Áhrifarík aðferð til að meðhöndla bandvefsmyndun í nýrum
Mar 17, 2022
fyrir frekari upplýsingar:ali.ma@wecistanche.com
Hluti Ⅰ: Endoplasmic reticulum prótein TXNDC5 stuðlar að nýrnatrefjun með því að knýja fram TGF-boð í nýrnatrefjum
Yen-Ting Chen, Pei-Yu Jhao & o.fl.
Kynning
Fibrosis í nýrum, sem einkennist af tubulointerstitialbandvefssjúkdómurog glomerular sclerosis, er algeng sjúkleg birtingarmynd flestra ef ekki allra tegundalangvarandinýrusjúkdóma(CKD)(1). Framvindan ánýrubandvefssjúkdómurhjá sjúklingum með langvinnan nýrnasjúkdóm leiðir til hægfara taps ánýruvirka, sem gæti að lokum leitt til nýrnasjúkdóms á lokastigi (ESRD) sem krefst skilunar eðanýruígræðsla (2). Þó að sýnt hafi verið fram á að margar sameindaákvarðanir og leiðir geti stuðlað að ferlinufibrosis í nýrum, umbreytandi vaxtarþáttur-beta (TGF-) er almennt álitinn aðalstjórnandi á trefjamyndun nýrna (3). Í kjölfar meiðsla ánýru, skemmdar pípulaga þekjufrumur (TECs) eru stöðvaðar í G2/M fasa og seyta miklu magni af TGF-, sem kallar á virkjun og umbreytingu aðliggjandi nýrnatrefja í nýrnafrumur í vöðvafíbroblasta (4-6). Virkjaðir vöðvafíbróblastar, sem einkennast af tjáningu a-sléttra vöðvaaktíns (SMA), fjölga sér mjög og framleiða utanfrumu fylkisprótein (ECM) eins og fibrillar kollagen, elastín, fibronectin og CCN2 (almennt þekktur sem bandvefsvaxtarþáttur, CTGF)(7,8). Á fyrstu stigum nýrnaskaða,bandvefssjúkdómurvar hafin sem aðlögunarhæf og sjálftakmörkuð lífeðlisfræðileg svörun sem hjálpar til við að gera við vef og viðhalda skipulagsheilleika (9). Hins vegar, eftir langvarandi, endurtekinn nýrnaskaða, er virkjun og fjölgun vöðvafíbroblasta viðvarandi, sem leiðir til óhóflegrar ECM framleiðslu og uppsöfnun, sem leiðir til taps á starfhæfu nýrnahlífum og að lokum nýrnabilunar (1O,11).
Smelltu til að Cistanche para que sirve fyrir nýrnasjúkdóm
Þrátt fyrir framfarir í nútíma læknisfræði hafa fáar klínískar meðferðir reynst árangursríkar gegnfibrosis í nýrum. Til dæmis hefur verið sýnt fram á að angíótensín-umbreytandi ensímhemlar (ACEI) og angíótensínviðtakablokkar (ARB) draga úr próteinmigu, draga úrnýrubandvefssjúkdómur, og hægja á framvindu langvinnrar nýrnasjúkdóms (12,13). Pentoxifylline, ósértækur fosfódíesterasa hemill, hefur aftur á móti verið sýnt fram á að hindra TGF- 1-framkallaða ECM og CCN2 tjáningu, sem leiðir til veiklaðrar tubulointerstitialbandvefssjúkdómur(14). Notkun ACEI og ARB er hins vegar takmörkuð af blóðþrýstingslækkandi áhrifum þeirra og hugsanlegum aukaverkunum eins og blóðkalíumhækkun. Að auki gátu hvorki ACEls/ARBs né pentoxifyllin meðferð stöðvað framgangnýrubandvefssjúkdómurog CKD(15,16). Það er því mikilvægt að greina nýja miðla eða leiðir sem eru mikilvægar fyrir meingerðnýrubandvefssjúkdómurað þróa árangursríkar meðferðir gegn langvinnri lungnateppu(langvinnir nýrnasjúkdómar).
