IL-8, valda ekki aðeins bólgu heldur einnig íferð hvítfrumna, myndun granuloma og vefjatrefjun. PMA/A23187 verkar á mastfrumur og hvetur þær til að framleiða IL-16, IL-6, TSLP og TNF-, sem veldur ofnæmistengdri bólgu. Þess vegna formeðhöndluðum við RBL-2H3 með viðmiðun í 20 mínútur og örvuðum með PMA/A23187 í 6 klst. til að greina hvort tilvísunin geti lækkað mRNA tjáningu IL-1, IL{{ 19}}, TSLP og TNF-a. Niðurstöðurnar sýndu að í hópnum sem var meðhöndlað með viðmiðun einni og sér hafði tjáning cýtókíns mRNA ekki áhrif og tjáning mRNA í hópnum sem framkallaði bólgu af völdum PMA/A23187 jókst verulega. Í hópnum sem meðhöndlaður var með tilvísun kom í ljós að mRNA tjáningarstig IL-1, IL-6, TSLP og TNF-a voru verulega bæld (Mynd 4).

2.5.Neferine hindrar PMA/A23187-framkallað fosfórun á MAPK ferli í RBL-2H3

Fyrri rannsóknir hafa bent á að mastfrumur þurfa að losa kalsíumjónir innanfrumu til að virkja MAPK. Auk þess stjórnar MAPK boðleiðin tjáningu einfrumna, T eitilfrumna, B eitilfrumna, frumuefna og efnafrumna og veldur sjálfsofnæmi. Þetta fyrirkomulag er svipað og virkjunarleið PMA/A23187. Í þessari rannsókn könnuðum við hvort tilvísunin geti tekið þátt í stjórnun MAPK ferla. Við meðhöndluðum mismunandi viðmiðunarstyrk (1,3 og 10 uM) til RBL-2H3 í 20 mínútur og örvuðum síðan með PMA/A23187 í 30 mínútur til að framkalla bólgu. Niðurstöðurnar sýndu að þegar RBL-2H3 var meðhöndlað með mismunandi styrkleika viðmiðunar eingöngu, hafði virkjun p38, JNK og ERK próteina ekki áhrif. Í hópnum sem var meðhöndlaður með PMA/A23187 einum, komumst við að því að p38, JNK og ERK prótein voru virkjuð og hafa marktæka fosfórun. Í hópnum sem var formeðhöndluð með tilvísun kom fram að fyrir hærri viðmiðunarstyrk var fosfórun p38, JNK og ERK próteina verulega minnkað (Mynd 5A-C).

2.6.Neferín hindrar PMA/A23187-framkallað fosfórun á NF-B ferli í RBL-2H3

Tjáning bólgueyðandi cýtókína er háð virkjun umritunarþáttarins NF-kB í mastfrumum. Þegar IKB próteinið var fosfórýlerað og brotið niður, losnaði NF-kB og fluttist inn í kjarnann, bindist við samsvarandi DNA-viðbragðsefni þess og stuðlaði að umritun bólgueyðandi miðla. Mörg cýtókín og chemokín voru framleidd, sem stjórna ónæmissvörun, aðgreiningu og bólgu. Þess vegna könnuðum við hvort formeðferð með tilvísun hefði áhrif á próteinfosfórun af völdum PMA/A23187. Við meðhöndluðum mismunandi viðmiðunarstyrk (1,3 og 10 μM) fyrir RBL-2H3. Eftir 20 mínútur örvaði PMA/A23187 RBL-2H3 í 1 klst eða 2 klst til að framkalla bólgu. Niðurstöðurnar sýndu að meðferð á RBL-2H3 með mismunandi viðmiðunarstyrk eingöngu hafði ekki áhrif á fosfórun IKBa og NF-KB. Þegar PMA/A23187 var notað til örvunar kom fram marktæk aukning á fosfórun á IkBo og NF-KB. Í hópnum sem formeðhöndlaður var með tilvísun kom í ljós að fosfórun á IkBa (Mynd 6A) og NF-KB (Mynd 6B) minnkaði verulega.

