Anterior Basolateral Amygdala taugafrumur samanstanda af fjarlægu óttaminni Engram Part 1

Kynning:

Ógnandi vísbendingar um umhverfið mynda oft varanlegar óttaminningar, en áfram er rannsakað hvernig þær myndast og geymdar.

Hræðsluminni er form af minni í heila okkar. Það er mjög sérstakt minningarform sem gerir okkur oft hrædd, hrædd og kvíðin. En sambandið á milli þessarar óttaminni og minnis okkar er mjög flókið.

Í fyrsta lagi hafa óttaminningar ekkert með skammtímaminni okkar að gera. Flestar óttaminningar eru geymdar í langtímaminnisbönkunum okkar. Þess vegna eru stundum minningar frá löngu liðnum tíma í huga okkar.

Í öðru lagi hafa óttaminningar ekki endilega áhrif á minni okkar. Þó að það geti valdið breytingum á athygli okkar og skapi, þá eru engar vísbendingar um að það valdi minnistapi. Margir geta enn sýnt mjög sterkar minningar eftir að hafa upplifað hræðilega hluti.

Að lokum ættum við ekki að leyfa hræddar minningar að verða þema í lífi okkar. Við verðum að grípa til jákvæðra aðgerða til að vinna úr þessum minningum og fara í jákvæðari átt. Þetta felur í sér að fá meðferð, vera félagslega virkur, æfa líkama og heila og viðhalda jákvæðu hugarfari og andlegri heilsu.

Svo, þó að hræðilegar minningar geti valdið okkur mikilli streitu og vanlíðan, verðum við að hafa trú á getu okkar og viðleitni. Við getum horfst í augu við þessar hræðilegu minningar, styrkt minni okkar, vaxið og orðið betra og öruggara fólk. Það má sjá að við þurfum að bæta minni okkar. Cistanche deserticola getur bætt minnið verulega vegna þess að Cistanche deserticola er hefðbundið kínverskt lækningaefni með mörg einstök áhrif, ein þeirra er að bæta minni. Virkni hakkaðs kjöts kemur frá hinum ýmsu virku innihaldsefnum sem það inniheldur, þar á meðal sýru, fjölsykrur, flavonoids o.fl. Þessi innihaldsefni geta stuðlað að heilsu heilans á margvíslegan hátt.

Smelltu á Vita skammtímaminni hvernig á að bæta

Minning á nýlegu óttaminni er talið endurspegla endurvirkjun taugafrumna, á mörgum heilasvæðum, virkjuð við myndun minni, sem gefur til kynna að líffærafræðilega dreifð og samtengd taugafrumnasamstæður samanstanda af hræðsluminni.

Að hve miklu leyti líffærafræðilega sértæk virkjun endurvirkjunar engrams haldast við langvarandi hræðsluminni er hins vegar að mestu ókannað. Við gerðum þá tilgátu að helstu taugafrumur í anterior basolateral amygdala (BLA), sem kóða neikvæð gildi, endurvirkjast bráðlega við endurköllun á fjarlægri ótta til að knýja fram óttahegðun.

Aðferðir:

Með því að nota fullorðin afkvæmi TRAP2 og Ai14 músa var þrálát tdTomatoexpression notuð til að „TRAP“ aBLA taugafrumum sem gengust undir Fos-virkjun við samhengishræðsluskilyrðingu (rafstuð) eða samhengisskilyrði (engin áföll) (n=5/hópur) . Þremur vikum síðar voru mýs endurútsettar fyrir sömu samhengisvísbendingum til að rifja upp fjarminni og síðan fórnað fyrir fosimmunohistochemistry.

Niðurstöður:

TRAPed (tdTomato +), Fos +, og endurvirkjað (tvöfalt merkt) taugasamstæður voru stærri í ótta en samhengisskilyrtar mýs, þar sem miðundirsvæði og mið-/stuðskautsfjórðungar aBLA sýndu mesta þéttleika allra þriggja hóphópanna.

Þar sem Tomato + ensembles voru yfirgnæfandi glútamatergískar í samhengi og óttahópum, var frosthegðun við fjarminningu ekki í tengslum við samstæðustærðir í hvorum hópnum.