Nýlega greindum við þíóredoxín lén sem inniheldur 5 (TXNDC5), ER-búið, trefjafrumuauðgað prótein með ensímvirkni próteinsúlfíðísómerasa (PDI), sem mikilvægan miðlara hjartabandvefssjúkdómur(17). Við sýndum að of mikið TXNDC5 stuðlar að þróun hjartabandvefssjúkdómurmeð redox-háðri hjartavefjavirkni og ECM framleiðslu. Erfðafræðileg eyðing á Txndc5 bætir hjartabandvefssjúkdómurog samdráttarvandamál af völdum örva í músum (17). Byggt á mikilvægu hlutverki TXNDC5 í hjartavöðvamyndun, gerðum við tilgátu um að TXNDC5 gæti einnig stuðlað að þróun vefjabandvefssjúkdómurí líffærum sem ekki eru hjartað, sérstaklegafibrosis í nýrum.
Í þessari rannsókn sýndum við fram á að TXNDC5 var mjög uppstýrt bæði í trefjanýrum úr mönnum og músum, sérstaklega í nýrnatrefjum sem seyta kollagen. Alheimseyðing á Txndc5 dró verulega úr umfanginýrubandvefssjúkdómurí mörgum múslíkönum af nýrnaskaða. Vélrænt sýndum við fram á að of mikið TXNDC5, framkallað af TGF- 1 í gegnum ATF6-háðan ER streituferil, eykurnýrubandvefssjúkdómurmeð því að stuðla að virkjun/fjölgun vefjafruma í nýrum og ECM framleiðslu með stöðugleika eftir þýðingu og uppstjórnun á TGF-viðtaka gerð I(TGFBR1). Mikilvægt er að við sýndum fram á að örvun á trefjakímfrumnasértækri eyðingu á Txndc5 bætti á áhrifaríkan hátt þróun og framvindufibrosis í nýrumframkallað af ýmsum tegundum meiðsla í músum, sem bendir til þess að miða á TXNDC5 gæti verið ný og öflug nálgun til að meðhöndlanýrubandvefssjúkdómurog varðveitanýruvirka.
Mynd 1. TXNDC5 var marktækt uppstýrt í trefjabundnum nýrum músa og nýrnasýnum frá sjúklingum með langvinnan nýrnasjúkdóm.( langvinnir nýrnasjúkdómar).
(A) IHC litun (n=3) og (B) ónæmisblettingar (n=6) sýndu að próteintjáning TXNDC5 var uppstýrt í trefjabundnum nýrum músa af völdum UUO eða uIRI, samanborið við gagnhliða nýru (CL) . Mælikvarðarstöng: 50 μm.
(C) Magnbundin RT-PCR sýndi að Txndc5 afrit var uppstýrt í trefjabundnum nýrum músa af völdum UUO og uIRI (n=4-7).
(D) Endurgreiningar á gögnum um örfylki á nýrnasýnum úr mönnum frá sjúklingum með langvinna lungnateppu (GSE66494) sýndu að TXNDC5, COL3A1 og FN1 voru marktækt uppstýrt í nýrnavef frá langvinnum nýrnasjúklingum (heilbrigð viðmiðun n=8, langvinn lungnateppa n {{ 6}}). Fyrir A–C eru gögn dæmigerð fyrir 3 eða fleiri sjálfstæðar tilraunaendurtekningar.
