Hver er ávinningurinn af Cistanche fjölsykru á ónæmisvirkni

Tengiliður: emily.li@wecistanche.com

Ónæmisfræðileg virkni og verkunarháttur Cistanche fjölsykru

Zeng Qunli, Zheng Yifan, Lu Zhiliang

[Ágrip]Markmið: Að rannsakaónæmirstarfsemi áCistancheFjölsykra(CDPS) og vélbúnaður þessónæmirreglugerð in vitro. Aðferðir: Tíazól blá litamælingaraðferðin (MTT) var notuð til að fylgjast með stjórnunaráhrifum CDPS (Cistanche fjölsykra) á IQS DEX TNF sem hindrar útbreiðslu thymic eitilfrumna í músum in vitro; CDPS (Cistanche fjölsykra) var notað til að framkvæma frumuhring og frumuhringsgreiningu með því að nota flæðifrumumælingar. Ákvörðun á innanfrumu Ca2. Niðurstöður: CDPS (Cistanche fjölsykra) í hærri styrk geta staðist hamlandi áhrif ISQDEX á eitilfrumufjölgun og hamlandi áhrif hástyrks TNF á eitilfrumufjölgun, og samvirkt fjölgunarhvetjandi áhrif lágstyrks TN F á eitilfrumur; 100ug/ml 200 ug/ml CDPS (Cistanche fjölsykra) getur verulega aukið frumurnar í skiptingarfasa; hærri styrkur (100g/ml) CDPS (Cistanche fjölsykra) getur verulega stuðlað að styrk Ca-jónar í tímfrumum músa. Niðurstaða: CDPS (Cistanche fjölsykra) getur stuðlað að því að frumur fari inn í skiptingarfasann og ályktað er að hvetjandi áhrif þess á útbreiðslu thymic eitilfrumna músa tengist því að hún ýti undir losun kalsíums í thymic eitilfrumum músa.

Cistanche(CistancheDeserticolaYC Ma) er sjaldgæft og dýrmætt kínverskt lækningaefni í mínu landi. Það er skráð sem efsta einkunn í "Shen Nong's Materia Medica".Cistanchehefur það hlutverk að næra blóð, næra nýru og aðstoða yang, raka þörmum og seinka öldrun. Nútíma lyfjafræðilegar rannsóknir sýna þaðCistancheFjölsykragetur bætt líkamannónæmirvirka, stuðla að myndun DNA, styrkja líkamlegan styrk, bæta greind og hafa augljós áhrif gegn öldrun [1]. Höfundur rannsakaði reglugerð um CDPS(Cistanche fjölsykra), fjölsykra hluti afCistanche, áónæmirvirkaaf eitilfrumum músa.

Cistanche fjölsykraeflafjölgun áeitilfrumur

1 Efniviður og aðferðir

1.1 Hvarfefni og lyf.

RPM, I 1640 miðill: GIB-CO; HEPES: FARCO; L-glútamín: Shanghai Dongfeng Reagent Factory; Penicillin og Streptomycin: Lyfjaverksmiðja Norður-Kína; Concanavalin (ConA), MTT: SIGM A Company; Phytohemagglutinin (PHA): Shanghai Medical Laboratory; Isoproterenol (ISO): Shanghai Tianfeng lyfjaverksmiðja; Merkaptóetanól: Fluka Company; Serum nýfæddra kálfa: Sijiqing Bioengineering Company; Dexamethasone (DEX) var kynnt af Dr. Ma Liang, fyrsta tengda sjúkrahúsinu í Zhejiang University School of Medicine; Tumor Suppressor Factor (TNF) var veitt af Yu Yuehan, prófessor, frumudeild, Lífvísindadeild Zhejiang háskólans; Afgangurinn af hvarfefnunum eru öll innlend framleidd greiningareinkunn.

1.2 Tilraunadýr.

ICR mýs, karlkyns, 68 vikna, sem vógu 18-20g, 22, voru keyptar frá Zhejiang Experimental Animal Center.