Umræða:

Við komumst að þeirri niðurstöðu að þrátt fyrir að aBLA-innifalið óttaminnisrit myndast og haldist á afskekktum tímapunkti, þá hefur mýking áhrif á raflífeðlisfræðileg viðbrögð engram taugafrumna, ekki stofnstærð þeirra, umritar óttaminni og knýr fram hegðunarbirtingar langtímahræðsluminnis.

Kynning

Hræðsluáreiti mynda oft sterkar og varanlegar samskiptaminningar sem tengja umhverfisvísbendingar við ógnandi lífsatburði.

Síðari kynni við svipaðar ógnir leiða til öflugri verndarhegðun, sem endurspeglar muna eftir ótta. Villur í úrvinnslu óttasambanda geta valdið geðrænum niðurstöðum með neikvæðu gildi, þar á meðal kvíða og áfallastreituröskun (PTSD) (Tovote o.fl., 2015).

Skilningur á fullum flóknum aðferðum sem liggja að baki hræðsluminninu er nauðsynlegur til að bera kennsl á óeðlilegar hringrásir sem stuðla að óttatengdum geðsjúkdómum og benda til nýrra meðferðarmarkmiða til að endurheimta eðlilega óttavinnslu.

Undanfarna áratugi hafa rannsóknir á hræðsluminni að miklu leyti beinst að myndun skammtímaminni, geymslu og endurköllun (Kimand Jung, 2006; Kim og Cho, 2020; Lee o.fl., 2021).

Rannsóknir hafa bent á víða dreifðar samtengdar taugafrumur í miðtaugakerfi sem bera ábyrgð á myndun og geymslu ótta-minni (Ramirez o.fl., 2013; Liu o.fl., 2014; Roy o.fl., 2022). Virkjun þessara hópa með skynjuðum ógnum leiðir til aukinnar taugamótunarsendingar sem táknar viðvarandi líkamlegt áletrun sem kallast amemory engram (Yuan o.fl., 2011; Miyawaki og Mizuseki, 2022).

Talið er að skammtímaminnisminnjun endurspegli endurvirkjun sömu taugafrumnasamstæðunnar og voru upphaflega virkjaðar við myndun minnis, með vísbendingum sem benda til þess að jafnvel að hluta til virkjun eins taugafrumnasamstæðu geti framkallað óttatengda hegðun, sem gefur til kynna minnisminni (Roy o.fl., 2022) ). Þótt stöðuglega stöðug styrkt hringrás engrams geti útskýrt skammtíma óttaminni, er enn óljóst að hve miklu leyti þeir taka þátt í langtíma óttaminni.

Þótt talið sé að styrking langtímahræðsluminni sé háð stigvaxandi eða stöku styrkingu skammtímaminnis, benda nokkrar nýlegar rannsóknir til þess að skammtímahræðsluminni taugasamstæður gangist undir tímaháða endurskipulagningu, sem leiðir til flutnings á geymda minni til annars taugafrumnasamstæðu, annað hvort innan. sama heilasvæði (DeNardo o.fl., 2019) eða mismunandi heilasvæði að öllu leyti (Frankland og Bontempi, 2005; Do Monte o.fl., 2016).

Basolateral amygdala (BLA) er heilasvæði sem er óaðskiljanlegur í óttaminni og hefur verið bendlaður við bæði nýlegri og fjarlægri hræðsluminni (Maren o.fl., 1996; Gale o.fl., 2004; Kitamura o.fl., 2017; Liu o.fl. ., 2022).

Sérstaklega hafa skýrslur lýst sérstöku skammtímahræðslu-minni engram í BLA sem er (1) virkjað meðan á minnismyndun stendur, (2) endurvirkjað við minnisminni og (3) fær um að knýja fram óttalíka hegðun í samhengi sem ekki er ótta ( Royet al., 2022; Zaki o.fl., 2022). Hins vegar er enn óráðið hversu mikið aBLA taugafrumnasamsetning sem er virkjuð við myndun minnis er endurvirkjuð við fjarminningu.