Fyrir öll spjaldið eru gögn sett fram sem meðaltal ± SEM. *P < {{0}}.05,="" **p="">< 0,01,="" ***p="">< 0,001="" með="" 2-hliða="" t-prófi="" (a–c)="" eða="" mann-="" whitney="" próf="">
Niðurstöður
TXNDC5 var marktækt uppstýrt í trefjanýrum úr mönnum og músum. Til að kanna hugsanlega þátttöku TXNDC5 í meingerðfibrosis í nýrum, ákváðum við fyrst próteintjáningarmagn þess í trefjabundnum nýrnavef músa af völdum einhliða þvagrásarstíflu (UUO), einhliða blóðþurrðar-endurflæðisskaða (uIRI) eða með gjöf fólínsýru (FA). Ónæmisvefjaefnafræðirannsóknir leiddu í ljós marktæka aukningu á styrk TXNDC5 litunar í nýrnahlutum úr öllum 3 múslíkönunum afnýrubandvefssjúkdómur(Mynd 1A og viðbótarmynd 1A; viðbótarefni aðgengilegt á netinu með þessari grein; https://doi.org/10.1172/JCI143645DS1). Ónæmisbletting og megindleg öfug umritun PCR(RT-PCR) sýndu einnig marktæka uppstjórnun próteins (Mynd 1B) og umrits (Mynd 1C og viðbótarmynd 1B) tjáningargildi TXNDC5 í trefjabundnum músarnýrum. Í samræmi við þessar niðurstöður sýndi endurgreining á gögnum um örfylki sem fengin voru úr sýnum úr nýrnavefsýni sjúklinga með CKD(GSE66494)(18) að tjáningarstig TXNDC5 (um 2,24 falt, P<0.001), as="" well="" as="" of="" markers="" for="">fibrosis í nýrumeins og COL3A1 og FN, var einnig marktækt aukið í nýrnasýnum frá sjúklingum með langvinnan nýrnasjúkdóm samanborið við heilbrigða viðmiðunarhópa (mynd 1D og viðbótarmynd 1C). Samanlagt bendir uppstillingin á TXNDC5/Txndc5 tjáningu í trefjabundnum manna-/músnýrum og jákvæð fylgni þess við trefjamyndandi ECM próteingen til hugsanlegs hlutverks TXNDC5 í meingerðfibrosis í nýrum.
Mynd 2. TXNDC5 var mjög uppstýrt í nýrnatrefjum, en ekki í TEC, æðaþelsfrumum eða fræfrumum, í trefjanýrum.
(A og C) IF litun á TXNDC5 (rautt) á hluta af trefjabundnum nýrum af völdum UUO í Col1a1-GFPTg músum sýndi að TXNDC5 var aðallega tjáð í nýrnatrefjum sem seyta kollageni (grænum), bæði í nýrnaberki og merg (n=6). Frumukjarnar voru litaðir með DAPI (bláum). Mælikvarðarstöng: 100 μm.
(B) IF litun á TXNDC5 (grænt) á hluta trefjabundinna nýrna sem UUO framkallar í Cdh16-Cre, NPHS2-Cre og Tie2-Cre/ERT2 tdTomato músum. Frumukjarnar voru litaðir með DAPI (bláum). Mælikvarðarstöng: 100 μm.
(D) Bökurit til að sýna hlutfall TXNDC5 plús frumna í mismunandi gerðum nýrnafrumna í trefjanýrum af völdum UUO.
Gögnin eru dæmigerð fyrir 3 eða fleiri sjálfstæðar tilraunaendurtekningar. Gögn í C eru sett fram sem meðaltal ± SEM.
