Tilviljunarlaus rannsókn sem rannsakar áhrif neyslu á brúnum hrísgrjónum á örverur í þörmum, athygli og skammtímavinnuminni hjá taílenskum skólaaldri börnum 2. hluti

2.4. Magngreining á saurörveru

Saursýnum var safnað úr börnum við grunnlínu, viku 4, 15, 56 og 61 og viku 71 í dauðhreinsuðum ílátum og voru strax fryst við -80 ◦C. Útdráttur úr örveru-DNA og magnmæling á algeru magni saurlífvera var framkvæmd eins og áður hefur verið lýst [29].

Samband magnmælinga og minnis er efni sem vert er að rannsaka. Fyrir mörg vandamál í lífinu eru minnisvandamál oft þau sem trufla fólk, eins og að geta ekki munað mikilvæga hluti, gleymt fundartíma o.s.frv. Á þessum tíma geta megindlegar mælingaraðferðir hjálpað okkur að skilja stöðu minnisins og gera markvissar umbætur .

Megindmælingaraðferðir geta magnmælt minni fólks með vísindalegum hætti. Á þessum grundvelli eru nokkrar sérstakar og árangursríkar aðferðir lagðar til til að þjálfa minni. Í daglegu lífi getum við líka notað einfaldar aðferðir til að þjálfa minnið, eins og að leggja orð á minnið, ljóð o.s.frv. Allt eru þetta áhrifaríkar leiðir til að þróa gott minni.

Á sama tíma getum við einnig bætt minni á öllum sviðum lífsins. Til dæmis, ef við viljum muna nýtt orðaforðaorð, getum við lesið það nokkrum sinnum, skrifað það nokkrum sinnum eða tengt það við merkingu þess, þannig að minnið verði dýpri.

Á tímum upplýsingasprenginga finnst okkur oft vera ofviða af upplýsingum. Oft þurfum við að muna ýmislegt, en við vitum ekki hvernig á að takast á við þessar upplýsingar. Á þessum tíma getum við notað megindlegar mælingaraðferðir til að ákvarða minnisstöðu okkar og síðan þjálfað og bætt út frá sérstökum aðstæðum. Með sanngjörnum minnisaðferðum getum við bætt minni okkar á áhrifaríkan hátt og veitt lífi okkar og starfi meiri þægindi.

Í stuttu máli má segja að sambandið milli magnmælinga og minnis sé óaðskiljanlegt. Við þurfum að nota vísindalegar aðferðir til að uppgötva minnisskilyrði okkar og stunda síðan árangursríka þjálfun út frá ákveðnum aðstæðum. Ég trúi því að svo lengi sem við æfum stanslaust getum við styrkt minnið og bætt lífsgæði okkar. Það má sjá að við þurfum að bæta minnið og Cistanche deserticola getur bætt minnið verulega því Cistanche deserticola getur líka stjórnað jafnvægi taugaboðefna eins og aukið magn asetýlkólíns og vaxtarþætti. Þessi efni eru mjög mikilvæg fyrir minni og nám. Að auki getur Kjöt einnig bætt blóðflæði og stuðlað að súrefnisgjöf, sem getur tryggt að heilinn fái nægileg næringarefni og orku og þar með bætt heilaþrótt og úthald.

Smelltu á vita bætiefni til að auka minni

Í stuttu máli var örvera erfðafræðilegt DNA dregið úr saursýnum með því að nota innuPREP Stool DNA Kit (Analytik Jena Biometra, Jena, Þýskalandi) og DNA styrkur og hreinleiki voru ákvarðaðir með því að nota Take 3Micro-Volume Plate (Biotek, Winooski, VT, USA).

Alger gnægð microbiota16s rRNA gena var síðan magngreind í gegnum qPCR með því að nota Real-Time Thermal CyclersCFX96 TouchTM (Bio-Rad, Singapúr) byggt á sérstökum frumurum sem sýndir eru í töflu S1.

qPCR skilyrðin og mat á fjölda afrita örvera voru gerðar eftir fyrri samskiptareglum [37]. Log10 af 16S rRNA afritafjölda á hvert gramm af blautþunga saur er kynnt í viðbótargögnum okkar.