Í þessari rannsókn prófuðum við þá tilgátu að endurvirkjun BLAfear minnissamstæðu sést á afskekktum tímapunkti 3 vikum eftir hræðsluskilyrðingu. Sérstaklega mikilvægt er að BLA-húsarásirnar stuðla bæði að andúðarhegðun og verðlaunaleitandi hegðun (Hu, 2016), þar sem taugafrumur með neikvæða gildisgildi sem bregðast við hræðsluáhrifum eru staðsettar sérstaklega fyrir fremri BLA (aBLA) (Goosensand Maren, 2001; Kim o.fl., 2016, 2017; Zhang o.fl., 2020).

Með því að einblína á aBLA, notuðum við annarrar kynslóðar markvissar endursamsetningar í erfðabreyttum músum (TRAP2) (DeNardo o.fl., 2019), þar sem Cre-recombinasa virkni er bundin við c-fos strax snemmbúna genahvataaukandi þætti með bættri Cre -estrógenviðtaka (ER) flókið. Taugatjáningar sem tjá þessa fléttu geta gengist undir viðvarandi Cre endurröðun, þ.e. hægt er að "TRAPED" með því að gefa ER agonisttamoxifen eða styttri verkandi hliðstæðu þess 4-hýdroxýtamoxifen (4-OHT), sem gerir kleift að tjá viðvarandi Cre -dependent effectoror reporter sameindir.

Hér fórum við yfir TRAP2 mýs og Cre-háða tdTomato fréttaritaralínuna Ai14 (Madisen o.fl., 2010) og magngreindum að hve miklu leyti aBLA taugafrumur sem eru fangaðar (tdTomatopositive) við samhengishræðsluskilyrðingu eru endurvirkjaðar (tjá Fos ónæmisvirkt prótein) við fjarminningu 3 vikum síðar.

Eins og í skammtíma óttaminni, styðja niðurstöður okkar tilvist langtíma glútamatergískrar óttaminni taugasamstæðu í aBLA.

Hins vegar var áberandi að stærð BLA-taugafrumnasamstæðu, hvort sem hún var virkjuð við endurköllun eða fjarminni eða hvort tveggja, var ekki í tengslum við óttahegðun, sem gefur til kynna að eðli hræðslunámstengdrar teygjanleika og að lokum áhrif hennar á fjarlægt óttaminni muna tengd raflífeðlisfræðileg svörun ensemble taugafrumna , ekki stærð hópsins, rekur fyrst og fremst fjarlæga óttaminni hegðun.

efni og aðferðir

Siðferðilegt samþykki

Tilraunaaðferðir voru samþykktar af Institutional Animal Care and Use Committee of the University of Texas Health SanAntonio og voru í samræmi við National Research Council Guide for the Care and Use of Laboratory Animals.

Dýr

Ræktunarpör af arfhreinum Fos2A−iCreER/2A−iCreER knockin (TRAP2, #030323) og R26Ai14/+ (Ai14, #007914) músum (Jackson Laboratories) voru krossaðar til að framleiða karlkyns hemizygousTRAP2:A afkvæmi (Fiigure TRAP2:A). Eftir frávenningu voru mýs flokkaðar og geymdar í plastbúrum (29 × 18 × 13 cm) sem innihéldu sængurföt fyrir nagdýr (Sani-chips; Harlan Teklad, Madison, WI, Bandaríkjunum). Vivarium var hitastýrt (24◦C) með 14 :10 ljós-myrkur hringrás (ljósin kveikt kl. 0600). Matur og vatn var fáanlegt að vild. Tilraunir voru hafnar þegar mýs náðu 3 mánaða gömlum.

Hegðunarvenja

Eins og í áður birtum rannsóknum (DeNardo o.fl., 2019) gengu mýsnar í gegnum fimm daga samfellda vanaþjálfun rétt fyrir samhengisóttaskilyrðingu til að lágmarka framkalla cfos til að bregðast við tilraunaaðstæðum en ekki vanrannsókn (td meðhöndlun, nýja samhengiskönnun o.s.frv.)( mynd 1B).