TXNDC5 var mjög auðgað í nýrnatrefjum sem seyta kollageni í trefjanýrum. Margar gerðir nýrnafrumna hafa verið bendlaðir við ferlið við trefjamyndun nýrna. Í kjölfar nýrnaskaða var sýnt fram á að vefjafrumur (19) og perivascular (20) nýrnatrefja aðgreindust í virka vöðvavefjafrumur og leiða til uppsöfnunar á ECM. Einnig var greint frá því að TEC og æðaþelsfrumur stuðlaði að þróunfibrosis í nýrumí gegnum þekju- og æðaþels-til-mesenchymal umskipti, í sömu röð (10,21). Til að ákvarða frumugerðir þar sem TXNDC5 var tjáð á meðan á nýrnaferlinu stóð.bandvefssjúkdómur, margar blaðamúsarlínur sem leyfa flúrljómunarmerkingu á nýrnatrefjum (Colla1-GFP', GFP knúið áfram af Collal enhancer/promoter, tilv.22), TECs(Cdh16-Cre ROSA26- tdTomato), æðaþelsfrumur (Tie2-Cre/ERT2 ROSA26-tdTomato) og fræfrumur (NPHS2-Cre ROSA26-tdTomato) urðu fyrir UUO, uIRI eða FA meðferð til að framkallafibrosis í nýrum. Ónæmisflúrljómun (IF) litun á nýrnahlutum frá þessum dýrum leiddi í ljós að TXNDC5 var verulega uppstýrt og mjög samsett með GFP-jákvæðum, kollagen-seytandi nýrnatrefjum í trefjabundnum músarnýrum af völdum UUO (81 prósent) (Mynd 2, A og C) , uIRI (76,8 prósent) og FA-meðferð (73,4 prósent) (viðbótarmynd 2, A og B). Í trefjabundnum nýrum af völdum UUO, var TXNDC5 aðeins tjáð af og til í TECs (5,94 prósent), fræfrumum (0.63 prósent ),og æðaþelsfrumum (2,05 prósent )(Mynd 2,B og D). Flæðifrumumælingar á trefjafrumum einangruðum úr músarnýrum sem urðu fyrir UUO leiddi í ljós marktæka stækkun í TXNDC5* nýrnatrefjum sem og marktæka uppstjórnun á TXNDC5 í þessum frumum, borið saman við þá sem eru frá gagnhliða stjórnnýrum (viðbótarmynd 2C). Mikil auðgun TXNDC5 í nýrnatrefjum í trefjafrumum bendir til þess að TXNDC5 gæti stuðlað aðfibrosis í nýrummeð því að stjórna virkni/hegðun þessara kollagen-seytandi trefjafrumna.
TXNDC5 var bæði nauðsynlegt og nægjanlegt til að örva virkjun, fjölgun og ECM framleiðslu á nýrnatrefjum. Næst ákváðum við starfrænt hlutverk TXNDC5 í nýrnatrefjum. Primary nýrnafibroblasts (HKFs) örvaðir með TGF- 1(10 ng/ml) sýndu sterka uppstjórnun í próteininu (Mynd 3A) og umriti (Mynd 3B) tjáningargildi TXNDC5, sem og vefjakveikjuvirkjunarmerkinu periostin og ECM prótein (COL1Al, fibronectin og CCN2). Brot á TXNDC5 með shRNA dró verulega úr TGF- 1-uppstýringu próteins/mRNA á periostini og mörgum ECM próteinum í HKFs (Mynd 3, A og B). Að auki jók TGF1 meðferð fjölgunarvirkni HKFs, sem var afnumin að fullu með TXNDC5 knockdown (Mynd 3D). Þessar niðurstöður benda til þess að TXNDC5 sé nauðsynlegt fyrir TGF- 1-framkallaða HKF virkjun, fjölgun og ECM framleiðslu. Oftjáning á TXNDC5 leiddi aftur á móti til marktækrar uppstýringar á periostíni, COL1A1 og fíbrónektíni (Mynd 3C), auk aukinnar fjölgunarvirkni (Mynd 3E) í HKFs. Samanlagt sýna þessar niðurstöður að TXNDC5, aftan við TGF- 1, er bæði nauðsynlegt og nægjanlegt til að stuðla að virkjun, fjölgun og ECM framleiðslu á nýrnatrefjum.
Mynd 3. Niðurlæging á TXNDC5 veikt TGF- 1-framkallað HKF virkjun og ECM framleiðslu; oftjáning á TXNDC5 nægði til að kveikja á HKF virkjun og ECM framleiðslu.
(A) Prótein og (B) umritatjáningarmagn fibroblast virkjunarmerkja (periostin) og ECM próteina (COL1A1, fibronectin og CCN2) jukust í viðmiðunar- (Scramble) HKF eftir TGF- 1 (10 ng/ml) meðferð. Niðurfelling á TXNDC5 dró úr uppstýringu þessara trefjamyndandi merkja sem TGF- 1 framkallaði í HKFs (n=5–10).
(C) Oftjáning á TXNDC5 var nægjanleg til að framkalla uppstýringu á vefjafrumuvirkjunarmerki (Periostin) og ECM próteinum (COL1A1, fibronectin) í HKFs (n=3-10).