2.5. Tölfræðigreining

Gagnadreifing var skoðuð með Shapiro–Wilk prófinu og Levene's prófinu (tölfræðipakki útgáfa 4.0.3). R pakkinn ggplot2 var notaður til að sýna gögn [38]. Benjamini-Hochberg (BH) p-gildi leiðrétting var beitt fyrir margfeldisprófunarleiðréttingu (q-gildi). Marktekt var ákvörðuð við q < 0.05. Allar tölfræðilegar greiningar voru gerðar í R hugbúnaðarútgáfu 4.0.3 [39].

Mismunur á meðaltalsmagni örveru í þörmum milli inngripshópa fyrir hvern tímapunkt var ákvarðaður með t-prófi eða Wilcoxon rank summa testi í samræmi við eðlilega dreifingu gagna.

Breytingar á örveru í þörmum á milli tímapunkta hvers fasa (innan viðfangsefna) voru metnar með því að nota parvis t-próf ​​eða Wilcoxon undirrituð ranking próf eftir marktækar niðurstöður úr einstefnu endurteknum mælingum ANOVA eða Friedman prófinu (p < 0.05 ). Breytingar á algerri gnægð meltingarvegar milli vikna voru gefnar upp sem log2 umbreyttar fellingarbreytingar (Log2FCs).

Tengsl milli algerrar gnægðar örveru í þörmum og aldurs barna á skólaaldri voru ákvörðuð með því að nota Pearson's eða Spearman's fylgnistuðul.

Tengsl milli örveru í þörmum og inngrips á hverjum tímapunkti, aðlögun fyrir lýðfræðilegum breytum (aldur, kyn, BMI z-stig, fæðingarhamur, fæðingarskrá og þjóðerni), var metið með margbreytilegri dreifigreiningu (PERMANOVA) með Adonis fallinu. . Til að kanna áhrif inngrips yfir vikurnar í hverjum áfanga var PERMANOVA framkvæmt með því að nota þátttakendur sem jarðlög og leiðrétta fyrir fylgibreytur. Skilyrði fyrir einsleitni byggt á Euclidean fjarlægð var mæld með betadín virkni.

Umbreyting var framkvæmd við 999 í R pakkanum vegan(2.6-2) [40]. Við ákváðum frekar áhrif inngrips á örveru í þörmum með því að nota offramboðsgreiningu (RDA) á meðan leiðrétt var fyrir fylgibreytum.

Meðferðirnar voru notaðar sem þvingaðar skýringarbreytur og algert magn þarmaörveru var notað sem svörunarbreytur. Mikilvægi takmarkana var metið með því að nota ANOVA-líkt umbreytingarpróf (breyting=999). Þrepaskipt val á skýringarbreytum var framkvæmt með því að nota skreffallið sem byggt var á AIC viðmiðum.

Vitsmunaleg útkoma milli íhlutunarhópanna fyrir hverja viku var borin saman með því að nota Welch tveggja úrtaks t-prófið eða Wilcoxon raðsummuprófið. Mismunur á vitsmunalegum frammistöðu í vikum hvers áfanga (innan einstaklings) var ákvarðaður með Wilcoxon undirritaða ranking prófinu eftir marktækar niðurstöður úr Friedman prófinu (p < 0.05).

Við notuðum RDA til að ákvarða áhrif inngrips á vitræna frammistöðu barna á skólaaldri á meðan aðlögun var að aldri og kyni. Áhrif tímapunkta á gnægð örveru í þörmum voru einnig metin með RDA með því að nota þátttakendur sem jarðlög.

RDA ástandið hélt áfram eins og lýst er hér að ofan. Til að ákvarða tengslin á milli vitrænnar frammistöðu og örveru í þörmum notuðum við Spearman's rankcorrelation coefficient.

Margþættagreining (MFA) var framkvæmd til að kanna breytileika í örveru í þörmum sem hægt var að útskýra með inngrips- og hýsilbreytum (aldur og kyn) með því að nota FactoMine R útgáfu 2.4 [41] og sjónræn með Factoextra útgáfu 1.0. 7 [42].

