Úrslægðaráhrif og verkun acteoside og echinacoside dregin út úr cistanche tubulosa
Mar 03, 2025
Ágrip:Miða að því að kanna áhrif á þvagsýru og fyrirkomulag acteoside (AS) og echinacoside (ech) dregið úrCistanche Tubulosa.
AðferðirHáþurrð (HUA) rottulíkan var staðfest með því að nota kalíum oxonat (1,5 g · kg -1 · d -1) ásamt adeníni (100 mg · kg -1 · d -1). Hua líkan rottum var skipt af handahófi í líkanastýringarhóp, allopurinol hóp (30 mg · kg -1 · d -1), sem lágt og hátt (50, 100 mg · kg -1 · d -1) skv. mg · kg -1 · d -1) skammtahópar. Venjulegur samanburðarhópur var áður stofnaður. Eftir fjögurra vikna gjöf var lífefnafræðing í blóði notuð til að greina SUA þvagefni, CREA, adenósín deaminase (ADA) og þvagsýru (UUA) í þvagi. Ensím tengd ónæmisbælandi greining var notuð til að greina xanthine oxidase (XOD) gildi í sermi. Nýrnavef var safnað og nýrna stuðull var veginn og reiknaður. Hematoxylin eosin (HE) litun var notuð til að fylgjast með meinafræðilegum breytingum. Ónæmisheilbrigðafræði (IHC) og rauntíma PCR voru notuð til að greina prótein- og mRNA tjáningarstig þvagfæraflutnings 1 (URAT1), glúkósa flutningsaðila 9 (GLUT9), lífrænan anjónaflutning 1 (OAT1) og lífrænan anjóns flutninga 3 (OAT3) í nýrnavef. Niðurstöður AS og ECH gætu bætt nýrnastarfsemi hjá rottum HUA líkansins, dregið úr þvagsýruþéttni, stuðlað að útskilnaði þvagsýru, lækkar sermisþéttni ADA og XOD, og uppstýrt prótein og mRNA tjáningu URAT1 og GLUT9 í nýrnavef, en uppstýrir próteini og mRNA tjáningu OAT1 og OAT3 í nýrnavef.
Ályktanir Fenýletanóíð glýkósíð AS og ech frá cistanche tubulosa geta haft áhrif á þvagsýru með því að bæta nýrnastarfsemi hjá Hua líkan rottum, draga úr ADA og XOD stigum og stjórna tjáningu URAT1, GLUT9, OAT1 og OAT3.
Lykilorð: Cistanche Tubulosa; Acteósíð; echinacoside; ofstækkun; draga úr þvagsýru; vélbúnaður
Cistanche tubulosa þykkni með 16% acteoside
Blóðsykursfall (HUA) er efnaskipta sjúkdómur af völdum truflaðs umbrots púríns í mannslíkamanum, sem leiðir til hækkaðs blóðsýruþéttni í blóði [1]. Það er venjulega greint þegar blóðþurrkur í blóði fer yfir 7. 0 mg · dl⁻¹ (416. 0 μmoltal·¹) hjá körlum og 6. 0 mg · dl⁻¹ (357. 0 μmol· vop) hjá konum [2]. Þróun blóðþurrðarlækkunar er fyrst og fremst tengd þáttum eins og mataræði með háum purínum, langvarandi áfengisneyslu, lyfjanotkun og skjaldvakabrest. Það eykur ekki aðeins hættuna á hjarta- og æðasjúkdómum, sykursýki og háþrýstingi [3-4] heldur hefur það einnig veruleg áhrif á heilsu sjúklinga.
Sem stendur eru klínískar meðferðir við blóðþurrð aðallega með lyfjum sem hindra þvagsýruframleiðslu og stuðla að útskilnaði þvagsýru. Samt sem áður hafa þessar meðferðir ákveðnar takmarkanir fyrir sjúklinga með skerta lifur eða nýrnastarfsemi [5-6]. Þess vegna hefur það mikla þýðingu að kanna árangursrík lyf með litlar aukaverkanir til að koma í veg fyrir og meðhöndla blóðþurrð.
Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight, sem oft er notað í hefðbundnum kínverskum lækningum sem nýrnahimnu sem er að nota nýrna, er notað til að meðhöndla aðstæður eins og getuleysi, ófrjósemi, kjarna og blóð, veikleika í mjóbaki og hnjám, veikleiki vöðva og hægðatregða vegna þurrku í þörmum [7]. Rannsóknir hafa sýnt þaðCistanche Tubulosabýr yfir taugavörn [8], bólgueyðandi [9], umbrotseftirliti [10] og virkniaukandi áhrifum hjá krabbameinslyfjameðferð fyrir krabbameinssjúklinga [11]. Meðal ýmissa virka íhluta þess eru fenýletanóíð glýkósíð algengastar.
