Meðferðaráhrif fenýletanóíð glýkósíða á sýklópfosfamíð af völdum dyszoospermia í músum og aðferð þess

Tengiliður: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Netfang:audrey.hu@wecistanche.com

ZHAO Dong-hail, ZHANG Lei?, ZHANG Yan², QI Ling', ZOU Xiang-ming'

Ágrip: Markmið Að kanna meðferðaráhrif fenýletanóíð glýkósíða á sýklófosfamíð (CTX) völdum dyszoospermia í músum og til að skýra bráðabirgðaaðferðirnar sem taka þátt í ferlinu. Aðferðir Fenýletanóíð glýkósíð var dregið út með etanólútdrætti, Fjörutíu karlkyns BALB/C músum var skipt af handahófi í samanburðarhóp, módelhóp, lágan skammt af fenýletanóíð glýkósíð hóp (50 mg·kg-I) og stóran skammt af fenýletanóíð glýkósíð hóp (100 mg ·kg-). Fyrir utan viðmiðunarhópinn var múslíkanið með dyszoospermia stofnað með kviðarholssprautun á CTX í dagskammtinum 80 mg·kg-i, einu sinni á dag í 5 daga í röð. Eftir líkanagerð voru fenýletanóíð glýkósíð gefin í maga í samsvarandi skömmtum í hvern fenýletanóíð glýkósíð hóp. Jafnt rúmmál af venjulegu saltvatni var gefið músunum í samanburðarhópnum og líkanhópnum með magagjöf. Öll lyfin voru framkvæmd einu sinni á dag í 30 d. Eistavefurinn fékkst 24 klst. eftir síðustu gjöf í maga. Magn testósteróns í einsleitni eistnavefsins var ákvarðað með ensímtengdri ónæmissogandi prófun. Sæðisfjöldi, hreyfanleiki og tíðni sæðisfrumna í ýmsum hópum var borin saman. Formfræðilegar breytingar á eistnavef sáust með HE-litun. Niðurstöður Í samanburði við samanburðarhópinn lækkuðu sæðisfjöldi og hreyfanleikahraði, tíðni teratozoospermia jókst og testósterónmagn í einsleitni eistna var lækkað í líkanahópnum (P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" sperm="" counts="" and="" the="" motility="" rates="" were="" increased,="" the="" teratozoospermia="" rates="" were="" decreased,="" and="" the="" testosterone="" levels="" in="" the="" testis="" tissue="" homogenate="" were="" increased="" in="" phenylethanoid="" glycosides=""><0.05 or=""><0,01). the="" histological="" results="" showed="" atrophy="" and="" degeneration="" of="" seminiferous="" tubule,="" thicker="" seminiferous="" epithelium,="" and="" azoospermic="" lumina="" in="" the="" model="" group;="" the="" number="" of="" seminiferous="" epithelial="" layers="" was="" increased="" and="" the="" seminiferous="" cells="" orderly="" arranged,="" and="" many="" sperms="" were="" found="" in="" the="" tubules="" in="" phenylethanoid="" glycosides="" groups.="" conclusion="" phenylethanoid="" glycosides="" have="" obviously="" therapeutical="" effects="" on="" ctx-induced="" dyszoospermia="" in="" mice,="" and="" their="" mechanisms="" might="" be="" correlated="" with="" recovering="" the="" testosterone="">

Lykilorð: fenýletanóíð glýkósíð; sýklófosfamíð; skerðing á sæðismyndun; mýs, BALB/C