1.3 Útdráttur á Cistanche fjölsykru [2]:

CistancheFjölsykraer dregin út af rannsóknarstofu okkar! Eftir að hafa mulið hrályfiðCistancheÞað er sökkt í heitt etanól, dregið út í sjóðandi vatni og botnfellt í etanóli. Hlutlaust ensím ásamt Sewag aðferð fyrir próteinafnám, anjón DEAE-Sephadex A- 50 skiptiskiljun og Sephacry S-200 hlaupsíunarskiljun til að fá einn þátt af CDPS (Cistanche fjölsykra)). Geymið þurrt, notaðu ófullkomið RPMI1640 til að ná ákveðnum styrk fyrir notkun og dauðhreinsaðu með ofsíun

1.4 Undirbúningur milta og thymus eitilfrumna [3]:

The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93, stilltu styrk miltafrumna að X 10 /ml og styrk tívfruma í × 10 gráður /ml

1.5 Eitilfrumufjölgunarviðbrögð:Samkvæmt Mosmanmn aðferðinni [4] Endurbætur: 96-brunnfrumuræktunarplata, bætið við 10/ml miltafrumusvöðrun eða vatni 10/ml tímfrumusviflausn 100M1 og mismunandi styrkleika lyfja 10041 í hvern brunn. Ræktaðu í CO2.37C útungunarvél í 72 klst. 4 klukkustundum fyrir lok ræktunar, bætið 8μ1 af MTT (5 mg/ml) í hvern brunn. Í lok ræktunarinnar, sogið 150"1 af flotinu úr hverri brunn og bætið við 0,5N ísóprópanólhýdróklóríði 150M1. Hristið varlega á örhristaranum til að leysa bláu kristallana alveg upp. Mælið OD570 á örplötulesaranum. Stillið hverja tilraun benda sem þrjár endurteknar holur.

1.6 Ákvörðun áhrifa á frumuhringinn [5]:

{{0}}brunnur frumuræktarplata, bætið 4 10 gráðu /ml 1ml skjaldkirtilsviflausn í hvern brunn, bætið ýmsum hvarfefnum og fjölsykrulausn við 2ml í sterku CO, 37 útungunarvélum Eftir ræktun í 72 klst. við 1500r/mín í 15mín, fargið flotinu, bætið 7 etanóli við til að festa útfelldar frumur, geymið við 4C fyrir biðstöðupróf, þvoið frumurnar tvisvar með PBS, skilið í skilvindu við 1500r/mín í 15mín, fargið floti, og bæta við Eftir að 0,5 ml0,1 RNaseA var melt við 4C í 30 mínútur, var 50 ug/ml brómasetat litað í 30 mínútur við 4C, og flúrljómunarstyrkur frumusýnanna var mældur á FACScan flæðifrumurmælinum. 10,000 frumuprófunarpunktum var safnað fyrir hvert sýni og gögnin notuðu Mul þríhjólahugbúnaðargreiningu.

1.7 Ákvörðun á styrk kalsíumjóna innan frumu [6]

Taktu músa thymocytes á sama hátt og hér að ofan. Fleygðu í ófullnægjandi RPMIl640 ræktunarmiðil og stilltu frumustyrkinn að × 10'/ml. Bætið 1 ml af blóðfrumusviflausn og 1 μM í hvert tilraunaglas Fluo-3AM litunarlausn 5μ1, 2 prósent F-275μ1, eftir ræktun við 37 í 30 mínútur, þvoið tvisvar með ófullnægjandi RPM1640, 1500r/ mín., skilið í skilvindu í 10 mínútur, fleygið flotinu og bætið mismunandi styrk fjölsykrum og fjölsykrum við útfelldar frumur. Eftir ConA var flúrljómunarstyrkurinn mældur á FACScan flæðifrumumælinum. Gögnunum um 10,000 frumuprófunarpunkta var safnað fyrir hvert sýni og greind með CELLQUEST hugbúnaði. 1.8 Tölfræðilegar aðferðir voru notaðar við dreifnigreiningu og frumuhringurinn og kalsíumjónamælingin greind með hugbúnaði frumuflæðismælisins.