Hver dagleg vanalota stóð í 3 mínútur og samanstóð af váhrifum á aðbúnaðarhólfið (HabitestModular System, Coulbourn Instruments). Skynvísbendingar í stofu samanstóð af (1) 70% etanóli (lyktarskyn), (2) málmgrindargólf (happísk vísbending), (3) mynstraður bakgrunnur (sjónræn vísbending) og (4) sýnilegt ljós (sjónræn vísbending).

Að auki var öllum músum haldið í höndunum í eina mínútu áður en þær voru settar í aðbúnaðarhólfið og varlega "skrúfaðar" í 10 sekúndur þegar þær fóru út úr hólfinu. Venjustundir voru hönnuð til að líkja eftir meðhöndluninni sem mýs myndu upplifa á þeim degi sem ástandið var gert nema engar inndælingar í kviðarhol (IP) voru gerðar.

Skilyrði fyrir samhengishræðslu

Músum var næst skipt af handahófi í hópa með hræðsluskilyrt (lost) og samhengisskilyrt (ekki sjokk/aðeins samhengi). Skilyrðin hófst á degi 0 og fólst í því að músum var komið fyrir í ástandshólfinu og þær látnar rannsaka í 2 mín. Á næstu 4 mínútum á eftir fengu hræðsluskilyrtar mýs röð fimm feta högga sem stóðu í 1 sekúndu og 0.75 mAintensity.

Áföll voru gefin með ófyrirsjáanlegu millibili hjá músunum, en samt í samræmi milli músa. Samhengisskilyrði mýs gengust undir eins samskiptareglur að undanskildum fótáföllum (Mynd 1C). Við lok verkefnisins fékk hver mús inndælingu af 4-hýdroxýtamoxifeni (4-OHT, 100 mg/kg, IP) leyst upp í 4:1 kokteil af sólblómaolíu og laxerolíu útbúinn eins og áður hefur verið lýst (DeNardo o.fl., 2019).

Músum var síðan skilað aftur í búr sín þar sem þær voru látnar óáreittar í herberginu við hliðina á atferlissvítunni í að minnsta kosti 72 klukkustundir áður en þær hófust aftur í venjulegri vistun.

Þremur vikum eftir hræðsluskilyrðingu (dagur 21) fóru mýs í fjarlægar minnisprófanir (Mynd 1D) sem samanstóð af endurútsetningu fyrir prófunarhólfinu með skynjunarmerkjum eins og þeim sem voru til staðar við skilyrðing. Músum var leyft að kanna hólfið í 5 mínútur þar sem hræðsluhegðun (stöðufrysting) var skorin með því að nota FreezeFrame 4 myndbandsrakningarhugbúnað (ActiMetrics, Wilmette IL, Bandaríkjunum).

Heilafesting og vefjafræði

Níutíu mínútum eftir minnisprófun voru mýs djúpsvæfðar með ísóflúrani (5% í súrefni) og síðan gengust þær í gegnum hjartaflæði með 30 mL af heparínuðu (100 einingar/mL) ísótónískum saltvatni og síðan 100 mL af 4% paraformaldehýði (PFA) )í 0,1 M fosfatjafna.

Heilar voru fjarlægðir, eftirfixaðir í 4% PFA í 6 klst við stofuhita (∼22◦C) og krýóverndaðir í 30% súkrósa-0.01 M fosfatbuffer saltvatni (PBS) í að minnsta kosti 2 daga.

Heili var síðan skorinn í 30 µm þykka kransæðaskurð á frystandi míkrótóm (Leica Microsystems, Wetzlar, Þýskalandi) og hlutar sem innihéldu aBLA (Paxinos og Franklin, 2019), voru geymdir í pólývínýlpýrrólídóni (PVP) frostverndarefni við -20◦C-20.

Ónæmisvefjafræði

Ónæmislitun var framkvæmd eins og áður hefur verið lýst (Mitchell o.fl., 2018; Maruyama o.fl., 2019).