Cistanche deserticola hefur mörg áhrif, smelltu hér til að vita meira

Vegna hröðunar á félagslegum takti, slæmra lífsvenja og umhverfismengunar og annarra þátta, hafa óeðlileg gæði sæðis eins og sæðisfrumnahækkun og asthenospermia orðið aðalorsök ófrjósemi karla [1]. Sem stendur eru til færri lyf til að meðhöndla fárviðarhækkun og astenóspermia og lækningaáhrifin eru ekki augljós. Hefðbundin kínversk lyfseðilsskyld eða virk innihaldsefni hafa góð áhrif til að bæta æxlun karla [2-6]. Hins vegar, vegna margs konar lyfseðilsskyldra lyfja, er sambandið milli lyfjafræðilegra áhrifa og áhrifaríkra innihaldsefna lyfsins ekki ljóst, sem takmarkar kynningu og notkun sæðisvaldandi lyfja. Rannsóknir og þróun árangursríkra innihaldsefna hefðbundinnar kínverskrar læknisfræði og rannsókn á lækningalegum áhrifum þess við æxlunarskaða hafa gott notkunargildi. Thefenýletanóíð glýkósíðí Cistanche cistanche eru eitt mikilvægasta virka innihaldsefnið í Cistanche. Þeir eru venjulega náttúruleg glýkósíð sem innihalda ester og oxó-glýkósíð tengi með -glúkósa sem kjarna. Þær eru víða í tvíkímblaða plöntum 7]. Rannsóknir [8] hafa sýnt að Cistanche fenetanól glýkósíður geta verndað rottu sæði gegn oxunarskemmdum in vitro, en engar fregnir liggja fyrir um sæðismyndun þess. Þessi tilraun rannsakar meðferðaráhrif Cistanchefenýletanóíð glýkósíðum sæðismyndun músa með sæðismyndun af völdum sýklófosfamíðs og veitir tilrauna- og fræðilegan grunn fyrir notkun Cistanche fenetýlalkóhólglýkósíða við meðhöndlun sæðissjúkdóma.

1 Efniviður og aðferðir

1.1 Tilraunadýr, helstu hvarfefni og tæki

40 SPF fullorðnar BALB/C mýs, 6-8 vikna gamlar, þyngd 20-22 g, keyptar frá dýratilraunum við Jilin University School of Basic Medicine, dýravottorðsnúmer: SCXK (Kirgyzstan) {{3} }. Mýsnar voru aldar upp með aðlögunarhæfni í 5 daga fyrir tilraunina. Fóðurskilyrði: 22 gráður -25 gráður, sólarhringur (12 klst/12 klst), ókeypis drykkjarvatn og matur. Cistanche er framleiðsla Xinjiang Dakang Trading Company, sýklófosfamíð til inndælingar var keypt frá Jiangsu Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd. (lotunúmer 11061921), einsleitt testósterón ensímtengd ónæmisprófunarsett fyrir eistuvef var keypt frá Tianjin Jiuding Medical Bioengineering Co. (lotunúmer 20120812), önnur hvarfefni eru öll innanlands framleidd greiningarflokkar. PLUS384 örplötulesari (MDC, Bandaríkin), TE2000U öfug smásjá (Nikon, Japan), J-26XP skilvindu (Nanodrop, Bandaríkjunum).

1.2 Undirbúningur cistanchefenýletanóíð glýkósíð

10 g afCistanche tubulosaduft var bakflæði með 70 prósent etanóli, tvisvar, 2 klukkustundir í hvert sinn til að fáfenýletanóíð glýkósíðeinbeita sér. Óblandaða lausnin var sett í D101 stórporous resin súluskiljun og skoluð með 70 prósent etanóli til að fáCistanche fenýletanóíð glýkósíðáfengi. UV litrófsmælirinn greindi útdráttinn á bylgjulengdinni 333 nm.