Acteoside (AS) og echinacoside (ECH), tvö fenýletanoid glýkósíð með mikið innihald íCistanche Tubulosa, sýna sterka líffræðilega virkni og hafa verulegan möguleika á þróun og notkun. Þar af leiðandi valdi rannsóknarhópurinn okkar sem og ECH til frekari rannsókna. Með spár um lyfjafræði netkerfis og fyrirfram tilrauna hjá músum uppgötvuðum við að fenýletanóíð glýkósíð útdrætti fráCistanche TubulosaGetur haft ákveðin þvagsýrandi áhrif. Hins vegar eru leiðir og aðferðir þessara áhrifa enn óljósar.
Þannig að nota fyrirkomulag þvagsýruframleiðslu og aðal útskilnaðarleiðir þess sem rannsóknaráherslu, könnuðum við þvagsýru-lækkandi áhrif fenýletanóíð glýkósíðútdráttar AS og ECH. Þessi rannsókn miðar að því að skýra leiðir og fyrirkomulag sem AS og ECH hafa þvagsýra lækkandi áhrif þeirra.
1 efni
1.1 Tilraunadýr
Sjötíu karlkyns SPF-gráðu Sprague-Dawley (SD) rottur, sem vegu 150–180 g, voru keyptar frá tilraunadýramiðstöðinni í Xinjiang læknaháskólanum. Dýraframleiðsluleyfi: SCXK (XIN) 2023-0001. Þessi tilraun var samþykkt af dýrasiðanefnd Xinjiang Autonomous Region Uygur Medicine Research Institute, með samþykkisnúmeri dýrasiðferða: Iacuc- (Zhun) -2024-009.
1.2 Lyf og hvarfefni
Fenýletanóíð glýkósíð útdrætti (AS og ECH)FráCistanche Tubulosa (purity >98%, staðfest með afkastamiklum vökvaskiljun) voru dregin út, hreinsuð og unnin af lykilrannsóknarstofu Uygur-mótunarvísinda, Xinjiang Autonomous Region Uygur Medicine Research Institute. Hópnúmer: 20220617 (AS) og 20220526 (ECH).
Allopurinol töflur, Hópnúmer: 62208726, framleitt af Jiangsu Wanbang Biochemical Pharmaceutical Group Co., Ltd.
KalíumoxónatOgadenín, lotunúmer: I2130050 og C2202255, keypt af Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.
Crea (kreatínín), UA (þvagsýra), þvagefni og ADA (adenósín deaminase) prófunarsett, hópnúmer: 141123010, 141223004, 141323008, og 043624005, keypt af Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.
XOD (xanthine oxidase) virkni prófunarbúnaður, lotunúmer: Y10001219, keypt af Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.
Mótefni (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3), lotunúmer: 3I5723 0, 92F0296/4, 0F33081/2I44618, keypt af Affinity Biosciences.
HRP-merkt geit gegn kanínu IgG, lotunúmer: 245440113, keypt af ZSGB-Bio.
Hematoxylin litunarlausn, Hópnúmer: 24135741h, keypt af Peking Lanjieke Technology Co., Ltd.
Dab litninga hvarfefni, lotunúmer: 240010512, keypt af ZSGB-Bio.
DEPC (díetýl pýrókarbónat), Vörunúmer: D 60029-500 ML, keypt af Amresco (USA).
M5 HICLEAR DL2000 DNA merki, Vörunúmer: MF025, keypt af Peking Genomics Biotechnology Co., Ltd.
Trizol ™ hvarfefni, Vörulistanúmer: 15596026, keypt af Thermo Fisher Scientific (Bandaríkjunum).
5x allt-í-einn RT MasterMixOgEvagreen Express 2 × QPCR MasterMix-Low Rox, Vörulistanúmer: G492 og G891, bæði keypt af Applied Biological Materials Inc. (ABM).
2 aðferðir
2.1 Stofnun og flokkun fyrirmyndar
Sjötíu karlkyns Sprague-Dawley (SD) rottur voru aðlagaðar og skipt í tvo hópa: venjulegur samanburðarhópur (1 {3}} rottur) og líkanastýringarhópur (60 rottur). Venjulegur samanburðarhópur var gefinn 0,5% CMC-NA með gavage. Líkanastýringarhópurinn var gefinn kalíumoxónat (1,5 g · kg⁻¹) ásamt adeníni (100 mg · kg⁻¹) í skammtinum 10 ml · kg⁻¹, einu sinni á dag í 14 daga í röð. Líkanið var talið staðfest með góðum árangri þegar þvagefni, CREA og SUA stig jókst verulega, mælt með lífefnafræðilegum greiningartæki.
Rottum rottum á blóðsykurslækkandi líkaninu var frekar skipt í eftirfarandi hópa byggða á SUA, þvagefni og CREA stigum: Model Control Group, Allopurinol Group (3 0 mg · kg⁻¹), lágskammtur sem hópur (50 mg · kg⁻¹), Háskammtar sem hópur (100 mg · kg⁻), lágmark-DOSE ECH GROUP (50 mg · kg⁻),,, og lág-úr-hópnum (50 mg · kg⁻). Háskammta ECH hóp (100 mg · kg⁻¹), með 10 rottur í hverjum hópi. Til að viðhalda stöðugu blóðsykurshækkun voru allir hópar nema venjulegur samanburðarhópur gefinn kalíumoxónat (500 mg · kg⁻¹) ásamt adeníni (100 mg · kg⁻¹) um gavage á morgnana, fylgt eftir með gjöf viðkomandi lyfja í hverjum meðferðarhópi síðdegis. Venjulegur samanburðarhópur fékk 0,5% CMC-NA lausn á morgnana og drykkjarvatn síðdegis í 10 ml · kg⁻, einu sinni á dag í 14 daga í röð. Síðan var gjöf fyrir reiknilíkön stöðvuð og viðkomandi lyf voru stöðugt gefin daglega í 14 daga til viðbótar.