Í stuttu máli voru hlutar þvegnir í PBS til að fjarlægja PVP frostvarnarefni og ræktaðir í 30 mínútur í PBS sem innihélt natríumbórhýdríð (0.5%) til að fjarlægja sjálfflúrljómandi aldehýð sem myndast við festingu. Eftir viðbótar PBS þvott voru hlutar ræktaðir í blokkandi jafnalausn (3% geitasermi, 0,05% Triton-X-100 í PBS) í 2 klst við ~22◦C, fylgt eftir með ræktun við 4◦C í blokkandi jafnalausn sem innihélt apolyclonal kanínu c -Fos frummótefni (Ab) í 72 klst (1:1.500, taugakerfi #226 003) eða einstofna mús CaMKII aðal-Ab í 24 klst (1:500, Enzo Life Sciences, #ADI-KAM-CA002).

Eftir frekari þvott voru Fos og CaMKII hlutar ræktaðir aðskildir í 2 klst við ~22◦C í biotinylated geita anti-rabbitIgG secondary Ab (1:250 EMD Millipore #AP132B) fylgt eftir með raðþvotti í 0. 05 M tris-bufferað saltvatn (TBS) og 0,1 Mnatríum asetat síðan útsett fyrir streptavidin-Alexa Fluor 488 (1:250, Invitrogen #S11223) í 1 klst. í TBS-byggðri blokkunarlausn.

Að lokum voru hlutar þvegnir í Tris biðminni og settir á glærur með Fluoromount-G (Invitrogen, #00-4958-02).

Myndataka og greining

A{{0}}bita ljósmargfaldarrör sem tengist Zeiss LSM710laser skanna confocal smásjá, útbúið með viðeigandi leysilínum, var notað til að taka aBLA myndir með því að nota 20× hlutlæg (NA 0,8) og skannahaus pinhole stærð af 47,5 µm. Fyrir hverja mynd var ImageJ hugbúnaður (NIH, Bethesda, MD) notaður til að búa til aðskilin pixlakort af tdTomato (þ.e. TRAPed, rautt) og Alexa-488(Fos, grænt) flúrljómun.

Uppgötvun pixlaþröskulds og skörunar bylgjulengdar fyrir tvíþætta merkingu voru ákvörðuð með því að bera saman vefkafla sem voru unnar með og án Fo's aðal Ab eins og áður var lýst (Mitchell o.fl., 2018; Maruyama o.fl., 2019). hálfsjálfráða ImageJ tappi EzColocalization (Stauffer o.fl.,2018).

Myndum af aBLA var skipt í þrjú rostro-caudal undirsvæði af næstum jafnstórum, þar sem hvert undirsvæði var skilgreint af sérstöku svið rostral-caudal stereotaxic hnit miðað við tobregma: rostral, -0.8 til -1.1 mm; miðja, -1,2 til -1,5 mm; andcaudal, -1,6 til -1,9 mm (Paxinos og Franklin, 2019). Umsjónarmaður hagsmunasvæðis (ROI) í ImageJ var síðan notaður til að skipta theaBLA eftir dorsal-ventral og medial-lateral fjórðungum sínum miðað við jaðar þess. Þessu sniðmáti var síðan beitt á allar myndir innan hvers tilgreinds róstral-caudal undirsvæðis.

aBLAperimeter afmörkunin var notuð með ImageJ EzColocalization plug-in til að búa til 2-D staðbundið plot af öllum taugafrumum í hverri mynd. Rýmisreitir innan róstral-, mið- og caudal undirsvæðanna voru síðan lagðir sérstaklega yfir. Þetta leiddi til 10 hræðslu- og 10 samhengisreitna fyrir rostra undirsvæðið, 10 ótta- og 13 samhengisreitna fyrir miðju undirsvæðið og 12 ótta- og 13 samhengisreitna fyrir undirsvæðið um hnakkann.

Til að leiðrétta fyrir meiri fjölda undirsvæðamynda í samhengishópnum eru leiðréttingarstuðlar 1.0(10/10), 0.77 (10/13) og 0.92 (12/13) var beitt, í sömu röð, á róstrala, miðju og caudal undirsvæði samhengishópsins. Til að koma í veg fyrir hlutdrægni í staðfræðilegri dreifingu talninga í samhengisgögnum var notaður slembitölugjafi í MS Excel til að bera kennsl á hvaða tiltekna talninga ætti að útiloka frá hverju aBLA undirsvæði.