Cistanche fjölsykra frá cistanche deserticola

2 Úrslit

2.1 Cistanche fjölsykra in vitro hindrar fjölgun músa thymic eitilfrumna með ISO DEX TNF

-adrenvirki viðtakaörvi ísópróterenól (ISO) og flokkur nýrnahettubarkarhormóns dexametasóns (DEX) hamla eitilfrumufjölgun CDPS (Cistanche fjölsykra) í hærri styrk (75 125ug/ml) getur staðist hamlandi áhrif ISO DEX á eitilfrumufjölgun (P<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">Cistanche Fjölsykra) (125 ug/ml) í hærri styrk getur staðist hamlandi áhrif TNF og stuðlað að samverkandi útbreiðslu eitilfrumna með lágum styrk TNF (Mynd 2)

2.2 Cistanche Polysaccharide stjórnun á thymus eitilfrumum hringrás

CDPS (CistancheFjölsykra) 25ug/ml 100ug/ml 200#g/ml þrír styrkir voru virkaðir á músa thymic eitilfrumur í 72 klukkustundir, DNA innihald í frumunum var mælt með FACS og útbreiðslustuðull (PI) var reiknaður út samkvæmt formúlunni. Niðurstöðurnar sýna að bæði 100 µg/ml og 200 µg/ml geta aukið frumurnar í skiptingarfasa verulega og útbreiðslustuðull (68,0 prósent, 56,6) beggja er marktækt hærri en samanburðarhópsins (44,6) og 200 µg/ml hópurinn er örlítið lægri en 100g/ml hópur vegna þess að við styrkleikann 200ug/ml hefur áhrif hans á frumufjölgun orðið lækkandi [7]. PI gildi (47,5 prósent) í 25 ug/ml hópnum var ekki marktækt hærra en í samanburðarhópnum.

2.3 Áhrif Cistanche Polysaccharide á styrk kalsíumjóna í thymocytes músa

Tilraunaniðurstöðurnar sýna að hærri styrkur (100 ug/ml) af CDPS (Cistanche fjölsykrae) getur marktækt stuðlað að aukningu á styrk kalsíumjóna í skjaldkirtilsfrumum músa Í samanburði við samanburðarhópinn er marktækur munur (P<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">

3 Umræður

Cistanche, almennt þekktur sem„eyðimerkur ginseng", er þurr, hreistur holdugur stilkur afCistanche.Cistanchehefur það hlutverk að næra nýra yang, nærandi kjarna, blóð og þörmum. Það tilheyrir eins konar spennu í heiladinguls-nýrnahettuberki eða hefur hormónalík áhrif sem líkjast nýrnahettuberki. Verðmætt kínverskt lyf sem getur stjórnaðónæmirvirkalíkamans. Fyrri rannsóknarniðurstöður okkar sýna að CDPS (Cistanche fjölsykra) in vitro getur stuðlað að útbreiðslu thymic T eitilfrumna sem hafa ekki verið virkjaðar eða virkjaðar af ConA PHA. Ásamt ConA PHA eru tvær tegundir af T frumu örvandi, við teljum að CDPS (Cistanche fjölsykra) er skaðvaldur fyrir T frumur og við komumst líka að því að CDPS (Cistanche fjölsykra) getur aukið seytingu milta eitilfrumna músa verulega við hærri styrk [8]

Sumar rannsóknir hafa leitt í ljós að raðbrigða TNF getur valdið frumufrumumyndun venjulegra músa og manna T eitilfrumuþyrpinga in vitro og þessi áhrif geta hugsanlega verið hindrað af IIL-2 IL-1 IFN og IIL-4 með dexametasóni (DEX) Það getur hindrað útbreiðslu eitilfrumna með því að hindra tjáningu eitilfrumna og seyti IL-2 og minnka framleiðslu á IL-2R með mikilli sækni. Þessi tilraun leiddi í ljós að hærri styrkur CDPS (CistancheFjölsykra) getur unnið gegn áhrifum mikils styrks TN F á eitilfrumufjölgun. Hömlun, samverkandi með lágum styrk TNF til að stuðla að útbreiðslu eitilfrumna og getur unnið gegn hamlandi áhrifum ISQ DEX á eitilfrumnafjölgun. Þessi áhrif eru einmitt í gegnum CDPS (CistancheFjölsykra) til að stuðla að útbreiðslu T eitilfrumna og eru sjálfkrínar af T frumum IL-2 og öðrum frumudrepum til að ljúka.

