Rannsókn á estrógenáhrifum Echinacoside og Acteoside frá Herba Cistanche
Mar 08, 2022
Tengiliður: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Netfang:audrey.hu@wecistanche.com
WANG Lin-lin, LI Wei, SONG Xin-bo*, YU He-Shui, MIAO Lin, ZHANG Li-Juan, TAO Rui
Tianjin háskólinn í hefðbundinni kínverskri læknisfræði, Tianjin 300193, Kína
Ágrip: Í þessari rannsókn, estrógen áhrif afechinacosideogakteósíðaf Herba Cistanche voru rannsökuð. A lucif erase reporter plasmíð lögmálið var notað til að greina estrógenáhrifechinacosideogakteósíð. Estrógenviðtaka samkeppnisbindingartilraunirnar voru notaðar til að greina samkeppnisáhrif þeirra við estrógen. Niðurstöðurnar sýndu þaðechinacosideogakteósíðgetur aukið virkni ERE. Hvenærechinacosideeðaakteósíðer bætt við í estrógenverkunum, er hægt að örva ERE-drifna fréttagenavirkni sem estrógenörva. Þess vegna var komist að þeirri niðurstöðuechinacosideogakteósíðhafði virkni plöntuestrógena með því að örva ERE-aukningu fréttagenavirkni.Echinacosideogakteósíðvoru hugsanleg SERM.
Lykilorð: echinacoside; akteósíð; plöntuestrógen;
Herba Cistanche er planta af Cistanche-ættkvíslinni (Oroban- chaceae) af Cistanche-ættkvíslinni (Cistanche). Það er þurr holdugur stilkur með hreistruð blöð. Það hefur það hlutverk að næra nýra yang, næra kjarna og blóð og raka þarma. Það er notað við skort á nýrna yang, skort á kjarna og blóði, getuleysi og ófrjósemi, eymsli í mitti og hné, máttleysi í vöðvum og beinum, þurrum þörmum og hægðatregðu ¨. 2J. Sem stendur eru helstu efnafræðilegu þættirnir sem eru einangraðir og auðkenndir frá Cistanche fenýlglýkósíð, iridoids, lignans, flavonoids, fjölsykrur, oligosaccharides, galactitol, rokgjarnir þættir, alkalóíðar o.s.frv. og eru einnig helstu uppgötvunarvísar fyrir gæðaeftirlit á Cistanche, og eru táknaðir meðechinacoside og verbascoside. Nútíma lyfjafræðilegar rannsóknir hafa sýnt að Cistanche hefur virkni ónæmisstjórnunar, andoxunar, öldrun, þreytu, taugaverndar og lifrarverndar. Sumar lyfjafræðilegar rannsóknir sýna einnig að Cistanche getur stuðlað að endurnýjun beina-l"J, hindrað myndun beinþynningar og plöntuestrógena hjá konum eftir tíðahvörf"]. Í þessari tilraun völdum við echinacoside og verbascoside, sem eru helstu gæðaeftirlitsvísarnir í Cistanche, og prófuðum estrógenið.áhrif echinacosideog verbascoside með luciferase reporter plasmíð aðferð og samkeppnishæfni estrógenviðtaka tilraun. Kannaðu gangverk echinacoside og verbascoside estrógens
1 Efniviður og aðferðir
1.1 Efni Hela frumur (leghálskrabbameinsfrumur úr mönnum), keyptar frá Shanghai Institute of Cell Biology;echinacosidevar aðskilið og hreinsað úr Cistanche deserticola af rannsóknarstofu okkar og var prófað með HPLC-ELSD. Theechinacosideviðmiðunarefni (Kína National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, lotunúmer: 111670) var notað sem viðmiðunarefni og mældur hreinleiki var 95,1 prósent. Theakteósíðvar aðskilið og hreinsað úr Cistanche eyðimörkinni af rannsóknarstofu okkar og var fengið með HPLC. ELSD próf, með Verbascum glýkósíð viðmiðunarefni (China Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, lotunúmer: 111530) sem viðmiðunarefni, mældur hreinleiki var 96,4 prósent; plasmíð ERa, ER[3, ERE-luc, Renila (dregin út af rannsóknarstofu okkar); Estradiol (E), Sigma Company; Fetal Bovine Serum (FBS), PAA Company; Virkjað kolefnismeðferð nautgripasermi (CS-FBS), PAA Company; Phenol Red-Free DMEM, Sigma Company; Dímetýl súlfoxíð (DMSO) ), Amresco Company; LB miðill, Shanghai Shenggong líftæknifyrirtæki; PassiveLysis5X Buffer, Promega Company; Lipofectamine2000, Promega Company; Plasmíð útdráttarsett, TIENGEN Company; Luciferase reporter gengreiningarsett er vara frá Promega Company.