1.3 Undirbúningur dýralíkans og lyfjagjöf

40 karlkyns BALB/C mýs fengu aðlögunarhæfni fóðraðar í 5 daga og músunum var skipt af handahófi í 4 hópa (10 mýs í hverjum hópi): samanburðarhópur, módelhópur, Cistanche cistanche lágt fenýlethanoid glýkósíð skammtur og háskammta Cistanche fenetýlalkóhól glýkósíð hópur. Fyrir utan viðmiðunarhópinn fengu hinir þrír hóparnir af músum inndælingu í kviðarhol með 80 mg·kg -1 sýklófosfamíði fyrir hverja mús í 5 daga í röð til að undirbúa dýralíkön af sæðisfrumusjúkdómum. Eftir að líkanið var útbúið voru mýs í lág- og háskammtahópumCistanche fenýletanóíðvoru gefin 50 og 100 mg·kg-'·d-'. , 1 sinni á dag í 30 daga samfleytt. Öllum músum var aflífað 24 klukkustundum eftir síðustu gjöf og tvíhliða próf voru tekin. Hægra eista var fest í formaldehýði. Þeimurinn og eistun voru tekin frá vinstri hlið. Eistið var einsleitt og skilið í skilvindu við 3,000 r·mín í 10 mín. Fljótandi vökvinn var tekinn og geymdur í kæli við 20 gráður til prófunar. Vinstri epididymis var prófaður fyrir þéttleika sæðisfrumna, hreyfanleika sæðisfrumna og aflögunartíðni.

1.4 Ákvörðun á þéttleika sæðisfrumna, hreyfanleika sæðisfrumna og aflögunartíðni

Settu tilraunaglas sem inniheldur 10 ml af næringarefnalausn sæðis í vatnsbað með stöðugu hitastigi til að forhita í 37 gráður, fjarlægðu bandvef og fitu af annarri hlið epididymis, skerðu vefinn og settu í tilraunaglasið við 37 gráður. í 10 mín. Eftir að sæðisfruman er alveg laus skaltu taka 1 dropa á blóðkornatalningarplötuna og reikna sæðisþéttleika í samræmi við frumutalningaraðferðina. Niðurstaðan er gefin upp sem fjöldi sæðisfrumna á millilítra; auk þess skaltu taka 5 μL af sæðisviflausn úr tilraunaglasinu og blanda því saman við sama magn af Eosin-Y Jafnt, setja það við stofuhita í 10 mínútur, bæta við hlífðarglasi og athuga með ljóssmásjá. Dauðu sæðisfruman eru bleiklituð og lifandi sæðisfrumurnar eru ekki litaðar en umfrymið er gegnsætt. Teldu 200 sæðisfrumur á hvert sýni, reiknaðu lífvænleika sæðisfrumna og niðurstaðan er gefin upp sem hundraðshluti, lífvænleiki sæðis=fjöldi lifandi sæðisfruma/heildarfjöldi sæðisfruma × 100 prósent. Önnur 5 μL af sæðisviflausn var fest í metanóli í 5 mínútur, þurrkuð og lituð með 2 prósent eósín vatnslausn í 1 klukkustund, skoluð og blástursþurrkuð. Leitaðu að hlutum með minni skarast sæðisfrumna undir lítilli aflsmásjá og notaðu stórvirka smásjá til að athuga formgerð sæðis í röð. Hver mús skoðaði 1000 heilar sæðisfrumur. Sæðishausarnir voru krókalausir, bananalaga, myndlausir, feitir, tvíhöfðaðir o.s.frv. voru dæmdir sem vansköpun. Hlutfall sæðisskekkju var reiknað út og niðurstöðurnar gefnar upp sem hundraðshluti. Vansköpunartíðni sæðisfrumna=fjöldi vanskapaðra sæðisfrumna/heildarfjöldi sæðisfrumna × 100 prósent.

1.5 Ákvörðun æxlunarhormóna

Eistið var skrælt af og sett í hettuglas og forkælt einsleitnimiðillinn (0.01 mól·L-súkrósa, 0.01 mól·L{{ 6}}Tris-HCl, 0,1 mmól· L-1EDTA-Naz lausnir, pH 7,4), klippið eistavefinn með augnlækningaskæri, hellið því í einsleitarglas úr gleri og gert einsleitt, skilið í skilvindu við 4 000 ×g í 10 mínútur við lágt hitastig, taktu ofanvatnið og notaðu ensímtengd ónæmissogandi hvarfefni. Testósterónmagnið í einsleitni eistnavefsins var ákvarðað af kassanum og 3 samhliða sýni voru prófuð fyrir hvert sýni. Tilraunaskrefunum og aðferðunum var lokið í samræmi við leiðbeiningar settsins.