2.7.Áhrif Neferíns á 2,4-Dinitróklórbensen(DNCB)framkallaða ofnæmishúðbólgu

Dýralíkan fyrir sjúkdómsrannsóknir, DNCB er dæmigert ertandi efni sem veldur ofnæmishúðbólgu[25]. Tilraunin okkar notar 1 prósent dínítróklórbensen (DNCB) uppleyst í 75 prósent alkóhóli til að framkalla fyrsta stig næmingarsvörunar. Viðmiðun (3mg/kg og 10 mg/kg) og dexametasón (Dexa,{{10}},2 mg/kg) uppleyst í DMSO voru gefin í kviðarhol á fimmta degi í tíu daga . Á 8., 1. og 14. degi var 0,5 prósent DNCB notað sem annað stig framkalla bólgu. Músum var skipt í fjóra hópa - samanburðarhóp, DNCB hóp, hóp sem fékk viðmiðunarmeðferð og hóp sem fékk dexametasón - og síðan, eftir samanburð á hópunum, kom fram munurinn. Við sáum að DNCB framkallaði ofnæmishúðbólguviðbrögð á húð músa. Eftir að DNCB var borið á, kom í ljós að húð músanna jók roða og flögnun. Þetta er allt vegna óeðlilegrar keratínfrumnafjölgunar, íferðar og samsöfnunar ónæmisfrumna. Hópurinn sem var meðhöndlaður með viðmiðun 3 mg/kg og dexametasón 0,2mg/kg í fjóra daga hafði dregið úr roða. Við héldum áfram að fylgjast með ástandi bakhúðarinnar á músunum fram á 15. dag. Í samanburði við samanburðarhópinn var DNCB hópurinn með alvarlega rauða og bólgna húðsjúkdóma og það voru flöskur og sár sem virtust stafa af kláða og sársauka. . Við getum fundið tilhneigingu til minnkandi stigs eftir meðferðir á tilvísun og dexametasóni (Mynd 7A). Tólúidín blár litur var notaður til að fylgjast með fjölda mastfrumna sem safnast saman. Mastfrumurnar virtust fjólubláar þegar þær voru skoðaðar í smásjá. Magnlega má sýna fram á að margar mastfrumur söfnuðust inn og söfnuðust upp í húð í DNCB tilraunahópnum og fjölgaði umtalsvert miðað við samanburðarhópinn. Í hópnum sem var meðhöndlaður með tilvísun og dexametasóni minnkaði íferð, samsöfnun og fjöldi mastfrumna (Mynd 7B, C).

2.8.Neferine bætir mRNA tjáningu hindrunartengdra sameinda eftir meðferð á DNCB

Húðtengd bólga af völdum AD getur valdið óeðlilegri starfsemi húðhindrana. Ef húðþröskuldurinn er gallaður er auðveldara fyrir mótefnavaka eða ertandi efni að komast inn í húðþekjuna og komast inn í líkamann til að framkalla ónæmistengd viðbrögð. Jafnframt verður dregið úr framleiðslu á sérhæfingarpróteinum, þar á meðal filaggrin, loricrin og involucrin. Þess vegna er mjög mikilvægt að endurheimta skemmda húðhindrun til að koma í veg fyrir og meðhöndla AD [26]. Í rannsókn okkar notuðum við tilvísanir til að grípa inn í dýralíkanið af ofnæmishúðbólgu af völdum DNCB. Eftir að músum var fórnað var bakhúðvefurinn jarðaður fyrir RI-qPCR greiningu til að meta hvort tilvísunin geti bætt mRNA tjáningu minnkun í filaggrin, loricrin og involucrin eftir meðferð á DNCB. Niðurstöðurnar sýndu að DNCB tilraunahópurinn hafði verulega dregið úr mRNA tjáningu á filaggrin, loricrin og involucrin samanborið við samanburðarhópinn. MRNA tjáning filaggrins, loricrins og involucrins var marktækt aukin í hópnum sem var meðhöndlaður með tilvísun og dexametasóni samanborið við DNCB hópinn (Mynd 8).

Við sönnuðum ennfremur að tilvísun hefur ofnæmisklóandi áhrif. Við notuðum mastfrumueyðingarefni, efnasamband 48/80, til að framkalla klórahegðun í BALB/c músum. Eins og sýnt er á mynd 9, komumst við að því að meðferð við tilvísun hamlaði klórahegðun af völdum efnasambands 48/80 (50 ug/staður). Endurtekin gjöf minni og stærri viðmiðunarskammta (3 og 10 mg/kg) í 5 daga í röð dró verulega úr fjölda rispna af völdum efnasambands 48/80.