1.2 Frumurækt Hela frumur voru ræktaðar í DMEM ræktunarmiðli sem innihélt 10 prósent nautgripafóstursermi. Að minnsta kosti einni kynslóð fyrir tilraunina var skipt út fyrir DMEM ræktunarmiðil sem innihélt 1 prósent virkjuðu kolmeðhöndlaða nautgripafóstursermi.
1.3 Transfektion og ákvörðun lúsiferasavirkni Hellafrumum var sáð í 24-brunnplötu með þéttleika á bilinu 70 prósent til 80 prósent. Eftir að frumurnar festust við vegginn og frumuþéttleiki náði 90 prósentum skaltu fylgja leiðbeiningunum í lípo. Leiðbeiningar um hvarfefni Feetamine2000 umbreyta ERa, ER[3 tjáningarplasmíðum og ERE, Renila reporter plasmíðum, skipta um miðil eftir 8 klukkustundir og bæta við prófunarlyfjum af mismunandi styrk. Eftir ræktun yfir nótt, notaðu fjölvirka plötulesara til að greina estrógenviðbrögðin. Hlutfall ERE lúsiferasavirkni, reiknaðu hlutfallsleg áhrif lyfja á lúsiferasavirkni.
1.4 Gagnavinnsla og tölfræðigreining
Með því að nota SPSS18.0 tölfræðihugbúnað eru gögnin gefin upp sem meðaltal±staðalfrávik (x±S). Einhliða dreifnigreining (ANOVA) og Dunnett's multiple comparison t-próf voru notuð til að greina gögnin á milli hópa. P<0.05 was="" considered="" there="" is="" statistical="">
Akteósíð
2 Tilraunaniðurstöður
2.1 Áhrif verbascosides á virkni estrógen svörunar frumefnisins ERE luciferasa Niðurstöðurnar sýna að borið saman við samanburðarhópinn þegar miðlað er af ERa og ER[3, getur E (10nmól) hækkað marktækt estrógen svörunarþáttinn ERE luciferasa Virkni verbascosides getur auka virkni estrógenviðbragðsþáttarins ERE luciferasa við 10, 100, 1, 10 og 50 txmól. Þegar styrkurinn nær 50 I~mól jafngildir uppstjórnun ERE lúsiferasavirkni estradíóls. Það er skammtaháð, en sértækni fyrir estrógenviðtaka ERa og EP~ er ekki augljós (Mynd 2).
2 Áhrif mismunandi styrks afakteósíðá lúsiferasavirkni ERE
Athugið: Í samanburði við samanburðarhópinn, P
2.2 Áhrif afechinacosideum estrógenviðbragðsþáttinn ERE lúsiferasavirkni Niðurstöðurnar sýna að þegar borið er saman við samanburðarhópinn, þegar miðlað er af ERa og ER[3, getur E(10nmól) marktækt uppstýrt estrógenviðbragðsþáttinn ERE flúrljómun Echinacoside getur aukið estrógenviðbragðið. frumefni ERE lúsiferasavirkni við 10, 100, 1, 10 og 50 Ixmól. Þegar styrkurinn nær 50 Ixmol er uppstjórnun ERE lúsiferasavirkni aðeins minni en estrógen. Díól er einnig metraháð en hefur smá mun á sértækni fyrir estrógenviðtaka ERa og E (Mynd 3).
2.3 Samkeppnisbindandi áhrif Verbascum glýkósíða og estradíóls á estrógenviðtaka Niðurstöður sýna að Verbascum glýkósíður geta samkeppnishæft bundist estrógenviðtökum með estradíóli og hamlað virkni estradíóls á estrógenviðbragðsþáttinn ERE luciferasa. Upp-regluáhrifin. Í samanburði við E (10nmo1) hópinn geta verbascosides lækkað lúsiferasavirkni estradíóls á estrógenviðbragðsþáttinum ERE í mismiklum mæli við 1, 10 og 50p, mól og verbascosides sýna skammtaháð. , Þegar styrkurinn er kominn upp í 50 Ixmól eru andstæð áhrif á estradíól augljósust (Mynd 4).