1.6 Formfræðileg athugun á eistavef

Taktu paraffínsneiðar af eistum músa, HE-bletti og fylgstu með dreifingu sæðisfrumna og sáðfrumna í eistavef undir ljóssmásjánni.

1.7 Tölfræðigreining

Tölfræðileg greining var gerð með SPSS 17.0 tölfræðihugbúnaði. Þéttleiki sæðisfrumna, hreyfanleiki sæðisfrumna, aflögunartíðni sæðisfrumna og testósterónmagn í eistum í hverjum hópi var gefið upp sem z±s og samanburður á milli hópa var gerður með einhliða dreifigreiningu.

2. úrslit

2.1 Þéttleiki sæðisfrumna, lífvænleiki sæðisfrumna og aflögunartíðni sæðisfrumna í hverjum hópi músa

Í samanburði við samanburðarhópinn minnkaði þéttleiki sæðisfrumna og hreyfanleiki sæðisfruma í líkanahópnum (P<0.01), and="" the="" sperm="" deformity="" rate="" increased=""><0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" sperm="" density="" and="" sperm="" motility="" rate="" of="" mice="" in="" each="" dose="" group="" of="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" increased=""><0.05 or=""><0.01), and="" the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" decreased=""><0.05 and=""><0.01). compared="" with="" the="" low-dose="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" glycoside="" group,="" the="" high-dose="">Cistanche fenetýl alkóhól glýkósíðhópur aukinn þéttleiki sæðisfrumna og hreyfanleika sæðisfrumna (P<0.05), and="" the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" decreased=""><>

2.2 Testósterónmagn í eistavef músa í hverjum hópi

Testósterónmagn í einsleitum eistum í samanburðarhópnum og líkanhópnum var (10.26±0.57) og (5.33±0.84) nmól·L-', í sömu röð. Testósterónmagn fyrirmyndarhópsins var marktækt lægra en samanburðarhópsins (P<0.01). the="" testosterone="" levels="" in="" the="" testicular="" tissue="" homogenate="" of="" the="" low-dose="">Cistanche phenylethanoid glýkósíðhópurinn var (7,55±1,21) og (10,35±0,94) nmól·L-1. Testósterónmagn lág- og háskammta Cistanchefenýletanóíð glýkósíðhópar voru marktækt hærri en hópar fyrirmyndar (P<0.05 or=""><0.01). the="" level="" of="" testosterone="" in="" the="" testicular="" tissue="" homogenate="" of="" the="" high-dose="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" glycoside="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" low-dose="" group=""><>

2.3 Formgerð músareista í hverjum hópi

Skoðað með ljóssmásjá; sæðismyndandi píplar í eistum eðlilega hópsins eru þéttar, kímfrumnastig og fjöldi er mörg, sæðisþekjunni er raðað snyrtilega og sáðpíplarnir eru allir myndaðir af sáðfrumum. Í líkanahópnum voru sáðpíplar í eistum músanna rýrnað og hrörnuð, sáðþekjuvefurinn þynntist verulega, þekjulaga fækkaði, uppröðunin var röskuð og sæðisfrumum í holrýminu fækkaði. Í samanburði við líkanahópinn er fjöldi sáðpípla og sáðþekjulaga í litlum skömmtumCistanche phenylethanoid glýkósíðhópnum fjölgaði, þekjuskipan var reglulegri og sáðpíplaskemmdir voru verulega bættir; háskammtinnCistanche phenylethanoid glýkósíðhópur bætti uppbyggingu sáðpíplanna meira, Fjöldi og fjöldi sáðþekju hefur aukist verulega, þeim er raðað snyrtilega, það eru þroskaðar sáðfrumur í sáðpíplum og uppbyggingin er í grundvallaratriðum komin í eðlilegt horf. Sjá mynd 1 (innskot 6).