Á undanförnum árum hafa verið gerðar margar rannsóknir á ónæmislyfjafræðilegum áhrifum plöntufjölsykra, en fáar rannsóknir áónæmirstjórnunarferli fjölsykra, sérstaklega merkjaflutningsleið fjölsykrna sem verka á eitilfrumur með Ca2 sem annan boðbera. Það er engin skýrsla. Í þessari tilraun var gerð frumrannsókn á þessu sviði. Innanfrumuboðasameindir innihalda cAM R Ca", IP3 DG cGMP osfrv., þar á meðal Ca" hefur afar mikilvæg lífeðlisfræðileg áhrif á frumur. Aukning á innanfrumuþéttni Ca² er mikilvægt fyrirbæri á fyrstu stigum eitilfrumnavirkjunar og -fjölgunar. Þetta ferli á sér aðallega stað á fyrstu tugum sekúndna til mínútna þegar frumur eru virkjaðar af örvum. Klassíska leiðin til virkjunar T-frumna er fosfatidýlinosítól (PIB) til að umbrotna fosfatidýl vöðva. Alkóhólumbrotsefnið 1,4.5-inositol triphosphate (IP3) getur stuðlað að losun Ca" sem er geymt í innri möskva með því að bindast við innri möskvaviðtaka, auka magn Ca2 innanfrumu og styrk innanfrumu Ca. * eykst. Hátt getur stuðlað að framleiðslu NF-AT (nektarþáttur virkjaðrar T frumu), sá síðarnefndi hefur þau áhrif að stuðla að tjáningu IIL-2 gens. Tilraunaniðurstöður sýna að hærri styrkur (100g/ml) ) af CDPS (CistancheFjölsykra) er áhrifaríkt í 5 10 mín. Tími hefur veruleg áhrif á að auka styrk Ca* í tímfrumum músa og hefur samverkandi áhrif með ConA. Þess vegna getum við getið um að CDPS (Cistanche fjölsykra) stuðlar að losun kalsíums í músa thymic eitilfrumum til að auka styrk kalsíumjóna innanfrumu. Aukningin stuðlar að tjáningu IL-2 gensins og leiðir til fjölgunar T-frumna, sem er ein af fræðilegum grunniCistancheFjölsykrurstjórnunaráhrif á líkamann

Cistanche fjölsykra

Heimildir

1. IN XiuHin, SU Yuke (Almennar aðstæður lyfjafræðirannsókna áCistancheSka 【J】. Hefðbundin kínversk og jurtalyf ((kínversk jurtalyf). 1993.24(10. 550-552(á kínversku))

2. ZHANG Weijiee ( Lífefnafræðileg kenning um samsett fjölsykrun [M]. Hangzhou Zhejiang University Pres (Zhejiang University Press), 1994.16-17 (á kínversku)

3. MA Bo- (Ma Baoli). Ónæmisfræði tækni【M1. Shanghai Medical University Pres (Shanghai Medical University Press), 1984 188-190. (n kínverska))

4. Mosmann T. Rapiloloimeric prófun til að auðvelda vöxt og lifun til að koma í veg fyrir útbreiðslu og frumueiturhrif[JJ Immun Meth.1983,6 55- 58.

5. WU is-hi, WU shailing, Acai-n, et al (Wu Jiahui, Wu Shuibing. Li Carian, o.fl.), Áhrif zins á útbreiðslu hringlaga frumna íónæmirlíffæragreining með frumuflæðismælingu [J]. Kínversk ónæmisfræði (Chinese Journal of Immunology), 1994, 10X5: 278-281. (í Kína)

6. TAO axin. JIYong-yong, GAO Qi-rong, o.fl. (Tao Jiaxian, Ji Yongpu Gao Qirong, osfrv.). FACS greining á breytingum á innanfrumu C2 við örvun[J] Chinese journal of immunology (China Journal of Immunology), 1993, 9 (2): 97-10L. (á kínversku)

7. ZENGQu-li.MAO Jum-hao, LU suchiang; Hreinsun d fjölsykri afCistancheDeserticolaYC Mfa og ónæmisbælandi áhrif þess á Tellfunction[J].burnal of Zhejiang Medical University (Journal of Zhejiang Medical University), 1998.27 (3: 108-111. (á kínversku)

8. Sarin A, Michelle C C. Perre AH Cytotoxic Efed of TNF and Lymphotoxin on T Lymphoblak. J Immunol, 1995, 1553716-3721.