Næst skiptum við enn frekar aBLA undirsvæðum í fjórðunga, tilnefnda 1–4 (sjá mynd 2D). Til að gera það var hnitamótin (0,0) ákvörðuð í MS-Excel sem punkturinn í 2-D planinu þar sem flatarmál hvers fjórðungs var um það bil jafnt fjórðungi af heildarflatarmáli hvers rostral-caudal undirsvæðis. Kvadrantásar og xy-hnit hvers talningar voru ákvörðuð og snúið 30◦ réttsælis, þannig að þeir stilltu þeim saman við líffæraás aBLA.

Til að gera grein fyrir litlum breytileika í stærð undirsvæða og fjórðungs þeirra voru talningargögn staðlað í yfirborðsflatarmál (talningar/mm2) þannig að skráð gildi tákna þéttleika talninga á hvern undirsvæði eða fjórðung.

Til að meta örvandi svipgerð taugafrumna sem teknar eru af TRAP2 kerfinu okkar, var samstaðsetning á skilyrðingu-TRAPed tdTomatoexpression með kalsíum-calmodulin-háð prótein kínasaII (CaMKII), staðfest merki glútamatergískra taugafrumna (McDonald o.fl., 2002), magngreind frá myndir af að minnsta kosti þremur BLA hlutum í hverri mús með ImageJ frumuteljara viðbótinni.

Tölfræði

Tölfræðileg prófun var gerð með Prism 9.5.1 hugbúnaði (GraphPad, San Diego, CA, Bandaríkjunum) og innihélt prófun á eðlilegri dreifingu allra gagnasetta með því að nota Shapiro-Wilk próf. Samanburður á samfelldum gögnum var gerður með tvíhliða óparuðum nemenda t-próf ​​eða með tví- eða þríhliða ANOVA fylgt eftir af Sidak's og Tukey's multiple comparisontest, í sömu röð, fyrir par-vitan samanburð í kjölfar marktækra ANOVA milliverkana.

Innan hóps fylgnigreiningar var framkvæmd til að ákvarða r-stuðul Pearsons og samsvarandi P-gildi. Fylgni var borið saman milli hópa með því að nota Fisher'sZ umbreytingu (viðbótartafla 1). Hópgögn eru gefin upp sem meðaltal ± SEM. Tölfræðileg marktækni var stillt á P < 0.05.

Niðurstöður

Hræðsluskilyrðing framkallar fjarlægt ótta-minni engram

Til að ákvarða að hve miklu leyti aBLA-taugafrumur sem virkjaðar eru við myndun óttaminni eru endurvirkjaðar við fjarminningu, gengu mýs undir hræðslu (n=5) eða samhengisskilyrði (n=5) fylgt eftir með inndælingu á 4-OHT (Myndir 1A–C).

Við skoðun á hræðsluminnismyndun (þ.e. hræðslunám), kom fram marktækt samspil meðferðar (lost vs. ekkert lost) og tímaramma (30 sekúndur eftir hvert lost) á frosthegðun [tvíhliðaANOVA, F(5, 40)=6.733, P=0.0001]. Mýs með hræðslu sýndu aukinn frosttíma miðað við grunnlínu eftir lost 3 (275 ± 68% af BL, P=0.0203), 4 (486 ± 76% af BL, P < 0,0001) og 5 (402 ± 26) % af BL, P < 0,0001), og miðað við samhengisskilyrði músa eftir lost 4 (251 ± 38% af samhengi, p < 0,0001) og 5 (375 ± 25% af samhengi, p < 0,0001).

Eins og við var að búast sýndi endurútsetning á kælihólfinu fyrir fjarminni að rifja upp á 21. degi eftir kælingu, hræðsluskilyrðar mýs sem sýndu marktækt meiri tíma í frystingu samanborið við samhengisstýringar[346 ± 18%, óparað t-próf, t(8) {{7} }.16, P < 0.0001] (Mynd 1D).
Samanlagt benda gögnin á mynd 1 til þess að samskiptareglur okkar um hræðsluskilyrði hafi valdið öflugri myndun hræðsluminni og fjarlægri hræðsluminni.