3. Úrslit

3.1. Einkenni barna á skólaaldri

Eftir gæðaeftirlit með gögnum (mynd 1) greindum við hin 85 og 57 börnin sem eftir voru í I. og II. stigum, í sömu röð. Börn við grunnlínu voru að meðaltali 7,02 og 10,52 ára fyrir WR og SLR hópana, í sömu röð.

Grunneiginleikar viðmiðunar- og inngripshópanna voru marktækt mismunandi eftir aldri (p < {0}}.0001), þyngd (p < 0,0001), hæð (p < 0,0001), BMI z- stig (p=0.03), og tegund fóðurs (p=0.02) (tafla S2).
Svipað mynstur kom einnig fram á tímapunktum rannsóknarinnar, nema BMI, sem var ekki marktækt mismunandi milli hópa í viku 71 (töflur S3–S7).

3.2. Áhrif Sinlek hrísgrjónaíhlutunar á þarmaörveru barna á skólaaldri

Miðað við hvern tímapunkta var enginn marktækur munur á algeru magni örveru í þörmum milli viðmiðunarhópa (WR) og Sinlek íhlutunar(SLR) hópa í fyrsta áfanga íhlutunar (I. áfangi; grunnlína, viku 4 og viku 15 ).

Fjölbreytusamanburður með því að nota PERMANOVA (með framlegð) sýndi einnig að inngrip í I. áfanga hafði engin marktæk áhrif á breytingar á örveru í þörmum eftir aðlögun fyrir lýðfræðilegum breytum (viðbótarskrá S1).

Við ákváðum frekar tengsl á milli gnægðs örveru í þörmum og aldri og komumst að því að Lactobacillus var neikvæð fylgni við aldur við grunnlínu (fylgni Pearsons; R {0}} −0.24, p {{ 3}}.026) og Vika 4 (fylgni Pearsons; R=−0.3, p=0.002) (Mynd 2b,d). Fyrir annan áfanga íhlutunar (2. stigs) voru breytingar á örverumagni hins vegar merktar í viku 61 og 71. Magn heildarbaktería (q=0.032) og Firmicutes (q=0.032 ) var marktækt aukið, en magn gammaproteobacteria (q < 0,0001) lækkaði marktækt eftir SLR inngrip í viku 61 (mynd 2e–g).

Þessar bakteríur voru einnig verulega tengdar aldri, þar sem magn heildarbaktería (Pearson'scorrelation; R {{0}} −0.32, p=0.0 15) og Firmicutes (Pearson's fylgni; R=−0.32, p=0.014, mynd 2h) minnkaði eftir því sem aldurinn hækkaði, en algert magn Gammaproteobacteria var jákvæð fylgni við aldur (Pearson's fylgni; R { {11}}.62, p < 0,0001, mynd 2i).

Í viku 71 minnkaði magn Bacteroidetes marktækt í SLR hópnum (q < 0.0001)(Mynd 2j), og magn þess var í jákvæðri fylgni við aldur (Spearman's rank fylgni;R { {4}}.57, p < 0,0001, mynd 2l).

Með hliðsjón af breytingum á gnægð örveru í þörmum yfir vikurnar (innan einstaklings) í samanburðar- og íhlutunarhópunum, sáum við svipað mynstur í tveimur hópum þátttakenda. Gammaproteobacteria virtist sveiflast mjög eftir inngrip: magn þeirra minnkaði verulega í viku 4 og viku 61 (myndir 3a, b, S1c og S2c, viðbótarskrá S2).

Magn þessara baktería virtist hins vegar endurkastast við endapunkt hvers fasa (vika 15 og viku 71). Þar að auki var magn Bacteroidetes fyrir SLR hópinn lægra í viku 71 samanborið við vikur 56 og 61 (myndir 3a og S2e). Smám saman minnkun á magni tveggja örveruflokka, þ.e. Ruminococcus og Bacteroides, sást einnig á II. stigs, þar sem magn þeirra var lægst við endapunkt rannsóknarinnar (vika 71) (myndir 3b og S2f,g), óháð inngripinu.

Ennfremur metum við hvort munur væri á gnægð örveru í þörmum milli meðferða og yfir vikurnar með því að nota þátttakendur sem jarðlög. PERMANOVA gaf til kynna að tilvist meðferðar og/eða tilraunatíma (viku) á báðum stigum hefði marktæk jaðaráhrif á gnægð örveru í þörmum (p < 0.05).