(D) Meðhöndlun á TGF- 1 (10 ng/ml) jók frumufjölgunarvirkni HKFs, sem var aflétt með TXNDC5-hækkun.
(E) Oftjáning á TXNDC5 jók frumufjölgunarvirkni HKFs. Í D og E, n=10. Gögnin eru dæmigerð fyrir 3 eða fleiri sjálfstæðar tilraunaendurtekningar.
Fyrir öll spjaldið eru gögn sett fram sem meðaltal ± SEM. Tölfræðileg marktækni mismunar fyrir 2 hópa var ákvörðuð með 2-hliða t-prófi og meðal 3 eða fleiri hópa var það ákvarðað með 1-leið ANOVA, fylgt eftir með Post hoc prófunum frá Sidak. *P < 0.05,="" **p="">< 0.01,="" ***p=""><>
Alheimseyðing á Txndc5 varið gegn nýrum b. Til að ákvarða kröfuna um TXNDC5 í þróunfibrosis í nýrumin vivo, WT og Tndc5-/mýs fóru í UUO, uIRI og FA meðferð. Picrosirius rauður og þríkróm litun Massons á nýrnahlutunum sýndi miklanýrubandvefssjúkdómurí WT músum eftir UUO (Mynd 4A), uIRI (Mynd 5A), og gjöf FA (Viðbótarmynd 3A). Alheimseyðing á Txndc5 dró verulega úr umfanginýrubandvefssjúkdómurí öllum 3 nýrnaskaðalíkönunum (mynd 4A, mynd 5A og viðbótarmynd 3A).
Mynd 4. Eyðing á Txndc5 veiklaðri bandvefsmyndun í nýrum af völdum UUO.
(A) Picrosirius rauð litun (efstu 2 spjöld) og Masson's trichrome litun (neðri 2 spjöld) á nýrnahlutum frá WT og Txndc5-7 músum 10 dögum eftir UUO. Súlurit af megindlegum niðurstöðum Picrosirius rauða og þríkróm litunarsvæða Massons eru sýnd til hægri (n=5-10). Skalastrik∶ 100 μm.
(B)SHG myndir af nýrnahlutum frá WT og Txndc5-/músum 10 dögum eftir UUO. Megindlegar niðurstöður SHG-jákvæðra svæða sýndu aukna uppsöfnun á fibrillar kollageni (grænt) í WT en ekki í Txndc5-mýs nýrum eftir áverka.
Fyrir hvern nýrnahluta sem tekinn var á mynd fyrir SHG var TPEF myndgreining fengin til að sýna prófíl skannaða vefsins (rauður litur í neðstu spjöldum)(n=3). Kvarðarstika: 50 um. (C)Immunoblots sýndu próteintjáningarmagn fibroblast virkjunarmerkis (Periostin) og ECM(COL1A1) í heilnýra útdrættinum frá WT og Txndc5-/músum 10 dögum eftir UUO (n= 3-6). Gögnin eru dæmigerð fyrir 3 eða fleiri sjálfstæðar tilraunaendurtekningar.
Fyrir öll spjaldið eru gögn sett fram sem meðaltal± SEM. Tölfræðilega mikilvægi mismunar milli 3 eða fleiri hópa var ákvarðað með 1-leið ANOVA, fylgt eftir með Post hoc prófunum frá Sidak.**P<><>
Til að mæla sjúkdómsvaldandi fibrillar kollagen (gerð I og II) sérstaklega og til að forðast ofmat á trefjasvæðum með hefðbundnum litunaraðferðum, second harmonic generation (SHG) smásjá, nýtt sjónvefsmyndakerfi sem gerir kleift að sjá þráða, en ekki ótrefja, kollagen í trefjalíffærum (23,24), var notað til að meta umfangbandvefssjúkdómurí WT og Tndc5 plús nýrum músa eftir meiðsli. Í samræmi við áðurnefndar niðurstöður sýndi SHG smásjárskoðun merkjanlega aukningu á fibrillar kollagenútfellingu í WTnýrum í kjölfar UUO (Mynd 4B), uIRI (Mynd 5B), og FA meðferð (Viðbótarmynd 3B), en umfang þeirra minnkaði verulega í Txndc{{ 4}}/ mýs (Mynd 4B, Mynd 5B, og viðbótarmynd 3B).