Hræðslunám framkallar öflugt undirsvæðissértækt aBLA fyrir ensemble

Greining á TRAPed (tdTomato +) talningum leiddi í ljós marktækt stærra fos-virkjað aBLA þýði í óttaskilyrtum (110 ± 6,2) en samhengisskilyrðum (77 ± 3,1) músum[óparað t-próf, t(8)=4 .782, P=0.0014] (tafla 1). Eins og búist var við, voru ~70% af samhengis- og ~80% af ótta-TRAPed taugafrumum (n=6 aBLAsections/group) CaMKII + (viðbótarmyndir 1A, B), sem gefur til kynna að þær hafi fyrst og fremst verið glútamatergic projection neurons.

Svipað og fyrri skýrslur (Kim o.fl., 2016), skiptum við theaBLA í þrjú rostrocaudal undirsvæði: rostral, mið og caudal (myndir 2A–C) og bárum saman TRAPed count þéttleika (talningar/mm2) yfir undirsvæði innan og milli meðferðarhópa (Mynd 2D). Tvíhliða ANOVA leiddi í ljós marktæka víxlverkun milli undirsvæðis og meðferðar [F(2,24)=7.7099,P=0.0038].

Innan hópagreiningar leiddu í ljós að TRAPed countdensity var meiri á miðju aBLA undirsvæðinu í ótta (239 ± 9) og samhengishópum (144 ± 12) miðað við rostra (ótta: 86 ± 6,P < { {8}}.0001; samhengi: 81 ± 9, P=0.0035) og caudal (ótti:123 ± 15, P < 0,0001; samhengi: 90 ± 12, P {{20 }}.0132) undirsvæði.

Greining á milli hópa leiddi í ljós að þéttleiki TRAPed talningar var marktækt meiri á miðju undirsvæði óttaskilyrtra músa (P < 0.0001).

Til að afmarka enn frekar staðsetningu TRAPed taugafrumna, skiptum við rostral, mið og caudal aBLA undirsvæði í fjóra fjórða hverja (Mynd 2E). Á miðju undirsvæðinu sáust önnur meðferðaráhrif á talningarþéttleika [þrjáhliða ANOVA, F(1,32)=17.44, P=0.0002] með hærri TRAPedcount þéttleiki í hópi ótta en samhengis í fjórðungum 3 (218 ± 29 á móti 107 ± 17, P=0.0031) og 4 (240 ± 16 á móti 101 ± 12, P < 0,0001).

Við metum frekar innan hóps og innan fjórðungs TRAPed talningarþéttleika yfir aBLA undirsvæði (Mynd 2E og viðbótartafla 2). Sérstaklega, þegar borið er saman við róstra undirsvæðið (59 ± 8), hafði fjórðungur 2 af óttahópnum meiri þéttleika í FALLA bæði í miðjunni (245 ± 21, P < 0.0001) og caudal (172 ± 23, P=0.0040) undirsvæði.

Næst metum við tengslin milli frystingarhegðunar og stærðar FLAGT taugafrumnasamstæðunnar í öllu aBLA, á miðju undirsvæði þess, og í fjórðungum mið- og hnútaundirsvæða þar sem þéttleiki hópfjölda var mismunandi milli samhengis og óttaskilyrtra hópa. Engin marktæk fylgni sást hvorki í ótta- eða samhengishópnum (Mynd 2F), sem bendir til þess að hræðsluhegðun endurspegli ekki stærð hræðslunámsins í aBLA undirsvæðum.

Samanlagt benda niðurstöður á mynd 2 til þess að hræðsluskilyrðing hafi leitt til stærri fos ensemble í aBLA en samhengisskilyrðing. Ensemble taugafrumur voru þéttast staðsettar á miðju aBLA undirsvæðinu, en hræðsluhegðun tengdist ekki þýðisstærðum.

For more information:1950477648nn@gmail.com