Dreifingin (frávik) milli hópa og líkan sem gerir grein fyrir lýðfræðilegum breytum með tölfræðilega marktekt eru teknar saman í viðbótarskrá S3. Við könnuðum frekar styrk tengsla og breytileika í örveru í þörmum útskýrt með inngripi með því að nota RDA. Marktækur munur fannst aðeins í II.

Mikið gammaproteobacteria var auðgað meira í samanburðarhópnum (WR) en í SLR hópnum, en hærra heildarfjölda bakteríur, Firmicutes og Bacteroidetes tengdust SLR íhlutun í viku 61 (RDA1 útskýrði 30,58% af heildarfráviki, R2adj {{5} }.29,p=0.001, mynd 3c). Fyrir viku 71 var magn Bacteroidetes meiri í samanburðarhópnum en í SLR hópnum (RDA1 útskýrði 8,18% af heildarfráviki, R2adj=0.06,p=0.005, mynd 3d) .

Við héldum síðan áfram með þrepaskipt val á skýringarbreytum (inngrip og lýðfræðilegar breytur) byggðar á AIC. Líkanið leiddi í ljós að aðeins inngripið útskýrði marktækt breytileika í örverusniði í þörmum barna á skólaaldri (q=0.035).

3.3. Vitsmunaleg frammistaða milli stjórnunar- og íhlutunarhópa

Í I. áfanga fundum við marktækan mun á viðmiðunar- og íhlutunarhópum í vitrænum útkomum. SLR hópurinn sýndi marktækt hærri einkunnir á Corsi blokkarprófinu (kallað MMG, minnisleikur) og heildarframmistöðu (OVP) á geðhreyfingarárvekniprófinu (PVT-B), en viðbragðstími (RT) og tímamörk voru lægri en viðmiðunarhópurinn. hópur (mynd 4).

Í II. áfanga hélst mynstur vitrænnar frammistöðu óbreytt. Við bárum einnig saman vitræna frammistöðu (innan einstaklings) yfir vikurnar í hverjum áfanga og komumst að því að samanburðarhópurinn (I. áfangi) stóð sig betur um brotthvarf í viku 15 samanborið við grunnlínu og viku 4 (q=0.02) (Mynd S3). RT var hærra í viku 15 samanborið við viku 4 (q=0.008), en enginn marktækur munur greindist á MMG eða OVP. MMG var eina vitræna niðurstaðan sem var marktækt hærri fyrir SLR hópinn (I. áfanga) í viku 15 samanborið við grunnlínu (q=0.003) og viku 4 (q=0.03) (Mynd S4) .

Í II. stigs var enginn marktækur munur á vikum í neinum af vitrænum frammistöðumælingum, hvorki í samanburðar- eða SLR hópnum. Ennfremur voru aldur og kyn einnig tekin með í RDA og niðurstöðurnar sýndu engin íhlutunaráhrif á vitræna frammistöðu barna í hvorum hópnum á hvaða tímapunkti sem er í 71 viku prufu.

Aldur lýsir hins vegar marktækt breytileika vitsmunalegra útkomu við grunnlínu (p=0.008), viku 4 (p=0.005) og viku 15 (p=0 .028) (Mynd 5), þar sem aldur var jákvæð fylgni við MMG og OVP. Engin marktæk áhrif af völdum inngripsins, aldurs eða kyns á vitræna frammistöðu fundust í viku 56, viku 61 eða viku 71.

Þegar hugrænir prófílar eru skoðaðir yfir vikur hverrar meðferðar í hverjum áfanga, lýstu bæði viku (p=0.001) og kyn (p=0.001) marktækt breytileika í vitrænni frammistöðu samanburðarhópsins (I. áfangi) , þar sem kvenkynið og Vika 15 voru jákvæð fylgni við MMG og OVP (Mynd S5a).