2.2 Sýnishorn
Eftir lokaskammtinn voru rotturnar fastar á einni nóttu (vatn var ekki takmarkað). Þvag úr hverjum hópi var safnað fyrir þvagsýrupróf. Líkamsþyngd var mæld eftir föstu og blóðsýnum var safnað undir svæfingu. Sermi var aðskilið með skilvindu og geymd til notkunar í framtíðinni. Nýrnavefjum var safnað og vegið. Eitt nýrun var fest í 4% paraformaldehýðlausn, en hin var fryst í fljótandi köfnunarefni til frekari greiningar.
2.3 Mæling á þvagsýru í þvag rottu
Þvagsýni úr hverjum hópi voru skilvindt (3, 000 r · min⁻¹, 10 mín, skilvindu radíus 14 cm) og flotinu var safnað. Þvagsýni voru þynnt 1: 9 með saltvatni og greind fyrir þvagsýruinnihald með því að nota lífefnafræðilega greiningartæki.
2.4 Mæling á ADA, UREA, CREA og SUA í rottusermi
Blóðsýni úr hverjum hópi voru skilvindt (3, 000 r · mín⁻¹, 10 mín., Sentrifuge radíus 14 cm) og sermi var safnað. ADA, þvagefni, CREA og SUA í sermi voru mæld með lífefnafræðilegum greiningartæki.
2.5 Mæling á XOD í rottusermi
Breytingar á stigum XOD í rottusermi voru mældar með því að nota ensímgreining samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Upprunalega frásog (A₁) og loka frásog (A₂) við 290 nm voru skráð og ΔA (ΔA=A₂ - A₁) var reiknuð. ΔA var skipt út í formúluna:
Xod (nmol⁻¹ · min⁻¹ · ml⁻¹)=[Δa × viðbragðskerfi Total rúmmál ÷ (molar útrýmingarstuðull þvagsýru × sjónstíg lengd) × 10⁹] ÷ sýnishorn ÷ tíma=4262 × δa,
Til að reikna magn þvagsýru hvata á mínútu á millilítra af sermi.
2.6 Mæling á nýrnastærð
Nýrnavefjum var safnað, þvegið með saltvatni og umfram vatn var fjarlægt. Líffæriþyngdin var mæld nákvæmlega og nýrnastuðullinn var reiknaður á eftirfarandi hátt:
Nýrnarstuðull=nýrnaþyngd (mg) / líkamsþyngd (g).
2.7 Histopathological athugun á nýrnavef með litun
Nýrnavefir sem voru festir í 4% paraformaldehýðlausn voru þurrkaðir með stigaðri etanólstyrk, hreinsað með xýleni, innbyggð í parafín og var skipt í 4- μm sneiðar. Hlutarnir voru afskekktir með xýleni, vökvaðir með flokkuðu etanóli, litaðir með hematoxýlíni og eósíni (HE) og innsiglaðir með hlutlausu gúmmíi. Formfræðilegar breytingar á nýrnavef sáust undir ljós smásjá og myndir voru teknar við 400 × stækkun.
2.8 Greining URAT1, GLUT9, OAT1 og OAT3 prótein tjáning í nýrnavef með IHC
Nýrnavefir sem voru festir í 4% paraformaldehýðlausn voru þurrkaðir með stigum etanólstyrk, hreinsað með xýleni, innbyggt í parafín og skipt. Mótefnavaka og geitasermisblokkun voru framkvæmd. Aðal mótefnum (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3) var bætt við 1: 200 þynningu og ræktað yfir nótt við 4 gráðu. Daginn eftir voru hlutarnir þvegnir með PBS, loftþurrkuðum og ræktaðir með biotin-merktum geitum gegn kanínu IgG við 37 gráðu í 30 mínútur. Hlutarnir voru þvegnir með PBS og ræktaðir með DAB -litningi hvarfefnis í 10 mínútur, fylgt eftir með PBS skolun, hematoxýlín litun í 3 mínútur, aðgreining með saltsýru etanóllausn, litíumkarbónat, ofþornun með halla etanóli, hreinsun með xýleni og þéttingu með hlutlausu gúmmíi.
Fyrir hverja rottu voru tveir handahófi 4 0 0 × reitir af nýrnahlutum valdir. Jákvæð litun (brúngul) var greind og samþætt sjónþéttleiki (IOD) hvers reits var mældur með því að nota Image-Pro Plus 6.0 fyrir tölfræðilega greiningu.