Í samræmi við veiklaða trefjasvörun eftir meiðsli í Txndc5 músarnýrum sem kom fram í myndrannsóknum, dró úrfelling á Tendc5 einnig úr uppstýringu ECM próteingena, þar á meðal Collar, Eln, Fnl og Ccn2 í músarnýrum eftir meiðsli (viðbótarmynd 3, CE). Ónæmisblettir af lýsötum af heilnýrum vefjum sýndu einnig minnkað próteinmagn ECM(COLIA1) og vefjafrumuvirkjunarmerkis (periostin) í Txndc5-/músum samanborið við WT mús eftir UUO og uIRI (Mynd 4C og Mynd 5C).
Mynd 5. Eyðing á Txndc5 bættri nýrnatrefjun af völdum ulRI.
(A) Picrosirius rauð litun (efri 2 spjöld) og Masson's trichrome litun (neðst 2 spjöld) á nýrnahlutum frá WT og Txndc5-7 músum 28 dögum eftir ulRI.Súlurit af megindlegum niðurstöðum Picrosirius red og Masson's trichrome litunarsvæði eru sýnd til hægri (n=6). Skalastöng∶ 100 μm.
(B) SHG myndir af nýrnahlutum frá WT og Txndc5-músum 28 dögum eftir ulRI. Megindlegar niðurstöður SHG-jákvæðra svæða sýndu aukna uppsöfnun á fibrillar kollageni (grænt) í WT en ekki í Txndc5-mýs nýrum eftir áverka. Fyrir hvern nýrnahluta sem tekinn var á mynd fyrir SHG, var TPEF myndgreining fengin til að sýna prófíl skannaða vefsins (rauður litur í neðstu spjöldum)（n=3）. Skalastika∶50 μm.
(C) Immunoblots sýndu próteintjáningarstig fibroblast virkjunarmerkis (Periostin) og ECM(COL1A1) í heilnýra útdrættinum frá WT og Txndc5/músum 28 dögum eftir ulRI (n=5-9). Gögnin eru dæmigerð fyrir 3 eða fleiri sjálfstæðar tilraunaendurtekningar.
Fyrir öll spjaldið eru gögn sett fram sem meðaltal ± SEM. Tölfræðilega mikilvægi mismunar milli 3 eða fleiri hópa var ákvarðað með 1-leið ANOVA, fylgt eftir með Post hoc prófunum frá Sidak.*P<><><>
Til að útiloka möguleikann á því að TXNDC5 tjáð í öðrum nýrnafrumugerðum eins og TEC, fræfrumum og æðaþelsfrumum gæti samt stuðlað að þróunnýrubandvefssjúkdómur, við mynduðum Txndc5 skilyrt knockout mýs sem eru sértækar fyrir TECs (Cdh16-cre*Txcndc5i, eða Txndc5Epeko), podocytes (NPHS2-cre*Txndc5/n, eða Tendc5Podxko) og æðaþelsfrumur (Tie{{ 7}}cre/ERT2*Tendc5/, eða Txndc5Endo.eko). Í tilraunum með Txndc5Pieko og Txndc5 Poio-cko mýs voru Txndc5Wmice notaðar sem viðmiðunartæki; í tilraunum á Txndc5EMio-eko músum var Txndc5 eyðing framkölluð með því að nota tamoxifen eins og lýst er á mynd 9A, þar sem tamoxifen-meðhöndlaðar Tie2-Cre/ERT2 mýs voru notaðar sem viðmið. Markviss eyðing Txndc5 í TEC, fræfrumum eða æðaþelsfrumum hafði hins vegar ekki áhrif á umfangfibrosis í nýrumframkallað af UUO eða FA (viðbótarmynd 6, BE). Þessar niðurstöður benda til þess að TXNDC5 tjáð í TECs, fræfrumum og æðaþelsfrumum stuðli lítið ef nokkurt að meingerðnýrubandvefssjúkdómur.