Börn stóðu sig betur í MMG í viku 15 í SLR hópnum (I. áfanga), á meðan kvenkynið var í jákvæðri fylgni við brottfall og RT (Mynd S5b). Áhrif meðferðar þar sem leiðrétt var að aldri og kyni voru einnig metin fyrir hvern áfanga á meðan stýrt var fyrir vikuna (tímapunktar). RDA sýndi að aldur hafði sterk tengsl við OVP og MMG í I. stigs (Mynd S6a), en í II. stigum var frammistaða varðandi RT og brottfall verri í SLR hópnum en í samanburðarhópnum (Mynd S6b).
Á heildina litið voru aldur og tímapunktar tengdir vitrænni frammistöðu barna á skólaaldri en íhlutunin, og áhrif inngripsins komu aðeins fram þegar sýni voru þvinguð innan hverrar viku í II. stigs eftir að hafa verið leiðrétt fyrir aldri og kyni.

3.4. Samband milli örveru í þörmum og vitræna frammistöðu barna á skólaaldri

Við fundum veik fylgni milli örveru í þörmum og vitræna útkomu á öllum tímum inngripsins byggð á fylgnistuðlum Spearman. Nokkur tengsl voru marktæk (p < {0}}.05), en aðeins ein tengsl, greind í viku 4 fyrir SLR hópinn (Roseburia vs. Lapses, rho=-0,40, q {{6 }}.04), hélst marktækt eftir aðlögun fyrir margvíslegan samanburð (Mynd S7).

Nokkur tengsl sem nálguðust marktækt fundust í viku 56 og viku 71. Tengslin sem komu fram í SLR hópnum í viku 56 voru meðal annars Faecalibacterium–RT (rho=0.62, q=0.07 ), Prevotella–OVP(rho=−0.55, q {{10}}.08), Gammaproteobacteria–OVP (rho=−0.58, q=0.07), og Faecalibacterium–OVP (rho=-0.64, q=0.05). Í viku 71 var Faecalibacterium jákvæð fylgni við RT í samanburðarhópnum (rho=0.62, q=0.07).

Með hliðsjón af aldri og kyni var frekari greining á tengslum milli örveru í þörmum og vitræna frammistöðu framkvæmd á hverjum tímapunkti með því að nota MFA til að sýna fram á afbrigði milli einstakra sniða meðferðarhópanna (viðbótarskrá S4).

Þrátt fyrir að einstaklingsbreytileiki hafi verið skýrður af gnægð örveru í þörmum í Dim 1 beggja fasa (p < 0.0001), kom fram sterkur aðskilnaður milli stjórnunar- og SLR hópanna í Dimm 2 (myndir 6 og 7). Skuggasniðið milli þessara tveggja hópa var undir áhrifum af aldri og OVP, sem voru jákvæð fylgni við Dim 2 (p < 0,0001), en bæði RT og lapses voru neikvæð fylgni (p < 0,0001).

Hins vegar voru Gammaproteobacteria áhrifamestir við að lýsa einstökum breytingum í þessari vídd í viku 61 (p < 0.0001). Magn þessarar bakteríu var lægra í SLR hópnum (hnit=-1,35, p < 0,0001).

Þrátt fyrir misjafnar úrtaksstærðir gaf MFA til kynna að munurinn á sniðum barna á skólaaldri í þessari óslembivaluðu klínísku rannsókn væri meira undir áhrifum af aldri og vitrænni frammistöðu en af ​​örveru í þörmum, sem bendir til minna framlags af inngripi til einstakra breytileika í þessari rannsókn.

4. Umræður

Rannsókn okkar sá engar marktækar breytingar á algerri gnægð örveru í þörmum eftir fyrsta áfanga Sinlek hrísgrjónaíhlutunar hjá börnum á skólaaldri. Marktækur munur á milli hópa kom hins vegar fram í II. stigum (viku 61 og 71) fyrir heildarbakteríur, Firmicutes, Bacteroidetes og Gammaproteobacteria.

Við sáum einnig marktækan mun á vitrænni frammistöðu milli viðmiðunarhópsins og íhlutunarhópanna í báðum áföngum. Við fundum ekki sterka fylgni milli örveru í þörmum og vitræna frammistöðu á neinum tímapunkti.

Frekari greiningar benda til þess að í þessum hópi hafi inngrip Sinlek hrísgrjóna ekki stuðlað að breytileika í örveru í þörmum og vitsmunalegum sniðum barna á skólaaldri, þar sem árangur var fyrst og fremst undir áhrifum aldri.

For more information:1950477648nn@gmail.com