2.4 Samkeppnisbindandi áhrifechinacosideog estradíól á estrógenviðtökum. Niðurstöðurnar sýna þaðechinacosidegetur einnig tengst estrógenviðtökum í samkeppni með estradíóli og hamlað viðbrögðum estradíóls við estrógeni. Uppstjórnun á ERE lúsiferasavirkni. Í samanburði við E (10nmól) hópinn getur verbascoside lækkað lúsiferasavirkni estradíóls á estrógenviðbragðsþáttinum ERE í mismiklum mæli við 1, 10 og 50 mól, ogechinacosidesýnir lata skammt. Kynlíf, þegar styrkurinn nær 50lxmól, eru andstæð áhrif á estradíól augljósust (mynd 5)
3 Umræður
Þessi tilraun sýndi í fyrsta skipti að skýr gögn sýndu þaðechinacosideog verbascoside, helstu virku innihaldsefnin í Cistanche, geta bundist estrógenviðtökum ERa og EP~, aukið lúsiferasavirkni ERE og haft estrógenáhrif, sem sýnir SERM virkni. Greining á ofangreindum tilraunagögnum sýnir að í ERa kerfinu jafngildir uppstjórnun verbaskósíðs á estrógenviðbragðsþáttinum ERE lúsiferasavirkni við 50 lxmól 0.977 sinnum meiri en E2 (1 0nmól), sem jafngildir því í ERI3 kerfinu. 0,970 sinnum; á sama hátt, í ERa kerfinu, jafngilda uppstjórnunaráhrif echinacosides á estrógen svörunarþáttinn ERE luciferasa virkni við 50 lxmól áhrif E (10nmól), sem jafngildir 0 í ERI3 kerfinu. 937 sinnum, uppstjórnun verbascosides á virkni estrógenviðbragðsþáttarins ERE luciferasa er aðeins meiri en áechinacoside, og sérhæfni fyrir estrógenviðtaka ERa og ER[3 er ekki augljós, á meðan echinacea Glycosides hafa veikan mun á sértækni fyrir estrógenviðtaka ERa og ERI3. Þessi munur gæti tengst mismunandi hópum sem tengjast R4 stöðu verbascoside og echinacoside. Estrógen verkar aðallega í gegnum estrógenviðtakann. Það eru tvær meginundirgerðir estrógenviðtaka, ERa og ER [3, estrógen og estrógenvirk efni sameinast estrógenviðtakanum til að mynda dimer, og tvímerast svo Líkaminn sameinast estrógenviðbragðsþáttinum ERE, og hefur síðan estrógenáhrif [2l,. Plýtóestrógen og estrógen hafa svipaða uppbyggingu og virkni. Rannsóknir hafa sýnt að plöntuestrógen geta stjórnað beinefnaskiptum og gegnt afar mikilvægu hlutverki við að viðhalda jafnvægi beinaupptöku og beinmyndunar. Það er áhrifaríkt við beinþynningu hjá sjúklingum með öldrunarvandamál. Hefur ákveðin klínísk forvarnar- og meðferðaráhrif¨. Þess vegna er getgátur um að áhrif Cistanche til að stuðla að endurnýjun beina og hindra myndun beinþynningar hjá konum eftir tíðahvörf sé í gegnum plöntuestrógen þess. Þessi tilraun sýnir einnig að echinacoside og verbascoside geta tengst estrógenviðtökum með estradíóli í samkeppnishæfni og hindrað uppstjórnun estradíóls á ERE lúsiferasavirkni. Verkunarháttur þessarar verkunar er þekktur fyrir resveratrol. Áhrif plöntuestrógena eru svipuð og J. Það er frekar útskýrt að echinacoside og verbascoside hafa estrógen áhrif með því að bindast estrógenviðtökum ERa og ER3. Ofangreindar rannsóknir á plöntuestrógenvirkni Cistanche og verkun estrógenáhrifa þess benda til þess að Cistanche geti seinkað myndun beinþynningar eftir tíðahvörf hjá konum með því að bæta magn estrógens í líkamanum eða meðhöndla meðferðina sem stafar af lækkun á styrk estrógen í líkamanum. Beinþynning setur fram möguleikann og veitir fræðilegan grunn til að auka umfang klínískrar lyfjanotkunar Cistanche.
Tilvísun
1 kínverska lyfjaskrárnefndin (国家药典委员）). Lyfjaskrá Alþýðulýðveldisins Kína. Peking: Chemical Industry Press, 2010. Vol 1:126.
2 Li SZ（李时珍）.Compendium of Materia Medica. Peking: People * s Medical Publishing House （人民卫生出版社）, 1977.727.
3 Zeng LQ（曾群力）,Zheng YF（郑一凡）,Lv ZL（吕志良）. Ónæmislíffræðileg virkni og verkunarmáti hennar af cistanches fjölsykrum. J Zhejiang Univ, Med Ed （浙江 大学学报,医学版）,2002,31:284-287.