Eyðing á Txndc5 í nýrnatrefjum verndar gegn TEC apoptosis sem svar við nýrnaskaða. Í vinnslu ánýrubandvefssjúkdómur, slasaðir TECs missa starfsemi hvatbera og apicobasal pólun, fylgt eftir með frumudauða og frumudauða(30). Til að kanna hvort eyðing á Txndc5 hafi áhrif á apoptosis TECs sem svar við meiðslum, gerðum við TUNEL litun á WT og Txndc5-mús kafla 10 dögum eftir UUO. Fjöldi apoptótískra TECs jókst verulega í trefjanýrum af völdum UUO í WT músum, en brottfall Txndc5 dró úr umfangi TECapoptosis. Greint hefur verið frá því að virkjaðir nýrnatrefjafrumur gætu framkallað TEC frumudauða með paracrine áhrifum (31). Vegna þess að Tendc5 er varla tjáð í TEC, er líklegt að minnkuð TEC frumuddrun sem sést í Txndc5-7músum eftir UUO hafi ekki verið frumusjálfstæð áhrif heldur frekar afleidd minnkað millivefbandvefssjúkdómurog þar af leiðandi fáir proapoptótísk merki frá nærliggjandi nýrnatrefjum. Í samræmi við þessa tilgátu, dró úr vefjafrumu-sértækri eyðingu á Txndc5 (Tendc5kO) TEC frumudauða í svipað mæli og sást hjá Txndc5-/músum 10 dögum eftir UUO (viðbótarmeðferð). Öfugt við minnkun á TECapoptosis, fjöldi F4/80-jákvæðra átfrumna og CD31-jákvæðra æðaþelsfrumna var sambærilegur í WT og Txndc5-músarnýrum, með eða án UUO, sem bendir til þess að Txndc5 eyðing hafi ekki áhrif á íferð átfrumna eða peritubular capillary þéttleiki í nýrum músa. Samanlagt benda þessi gögn til þess að endurnýjunarverndaráhrif eyðingar Txndc5 stafi af minni millivef í pípulagabandvefssjúkdómurog TEC apoptosis, án þess að hafa áhrif á þéttleika nýrnaháræða eða átfrumur.
Völdum brottfalli á Tendc5 í nýrnatrefjum dró úr framgangi staðfestufibrosis í nýrum. Til að ákvarða hvort miðun á Txndc5 í nýrum gæti verið gagnleg í staðfestunýrubandvefssjúkdómur, Txndc5 eyðing í nýrnatrefjum var framkölluð í Txndc5eko músum 10 dögum eftir UUO, tímapunkti þegar mikilnýrubandvefssjúkdómurhægt að fylgjast með. Í þessum tilraunum voru tamoxifenmeðhöndlaðar Colla2-Cre mýs notaðar sem viðmið. Eins og sést höfðu Colla2-Cre og Tcndc5eko mýs svipað umfang afnýrubandvefssjúkdómur10 dögum eftir UUO fyrir tamoxifen meðferð. Ellefu dögum eftir inndælingu tamoxifens hélt umfang bandvefsmyndunar í nýrum hins vegar áfram að versna hjá viðmiðunarmúsum (trefjasvæði jókst úr 5,1 prósent í 10,6 prósent), en versnunnýrubandvefssjúkdómurvar næstum stöðvuð (trefjasvæði breytt úr 5,3 prósentum í 6,9 prósent) í Txndc5eko músum. Immunoblotting sýndi einnig verulega veiklaða uppstjórnun á CCN2, periostin og TGFBR1 í Txndc5eko músum samanborið við samanburðarmús á milli D10 og D21 eftir UUO. Þessar niðurstöður sýna að inngripseyðing á Txndc5 í nýrnatrefjum dregur verulega úr framgangifibrosis í nýrum, sem bendir til þess að in vivo miðun á TXNDC5 gæti verið ný og öflug meðferðaraðferð til að bætanýrubandvefssjúkdómurog hægja á framgangi langvinnrar nýrnasjúkdóms.
